雌馬酚干預(yù)對(duì)高脂飲食誘導(dǎo)的去卵巢大鼠非酒精性脂肪肝的影響

張貴明,倪向敏,崔涵強(qiáng),徐 喆,李 碩,王 建

400037 重慶，陸軍軍醫(yī)大學(xué)(第三軍醫(yī)大學(xué))第二附屬醫(yī)院營(yíng)養(yǎng)科

非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)以肝細(xì)胞中過(guò)量的甘油三酯(triglyceride，TG)積累為特征,可從單純性脂肪變性發(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)、肝纖維化、肝硬化，甚至肝細(xì)胞癌，影響著全球大約25%的人口，已成為一個(gè)日益嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題[1]。核因子κB(nuclear factor kappa-B，NF-κB)通路的持續(xù)激活可促進(jìn)腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-alpha，TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)等炎癥因子的釋放，引起慢性炎癥狀態(tài)和胰島素抵抗(insulin resistance，IR)，進(jìn)而促進(jìn)NAFLD的發(fā)展。NF-κB及其下游信號(hào)通路受雌激素信號(hào)通路的抑制，因而雌激素缺乏會(huì)增加機(jī)體的炎癥因子水平[2]。絕經(jīng)后女性由于雌激素水平降低,導(dǎo)致其N(xiāo)AFLD發(fā)病率遠(yuǎn)高于絕經(jīng)前婦女,激素替代療法(hormone replacement therapy, HRT)可有效改善絕經(jīng)后NAFLD的肝臟炎癥和脂肪變性，但可能增加乳腺癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)限制了其臨床應(yīng)用[3]。

大豆異黃酮(soy isoflavones，SIF)是一種天然的植物化合物,其分子結(jié)構(gòu)和生物活性與體內(nèi)合成的雌激素相似，在豆類植物中含量較為豐富，具有抗炎、抗氧化、改善IR、緩解脂質(zhì)代謝紊亂等多種生物學(xué)效應(yīng)，SIF作為植物雌激素并沒(méi)有合成雌激素的副作用[4-7]。人群調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，膳食SIF攝入水平與NAFLD發(fā)病率呈負(fù)相關(guān)[8-9]。SIF的生物學(xué)效應(yīng)與其腸道代謝產(chǎn)物雌馬酚(equol，Eq)密切相關(guān)，Eq比其前體更穩(wěn)定，清除率更低，具有更高的雌激素活性，表現(xiàn)出很強(qiáng)的抗炎、抗氧化作用，在緩解女性更年期癥狀，以及預(yù)防心血管疾病、骨質(zhì)疏松、慢性腎病、惡性腫瘤等方面顯示出良好的效果[10]。然而,目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于Eq干預(yù)對(duì)絕經(jīng)后NAFLD的作用研究甚少。本研究通過(guò)高脂飲食(high-fat diet，HFD)喂養(yǎng)去卵巢大鼠建立絕經(jīng)后NAFLD模型,觀察Eq干預(yù)對(duì)絕經(jīng)后NAFLD的影響,并探討其中的可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

Eq購(gòu)自上海大賽璐藥物手性技術(shù)有限公司，17β-雌二醇(estradiol，E2)、游離脂肪酸(free fatty acid，F(xiàn)FA)檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京Solarbio公司。TG、總膽固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-c)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein cholesterol，LDL-c)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine transaminase，ALT)，天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)檢測(cè)試劑盒廠家為南京建成生物工程研究所。TNF-α、IL-6、雌激素和胰島素檢測(cè)ELISA試劑盒購(gòu)自廈門(mén)惠佳生物科技有限公司?？俁NA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、qRT-PCR試劑盒、引物、GAPDH一抗、過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的二抗購(gòu)自上海生工生物技術(shù)有限公司。RIPA裂解緩沖液、BCA蛋白檢測(cè)試劑盒購(gòu)自上海碧云天生物科技。NF-κB p-p65 一抗購(gòu)自上海艾比瑪特生物醫(yī)藥有限公司。大鼠高脂飼料購(gòu)自北京華富康生物科技公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)及分組

實(shí)驗(yàn)按照陸軍軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物保護(hù)與使用委員會(huì)批準(zhǔn)的程序進(jìn)行。5周齡雌性SD大鼠60只，購(gòu)自北京華富康生物科技公司。將大鼠置于溫度[(21±2)℃]和濕度[(50±10)%]條件下，標(biāo)準(zhǔn)光照(12 h光/暗)循環(huán)，自由攝入標(biāo)準(zhǔn)飲食和水。大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉400 mg/kg麻醉，進(jìn)行假手術(shù)或卵巢切除(ovariectomized,OVX)。7 d后選取10只假手術(shù)大鼠作為假手術(shù)組,喂普通飼料；50只OVX大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為：OVX+HFD組，OVX+HFD+低、中、高劑量[20、40、80 mg/(kg·d)] Eq干預(yù)組，OVX+HFD+E2[0.25 mg/(kg·d)]干預(yù)組,每組10只,喂高脂飼料。Eq和E2以灌胃方式給藥,其余組給予等量生理鹽水,每日1次,連續(xù)12周。12周后大鼠存活51只(死亡原因均為灌胃后窒息所致)，大鼠禁食12 h，麻醉后稱量、采血，處死、取肝組織樣品。

1.3 大鼠肝臟組織形態(tài)學(xué)觀察

所有大鼠取肝臟相同部位，4%多聚甲醛固定、脫水、石蠟包埋，常規(guī)切片5 μm厚，HE染色后使用奧林巴斯顯微鏡觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)變化，以超過(guò)5%的肝細(xì)胞出現(xiàn)大泡性脂肪變性作為NAFLD的病理診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]。

1.4 稱量大鼠肝臟濕質(zhì)量,計(jì)算肝指數(shù)

處死大鼠后迅速去除肝臟周?chē)M織,稱量肝臟濕質(zhì)量并計(jì)算肝指數(shù)(肝臟濕質(zhì)量/體質(zhì)量×100%)。

1.5 血清雌激素、FPG、FINS水平及HOMA-IR檢測(cè)

血液樣本4 ℃、4 000 r/min離心10 min，收集血清，采用全自動(dòng)臨床化學(xué)分析儀測(cè)定空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)水平。ELISA試劑盒檢測(cè)血清雌激素、空腹胰島素(fasting insulin，F(xiàn)INS)水平，計(jì)算穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(homeostasis model assessment-IR, HOMA-IR)，HOMA-IR=FPG×FINS÷22.6。

1.6 血清和肝臟脂質(zhì)水平檢測(cè)

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、FFA水平；肝臟勻漿于生理鹽水中，采用試劑盒測(cè)定勻漿中TG、TC水平。

1.7 肝損傷血清生化指標(biāo)檢測(cè)

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清ALT、AST水平。

1.8 血清和肝臟炎癥因子水平檢測(cè)

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)血清TNF-α、IL-6水平；肝臟勻漿于生理鹽水中，采用試劑盒測(cè)定勻漿中TNF-α、IL-6水平。

1.9 實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)

按照試劑盒的說(shuō)明，用TRIzol試劑提取肝組織總RNA。測(cè)定RNA濃度，用逆轉(zhuǎn)錄酶試劑盒將RNA轉(zhuǎn)錄為cDNA。利用NCBI網(wǎng)站設(shè)計(jì)大鼠TNF-α、IL-6和GAPDH序列特異性引物,見(jiàn)表1。Bio-Rad PCR儀進(jìn)行qRT-PCR,采用比較周期閾值(Ct) (2-ΔΔCt)方法定量RNA的相對(duì)量。

表1 引物序列

1.10 Western blot檢測(cè)

肝組織用含有蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液勻漿，在10 000×g轉(zhuǎn)速下4 ℃離心10 min。按試劑盒說(shuō)明測(cè)定上清液中的蛋白濃度后采用Western blot檢測(cè)肝組織等量蛋白中NF-κB p-p65、GAPDH的表達(dá)情況，顯影后用Image J軟件計(jì)算灰度值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 Eq對(duì)大鼠肝臟組織學(xué)改變的影響

肝組織 HE 染色可見(jiàn):假手術(shù)組大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及排列正常;OVX+HFD組大鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及排列紊亂,匯管區(qū)出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),出現(xiàn)大量脂滴空泡,符合NAFLD的診斷標(biāo)準(zhǔn)；經(jīng)Eq或E2干預(yù)后，肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)及排列紊亂有所改善，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和脂滴空泡減少,且隨著Eq干預(yù)劑量增加，其對(duì)脂肪肝病理變化的改善效應(yīng)有增強(qiáng)趨勢(shì)，見(jiàn)圖1。

2.2 Eq對(duì)大鼠體質(zhì)量、肝臟濕質(zhì)量、肝指數(shù)的影響

與假手術(shù)組比較，OVX+HFD組大鼠體質(zhì)量、肝臟濕質(zhì)量及肝指數(shù)顯著升高(P<0.05)；與OVX+HFD組比較，Eq干預(yù)后大鼠肝臟濕質(zhì)量及肝指數(shù)均顯著降低(P<0.05)，其中Eq中、高劑量組顯著降低大鼠體質(zhì)量(P<0.05)，與E2具有相似的作用效果，干預(yù)效應(yīng)隨Eq劑量增加而增強(qiáng)，見(jiàn)圖2。

1:假手術(shù)組(n=10); 2:OVX+HFD組(n=8); 3:OVX+HFD+低劑量Eq干預(yù)組(n=8); 4:OVX+HFD+中劑量Eq干預(yù)組(n=8); 5:OVX+HFD+高劑量Eq干預(yù)組(n=8); 6:OVX+HFD+E2干預(yù)組(n=9)；a:P<0.05，與假手術(shù)組比較;b:P<0.05，與OVX+HFD組比較

2.3 Eq對(duì)大鼠血清雌激素、FPG、FINS水平及HOMA-IR的影響

與假手術(shù)組比較，OVX+HFD 組大鼠血清雌激素水平顯著下降(P<0.05),血清FPG、FINS水平，HOMA-IR顯著升高(P<0.05)；與OVX+HFD組比較，經(jīng)Eq或E2干預(yù)后，大鼠血清雌激素水平顯著升高(P<0.05),血清FPG、FINS水平，HOMA-IR顯著降低(P<0.05)，Eq干預(yù)效果呈現(xiàn)一定劑量依賴效應(yīng)，見(jiàn)圖3。

1:假手術(shù)組(n=10); 2:OVX+HFD組(n=8); 3:OVX+HFD+低劑量Eq干預(yù)組(n=8); 4:OVX+HFD+中劑量Eq干預(yù)組(n=8); 5:OVX+HFD+高劑量Eq干預(yù)組(n=8); 6:OVX+HFD+E2干預(yù)組(n=9)；a:P<0.05，與假手術(shù)組比較;b:P<0.05，與OVX+HFD組比較

2.4 Eq對(duì)大鼠血清脂質(zhì)水平的影響

與假手術(shù)組比較，OVX+HFD組大鼠血清HDL-c水平顯著降低(P<0.05)，血清TG、TC、LDL-c、FFA水平顯著升高(P<0.05)；Eq干預(yù)后，OVX+HFD大鼠血清TG、TC、LDL-c、FFA水平顯著降低(p<0.05)，血清HDL-c水平顯著升高(P<0.05)，與E2具有相似的作用效果，隨著干預(yù)劑量增加,Eq的效應(yīng)更加明顯,見(jiàn)圖4。

1:假手術(shù)組(n=10); 2:OVX+HFD組(n=8); 3:OVX+HFD+低劑量Eq干預(yù)組(n=8); 4:OVX+HFD+中劑量Eq干預(yù)組(n=8); 5:OVX+HFD+高劑量Eq干預(yù)組(n=8); 6:OVX+HFD+E2干預(yù)組(n=9)；a:P<0.05，與假手術(shù)組比較;b:P<0.05，與OVX+HFD 組比較

2.5 Eq對(duì)大鼠肝臟脂質(zhì)水平的影響

與假手術(shù)組比較，OVX+HFD組大鼠肝臟TG、TC水平顯著升高(P<0.05)，與OVX+HFD組比較,Eq干預(yù)后OVX+HFD大鼠肝臟TG、TC水平顯著降低(P<0.05)，與E2具有相似的作用效果,Eq干預(yù)效果呈現(xiàn)一定劑量依賴效應(yīng)，見(jiàn)圖5。

1:假手術(shù)組(n=10); 2:OVX+HFD組(n=8); 3:OVX+HFD+低劑量Eq干預(yù)組(n=8); 4:OVX+HFD+中劑量Eq干預(yù)組(n=8); 5:OVX+HFD+高劑量Eq干預(yù)組(n=8); 6:OVX+HFD+E2干預(yù)組(n=9)；a:P<0.05，與假手術(shù)組比較;b:P<0.05，與OVX+HFD組比較

2.6 Eq對(duì)大鼠ALT和AST水平的影響

與假手術(shù)組比較，OVX+HFD組大鼠血清ALT、AST水平顯著升高(P<0.05)，與OVX+HFD組比較，Eq或E2干預(yù)后大鼠血清ALT、AST水平顯著降低(P<0.05)，Eq干預(yù)效果呈現(xiàn)一定劑量依賴效應(yīng)，見(jiàn)圖6。

2.7 Eq對(duì)大鼠血清和肝臟炎癥因子水平的影響

與假手術(shù)組比較，OVX+HFD組大鼠血清和肝臟炎癥因子TNF-α、IL-6水平顯著升高(P<0.05)，與OVX+HFD組比較，Eq干預(yù)后大鼠血清和肝臟TNF-α、IL-6水平顯著降低(P<0.05)，與E2具有相似的作用效果，隨著干預(yù)劑量增加，Eq的效應(yīng)增強(qiáng)，見(jiàn)圖7。

1:假手術(shù)組(n=10); 2:OVX+HFD組(n=8); 3:OVX+HFD+低劑量Eq干預(yù)組(n=8); 4:OVX+HFD+中劑量Eq干預(yù)組(n=8); 5:OVX+HFD+高劑量Eq干預(yù)組(n=8); 6:OVX+HFD+E2干預(yù)組(n=9)；a:P<0.05，與假手術(shù)組比較;b:P<0.05，與OVX+HFD組比較

2.8 Eq對(duì)大鼠肝臟TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，OVX+HFD組肝組織炎癥因子TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)；Eq或E2干預(yù)后肝組織TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)圖8。

1:假手術(shù)組(n=10); 2:OVX+HFD組(n=8); 3:OVX+HFD+低劑量Eq干預(yù)組(n=8); 4:OVX+HFD+中劑量Eq干預(yù)組(n=8); 5:OVX+HFD+高劑量Eq干預(yù)組(n=8); 6:OVX+HFD+E2干預(yù)組(n=9)；a:P<0.05，與假手術(shù)組比較;b:P<0.05，與OVX+HFD 組比較

2.9 Eq對(duì)大鼠肝臟NF-κB p-p65蛋白表達(dá)的影響

與假手術(shù)組比較，OVX+HFD組肝組織NF-κB p-p65蛋白表達(dá)水平均顯著升高(P<0.05)；Eq干預(yù)后肝組織TNF-κB p-p65蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，見(jiàn)圖9。

1:假手術(shù)組(n=10); 2:OVX+HFD組(n=8); 3:OVX+HFD+低劑量Eq干預(yù)組(n=8); 4:OVX+HFD+中劑量Eq干預(yù)組(n=8); 5:OVX+HFD+高劑量Eq干預(yù)組(n=8); 6:OVX+HFD+E2干預(yù)組(n=9)

3 討論

NAFLD發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,“多重打擊”假說(shuō)認(rèn)為胰島素抵抗(IR)、脂質(zhì)過(guò)氧化、炎癥因子、腸道微環(huán)境等多種因素作用于易感個(gè)體，共同促進(jìn)NAFLD的發(fā)生、發(fā)展[12]。NF-κB是一種參與先天和適應(yīng)性免疫反應(yīng)的轉(zhuǎn)錄因子,在肝臟炎癥信號(hào)通路的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用,在NAFLD動(dòng)物模型和NASH患者中顯示了持續(xù)的NF-κB通路激活[2,12]。正常情況下，NF-κB通過(guò)與抑制蛋白結(jié)合被隔離在細(xì)胞質(zhì)中，在低雌激素、高脂等條件下,NF-κB抑制蛋白磷酸化降解允許NF-κB轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核,誘導(dǎo)編碼TNF-α和IL-6等炎癥因子的靶基因表達(dá),引起炎癥反應(yīng)和肝損傷[13]。雌激素是女性最重要的激素,絕經(jīng)前主要由卵巢合成,絕經(jīng)后由于卵巢功能減退導(dǎo)致其濃度急劇降低[14],NF-κB及其下游信號(hào)通路受雌激素信號(hào)通路的抑制,這一調(diào)控作用解釋了與絕經(jīng)相關(guān)的肝臟炎癥的過(guò)度調(diào)節(jié),并導(dǎo)致NAFLD向更有害的NASH、纖維化和肝癌等情況發(fā)展[2]。

飲食和生活方式的改變以及壽命的延長(zhǎng)使絕經(jīng)后婦女NAFLD的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。NAFLD與心血管疾病、骨質(zhì)疏松、惡性腫瘤、各種內(nèi)分泌疾病緊密相關(guān),這種疾病的日益流行及其可能造成的嚴(yán)重并發(fā)癥給患者帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和較差的生活質(zhì)量[1]。然而,目前針對(duì)NAFLD的治療并不理想,缺乏有效的藥物治療手段。盡管有研究顯示，接受激素替代療法(HRT)可降低絕經(jīng)后婦女NAFLD患病風(fēng)險(xiǎn),但婦女健康倡議的評(píng)估結(jié)果認(rèn)為HRT的總體風(fēng)險(xiǎn)超過(guò)了它的益處,不推薦把HRT作為一種長(zhǎng)期治療手段[15-16]。因此探索一種安全有效、易于長(zhǎng)期堅(jiān)持的治療方法很有意義。近年來(lái)，植物雌激素在脂肪肝治療中的作用開(kāi)始受到密切關(guān)注，本研究通過(guò)切除大鼠卵巢加高脂飲食誘導(dǎo)NAFLD模型,模擬絕經(jīng)后婦女NAFLD病變,探討Eq對(duì)NAFLD大鼠的作用、炎癥因子的表達(dá)的影響及可能的機(jī)制。

NF-κB活化伴有NF-κB p65蛋白磷酸化的增多,p65蛋白磷酸化可作為NF-κB通路激活的標(biāo)志[17]。TNF-α在與肝損傷相關(guān)的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中具有關(guān)鍵作用,一方面TNF-α表達(dá)受NF-κB信號(hào)的調(diào)控,另一方面TNF-α可通過(guò)磷酸化NF-κB抑制因子來(lái)激活NF-κB,進(jìn)一步促進(jìn)TNF-α轉(zhuǎn)錄,形成了一個(gè)炎癥性的正反饋回路[18]。TNF-α和IL-6是機(jī)體的重要炎癥細(xì)胞因子,一方面可以促進(jìn)機(jī)體炎癥的發(fā)生,另一方面可通過(guò)抑制胰島素受體底物磷酸化,損害胰島素信號(hào)誘發(fā)IR[19]。IR是NAFLD的一個(gè)主要特征,對(duì)脂肪毒性、氧化應(yīng)激和炎癥級(jí)聯(lián)激活的建立至關(guān)重要[12]。在IR狀態(tài)下,肝胰島素不能抑制肝臟葡萄糖生成但能促進(jìn)脂質(zhì)合成,導(dǎo)致高血糖、高甘油三酯血癥和肝臟脂肪變性[20]。此外,胰島素具有抑制脂肪組織脂解的作用，在IR狀態(tài)下,這種抑制受損,導(dǎo)致FFA向肝臟的外排增加,肝細(xì)胞中的FFA一方面通過(guò)絲氨酸激酶的激活來(lái)誘導(dǎo)胰島素信號(hào)通路的缺陷,另一方面FFA增多會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)的異常堆積,促進(jìn)TNF-α、IL-6等炎癥介質(zhì)的增多,造成炎癥、IR的惡性循環(huán),加速NAFLD的進(jìn)展[12,19]。從單純性肝脂肪變性到NASH或從NASH到肝硬化的分子機(jī)制尚不完全清楚,但肝組織炎癥細(xì)胞聚集和IR是其中的關(guān)鍵步驟[21]。

本研究干預(yù)結(jié)束時(shí),與假手術(shù)組比較,OVX+HFD大鼠雌激素水平顯著降低,肝臟組織學(xué)檢查可見(jiàn)大面積的脂肪變性,成功誘導(dǎo)低雌激素高脂飲食環(huán)境下的NAFLD。OVX+HFD大鼠血清HDL-c水平降低, 血清TG、TC、LDL-c、FFA和肝臟TG、TC水平升高,出現(xiàn)高脂血癥、肝臟脂質(zhì)異常沉積等脂質(zhì)代謝紊亂;血清和肝臟TNF-α、IL-6水平增高,出現(xiàn)明顯的炎癥反應(yīng)；同時(shí)FPG、FINS和HOMA-IR升高。AST和ALT是反應(yīng)肝功能常用指標(biāo),在出現(xiàn)肝損傷和炎癥等條件下,AST和ALT的水平會(huì)顯著升高[22],本研究中OVX+HFD大鼠血清AST和ALT水平較假手術(shù)組顯著升高,說(shuō)明大鼠出現(xiàn)了明顯的肝功能的異常。通過(guò)qRT-PCR和Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)肝組織TNF-α、IL-6 mRNA及NF-κB p-p65蛋白表達(dá)水平增高。研究顯示,Eq可通過(guò)抗炎作用發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)[23-25],SUBEDI等[23]發(fā)現(xiàn)Eq可有效抑制NF-κB活性,降低TNF-α、IL-6等炎癥因子表達(dá),保護(hù)小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥損傷。LU等[24]的研究也發(fā)現(xiàn),Eq可通過(guò)抑制NF-κB活性,減少TNF-α、IL-6的表達(dá)減輕神經(jīng)炎癥反應(yīng),有效改善小鼠全身注射脂多糖引起的抑郁樣行為。BANDARA等[25]發(fā)現(xiàn)，Eq可以劑量依賴性降低TNF-α、IL-6的表達(dá)，減輕大鼠皮膚炎癥。本研究顯示,Eq干預(yù)后大鼠血清雌激素維持在更高水平,有效減輕了OVX+HFD大鼠體質(zhì)量、肝指數(shù)、HOMA-IR、炎癥反應(yīng)水平和肝臟脂肪病變程度，改善了大鼠肝功能和脂質(zhì)代謝紊亂，下調(diào)了肝組織TNF-α和IL-6 mRNA和NF-κB p-p65蛋白水平,隨著干預(yù)劑量增加,Eq的效應(yīng)更加明顯,與E2具有相似的作用效果。

綜上所述，Eq能有效改善高脂飲食去卵巢誘導(dǎo)的大鼠非酒精性脂肪肝,其部分機(jī)制可能是Eq通過(guò)抑制NF-κB信號(hào)，減少炎癥因子TNF-α、IL-6表達(dá),減輕大鼠炎癥和IR水平,最終有效減輕了大鼠脂質(zhì)代謝紊亂和肝功能的異常。本研究為揭示Eq臨床防治絕經(jīng)后婦女NAFLD提供了新的科學(xué)依據(jù)，但Eq調(diào)控NF-κB信號(hào)通路的具體機(jī)制尚需進(jìn)一步深入研究。值得注意的是,由于飲食習(xí)慣和腸道微環(huán)境的差異,并不是所有人都能代謝SIF產(chǎn)生Eq而從中獲益[26],而經(jīng)常性食用含SIF食物可以提高腸道中代謝SIF產(chǎn)生Eq菌群的豐度,使非Eq產(chǎn)生者向Eq產(chǎn)生者轉(zhuǎn)變[10],因此,對(duì)于有發(fā)展成為NAFLD傾向的絕經(jīng)后女性,如沒(méi)有特殊禁忌,可適當(dāng)增加飲食中富含SIF食物而從中獲益。