• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于Box-Behnken響應面法優(yōu)化生乳湯水提取工藝研究*

    2022-11-11 06:00:04譚建偉李蘭蘭朱玉蓉虎亞光
    中醫(yī)藥導報 2022年10期
    關鍵詞:生乳液料甘草酸

    譚建偉,張 睿,李蘭蘭,朱玉蓉,代 偉,楊 濤,虎亞光

    (甘肅省婦幼保健院,甘肅 蘭州 730050)

    產后缺乳是指婦女產后乳汁量甚少或全無,不能滿足嬰兒喂養(yǎng)需求,是臨床常見疾病,發(fā)病率為20%~30%[1]。母乳是嬰幼兒最理想的天然食品,母乳喂養(yǎng)可促進嬰幼兒生長發(fā)育,降低母嬰患病風險,改善母嬰健康狀況[2]。目前我國產后4個月純母乳喂養(yǎng)率為16%~34.4%,遠低于WHO要求的80%。據統(tǒng)計,產后1個月及以后母乳喂養(yǎng)失敗因乳量不足約占34.39%[3],防治產后缺乳對提高母乳喂養(yǎng)率具有重要意義。

    中醫(yī)認為導致產后乳汁不足或全無的主要病機為乳汁生化不足或乳絡不暢,常見病因有氣血虛弱、肝郁氣滯及痰濕壅阻等[4-6],治療產后缺乳以扶正、理血為主,常用中藥為當歸、王不留行、黃芪、川芎及漏蘆[7]。生乳湯主要組成為炙黃芪、漏蘆、當歸、桔梗、通草、炒王不留行、炙甘草、黨參等,諸藥合用具有益氣養(yǎng)血、通絡、疏肝解郁的功效[8-12]。經臨床應用發(fā)現(xiàn),生乳湯可有效治療產后缺乳,緩解產婦泌乳不足的問題。但目前尚未建立生乳湯的提取優(yōu)化方案及質量控制方法。因此,本研究優(yōu)化組方提取方法,最大限度提取其有效成分。

    1 儀器與材料

    1.1 主要儀器Thermo Ultimate 3000型高效液相色譜儀(美國賽默飛公司);SQP型電子分析天平(德國賽多利斯儀器有限公司);TWCL-T型調溫磁力加熱器(上海予申儀器有限公司);EMS-30型恒溫水浴鍋(上海喬月電子有限公司);CQ50型超聲波清洗機(上海喬躍電子有限公司);202A-00型電熱鼓風干燥箱(上海一恒科學儀器有限公司)。

    1.2 材料 生地黃(批號:191127)、桔梗(批號:200201)、通草(批號:200405)、炙甘草(批號:200818)、炙黃芪(批號:200705)均購自甘肅康樂藥業(yè)有限責任公司;漏蘆(批號:19061105)、炒王不留行(批號:20010202)均購自蘭州安泰堂中藥飲片有限公司;黨參(批號:200801)購自甘肅和潤醫(yī)藥集團有限公司。上述中藥材由甘肅省中醫(yī)院主任中藥師李喜香鑒定均為正品。槲皮素標準品(批號:Q111273,純度≥98.5%)購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司;甘草酸標準品(批號:A0810AS,純度≥98%)購自美侖生物有限公司;色譜純乙腈(批號:JA107230)購自Merck Millipore公司;色譜純甲醇(批號:1147507)購自Merck Millipore公司;其余試劑為分析純;實驗用水為超純水。

    2 方法與結果

    2.1 槲皮素和甘草酸含量測定

    2.1.1 色譜條件 色譜柱:Thermo C18(4.6 mm×150 mm,2.6 μm);流動相為乙腈-0.05 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH值=3.2),采用梯度洗脫程序:0~5 min,30%乙腈;5~7 min,30%乙腈→50%乙腈;7~9 min,50%乙腈→30%乙腈;流速為1.0 mL/min;柱溫為30℃;紫外檢測波長為256 nm;進樣量為20 μL。

    2.1.2 溶液的制備

    2.1.2.1 混合對照品溶液的制備 精密稱取槲皮素標準品5.44 mg、甘草酸標準品25.15 mg,加甲醇溶解稀釋至10 mL,制成每毫升含有槲皮素0.544 mg、甘草酸2.515 mg的混合對照品溶液。混合對照品紫外全波長掃描見圖1。

    圖1 紫外全波長掃描圖

    2.1.2.2 供試品溶液的制備 按處方比例稱取藥材,采用水煎法進行提取,提取液烘干得到干浸膏。精密稱取200 mg干浸膏,加入5 mL鹽酸-甲醇溶液(體積比為1∶4)充分溶解,超聲處理15 min后,60℃水浴1 h。取100 μL上清液,甲醇稀釋至1 mL,經0.22 μm微孔濾膜過濾后,取續(xù)濾液作為供試品溶液。

    2.1.2.3 陰性對照品溶液的制備 分別稱取除炙黃芪、甘草外的生乳湯組方中其他藥材,經水煎提取后,按照“2.1.2.2”項方法制備缺少槲皮素、甘草酸的陰性對照品溶液。

    2.1.3 系統(tǒng)適用性試驗 分別精密吸取混合對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各20 μL,依次按照“2.1.1”項色譜條件進樣測定,記錄液相色譜圖。陰性對照品在相應色譜峰處無干擾吸收峰,槲皮素、甘草酸的理論塔板數(shù)均大于3 000,對應色譜峰的分離度均大于1.5。(見圖2)

    圖2 HPLC圖

    2.1.4 線性關系考察 取“2.1.2.1”項下的混合對照品溶液1 mL,用甲醇稀釋至不同濃度梯度,經0.22 μm微孔濾膜過濾后,取續(xù)濾液20 μL,按照“2.1.1”項色譜條件進樣分析,以濃度為橫坐標(X),對應的高效液相色譜峰面積為縱坐標(Y),繪制標準曲線,進行回歸分析,結果表明槲皮素在0.27~43.52 μg,甘草酸在1.01~201.20 μg范圍內線性關系良好。

    表1 線性關系考察結果

    2.1.5 精密度試驗 精密吸取“2.1.2.2”項下的供試品溶液,按“2.1.1”項下色譜條件,重復進樣6次,測定槲皮素和甘草酸峰面積值,結果峰面積RSD分別為1.90%、1.72%。表明儀器的精密度良好。

    2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液,分別在配制后0、2、4、6、8、24 h,按“2.1.1”項下色譜條件,重復進樣6次,測定槲皮素和甘草酸峰面積值,結果峰面積RSD分別為2.08%、1.75%。表明供試品溶液的穩(wěn)定性良好。

    2.1.7 重復性試驗 取同一批次干浸膏,按照“2.1.2.2”項制備6份供試品溶液,按“2.1.1”項下色譜條件,重復進樣6次,測定槲皮素和甘草酸峰面積值,結果峰面積RSD分別為1.79%、1.63%。表明該測定方法重復性良好。

    2.1.8 加樣回收率試驗 取同一批已知含量的干浸膏6份,分別加入干浸膏中槲皮素、甘草酸含量的80%、100%、120%的對照品溶液,按“2.1.2.2”項制備,按“2.1.1”項下色譜條件測定槲皮素和甘草酸的含量,以測定量(測得量-樣品中的量)與加入量的比值計算回收率。結果槲皮素和甘草酸的平均回收率分別為101.50%、101.17%,RSD分別為1.81%、1.94%,表明該方法準確度良好。(見表2)

    表2 加樣回收率試驗結果 (n=6)

    2.2 單因素試驗考察 前期預試驗考察不同提取條件下,組方內多個化合物的含量變化,考察發(fā)現(xiàn)不同液料比、提取時間及提取次數(shù)對槲皮素提取效果的影響較大,因此,選擇槲皮素作為指標性成分進行單因素試驗,從而獲取各因素適宜的提取區(qū)間。

    2.2.1 液料比對槲皮素含量的影響 按處方比例稱取藥材,在提取時間為1 h,提取次數(shù)為2次的條件下,考察液料比為8∶1、12∶1、16∶1、20∶1、24∶1對槲皮素含量的影響,平行重復3次。按“2.1.2.2”項下方法制備供試品溶液,采用“2.1.1”項下色譜條件測定槲皮素含量。結果隨著液料比的增加,槲皮素含量也逐漸增加,當液料比為20∶1時,達到最大槲皮素含量。液料比繼續(xù)增加至24∶1時,槲皮素含量有所下降,因此,選擇液料比為16∶1、20∶1、24∶1進行Box-behnken試驗。(見圖3A)

    2.2.2 提取時間對槲皮素含量的影響 按處方比例稱取藥材,在液料比為16∶1,提取次數(shù)為2次的條件下,考察提取時間0.5、1.0、2.0 h對槲皮素含量的影響,平行重復3次。按“2.1.2.2”項下方法制備供試品溶液,采用“2.1.1”項下色譜條件測定槲皮素含量。結果槲皮素含量隨時間延長而提高,最高點在提取時間為1 h時,之后槲皮素含量隨時間延長而降低。該結果可能與長時間高溫提取環(huán)境下,槲皮素的化學結構穩(wěn)定性降低有關。因此,選擇提取時間為0.5、1.0、1.5 h進行Boxbehnken試驗。(見圖3B)

    2.2.3 提取次數(shù)對槲皮素含量的影響 按處方比例稱取藥材,在液料比為16∶1,提取時間為1 h的條件下,考察提取1、2、3次生乳湯對槲皮素含量的影響,平行重復3次。按“2.1.2.2”項下方法制備供試品溶液,采用“2.1.1”項下色譜條件測定槲皮素含量。結果提取次數(shù)增加至2次時,槲皮素含量亦隨之增加,當提取次數(shù)達到3次時,結果提示槲皮素的含量并未持續(xù)增加,可能與槲皮素化學穩(wěn)定性差、易被氧化降解有關[13]。因此,選擇提取次數(shù)1、2、3次進行Box-behnken試驗。(見圖3C)

    圖3 液料比(A)、提取時間(B)及提取次數(shù)(C)對槲皮素含量的影響

    2.3 Box-Behnken響應面試驗考察

    2.3.1 方案設計 根據單因素試驗結果,選擇液料比(A)、提取時間(B)及提取次數(shù)(C)為影響因素,以槲皮素、甘草酸提取率的綜合評分為指標,綜合評分=槲皮素提取率/槲皮素最高提取率×0.714×100+甘草酸提取率/甘草酸最高提取率×0.286×100[生乳湯組方中含炙黃芪15 g,甘草6 g,按照藥材質量比重計算加權比例,槲皮素為0.714(15/21),甘草酸為0.286(6/21)],采用Box-Behnken響應面法對數(shù)據進行分析和評價,優(yōu)化生乳湯的工藝條件。設計因素與水平見表3,Box-Behnken結果見表4。

    表3 Box-Behnken設計因素水平

    表4 Box-Behnken響應面設計及結果

    2.3.2 模型擬合及分析 采用Design Expert 12.0軟件對試驗數(shù)據進行擬合分析,得到多元回歸方程如下:Y=91.29-3.84A-0.003 9B+5.61C-6.09AB-0.4101AC+9.03BC-17.86A2-11.83B2-9.75C2。對擬合模型進行方差分析,結果見表5。實驗設計的3個因素對生乳湯中槲皮素和甘草酸提取率綜合評分的影響排序為C>A>B。擬合模型的P=0.035 6<0.05,差異有統(tǒng)計學意義,表明該響應面模型的擬合性較好,實驗預測誤差較小。由表5可知,二次項中A2和B2均呈顯著性影響(P<0.05),其余一次項與二次項因素對生乳湯中槲皮素和甘草酸提取率的影響差異無統(tǒng)計學意義,該擬合模型提示,考察因素與響應值之間未呈現(xiàn)簡單的線性關系。多元回歸方程失擬項P=0.157 7>0.05,提示模型失擬不顯著,模型具有較好的可信度,建立該擬合模型能夠有效地進行生乳湯提取工藝的優(yōu)化分析及預測。

    表5 二次回歸模型方差分析

    2.3.3 響應面分析 通過Design Expert 12.0軟件繪制各指標與響應值交互項的響應面圖,可直觀評價各因素對生乳湯中槲皮素和甘草酸提取率的影響。結果顯示,隨著各因素的增加槲皮素和甘草酸提取率均呈現(xiàn)先增加后逐漸減少的趨勢。因素C提取次數(shù)的曲面較陡峭,提示提取次數(shù)對槲皮素和甘草酸提取率影響較明顯,這與二次回歸模型中的方差分析結果一致。(見圖4~6)2.3.4驗證試驗 根據模型擬合方程,預測分析得到的最優(yōu)提取方案為液料比為19.434:1,提取時間為1.089 h,提取次數(shù)為2.373次。考慮到實際提取時的可操作性,故將生乳湯的提取方案修正為液料比為20∶1,提取時間為1 h,提取次數(shù)為2次。為驗證該擬合模型預測的準確性,按照修正后的方案提取生乳湯中槲皮素和甘草酸,重復進行3次試驗,并測定提取液中槲皮素和甘草酸含量。結果顯示,槲皮素和甘草酸的平均提取率分別為7.15%、4.10%,RSD分別為0.85%、1.27%,提示前期建立的響應面擬合模型預測性準確,選取的生乳湯優(yōu)化提取工藝具有良好的可行性及重復性。

    圖4 液料比與提取時間的交互作用響應面及等高線圖

    圖5 液料比與提取次數(shù)的交互作用響應面及等高線圖

    圖6 提取時間與提取次數(shù)的交互作用響應面及等高線圖

    3 討 論

    3.1 色譜條件優(yōu)化 本研究采用HPLC法對生乳湯中炙黃芪、甘草的有效成分槲皮素和甘草酸進行含量測定。在200~400 nm范圍內對混合對照品溶液進行紫外光全波長掃描,結果提示混合對照品溶液在256 nm處有最大紫外吸收,故選擇該波長測定生乳湯中槲皮素和甘草酸含量。以乙腈-水作流動相時,槲皮素和甘草酸峰形拖尾嚴重,分離度較差,換用0.05 mol/L磷酸鹽緩沖液后,槲皮素和甘草酸樣品色譜峰無拖尾,分離度較好,可有效優(yōu)化槲皮素和甘草酸峰形。本試驗通過梯度洗脫方式,既能保證槲皮素和甘草酸有較好的分離度,又可縮短樣品檢測的保留時間,提高高效液相色譜法的檢測效率。

    3.2 評價指標 槲皮素黃酮類化合物,可通過調控GSH水平,提高機體的抗氧化能力,亦可作用于白細胞并通過細胞信號通路中的蛋白激酶和磷酸酶,發(fā)揮抗炎及免疫調節(jié)的作用[14]。黃芪、甘草、漏蘆及桔梗中均含有槲皮素[14-17],以槲皮素為評價指標可以體現(xiàn)多味藥材有效成分的提取率。甘草的化學成分主要有三萜皂苷類(如甘草酸、甘草次酸等)、黃酮類(如甘草苷、甘草苷元等)[18],具有抗病毒、抗腫瘤、抗炎、免疫調節(jié)等作用,其中皂苷類化合物是甘草中重要的成分之一。網絡藥理學研究表明,甘草可調節(jié)催乳素信號通路,參與乳房發(fā)育、乳蛋白合成及維持乳汁分泌[19-20]。故本研究以槲皮素和甘草酸作為定量指標,評價生乳湯的水提取工藝[21-23]。3.3 提取工藝優(yōu)化 本研究在單因素試驗的基礎上,采用非線性擬合的Box-Behnken響應面法對多個因素進行擬合分析,充分考慮液料比、提取時間及提取次數(shù)對槲皮素和甘草酸提取率的影響,建立擬合模型對生乳湯的提取工藝進行了優(yōu)化,有效提高了提取工藝的準確性。驗證結果表明,本提取工藝簡便、快捷,結果穩(wěn)定、可靠,為生乳湯的廣泛應用與開發(fā)提供了理論和實驗依據,也為含有同類成分的中藥制劑提供定量檢測參考。

    猜你喜歡
    生乳液料甘草酸
    新型多功能飲品復合調配分離瓶的研發(fā)
    科技視界(2018年22期)2018-10-08 01:41:38
    補血生乳顆粒對SD大鼠圍產期毒性
    中成藥(2018年3期)2018-05-07 13:34:12
    復方甘草酸苷片治療慢性濕疹56例臨床分析
    甘草酸二銨對大鼠背部超長隨意皮瓣成活的影響
    異甘草酸鎂對酒精性肝炎患者TNF和IL-6的影響
    反相高效液相色譜法測定復方甘草酸銨注射液中甘草酸銨含量
    混砂機液料流量的精確控制
    流量反饋控制在呋喃樹脂混砂機上的應用
    現(xiàn)代連續(xù)式混砂機的液料系統(tǒng)
    黑龍江按季度發(fā)布生乳交易參考價
    国产成人freesex在线| 久久99一区二区三区| 国产精品人妻久久久久久| 在线观看人妻少妇| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产淫片久久久久久久久| 性色avwww在线观看| 久久久久久久精品精品| 午夜激情久久久久久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| av福利片在线| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 久久久久网色| 精品少妇内射三级| 国产免费一区二区三区四区乱码| 麻豆成人午夜福利视频| 久久人人爽人人片av| 中文在线观看免费www的网站| av在线老鸭窝| 国产一区有黄有色的免费视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 我要看黄色一级片免费的| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲精品aⅴ在线观看| av.在线天堂| 成人亚洲精品一区在线观看| 精品视频人人做人人爽| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 婷婷色av中文字幕| 性色av一级| 秋霞在线观看毛片| 午夜91福利影院| 精品少妇久久久久久888优播| 我要看日韩黄色一级片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 黄色日韩在线| 国产精品一区www在线观看| 99久国产av精品国产电影| 热re99久久国产66热| 亚洲精品国产成人久久av| 国产男人的电影天堂91| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 黄色欧美视频在线观看| 91成人精品电影| 91成人精品电影| 中文在线观看免费www的网站| 香蕉精品网在线| 性色av一级| 妹子高潮喷水视频| 久久精品久久久久久久性| 免费黄色在线免费观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲美女黄色视频免费看| 成人黄色视频免费在线看| 国产永久视频网站| 国产成人精品久久久久久| 久久女婷五月综合色啪小说| 免费大片黄手机在线观看| 国产在线视频一区二区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲久久久国产精品| 国产精品一区二区在线观看99| 国产黄片美女视频| 看十八女毛片水多多多| 熟女电影av网| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产熟女欧美一区二区| 看十八女毛片水多多多| 成人亚洲精品一区在线观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 最近中文字幕2019免费版| 最近中文字幕2019免费版| 大话2 男鬼变身卡| 男女边摸边吃奶| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产成人freesex在线| 性高湖久久久久久久久免费观看| 欧美日韩综合久久久久久| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲真实伦在线观看| 欧美bdsm另类| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 黑人高潮一二区| 午夜久久久在线观看| 亚洲国产精品一区三区| 国产成人免费无遮挡视频| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲国产最新在线播放| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 日韩伦理黄色片| 亚洲av成人精品一二三区| 日日撸夜夜添| 国产男女内射视频| 色视频在线一区二区三区| 久久久久久久精品精品| 一二三四中文在线观看免费高清| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产美女午夜福利| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品久久久久久久久免| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 午夜福利,免费看| 成年人免费黄色播放视频 | 99久久人妻综合| 欧美97在线视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 全区人妻精品视频| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲欧洲国产日韩| 草草在线视频免费看| 美女主播在线视频| 最近中文字幕2019免费版| 人人妻人人看人人澡| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲国产精品成人久久小说| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 国产男女内射视频| 男人舔奶头视频| 亚洲性久久影院| 99久久人妻综合| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 日韩精品有码人妻一区| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 免费人成在线观看视频色| 日本黄色片子视频| 9色porny在线观看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 色婷婷av一区二区三区视频| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 9色porny在线观看| 一级毛片我不卡| 97精品久久久久久久久久精品| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲无线观看免费| 大香蕉久久网| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 亚洲av中文av极速乱| 久久久午夜欧美精品| 搡女人真爽免费视频火全软件| 日本wwww免费看| 97在线视频观看| 亚洲色图综合在线观看| 热re99久久国产66热| 日韩一区二区三区影片| 欧美 日韩 精品 国产| 乱码一卡2卡4卡精品| 日韩在线高清观看一区二区三区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 男女免费视频国产| av在线观看视频网站免费| 精品国产一区二区久久| 国产亚洲91精品色在线| 久久 成人 亚洲| 51国产日韩欧美| 99热这里只有精品一区| 一级毛片aaaaaa免费看小| 人妻一区二区av| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 日日啪夜夜撸| 国产一区二区在线观看av| 一级a做视频免费观看| 视频中文字幕在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 香蕉精品网在线| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产在线视频一区二区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 哪个播放器可以免费观看大片| 亚洲国产av新网站| 伦理电影免费视频| 毛片一级片免费看久久久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产91av在线免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 久久亚洲国产成人精品v| 国产av码专区亚洲av| 国产精品国产三级专区第一集| 精品久久久久久电影网| 亚洲内射少妇av| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 麻豆成人午夜福利视频| 嘟嘟电影网在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 欧美变态另类bdsm刘玥| 国产精品一区二区在线观看99| 国产永久视频网站| 草草在线视频免费看| 成人影院久久| 一本久久精品| 三级国产精品片| tube8黄色片| 亚洲国产日韩一区二区| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 日本黄大片高清| 又大又黄又爽视频免费| av天堂久久9| 五月天丁香电影| 久久精品国产a三级三级三级| 午夜免费观看性视频| 精品少妇内射三级| 亚洲欧美清纯卡通| 久久精品久久久久久久性| 国产色婷婷99| 久久久久久久久久人人人人人人| 亚洲真实伦在线观看| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 国产在视频线精品| 晚上一个人看的免费电影| 日韩欧美一区视频在线观看 | 精品少妇久久久久久888优播| 精品人妻熟女av久视频| av在线app专区| 国产精品99久久久久久久久| 91久久精品电影网| 久久久久久久久大av| 校园人妻丝袜中文字幕| 日韩 亚洲 欧美在线| 午夜影院在线不卡| 久久鲁丝午夜福利片| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲国产av新网站| 天美传媒精品一区二区| 亚洲国产精品成人久久小说| 91精品国产九色| 久久毛片免费看一区二区三区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 亚洲av中文av极速乱| 午夜日本视频在线| 久久久精品免费免费高清| 色吧在线观看| 久热久热在线精品观看| 黑丝袜美女国产一区| 男人添女人高潮全过程视频| 简卡轻食公司| 新久久久久国产一级毛片| 久久久久久久久久久免费av| 黄片无遮挡物在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 一级毛片久久久久久久久女| 免费黄色在线免费观看| av视频免费观看在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看 | 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久鲁丝午夜福利片| 69精品国产乱码久久久| 高清不卡的av网站| 亚洲不卡免费看| 国产一区二区三区综合在线观看 | 熟妇人妻不卡中文字幕| 精品少妇黑人巨大在线播放| 日本av免费视频播放| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美97在线视频| 中文天堂在线官网| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 成年人午夜在线观看视频| 成人美女网站在线观看视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲欧洲国产日韩| 人人澡人人妻人| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 交换朋友夫妻互换小说| 国产亚洲5aaaaa淫片| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品无大码| 中文欧美无线码| 亚洲国产av新网站| 爱豆传媒免费全集在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 偷拍熟女少妇极品色| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲综合精品二区| 日韩 亚洲 欧美在线| 成年人午夜在线观看视频| 少妇 在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 精品亚洲成国产av| 欧美最新免费一区二区三区| 美女国产视频在线观看| 插阴视频在线观看视频| 又爽又黄a免费视频| 国产熟女欧美一区二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 国产有黄有色有爽视频| 最近最新中文字幕免费大全7| 国模一区二区三区四区视频| 中文在线观看免费www的网站| 国产熟女欧美一区二区| 一本色道久久久久久精品综合| 一级毛片我不卡| 中文字幕久久专区| 在线看a的网站| 夫妻午夜视频| 妹子高潮喷水视频| 伦理电影大哥的女人| 又大又黄又爽视频免费| 国产成人a∨麻豆精品| 国产深夜福利视频在线观看| 黑丝袜美女国产一区| 国产亚洲91精品色在线| 免费在线观看成人毛片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 精品国产国语对白av| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产成人精品久久久久久| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 九九爱精品视频在线观看| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲精品乱久久久久久| 老司机影院成人| 熟女av电影| 欧美日韩精品成人综合77777| 一区二区三区免费毛片| av在线老鸭窝| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲精品国产色婷婷电影| 人妻系列 视频| 内射极品少妇av片p| 又大又黄又爽视频免费| 午夜福利影视在线免费观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 欧美成人午夜免费资源| 全区人妻精品视频| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲成人一二三区av| 色94色欧美一区二区| 亚州av有码| 免费黄色在线免费观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 一个人看视频在线观看www免费| 欧美精品一区二区免费开放| 美女内射精品一级片tv| 久热这里只有精品99| 欧美xxⅹ黑人| 丰满乱子伦码专区| 日本黄色片子视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美日韩在线观看h| 中文字幕av电影在线播放| 欧美成人午夜免费资源| 成人毛片60女人毛片免费| 久久久久久久精品精品| 高清在线视频一区二区三区| 亚洲欧美精品自产自拍| 激情五月婷婷亚洲| 成人二区视频| 国产高清不卡午夜福利| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲精品成人av观看孕妇| 内射极品少妇av片p| 各种免费的搞黄视频| 亚洲精品第二区| 国产成人freesex在线| 各种免费的搞黄视频| 韩国av在线不卡| 伦理电影大哥的女人| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 亚洲国产精品999| 色婷婷av一区二区三区视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产精品人妻久久久久久| 日韩伦理黄色片| 亚洲四区av| 男女无遮挡免费网站观看| 男人舔奶头视频| 一二三四中文在线观看免费高清| 欧美精品高潮呻吟av久久| 免费人妻精品一区二区三区视频| 午夜福利视频精品| 国产av一区二区精品久久| 国产一区二区在线观看日韩| 99九九在线精品视频 | 国产精品无大码| 丰满少妇做爰视频| 午夜视频国产福利| 看非洲黑人一级黄片| 2021少妇久久久久久久久久久| 午夜免费观看性视频| 中文欧美无线码| 午夜福利影视在线免费观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲天堂av无毛| 国产精品熟女久久久久浪| 麻豆成人av视频| 日韩三级伦理在线观看| 少妇 在线观看| 国产精品.久久久| 国产精品三级大全| 亚洲av不卡在线观看| 大话2 男鬼变身卡| 久久97久久精品| 久久精品国产亚洲av涩爱| 91久久精品电影网| 色视频在线一区二区三区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲真实伦在线观看| 久久午夜福利片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久久久国产精品人妻一区二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 伊人亚洲综合成人网| 一本久久精品| 免费大片黄手机在线观看| xxx大片免费视频| 婷婷色av中文字幕| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久影院123| 久久久久久久亚洲中文字幕| 街头女战士在线观看网站| 热99国产精品久久久久久7| 十八禁网站网址无遮挡 | 午夜激情福利司机影院| 欧美最新免费一区二区三区| 国产高清国产精品国产三级| 精品人妻一区二区三区麻豆| 蜜臀久久99精品久久宅男| 丰满少妇做爰视频| 久久久久久久久久成人| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品久久久久久精品古装| 国产免费一级a男人的天堂| 一二三四中文在线观看免费高清| 男人添女人高潮全过程视频| 99热国产这里只有精品6| 下体分泌物呈黄色| 久久女婷五月综合色啪小说| 亚洲精品国产成人久久av| 少妇被粗大猛烈的视频| 我的老师免费观看完整版| 色视频在线一区二区三区| 丝瓜视频免费看黄片| 91aial.com中文字幕在线观看| 免费观看的影片在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 97超视频在线观看视频| 欧美 日韩 精品 国产| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 日韩三级伦理在线观看| 99热这里只有精品一区| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 人人澡人人妻人| a级一级毛片免费在线观看| 美女国产视频在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 亚洲av欧美aⅴ国产| 一区二区三区乱码不卡18| 看免费成人av毛片| 国产男女内射视频| 内地一区二区视频在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 成人无遮挡网站| 国产在线视频一区二区| 成人特级av手机在线观看| tube8黄色片| 亚洲国产av新网站| 妹子高潮喷水视频| 午夜日本视频在线| av国产久精品久网站免费入址| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产男人的电影天堂91| 国产爽快片一区二区三区| freevideosex欧美| 久久久久网色| 欧美三级亚洲精品| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 中国美白少妇内射xxxbb| 在线观看国产h片| 国产av一区二区精品久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲精品一区蜜桃| 人人妻人人澡人人看| 免费黄网站久久成人精品| 观看av在线不卡| 男人狂女人下面高潮的视频| 日本av免费视频播放| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 男女国产视频网站| 亚洲丝袜综合中文字幕| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 欧美97在线视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 精品亚洲成a人片在线观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 韩国av在线不卡| 一级,二级,三级黄色视频| 老司机亚洲免费影院| 亚洲av二区三区四区| 最近中文字幕高清免费大全6| 熟女av电影| 97在线视频观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久国产乱子免费精品| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 欧美日韩精品成人综合77777| 国产中年淑女户外野战色| 大话2 男鬼变身卡| 一本久久精品| 国产精品久久久久久久电影| 国产免费一区二区三区四区乱码| 免费大片18禁| av黄色大香蕉| 如日韩欧美国产精品一区二区三区 | 亚洲精品乱码久久久v下载方式| a级毛片在线看网站| 麻豆成人午夜福利视频| 国产成人精品无人区| 一本一本综合久久| 国产av精品麻豆| 欧美国产精品一级二级三级 | 国产成人精品无人区| 久久综合国产亚洲精品| 高清毛片免费看| av网站免费在线观看视频| 久久精品久久精品一区二区三区| 久久久国产欧美日韩av| 22中文网久久字幕| 精品少妇久久久久久888优播| 亚洲国产精品国产精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 一区二区三区四区激情视频| 国产色婷婷99| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲人与动物交配视频| 黄色日韩在线| 免费av中文字幕在线| 99热这里只有精品一区| 国产永久视频网站| 国产av国产精品国产| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 男女啪啪激烈高潮av片| 大片免费播放器 马上看| 中文字幕亚洲精品专区| 成人毛片60女人毛片免费| 简卡轻食公司| 午夜日本视频在线| a级毛色黄片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| a级毛色黄片| 深夜a级毛片| 中文字幕亚洲精品专区| av福利片在线| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲成人手机| 久久女婷五月综合色啪小说| 精品少妇内射三级| 九九在线视频观看精品| 在现免费观看毛片| 美女大奶头黄色视频| 久久精品夜色国产| 黄片无遮挡物在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久久久精品久久久久真实原创| 中文在线观看免费www的网站| 精品午夜福利在线看| 成人午夜精彩视频在线观看| 国产亚洲最大av| 99re6热这里在线精品视频| 在线观看免费高清a一片| 久久国产精品大桥未久av | 成年美女黄网站色视频大全免费 | 欧美3d第一页| 搡女人真爽免费视频火全软件| 精品亚洲成国产av| 一级片'在线观看视频| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 久久婷婷青草| 我要看日韩黄色一级片| 看免费成人av毛片| 少妇丰满av| 欧美日韩亚洲高清精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 少妇精品久久久久久久| 精品久久国产蜜桃| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲欧美清纯卡通| 久久热精品热| 三级国产精品片| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 黄色一级大片看看| 好男人视频免费观看在线| 日本-黄色视频高清免费观看| 麻豆成人午夜福利视频| 免费人妻精品一区二区三区视频| 久热久热在线精品观看| 亚洲av男天堂| 99久久精品一区二区三区| 在线观看美女被高潮喷水网站|