• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    31種石斛屬植物及金石斛遺傳多樣性SRAP分析及DNA指紋圖譜研究

    2022-11-11 02:40:44張迎輝凡莉莉杜溶訖謝德金楊旺利陳禮光鄭郁善
    熱帶作物學(xué)報(bào) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:標(biāo)記技術(shù)石斛種質(zhì)

    張迎輝,凡莉莉,杜溶訖,謝德金,楊旺利,陳禮光,鄭郁善*

    31種石斛屬植物及金石斛遺傳多樣性SRAP分析及DNA指紋圖譜研究

    張迎輝1,凡莉莉2,杜溶訖2,謝德金2,楊旺利3,陳禮光2,鄭郁善2*

    1. 福建農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,福建福州 350007;2. 福建農(nóng)林大學(xué)林學(xué)院,福建福州 350002;3. 福安市林業(yè)局,福建福安 355000

    石斛屬(Sw.)為蘭科(Orchidaceae)蘭亞科(Subfam. Orchidoideae)植物,在我國有著廣泛的分布與應(yīng)用,多用于名貴中藥材和觀賞植物,具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。由于苛刻的生長條件加上過度的開發(fā)利用,導(dǎo)致野生石斛資源破壞嚴(yán)重,大部分種類已近枯竭,這也導(dǎo)致市場上出現(xiàn)的石斛種質(zhì)混雜、真?zhèn)舞b定困難等問題亟待解決。石斛屬植物遺傳多樣性的研究和數(shù)字指紋圖譜的建立,可以為石斛的品種鑒定與分類、良種選擇與保護(hù)提供理論依據(jù),對保護(hù)藥用植物生物多樣性也具有十分重要的意義。以31種石斛屬植物及金石斛()為研究對象,應(yīng)用SRAP-PCR分子標(biāo)記技術(shù)對其開展遺傳多樣性分析并構(gòu)建DNA指紋圖譜。結(jié)果表明:利用篩選出來的15對引物進(jìn)行擴(kuò)增,共擴(kuò)增出264個(gè)位點(diǎn),其中多態(tài)性位點(diǎn)為251個(gè),平均每對引物擴(kuò)增出16.73個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),多態(tài)比率達(dá)95.08%,其中Me2-Em5、Me4-Em3、Me4-Em5、Me7-Em3、Me7-Ee7等5對引物的多態(tài)百分率均為100%,這些引物組合對石斛種類的鑒別效率較高;經(jīng)過計(jì)算31種石斛屬植物與金石斛間的觀測等位基因數(shù)(a)為1.784,有效等位基因數(shù)(e)為1.430,Nei’s基因多樣性指數(shù)()為0.202,Shannon’s信息指數(shù)()為0.386,石斛種間存在較高的遺傳變異度與豐富的遺傳多樣性水平;其遺傳相似系數(shù)的變化范圍為0.591~0.851,親緣關(guān)系較近,當(dāng)遺傳相似性系數(shù)為0.660時(shí),金石斛單獨(dú)聚為一類,當(dāng)遺傳相似性系數(shù)為0.724時(shí),可將31個(gè)石斛屬植物進(jìn)一步分為10組;構(gòu)建DNA指紋圖譜可單獨(dú)鑒別出31種石斛屬植物以及金石斛,為石斛遺傳背景分析和快速鑒別石斛種類提供科學(xué)依據(jù)。

    石斛屬;SRAP標(biāo)記;遺傳多樣性;DNA指紋圖譜

    石斛屬()為蘭科(Orchidaceae)植物最大的屬之一,約含1000個(gè)種,其中我國分布有74個(gè)種,2個(gè)變種[1]。雖然我國石斛屬資源在世界上的占有率較低,但因其具有較高的觀賞價(jià)值[2-3]和藥用價(jià)值[4-5],在資源開發(fā)與利用方面一直走在前沿。石斛作為傳統(tǒng)珍貴中藥材,在我國已有2000多年的使用歷史。石斛是典型的多基源藥材,《中國藥典》中收載的石斛來源為蘭科植物金釵石斛()、霍山石斛()、鼓槌石斛()或流蘇石斛()的栽培種及其同屬植物近似種和鐵皮石斛()的莖[6]。但由于資源缺乏,目前我國商品流通的藥用石斛植物來源有近40種,因此石斛屬植物種質(zhì)混雜、真?zhèn)舞b定困難等問題亟待解決。DNA分子標(biāo)記技術(shù)具有操作簡單、多態(tài)性和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于石斛親緣關(guān)系鑒別、基因庫構(gòu)建、指紋圖譜庫等領(lǐng)域[7-10]。崔學(xué)強(qiáng)等[11]采用iPBS分子標(biāo)記技術(shù)分析并構(gòu)建48份石斛蘭種質(zhì)資源DNA指紋圖譜,且利用2對引物可單獨(dú)進(jìn)行鑒別。宋爽等[12]利用ISSR和AFLP兩種分子標(biāo)記方法分析了石斛種質(zhì)資源的遺傳多樣性,均能有效地將研究材料進(jìn)行鑒別。蔡莉等[13]對15份金釵石斛栽培種樣品運(yùn)用SRAP分子標(biāo)記法檢測其遺傳多樣性,認(rèn)為SRAP分子標(biāo)記法能有效地反映金釵石斛栽培種的遺傳多樣性。樊洪泓等[14]利用SRAP和RAPD兩種分子標(biāo)記技術(shù)對9份石斛種質(zhì)進(jìn)行遺傳多樣性研究,發(fā)現(xiàn)SRAP標(biāo)記在石斛的遺傳多樣性與親緣關(guān)系的研究中表現(xiàn)出了極大的優(yōu)越性。本研究以31種石斛屬植物及金石斛為試驗(yàn)材料,應(yīng)用SRAP-PCR分子標(biāo)記技術(shù)對其開展遺傳多樣性分析并構(gòu)建DNA指紋圖譜,將為石斛的品種鑒定與分類提供理論和技術(shù)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    供試的32種石斛樣品采自福建省福安旺盛經(jīng)濟(jì)林研究所石斛種質(zhì)資源圃(表1)。每種石斛取樣7~10株,每株3~5片嫩葉,混合后裝入自封袋中,用變色硅膠(硅膠與葉片體積比例至少10∶1)迅速干燥放入冰盒中,將干燥的樣品快速帶回實(shí)驗(yàn)室,置于–80℃超低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    表1 供試材料

    1.2 方法

    1.2.1 石斛總DNA的提取 石斛總DNA采用鄭云柯等[15]的改良CTAB法提取,具體如下:取0.1 g嫩葉放入液氮中研磨粉碎并干燥至略發(fā)白色;將粉碎的樣品粉末放入2 mL的離心管中,立即添加預(yù)熱的CTAB緩沖液750 μL,16 μL的25 mg/mL R Nase A,65℃水浴50 min,期間輕微顛倒混勻離心管4~6次;取出離心管放至冷卻后加入等體積氯仿-異戊醇(24∶1)混合液,輕微顛倒混勻,并靜放3 min分層;將混合物于12 000 r/min,4℃中離心12 min;取上清液加800 μL無水乙醇(預(yù)冷)輕微充分顛倒混勻,直到有大量白色絮狀物析出,放入–20℃冰箱中保存20 min;將離心管于12 000 r/min,4℃中離心5 min,倒出液體后,加入75%乙醇(預(yù)冷)清洗2次(12 000 r/min,4℃中離心3 min),室溫晾干;加入100 μL已滅菌的ddH2O溶解,將含有DNA的離心管放入–20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.2 SRAP-PCR反應(yīng)體系 PCR反應(yīng)體系采用前期研究結(jié)果[16]:Mg2+2.5 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,DNA聚合酶1.25 U,引物0.4 μmol/L,模板DNA 30 ng,10×PCR buffer 2.5 μL,其余的用滅菌的ddH2O補(bǔ)齊,形成共25 μL的擴(kuò)增體系。PCR反應(yīng)程序:94℃預(yù)變性5 min,94℃變性1 min,36℃復(fù)性1 min,72℃延伸1 min,5次循環(huán),94℃變性1 min,根據(jù)不同引物的不同退火溫度復(fù)性1 min,72℃延伸1 min,30次循環(huán),最終72℃延伸7 min,保存于4℃恒溫中。SRAP引物序列見表2。

    表2 SRAP引物序列

    Tab.2 Primers used in SRAP molecular markers

    1.3 數(shù)據(jù)處理

    依據(jù)常青等[17]的數(shù)據(jù)分析方法對電泳圖譜進(jìn)行人工讀帶,同一位點(diǎn)有條帶出現(xiàn)的賦值為“1”,無條帶出現(xiàn)的賦值為“0”,將數(shù)據(jù)輸入Excel表格中制成0-1二元矩陣。使用NTSYS Version 2.1軟件,結(jié)合POPGENE Version 1.32軟件計(jì)算遺傳距離與遺傳相似性系數(shù),運(yùn)用非加權(quán)組平均法(UPGMA)進(jìn)行聚類分析,建立聚類圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 引物擴(kuò)增多態(tài)性及遺傳多樣性分析

    用篩選出來的15對引物對31種石斛屬植物及金石斛進(jìn)行擴(kuò)增(圖1),共擴(kuò)增出264個(gè)位點(diǎn),其中多態(tài)性位點(diǎn)為251個(gè),平均每對引物擴(kuò)增出16.73個(gè)多態(tài)性位點(diǎn),多態(tài)率達(dá)到95.08%(表3)。31種石斛與金石斛的觀測等位基因數(shù)(a)、有效等位基因數(shù)(e)、Nei’s基因多樣性指數(shù)()、Shannon’s信息指數(shù)()分別為1.784、1.430、0.202、0.386,證明石斛種間存在較高的遺傳變異度與豐富的遺傳多樣性水平。在15對引物組合中,Me2-Em5,Me4-Em3,Me4-Em5,Me7-Em3,Me7-Ee7的多態(tài)百分率均為100%,說明這些引物組合對石斛種類的鑒別效率較高,并且SRAP分子標(biāo)記方法能很好地應(yīng)用于石斛種類的遺傳多樣性研究中。

    表3 SRAP引物序列及其擴(kuò)增結(jié)果

    Tab.3 Sequences and amplification results of SRAP primers

    圖1 E7M7凝膠成像圖

    2.2 聚類分析

    為了確定石斛種間的遺傳關(guān)系,將統(tǒng)計(jì)好的石斛SRAP-PCR反應(yīng)數(shù)據(jù)錄入NTSYS Version 2.1軟件中進(jìn)行聚類分析(UPMGA),建立遺傳關(guān)系聚類圖(圖2)。31種石斛屬植物及金石斛的遺傳距離范圍為0.138~0.522,均值為0.317,遺傳相似性的變化范圍為0.591~0.851,均值是0.733,說明31種石斛屬植物及金石斛的品種間存在一定的遺傳變異。從圖2可以看出,當(dāng)遺傳相似性系數(shù)為0.660時(shí),31個(gè)石斛屬植物聚為一類,記為Ⅰ類;金石斛單獨(dú)聚為一類記為Ⅱ類,表明其遺傳基礎(chǔ)與石斛屬植物存在著較大的差異。當(dāng)遺傳相似性系數(shù)為0.724時(shí),Ⅰ類中的31個(gè)石斛屬植物又可再分為10組,分別記為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J,其中A組為海南石斛、少花石斛;B組為長蘇石斛、束花石斛、小雙花石斛、美花石斛、竹枝石斛、疏花石斛、曲軸石斛、尖刀唇石斛、喇叭唇石斛、金釵石斛、鐵皮石斛、霍山石斛、細(xì)葉石斛、短棒石斛、杓唇石斛;C組為鼓槌石斛、聚石斛、小黃花石斛;D組為羅河石斛和黃花石斛;E組為劍葉石斛;F組為反瓣石斛;G組為矮石斛、長距石斛;H、I、J組分別為叉唇石斛、鉤狀石斛和景洪石斛。

    圖2 31種石斛屬植物及金石斛基于SRAP的遺傳相似性聚類分析

    2.3 DNA指紋圖譜構(gòu)建

    據(jù)引物品種鑒別率公式對15個(gè)引物組合進(jìn)行鑒別結(jié)果統(tǒng)計(jì),其中引物組合Me1-Em3、Me3-Em3、Me1-Em6均能將31種石斛及金石斛完全鑒別出來,而其他引物組合鑒別率則在68.75%~93.75%之間,未達(dá)到完全鑒別。利用引物Me1-Em3構(gòu)建石斛種類的DNA數(shù)字指紋圖譜(圖3),其中黑色表示該位點(diǎn)有條帶,即該位點(diǎn)0-1矩陣中為“1”,無色表示該位點(diǎn)無條帶,即該位點(diǎn)在0-1矩陣中為“0”。構(gòu)建的指紋圖譜可以為石斛遺傳背景分析和種類鑒定提供依據(jù)。

    3 討論

    分子標(biāo)記技術(shù)已廣泛應(yīng)用于石斛類植物的研究中。劉玲等[18]采用TRAP分子標(biāo)記技術(shù),篩選出7對引物可將6個(gè)鐵皮石斛野生居群以及雜交后代進(jìn)行鑒別。付濤等[19]開發(fā)鐵皮石斛EST-SSR分子標(biāo)記方法,設(shè)計(jì)的43對引物能夠擴(kuò)增出多態(tài)性條帶。肖文芳等[20]采用P-M13-SSR分子標(biāo)記技術(shù)將29份石斛蘭劃分為6個(gè)類群,并利用3對引物獲得29份石斛蘭種質(zhì)獨(dú)有、可辨的分子身份證。SRAP標(biāo)記方法是由美國加州大學(xué)蔬菜作物系的LI等[21]創(chuàng)立的一種新型的分子標(biāo)記方法,該方法的基礎(chǔ)雖然也是依靠PCR技術(shù),但其克服了成本高昂、技術(shù)繁雜、重復(fù)性差等缺點(diǎn),兼具了簡單、可靠、中等信息量和易于對相應(yīng)片段測序等優(yōu)點(diǎn)[22],作為理想的分子標(biāo)記技術(shù)在植物遺傳多樣性分析[23-26]、種質(zhì)鑒定[27-29]等方面得到廣泛應(yīng)用。

    圖3 31種石斛屬植物及金石斛DNA指紋圖譜

    楊貞等[30]利用SRAP分子標(biāo)記法從13份鐵皮石斛種質(zhì)中擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶為96.75%,遺傳相似系數(shù)為0.44~0.79,并根據(jù)親緣關(guān)系劃分為3個(gè)類群。林榕燕等[31]從48份石斛蘭種質(zhì)擴(kuò)增出的多態(tài)性條帶高達(dá)97.48%,多態(tài)性信息含量為0.718~0.903,石遺傳距離為0.15~0.97,并將48個(gè)石斛蘭品種分為7大聚類群。朱勝男等[2]采用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)對31種石斛屬植物進(jìn)行了遺傳多樣性分析,根據(jù)聚類圖結(jié)果可以有效地將32個(gè)石斛屬植物區(qū)分開。崔學(xué)強(qiáng)等[11]利用iPBS標(biāo)記對麝香石斛()等18份石斛蘭原生種以及30份石斛蘭商品種構(gòu)建的DNA指紋圖譜可區(qū)分出這48份石斛蘭種質(zhì)資源。本研究采用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對31份石斛屬植物原生種以及金石斛開展研究,利用篩選出來的15對引物進(jìn)行擴(kuò)增,共擴(kuò)增出264個(gè)位點(diǎn),其中多態(tài)性位點(diǎn)為251個(gè),多態(tài)率達(dá)到95.08%,其中5對引物的多態(tài)百分率達(dá)到100%,表明這些石斛屬品種的遺傳豐富度較高,遺傳范圍較為廣泛。遺傳距離與遺傳相似性系數(shù)是衡量個(gè)體間相似程度的重要指標(biāo),31種石斛屬植物及金石斛的遺傳距離范圍為0.138~0.522,表明品種間存在豐富的遺傳多樣性,遺傳相似系數(shù)的變化范圍為0.591~0.851,說明31種石斛及金石斛的親緣關(guān)系較近,其中石斛屬植物間羅河石斛與黃花石斛的親緣關(guān)系最近,景洪石斛與金石斛的親緣關(guān)系最遠(yuǎn)。在聚類分析中金石斛單獨(dú)聚為一類,剩余的31種石斛屬聚為一大類,表明SRAP可有效鑒別出石斛屬植物。當(dāng)遺傳相似性系數(shù)為0.724時(shí),可將31個(gè)石斛屬植物為10組,這與植物志中石斛屬的分類較為符合。

    構(gòu)建DNA指紋圖譜已成為植物品種鑒定的有效方法之一,利用分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建石斛蘭DNA指紋圖譜有少量報(bào)道,其中關(guān)鍵是篩選出可鑒別供試材料的引物[2, 18, 20]。本研究篩選的15對引物組合均能鑒別31個(gè)石斛屬植物及金石斛,應(yīng)用引物Me1-Em3構(gòu)建出的DNA指紋圖譜,能為石斛的分子鑒別提供參考。

    [1] 中國科學(xué)院中國植物委員會(huì). 中國植物志(第十九卷)[M]. 北京: 科學(xué)出版社, 1999: 69.

    Chinese Botanical Committee, Chinese Academy of Sciences. Flora of China (Volume 19)[M]. Beijing: Science Press, 1999: 69. (in Chinese)

    [2] 朱勝男, 周振華, 馮尚國, 汪 尚, 索娜娜, 王慧中. 31種石斛屬植物的RAPD遺傳多樣性分析[J]. 杭州師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版), 2011, 10(4): 333-339.

    ZHU S N, ZHOU Z H, FENG S G, WANG S, SUO N N, WANG H Z. Analysis on the genetic diversity among 31 species ofbased on RAPD marker[J]. Journal of Hangzhou Normal University (Natural Science Edition), 2011, 10(4): 333-339. (in Chinese)

    [3] 鮮小林, 陳 睿, 萬 斌, 秦 帆. 西南地區(qū)野生春石斛資源搜集、保存與觀賞利用價(jià)值評(píng)價(jià)[J]. 西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2013, 26(3): 1184-1189.

    XIAN X L, CHEN R, WAN B, QIN F. Wild spring dendrobium resources’ collection, preservation and evaluation of ornamental and use values in Southwest China[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences, 2013, 26(3): 1184-1189. (in Chinese)

    [4] 李 濤, 何 璇. 石斛屬27種藥用植物的性狀鑒定特征比較[J]. 華西藥學(xué)雜志, 2016, 31(1): 54-57.

    LI T, HE X. Comparative study on the macroscopical identification characters of twenty-seven herbal medicines of[J]West China Journal of Pharmaceutical Sciences, 2016, 31(1): 54-57. (in Chinese)

    [5] 陳慧玲, 劉宗坤, 楊彥伶, 張新葉. 基于層次分析法的藥用石斛種質(zhì)資源評(píng)價(jià)[J]. 西南林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 37(1): 82-87.

    CHEN H L, LIU Z K, YANG Y L, ZHANG X Y. Evaluating germplasm of medicinalspp. via analytic hierarchy process[J]. Journal of Southwest Forestry University, 2017, 37(1): 82-87. (in Chinese)

    [6] 中華人民共和國國家藥典委員會(huì). 中華人民共和國藥典: 2015年版. 第1部[M].北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 2015: 94, 295.

    State Pharmacopoeia Committee of the People’s Republic of China. Pharmacopoeia of the People’s Republic of China: 2015 edition part 1[M]. Beijing: China Medical Science and Technology Press, 2015: 94, 295. (in Chinese)

    [7] NGUYEN N H, VU H T, LE N D, NGUYEN T D, DUONG H X, TRAN H D. Molecular identification and evaluation of the genetic diversity ofspecies collected in southern Vietnam[J]. Biology, 2020, 9(4): 76.

    [8] 韓曉霞, 章靜鋼, 張鵬博, 宗 宇, 陳文榮, 郭衛(wèi)東. 基于SSR的鐵皮石斛實(shí)生群體遺傳多樣性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2016, 44(6): 90-93.

    HAN X X, ZHANG J G, ZHANG P B, ZONG Y, CHEN W R, GUO W D. Genetic diversity ofseedling population based on SSR[J]. Jiangsu Agricultural Sciences, 2016, 44(6): 90-93. (in Chinese)

    [9] LI Q G, MO J M, WU W R, YANG J, LI J J, LAI T X, QU Z L, QIU Z W, GUAN S X, LIAO J J. Genetic diversity, population structure and identification ofcultivars with high polysaccharide contents using SCOT, SCAR and nested PCR markers[J]. Genetic Resources and Crop Evolution, 2019, 66(1): 71-88.

    [10] JIANG R B, XU X D, CHEN N P, DING Z S, JIN B. Analysis of the genetic diversity ofby ISSR, SRAP, and scoT[J]. Journal of Biobased Materials and Bioenergy, 2017, 11(6): 590-597.

    [11] 崔學(xué)強(qiáng), 唐 璇, 黃昌艷, 鄧杰玲, 李秀玲, 盧家仕, 張自斌. 基于iPBS標(biāo)記的石斛蘭種質(zhì)資源遺傳多樣性分析及DNA指紋圖譜構(gòu)建[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2021, 42(2): 317-324.

    CUI X Q, TANG X, HUANG C Y, DENG J L, LI X L, LU J S, ZHANG Z B. Genetic diversity analysis and fingerprinting construction ofgermplasm resources by ipbs marker[J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2021, 42(2): 317-324. (in Chinese)

    [12] 宋 爽, 周洋帆, 劉正杰, 趙明富, 楊 娟, 徐紹忠, 文國松. 利用ISSR和AFLP標(biāo)記分析石斛種質(zhì)資源的遺傳多樣性[J]. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)), 2016, 31(4): 688-695.

    SONG S, ZHOU Y F LIU Z J, ZHAO M F, YANG J, XU S Z, WEN G S. Genetic diversity amongwith known origins based on the ISSR and AFLP markers[J] Journal of Yunnan Agricultural University (Natural Science), 2016, 31(4): 688-695. (in Chinese)

    [13] 蔡 莉, 趙 致, 劉紅昌, 李金玲, 楊繼勇, 鄧賢芬. 基于SRAP分子標(biāo)記的金釵石斛遺傳多樣性研究[J]. 時(shí)珍國醫(yī)國藥, 2019, 30(8): 1975-1978.

    CAI L, ZHAO Z, LIU H C, LI J L, YANG J Y, DENG X F. Genetic diversity ofbased on SRAP molecular markers[J]. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research, 2019, 30(8): 1975-1978. (in Chinese)

    [14] 樊洪泓, 李廷春, 邱 婧, 林 毅, 蔡永萍. 石斛屬幾種植物遺傳關(guān)系的SRAP和RAPD比較分析[J]. 中草藥, 2010, 41(4): 627-632.

    FAN H H, LI T C, QIU J, LIN Y, CAI Y P. Comparison of SRAP and RAPD markers for genetic analysis of plants inSw[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2010, 41(4): 627-632. (in Chinese)

    [15] 鄭云柯, 胡翔宇, 宋希強(qiáng), 王 健. 石斛屬植物基因組DNA提取方法的對比[J]. 熱帶生物學(xué)報(bào), 2015, 6(2): 168-172.

    ZHENG Y K, HU X Y, SONG X Q, WANG J. Optimized extraction method for genomic DNA fromspecies (Orchidaceae)[J]. Journal of Tropical Biology, 2015, 6(2): 168-172. (in Chinese)

    [16] 張迎輝, 杜溶訖, 凡莉莉, 楊旺利, 榮俊冬, 鄭郁善, 陳禮光. 石斛屬部分植物SRAP-PCR反應(yīng)體系的建立與優(yōu)化[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2021, 42(1): 25-32.

    ZHANG Y H, DU R Q, FAN L L, YANG W L, RONG J D, ZHENG Y S, CHEN L G. Establishment and optimization of SRAP-PCR reaction system in some species of[J]Chinese Journal of Tropical Crops, 2021, 42(1): 25-32. (in Chinese)

    [17] 常 青, 周開亞. 分子進(jìn)化研究中系統(tǒng)發(fā)生樹的重建[J]. 生物多樣性, 1998(1): 55-62.

    CHANG Q, ZHOU K Y. Reconstruction of phylogenetic tree in molecular evolution[J]. Chinese Biodiversity, 1998(1): 55-62. (in Chinese)

    [18] 劉 玲, 吳 睿, 牛志韜, 薛慶云, 劉 薇, 丁小余. 基于TRAP分子標(biāo)記的鐵皮石斛野生居群的分析與鑒別[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2016, 51(12): 1926?1933.

    LIU L, WU R, NIU Z T, XUE Q Y, LIU W, DING X Y. Molecular identification of wild populations ofbased on target region amplification polymorphism[J]. Acta Pharmaceutica Sinica, 2016, 51(12): 1926-1933. (in Chinese)

    [19] 付 濤, 胡仲義, 何月秋, 李 文, 林 立. 鐵皮石斛EST-SSR分子標(biāo)記的開發(fā)[J]. 核農(nóng)學(xué)報(bào), 2017, 31(4): 663-670.

    FU T, HU Z Y, HE Y Q, LI W, LIN L. Development of EST-SSR molecular markers in[J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences, 2017, 31(4): 663-670. (in Chinese)

    [20] 肖文芳, 李 佐, 陳和明, 呂復(fù)兵. 基于TP-M13-SSR標(biāo)記的石斛蘭種質(zhì)分子身份證構(gòu)建[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2021, 42(10): 2751-2757.

    XIAO W F, LI Z, CHEN H M, LV F B. Molecular identity card establishment ofgermplasms by TP-M13-SSR[J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2021, 42(10): 2751-2757. (in Chinese)

    [21] LI G, QUIROS C F. Sequence-related amplified polymorphism (SRAP), a new marker system based on a simple PCR reaction: its application to mapping and gene tagging in[J]. Theoretical and Applied Genetics, 2001, 103(2/3): 455-461.

    [22] 曹墨菊. 植物生物技術(shù)概論[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社, 2014.

    CAO M J. Introduction to plant biotechnology[M]. Beijing: China Agricultural University Press, 2014. (in Chinese)

    [23] QIAO Q, YE M J, WU C, WANG J W, LIU Q Z, TAO J H, ZHANG L, FENG Z. Analysis of leaf morphology variation and genetic diversity via SRAP markers for near-threatened plant[J]. Global Ecology and Conservation, 2022, 33: e01980

    [24] KATALIN S, DORU P, SABIN B A, MONICA H. Assessment of genetic diversity and population structure of the endangeredsubsp. transsilvanicus through DNA-Based molecular markers[J]. Plants, 2021, 10(12): 2732.

    [25] 王挺進(jìn), 袁 璐, 劉 柯, 劉玲娟, 劉勝龍, 陳利萍, 文香英. 浙江省廣西越桔組織培養(yǎng)及遺傳多樣性分析[J]. 核農(nóng)學(xué)報(bào), 2022, 36(3): 613-620.

    WANG T J, YUAN L, LIU K, LIU L J, LIU S L, CHEN L P, WEN X Y. Tissue culture and genetic analysis ofin Zhejiang province[J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences, 2022, 36(3): 613-620. (in Chinese)

    [26] 林宗鏗, 張?zhí)煜? 楊俊杰. 基于SRAP的辣木種質(zhì)資源遺傳多樣性和親緣關(guān)系分析[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2021, 42(4): 945-950.

    LIN Z K, ZHANG T X, YANG J J. Assessment of genetic diversity and relationship among 18species based on SRAP marker[J]. Chinese Journal of Tropical Crops, 2021, 42(4): 945-950. (in Chinese)

    [27] 林榕燕, 羅遠(yuǎn)華, 樊榮輝, 葉秀仙, 方能炎, 鐘淮欽, 黃敏玲. 文心蘭雜交后代的EST-SSR和SRAP分子標(biāo)記鑒定[J]. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2021, 36(12): 1439-1446.

    LIN R Y, LUO Y H, FAN R H, YE X X, FANG N Y, ZHONG H Q, HUANG M L. Identification of hybrid progenies fromwith EST-SSR and SRAP molecular markers[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2021, 36(12): 1439-1446. (in Chinese)

    [28] 林榕燕, 陳藝荃, 鐘淮欽, 林 兵, 葉秀仙. SRAP標(biāo)記在秋石斛雜交后代鑒定中的應(yīng)用[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2021, 49(22): 55-59.

    LIN R Y, CHEN Y Q, ZHONG H Q, LIN B, YE X X. Application of SRAP marker in identification of hybrid progeny of[J]Jiangsu Agricultural Sciences, 2021, 49(22): 55-59. (in Chinese)

    [29] SHAMUSTAKIMOVA A. O, MAVLYUTOV Y. M, KLIMENKO I. A. Application of SRAP markers for DNA identification of Russian alfalfa cultivars[J]. Russian Journal of Genetics, 2021, 57(5): 540-547.

    [30] 楊 貞, 蔡友銘, 張永春, 楊柳燕, 王藝程. 基于SRAP分子標(biāo)記的鐵皮石斛遺傳多樣性分析[J]. 上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2019, 35(5): 23-27.

    YANG Z, CAI Y M, ZHANG Y C, YANG L Y, WANG Y C. Genetic diversity analysis ofbased on SRAP molecular markers[J]. Acta Agriculturae Shanghai, 2019, 35(5): 23-27. (in Chinese)

    [31] 林榕燕, 葉秀仙, 鐘淮欽, 林 兵, 黃敏玲. 基于SRAP分子標(biāo)記的石斛蘭種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[J]. 福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2018, 33(5):469-473.

    LIN R Y , YE X X, ZHONG H Q, LIN B, HUANG M L. Genetic diversity ofgermplasms accessed by SRAP markers[J]. Fujian Journal of Agricultural Sciences, 2018, 33(5): 469-473. (in Chinese)

    SRAP Analysis and DNA Fingerprinting of Genetic Diversity of 31 Species ofand

    ZHANG Yinghui1, FAN Lili2, DU Rongqi2, XIE Dejin2, YANG Wangli3, CHEN Liguang2, ZHENG Yushan2*

    1.Fujian Vocational College of Agriculture, Fuzhou, Fujian 350007, China; 2. College of Forestry, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350002, China; 3. Forestry Bureau of Fu’an City, Fu’an, Fujian 355000, China

    Sw. belongs to the Orchidaceae (Subfam. Orchidoideae), which has a wide distribution and application in China. Most are precious Chinese medicinal materials and ornamental plants with high economic values. Due to harsh growth conditions and excessive development and utilization, wildresources have been severely damaged, and most species have been nearly depleted, which also lead to problems such as mixed germplasm ofin the market and difficulties in authenticity identification. The research on the genetic diversity ofplants and the establishment of digital fingerprints can provide a theoretical basis for the identification and classification ofspecies, the selection, and protection of fine varieties, and it is also of great significance to protect the biodiversity ofresources. Taking 31 species ofandas the research objects, the genetic diversity was analyzed by the SRAP-PCR molecular marker technology and DNA fingerprints were constructed. 15 pairs of primers were used for amplification, and a total of 264 loci were amplified, including 251 polymorphic loci, and an average of 16.73 polymorphic loci with a 95.08% ratio were amplified for each pair of primers. The polymorphism percentage of 5 pairs of primers including Me2-Em5, Me4-Em3, Me4-Em5, Me7-Em3, Me7-Ee7 was 100%, and the primer combinations had higher identification efficiency forspecies. After calculation, the number of observed alleles (a) between 31 species ofandwas 1.784, the number of effective alleles (e) was 1.430, the Nei’s gene diversity index () was 0.202, and Shannon’s information index () was 0.386, which showed there was a high degree of genetic variability and rich genetic diversity amongspecies. The variation range of the genetic similarity coefficient was 0.591–0.851, and the genetic relationship was relatively close. When the genetic similarity coefficient was 0.66,could be clustered into one group. When the genetic similarity coefficient was 0.724, 31species could be divided into 10 groups. The DNA fingerprints constructed by three pairs of primers, including Me1-Em3, Me3-Em3, and Me1-Em6, could identify 31 species ofandindependently, providing a scientific basis for the analysis of the genetic background and the rapid identification ofspecies.

    ; SRAP markers; genetic diversity; DNA fingerprint

    S567.239

    A

    10.3969/j.issn.1000-2561.2022.10.008

    2022-02-16;

    2022-03-22

    福建省科技創(chuàng)新平臺(tái)項(xiàng)目(No. 2008Y2001);福建農(nóng)林大學(xué)科技創(chuàng)新專項(xiàng)基金項(xiàng)目(No. CXZX2016043)。

    張迎輝(1979—),女,博士,副教授,研究方向:園林植物栽培與應(yīng)用。*通信作者(Corresponding author):鄭郁善(ZHENG Yushan),E-mail:zys1960@163.com。

    猜你喜歡
    標(biāo)記技術(shù)石斛種質(zhì)
    華南地區(qū)最大農(nóng)作物種質(zhì)資源保護(hù)庫建成
    飛鼠與石斛
    35 種石斛蘭觀賞價(jià)值評(píng)價(jià)
    金釵石斛化學(xué)成分的研究
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:56
    亞麻抗白粉病種質(zhì)資源的鑒定與篩選
    貴州玉米種質(zhì)資源遺傳多樣性及核心種質(zhì)庫構(gòu)建
    正交設(shè)計(jì)在觀賞石斛種胚離體培養(yǎng)中的應(yīng)用
    紅錐種質(zhì)早期生長表現(xiàn)
    DNA分子標(biāo)記技術(shù)在柑橘研究中的應(yīng)用
    浙江柑橘(2016年3期)2016-03-11 20:12:48
    RAPD分子標(biāo)記技術(shù)和ITS同源性分析比較不同生態(tài)環(huán)境來源的鈍頂螺旋藻的遺傳多樣性
    久久久a久久爽久久v久久| 伊人亚洲综合成人网| 观看av在线不卡| 欧美中文综合在线视频| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 成年动漫av网址| 香蕉丝袜av| 欧美bdsm另类| 免费观看性生交大片5| 亚洲三区欧美一区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| av不卡在线播放| 亚洲伊人色综图| 国产一区二区激情短视频 | 欧美日韩国产mv在线观看视频| 激情视频va一区二区三区| 人妻 亚洲 视频| 在线天堂最新版资源| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久青草综合色| 黄网站色视频无遮挡免费观看| h视频一区二区三区| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲国产av新网站| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 成年av动漫网址| 国产探花极品一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 婷婷成人精品国产| 国产一区二区激情短视频 | 欧美av亚洲av综合av国产av | 精品国产一区二区久久| 亚洲欧美一区二区三区久久| 丝袜喷水一区| 男女免费视频国产| 亚洲欧洲日产国产| 下体分泌物呈黄色| 国产又色又爽无遮挡免| 91国产中文字幕| 久久午夜综合久久蜜桃| 美女视频免费永久观看网站| 女性生殖器流出的白浆| 国产成人免费观看mmmm| 老司机亚洲免费影院| 久久久国产欧美日韩av| av网站免费在线观看视频| 成人国语在线视频| 曰老女人黄片| 亚洲精品一二三| 亚洲精品自拍成人| 天堂8中文在线网| 欧美成人午夜精品| 亚洲精品美女久久av网站| 国产黄频视频在线观看| 高清不卡的av网站| av在线app专区| 久久国产精品大桥未久av| 午夜av观看不卡| 亚洲av福利一区| 不卡av一区二区三区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产精品一区二区在线观看99| 又大又黄又爽视频免费| 日韩免费高清中文字幕av| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产精品av久久久久免费| av片东京热男人的天堂| 高清欧美精品videossex| 午夜福利视频在线观看免费| 成人毛片a级毛片在线播放| 午夜激情久久久久久久| 麻豆乱淫一区二区| 九草在线视频观看| 女人精品久久久久毛片| a级毛片黄视频| 国产免费又黄又爽又色| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美少妇被猛烈插入视频| 最近的中文字幕免费完整| 国产不卡av网站在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 一级毛片电影观看| 国产成人欧美| 亚洲成人av在线免费| 99热网站在线观看| 亚洲国产精品成人久久小说| 成人午夜精彩视频在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲情色 制服丝袜| 久久久久久免费高清国产稀缺| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲综合色惰| 亚洲国产色片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 精品一区二区免费观看| www日本在线高清视频| 精品视频人人做人人爽| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲国产精品999| 中文欧美无线码| 久久99热这里只频精品6学生| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品.久久久| 精品久久久久久电影网| 欧美日韩精品网址| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 视频区图区小说| 精品国产国语对白av| 新久久久久国产一级毛片| 看免费成人av毛片| 男女啪啪激烈高潮av片| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 亚洲成国产人片在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 丰满少妇做爰视频| 在线观看www视频免费| 香蕉精品网在线| 精品亚洲成a人片在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产不卡av网站在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 波多野结衣一区麻豆| 久久久国产一区二区| 看免费av毛片| 热re99久久国产66热| 美女视频免费永久观看网站| 免费在线观看完整版高清| a级毛片在线看网站| 性少妇av在线| xxxhd国产人妻xxx| 丝袜脚勾引网站| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产福利在线免费观看视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产一区二区 视频在线| 成年人午夜在线观看视频| 亚洲少妇的诱惑av| 大香蕉久久网| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 精品久久久精品久久久| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲精品美女久久av网站| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 成年人午夜在线观看视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 一区二区av电影网| 少妇 在线观看| 亚洲男人天堂网一区| 26uuu在线亚洲综合色| 国产在视频线精品| 免费在线观看完整版高清| 成人国产麻豆网| 在线 av 中文字幕| 亚洲在久久综合| 国产麻豆69| 曰老女人黄片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 爱豆传媒免费全集在线观看| 三级国产精品片| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| 国产片特级美女逼逼视频| 高清视频免费观看一区二区| 国产97色在线日韩免费| 亚洲av综合色区一区| 丝袜美腿诱惑在线| 我的亚洲天堂| 国产日韩欧美亚洲二区| 一区二区三区精品91| 久久 成人 亚洲| 少妇精品久久久久久久| av在线观看视频网站免费| 精品少妇内射三级| 免费在线观看完整版高清| 日本vs欧美在线观看视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产成人精品一,二区| 国产精品一区二区在线观看99| 青草久久国产| 精品一区在线观看国产| 成年人午夜在线观看视频| 免费黄频网站在线观看国产| 久久久久久久久久久免费av| 观看av在线不卡| 黄色怎么调成土黄色| 一级a爱视频在线免费观看| 一个人免费看片子| 大陆偷拍与自拍| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 国产成人精品在线电影| 久久久久视频综合| 熟妇人妻不卡中文字幕| 最新的欧美精品一区二区| 美女福利国产在线| 日韩在线高清观看一区二区三区| 成人国语在线视频| 香蕉精品网在线| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产亚洲最大av| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久久久久久久久久久大奶| 午夜91福利影院| 两个人免费观看高清视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 美国免费a级毛片| 久久久欧美国产精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产欧美亚洲国产| 97在线视频观看| 成年av动漫网址| 日韩一本色道免费dvd| 国产1区2区3区精品| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 精品福利永久在线观看| av卡一久久| 考比视频在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 蜜桃国产av成人99| a级毛片在线看网站| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 亚洲国产日韩一区二区| 久久热在线av| 精品一品国产午夜福利视频| 久久这里只有精品19| 久久人人爽人人片av| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| av在线app专区| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜激情av网站| 色94色欧美一区二区| 丰满乱子伦码专区| 亚洲三级黄色毛片| 美女主播在线视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 男女免费视频国产| 99九九在线精品视频| 999久久久国产精品视频| 欧美日韩综合久久久久久| 免费av中文字幕在线| 欧美日韩av久久| 国产精品不卡视频一区二区| 十分钟在线观看高清视频www| 天堂俺去俺来也www色官网| 韩国高清视频一区二区三区| 在线天堂最新版资源| 人人澡人人妻人| 美女中出高潮动态图| 一区二区av电影网| 一区二区三区激情视频| 中文天堂在线官网| 国产精品嫩草影院av在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 夫妻午夜视频| 男女午夜视频在线观看| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 精品一区在线观看国产| 成年动漫av网址| 日韩制服骚丝袜av| 男人舔女人的私密视频| 91aial.com中文字幕在线观看| av女优亚洲男人天堂| 色网站视频免费| 久久影院123| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 成人国产麻豆网| 亚洲精品日本国产第一区| 蜜桃在线观看..| 午夜福利一区二区在线看| 高清在线视频一区二区三区| 国产av精品麻豆| 亚洲精品乱久久久久久| 男男h啪啪无遮挡| 美女午夜性视频免费| 国产精品无大码| 美女福利国产在线| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 成年人免费黄色播放视频| 免费在线观看黄色视频的| 免费观看无遮挡的男女| 亚洲图色成人| 夫妻性生交免费视频一级片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 免费日韩欧美在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 午夜日本视频在线| 搡老乐熟女国产| 成人二区视频| 在线精品无人区一区二区三| 69精品国产乱码久久久| 热re99久久国产66热| 丁香六月天网| 亚洲av日韩在线播放| 精品一区在线观看国产| 国产精品久久久久久久久免| 久久女婷五月综合色啪小说| 色吧在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 精品福利永久在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 黄片小视频在线播放| 国产精品 欧美亚洲| 在线观看人妻少妇| 亚洲成国产人片在线观看| 乱人伦中国视频| 免费观看a级毛片全部| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 满18在线观看网站| 99久国产av精品国产电影| 亚洲成人av在线免费| 美女福利国产在线| 国产成人精品在线电影| 好男人视频免费观看在线| 国产成人精品福利久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久久欧美国产精品| 亚洲欧洲日产国产| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产亚洲最大av| h视频一区二区三区| 777米奇影视久久| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日韩制服骚丝袜av| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲国产av新网站| 成年av动漫网址| 中文字幕人妻熟女乱码| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日本av免费视频播放| 亚洲精品第二区| 久久免费观看电影| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 老熟女久久久| 性少妇av在线| 久久久a久久爽久久v久久| 国产成人免费观看mmmm| 少妇精品久久久久久久| 啦啦啦在线观看免费高清www| 丰满乱子伦码专区| 亚洲国产看品久久| 亚洲av男天堂| 91成人精品电影| 亚洲av.av天堂| 97在线人人人人妻| 少妇的丰满在线观看| 丝袜喷水一区| 国产亚洲欧美精品永久| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日韩中文字幕视频在线看片| 天天影视国产精品| 国产成人精品婷婷| 精品人妻在线不人妻| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久久久a久久爽久久v久久| 色吧在线观看| 欧美97在线视频| 中文字幕色久视频| 欧美在线黄色| 国产男女内射视频| 考比视频在线观看| 两个人看的免费小视频| 国产在线视频一区二区| 中文字幕av电影在线播放| 在线天堂中文资源库| av在线播放精品| 岛国毛片在线播放| 亚洲欧美一区二区三区久久| 亚洲第一区二区三区不卡| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 人体艺术视频欧美日本| 女性被躁到高潮视频| 国产成人精品久久久久久| 国产精品久久久久成人av| 黄频高清免费视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 制服丝袜香蕉在线| 欧美日韩精品网址| 一区二区三区精品91| 啦啦啦啦在线视频资源| 精品国产乱码久久久久久小说| 999久久久国产精品视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 国产深夜福利视频在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美av亚洲av综合av国产av | 亚洲av免费高清在线观看| 成年美女黄网站色视频大全免费| 老司机影院成人| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲国产色片| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产精品久久久久久精品古装| 国产精品无大码| 欧美 日韩 精品 国产| 人人妻人人澡人人看| 日日啪夜夜爽| 色吧在线观看| h视频一区二区三区| 精品一区在线观看国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 中文字幕av电影在线播放| 波野结衣二区三区在线| 日韩免费高清中文字幕av| 满18在线观看网站| 99热全是精品| 久久精品国产自在天天线| 久久精品国产亚洲av天美| 成人国产av品久久久| 久久久久国产网址| 丝袜美足系列| 中文字幕人妻丝袜制服| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 曰老女人黄片| 欧美日韩成人在线一区二区| 午夜精品国产一区二区电影| 久久久久久伊人网av| 一个人免费看片子| www.熟女人妻精品国产| 欧美+日韩+精品| 久久97久久精品| 成人亚洲欧美一区二区av| av电影中文网址| 亚洲一码二码三码区别大吗| 97精品久久久久久久久久精品| 2022亚洲国产成人精品| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 精品一区二区三区四区五区乱码 | av女优亚洲男人天堂| freevideosex欧美| 丝袜在线中文字幕| 亚洲国产av新网站| 美女中出高潮动态图| 中文字幕最新亚洲高清| www.av在线官网国产| 大片免费播放器 马上看| 日本-黄色视频高清免费观看| 水蜜桃什么品种好| 亚洲美女黄色视频免费看| 久久人人97超碰香蕉20202| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 校园人妻丝袜中文字幕| 美女脱内裤让男人舔精品视频| a级毛片黄视频| 久久99精品国语久久久| 午夜精品国产一区二区电影| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产又色又爽无遮挡免| 91精品国产国语对白视频| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 青草久久国产| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| √禁漫天堂资源中文www| 考比视频在线观看| 中文字幕av电影在线播放| 日本免费在线观看一区| 99热全是精品| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 老熟女久久久| 亚洲综合色网址| 18禁国产床啪视频网站| 大片免费播放器 马上看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 久久久久久免费高清国产稀缺| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 成年动漫av网址| 我的亚洲天堂| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 亚洲精品第二区| 日韩伦理黄色片| tube8黄色片| 欧美精品av麻豆av| 国产精品一区二区在线观看99| 在线 av 中文字幕| 欧美日韩视频精品一区| 97在线人人人人妻| av一本久久久久| 欧美日本中文国产一区发布| 欧美人与性动交α欧美软件| 只有这里有精品99| 涩涩av久久男人的天堂| 男女高潮啪啪啪动态图| videosex国产| 国产成人aa在线观看| 国产 一区精品| 丝袜喷水一区| 久久综合国产亚洲精品| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲三区欧美一区| 七月丁香在线播放| 亚洲欧美成人精品一区二区| 热re99久久国产66热| 男的添女的下面高潮视频| 亚洲成人一二三区av| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产不卡av网站在线观看| 国产精品久久久久久av不卡| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 大码成人一级视频| 十八禁网站网址无遮挡| www日本在线高清视频| 制服诱惑二区| 日本欧美视频一区| 天堂8中文在线网| 欧美激情高清一区二区三区 | 亚洲国产精品999| 丰满少妇做爰视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 黑人猛操日本美女一级片| videosex国产| 免费黄色在线免费观看| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 日韩一区二区视频免费看| 天美传媒精品一区二区| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 麻豆乱淫一区二区| av片东京热男人的天堂| 久久久欧美国产精品| av国产久精品久网站免费入址| 一级片免费观看大全| 成年av动漫网址| 多毛熟女@视频| 亚洲成色77777| 国产 精品1| 少妇人妻 视频| 日韩一区二区视频免费看| 美女福利国产在线| 叶爱在线成人免费视频播放| 狂野欧美激情性bbbbbb| 只有这里有精品99| videos熟女内射| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 深夜精品福利| 99久久精品国产国产毛片| 国产精品成人在线| 国产色婷婷99| 免费观看性生交大片5| 久久99一区二区三区| 婷婷成人精品国产| 高清av免费在线| 女性生殖器流出的白浆| 久久久久网色| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产又爽黄色视频| 久久 成人 亚洲| 男女边摸边吃奶| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲情色 制服丝袜| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产精品久久久久久久久免| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 看十八女毛片水多多多| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 婷婷色av中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久久久精品人妻al黑| 人妻少妇偷人精品九色| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 尾随美女入室| 五月天丁香电影| 成人国产麻豆网| 久久狼人影院| 色播在线永久视频| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 欧美av亚洲av综合av国产av | a级毛片黄视频| 亚洲美女视频黄频| 18+在线观看网站| 精品久久久精品久久久| 国产精品一国产av| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲国产最新在线播放| 国产黄频视频在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 亚洲国产欧美网| 亚洲美女黄色视频免费看| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产精品 国内视频| 极品少妇高潮喷水抽搐| 久久久久久久精品精品| 日韩一本色道免费dvd| 日本91视频免费播放| 一区二区三区四区激情视频| 亚洲精品自拍成人| 少妇精品久久久久久久| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久久久久亚洲中文字幕| 国产av国产精品国产| 男女免费视频国产| 老熟女久久久| 成人影院久久| 国产福利在线免费观看视频| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 精品福利永久在线观看| 国产日韩欧美亚洲二区| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产极品天堂在线|