SKP1、SKP2對(duì)腎癌預(yù)后的預(yù)測(cè)作用分析

楊偉芳 楊海華 冉剛 皮文虎 王學(xué)全

腎癌在全球男性、女性惡性腫瘤中發(fā)病率分別列第6位、第8位，且呈逐年上升趨勢(shì)。由于早期癥狀不典型及缺乏高靈敏度、高特異度的腫瘤標(biāo)志物，約20%的腎癌患者在確診時(shí)已發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[1]。腎癌患者5年生存率75%，而有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者5年生存率僅10%～12%[2]。免疫治療以及免疫聯(lián)合靶向治療的發(fā)展為腎癌治療帶來(lái)新的希望，但治療有效率仍較低[3-4]。目前，腎癌尚缺乏簡(jiǎn)單的、有助早期診斷、指導(dǎo)治療和預(yù)測(cè)預(yù)后的生物標(biāo)志物。S期激酶相關(guān)蛋白2（S-phase kinase-associated protein 2,SKP2）是 F-box蛋白的一種，它與CUL1、S期激酶相關(guān)蛋白1（SKP1）、環(huán)盒蛋白1（ring box 1,Rbx1）一起形成SCF-E3泛素連接酶復(fù)合體，通過(guò)泛素化對(duì)體內(nèi)多種關(guān)鍵蛋白起調(diào)節(jié)作用。免疫檢查點(diǎn)分子的表達(dá)以及免疫細(xì)胞的成熟、腫瘤微環(huán)境的塑造等均受泛素化系統(tǒng)的調(diào)節(jié)。研究報(bào)道SKP2影響腫瘤形成、轉(zhuǎn)移、細(xì)胞周期發(fā)展、細(xì)胞衰老、凋亡、自噬、免疫應(yīng)答、腫瘤放射敏感性、腫瘤藥物敏感性等，是腫瘤治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)之一[5-11]。SKP1是SCF-E3泛素連接酶復(fù)合體的不變核心成分，負(fù)責(zé)結(jié)合CUL1并招募各種F-box蛋白用于SCF復(fù)合物的形成。SKP1和SCF復(fù)合物調(diào)節(jié)多種蛋白維持基因組穩(wěn)定，包括DNA損傷修復(fù)、凋亡信號(hào)傳導(dǎo)和中心體動(dòng)力學(xué)等。SKP1表達(dá)異?？蓪?dǎo)致染色體不穩(wěn)定，可能與腫瘤的發(fā)生相關(guān)，其具體機(jī)制尚不明確[12-14]。有研究報(bào)道腎癌組織標(biāo)本中存在SKP2表達(dá)，且SKP2表達(dá)與腫瘤分期、分級(jí)和不良預(yù)后相關(guān)。腎透明細(xì)胞癌是腎癌最常見(jiàn)的組織學(xué)亞型，占70%～80%[15]，腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌等也是腎癌的常見(jiàn)類(lèi)型。腎癌的不同病理類(lèi)型中SKP2表達(dá)存在差異[16-18]。基于此，本研究通過(guò)多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)分析SKP1、SKP2表達(dá)水平對(duì)腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌這3種腎癌患者預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 數(shù)據(jù)源和預(yù)處理 從https://xenabrowser.net/數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索癌癥基因組圖譜（The Cancer Genome Atlas，TCGA）數(shù)據(jù)庫(kù)并下載64例腎嫌色細(xì)胞癌，531例腎透明細(xì)胞癌，286例腎乳頭狀細(xì)胞癌患者的臨床數(shù)據(jù)、RNA-seq數(shù)據(jù)、甲基化數(shù)據(jù)和突變數(shù)據(jù)，使用R.studio、R編程（4.03）軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.2 腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌中SKP1、SKP2表達(dá)分析 使用“survminer”軟件進(jìn)行患者Kaplan-Meier生存分析，采用Cox回歸分析SKP1、SKP2表達(dá)與這3種腎癌患者預(yù)后的相關(guān)性；pec包分析生存的一致性指數(shù)；risk Regression包計(jì)算時(shí)間依賴性ROC曲線下的AUC。

1.3 腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌臨床病理特征及甲基化位點(diǎn)與SKP1和SKP2表達(dá)水平的關(guān)系分析 使用MEXPRESS數(shù)據(jù)庫(kù)（http://mexpress.be）可視化分析這3種腎癌中臨床病理特征及甲基化位點(diǎn)與SKP1、SKP2表達(dá)水平的關(guān)系。

1.4 SKP1、SKP2甲基化位點(diǎn)與腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌預(yù)后的關(guān)系分析 采用Cox回歸分析SKP1、SKP2甲基化位點(diǎn)的甲基化水平與這3種腎癌患者預(yù)后的相關(guān)性。

1.5 腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌中SKP1、SKP2基因突變分析 采用cBioPortal網(wǎng)站分析SKP1、SKP2在這3種腎癌中的突變分布；使用R語(yǔ)言 maftools軟件包中的oncoplot函數(shù)生成SKP1、SKP2高表達(dá)組和低表達(dá)組突變瀑布圖。

1.6 基因功能富集分析和蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)分析采用Pearson分析腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌中SKP2的共表達(dá)基因（r＞0.4，P＜0.05），然后采用Metascape數(shù)據(jù)庫(kù)分析3種腎癌中SKP2共表達(dá)基因的功能富集（GO和KEGG）和蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)（protein-protein interaction,PPI）。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用R.studio軟件和R編程（4.03）軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布的計(jì)量資料組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料兩組比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。單因素和多因素Cox回歸分析用于評(píng)估預(yù)后。生存分析采用Kaplan-Meier法和對(duì)數(shù)秩檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌組織SKP1、SKP2表達(dá)情況比較 與正常組織比較，SKP1基因表達(dá)水平在腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌組織中均降低（均P＜0.05），SKP2基因表達(dá)水平在腎透明細(xì)胞癌和腎乳頭狀細(xì)胞癌中升高（均P＜0.05），而在腎嫌色細(xì)胞癌中表達(dá)降低（P＜0.05），但在配對(duì)腫瘤組織中與正常組織無(wú)明顯差異（均P＞0.05）。

2.2 SKP1、SKP2表達(dá)情況與腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌預(yù)后的關(guān)系 在腎透明細(xì)胞癌中SKP1表達(dá)降低者預(yù)后差（P＜0.05）。腎嫌色細(xì)胞癌和腎乳頭狀癌中SKP1表達(dá)高低與總生存期均無(wú)關(guān)（均P＞0.05）。SKP2表達(dá)升高與腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌的不良預(yù)后均有關(guān)（均P＜0.05）。腎透明細(xì)胞癌中SKP1、SKP2預(yù)測(cè)生存的AUC為0.6～0.7，一致性指數(shù)為0.6左右。腎嫌色細(xì)胞癌中SKP2預(yù)測(cè)生存的AUC為0.8～0.9，一致性指數(shù)穩(wěn)定在0.8左右，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確度較好。腎嫌色細(xì)胞癌中SKP1預(yù)測(cè)生存的AUC為0.6～0.7，一致性指數(shù)為0.6左右。腎乳頭狀細(xì)胞癌中SKP2預(yù)測(cè)生存的AUC為0.7～0.8，一致性指數(shù)為0.6～0.7。腎乳頭狀細(xì)胞癌中SKP1的AUC和一致性指數(shù)偏低。單變量Cox回歸分析結(jié)果表明SKP1是腎乳頭狀細(xì)胞癌和腎嫌色細(xì)胞癌患者的不良預(yù)后因素，而在腎透明細(xì)胞癌患者中，它被認(rèn)為是一個(gè)有利的預(yù)后因素。SKP2是腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌患者的不良預(yù)后預(yù)測(cè)因素。

2.3 腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌臨床病理特征及甲基化位點(diǎn)與SKP1和SKP2表達(dá)水平的關(guān)系 腎透明細(xì)胞癌組織SKP1表達(dá)水平與患者初診時(shí)年齡（r=0.086，P＜0.05）、陽(yáng)性淋巴結(jié)數(shù)目（r=0.292，P＜0.05）均呈正相關(guān)。腎乳頭狀細(xì)胞癌組織SKP1表達(dá)水平與性別、病理N分期、腫瘤分期等相關(guān)（均P＜0.05）。腎透明細(xì)胞癌組織SKP2表達(dá)水平與患者初診時(shí)年齡、新輔助治療史等相關(guān)（均P＜0.05）。腎乳頭狀細(xì)胞癌組織SKP2表達(dá)水平與患者性別、臨床M分期、病理T分期、病理M分期、腫瘤分期等相關(guān)（均P＜0.05）。

腎乳頭狀細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌和腎透明細(xì)胞癌中各有8、9、9個(gè)甲基化位點(diǎn)與SKP1表達(dá)水平顯著相關(guān)（均P＜0.05）；各有2、3、6個(gè)甲基化位點(diǎn)與SKP2表達(dá)水平顯著相關(guān)（均P＜0.05）。ch.5.2450351R、cg19957803、cg04691829、cg20261922、cg00854995、cg26922706、cg04136748等7個(gè)甲基化位點(diǎn)與這3種腎癌SKP1表達(dá)水平均顯著相關(guān)（均P＜0.05）。其中腎乳頭狀細(xì)胞癌中cg14641600、ch.5.2450351R、cg19957803、cg04691829、cg20261922、cg00854995、cg26922706、cg04136748等 8個(gè)甲基化位點(diǎn)與SKP1表達(dá)水平顯著相關(guān)（均P＜0.05）。腎嫌色細(xì)胞癌中ch.5.2450351R、cg19957803、cg04691829、cg11916758、cg02717486、cg20261922、cg00854995、cg26922706、cg04136748等 9個(gè)甲基化位點(diǎn)與SKP1表達(dá)水平相關(guān)（均P＜0.05）。腎透明細(xì)胞癌中cg18516595、ch.5.2450351R、cg19957803、cg04691829、cg20261922、cg00854995、cg26922706、cg16653901、cg04136748等9個(gè)甲基化位點(diǎn)與SKP1表達(dá)水平顯著相關(guān)（均P＜0.05）。腎乳頭狀細(xì)胞癌中cg27130364、cg04696559與SKP2表達(dá)相關(guān)（均P＜0.05）。腎嫌色細(xì)胞癌中cg24749912、cg12428978、cg27116787甲基化位點(diǎn)與SKP2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（均P＜0.05）。腎透明細(xì)胞癌中 cg08674342、cg16113047、cg01943654、cg21893846、cg04696559、cg14711201等6個(gè)甲基化位點(diǎn)與SKP2表達(dá)呈正相關(guān)（均P＜0.05）。

2.4 腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌SKP1、SKP2甲基化與患者預(yù)后的關(guān)系 對(duì)于SKP1和SKP2甲基化位點(diǎn)，腎乳頭狀細(xì)胞癌中有17個(gè)，腎嫌色細(xì)胞癌中有12個(gè)，腎透明細(xì)胞癌中有23個(gè)與總生存期相關(guān)（均P＜0.05）。其中SKP1 cg00854995、cg02717486、cg08584618甲基化位點(diǎn)與腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌總生存期呈正相關(guān)（均P＜0.05）。SKP1 cg04691829、cg16653901、cg19957803甲基化位點(diǎn)與腎透明細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌不良預(yù)后相關(guān)（均P＜0.05）。SKP2 cg08344341、cg08674342甲基化位點(diǎn)與腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌不良預(yù)后相關(guān)（均P＜0.05）。SKP2 cg15996282、cg27130364甲基化位點(diǎn)與腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌不良預(yù)后相關(guān)（均P＜0.05）。

2.5 腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌SKP1、SKP2的基因突變情況 OncoPrint分析結(jié)果顯示，腎癌中SKP1基因突變占7%，突變類(lèi)型是基因擴(kuò)增；SKP2基因突變占0.4%，包括錯(cuò)配修復(fù)和基因擴(kuò)增。其中腎透明細(xì)胞癌中SKP1和SKP2突變占14%。腎癌總體人群中，與無(wú)突變者相比，SKP1和SKP2突變與總生存期無(wú)關(guān)（P＞0.05）。

通過(guò)對(duì)這3種腎癌SKP1和SKP2高低表達(dá)組突變率最高的15個(gè)基因的分析顯示，在腎透明細(xì)胞癌和腎乳頭狀細(xì)胞癌SKP2和SKP1高表達(dá)組中均存在KMT2C高突變，而低表達(dá)組該基因突變率較低。腎乳頭狀細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌SKP1低表達(dá)組存在HERC2突變。PRKDC突變?cè)谀I透明細(xì)胞癌SKP1低表達(dá)組和SKP2高表達(dá)組更常見(jiàn)。SETD2突變?cè)谀I透明細(xì)胞癌SKP1低表達(dá)組和SKP2高表達(dá)組突變更常見(jiàn)。腎透明細(xì)胞癌和腎乳頭狀細(xì)胞癌SKP2低表達(dá)組中存在HMCN1突變，而高表達(dá)組該基因突變率低，見(jiàn)圖1、2（插頁(yè)）。

圖1 腎癌中S期激酶相關(guān)蛋白1（SKP1）高表達(dá)和低表達(dá)組的基因突變情況（a、b：腎乳頭狀細(xì)胞癌中SKP1高表達(dá)、低表達(dá)；c、d：腎透明細(xì)胞癌中SKP1高表達(dá)、低表達(dá)；e、f：腎嫌色細(xì)胞癌中SKP1高表達(dá)、低表達(dá)）

圖2 腎癌中S期激酶相關(guān)蛋白2（SKP2）高表達(dá)和低表達(dá)組的基因突變情況（a、b：腎乳頭狀細(xì)胞癌中SKP2高表達(dá)、低表達(dá)；c、d：腎透明細(xì)胞癌中SKP2高表達(dá)、低表達(dá)；e、f：腎嫌色細(xì)胞癌中SKP2高表達(dá)、低表達(dá)）

2.6 腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌SKP2相關(guān)的共表達(dá)基因分析 使用Metascape（http://metascape.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)分析這3種腎癌中SKP2共表達(dá)基因的細(xì)胞生物功能富集分析，結(jié)果顯示SKP2與RNA定位、DNA復(fù)制、核糖核蛋白復(fù)合物生物發(fā)生、mRNA代謝過(guò)程、細(xì)胞周期、中心體循環(huán)、染色質(zhì)結(jié)合、轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物、組蛋白修飾、有絲分裂細(xì)胞周期過(guò)程、DNA修復(fù)、微管細(xì)胞骨架組織、細(xì)胞周期過(guò)程的調(diào)節(jié)、染色體組織的調(diào)節(jié)、DNA構(gòu)象改變等功能相關(guān)。SKP2共表達(dá)基因之間在蛋白質(zhì)水平上存在密切相互作用。

3 討論

腎癌對(duì)化療和放療敏感性較低，靶向治療多數(shù)均會(huì)出現(xiàn)耐藥，免疫治療以及免疫聯(lián)合靶向治療成為目前的治療熱點(diǎn)，但不同個(gè)體間療效差異大。迄今為止，腎癌仍然缺乏簡(jiǎn)單的、有助早期診斷、指導(dǎo)治療和預(yù)測(cè)預(yù)后的生物標(biāo)志物。泛素蛋白酶體系統(tǒng)（UPS）主要調(diào)控蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和活性，進(jìn)而影響細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期進(jìn)程、轉(zhuǎn)錄、凋亡、衰老、自噬等多種細(xì)胞功能，并調(diào)控免疫檢查點(diǎn)分子的表達(dá)以及免疫細(xì)胞的成熟，參與腫瘤微環(huán)境的塑造等[7-8，11]。SKP2是F-box蛋白的一種，它與Cullin-1、SKP1和Rbx1一起形成SCFE3泛素連接酶復(fù)合體，是該復(fù)合體的基質(zhì)識(shí)別亞單位。E3泛素連接酶功能的獲得或喪失，會(huì)導(dǎo)致癌蛋白或腫瘤抑制因子的異常降解，可能導(dǎo)致腫瘤發(fā)生和其他疾病，而F-box蛋白的致癌和抑癌功能取決于其泛素底物的生物學(xué)功能[8,11]。研究報(bào)道過(guò)高SKP2表達(dá)可以導(dǎo)致細(xì)胞的過(guò)度生長(zhǎng)和各種腫瘤的生成，SKP2過(guò)表達(dá)見(jiàn)于多種人類(lèi)腫瘤并與不良預(yù)后和治療效果差相關(guān)，抑制SKP2成為抗腫瘤治療方法之一[9-10，19]。SKP1在多種腫瘤和正常組織中表達(dá)存在明顯差異，SKP1表達(dá)異常與染色體不穩(wěn)定性相關(guān)，可能參與腫瘤發(fā)生過(guò)程，對(duì)其機(jī)制的深入研究有助于進(jìn)一步明確其對(duì)腫瘤預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值或作為治療目標(biāo)的意義[14]。

本研究分析了SKP1、SKP2表達(dá)水平對(duì)3種腎癌患者預(yù)后的影響。結(jié)果表明，與正常組織比較，SKP1基因表達(dá)水平在3種腎癌組織中均降低，SKP2基因表達(dá)水平在腎透明細(xì)胞癌和腎乳頭狀細(xì)胞癌組織中升高。SKP1表達(dá)高低與預(yù)后的關(guān)系在這3種腎癌中均不同。而SKP2高表達(dá)者在腎嫌色細(xì)胞癌、腎透明細(xì)胞癌和腎乳頭狀細(xì)胞癌中的生存期均較低表達(dá)者明顯縮短。SKP2在腎透明細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌和腎嫌色細(xì)胞癌中預(yù)測(cè)生存的AUC值多數(shù)為0.6～0.7、0.7～0.8、0.8～0.9，一致性指數(shù)分別維持在0.6、0.6～0.7和0.8左右，預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性相對(duì)穩(wěn)定。本研究結(jié)果表明，SKP2是腎癌預(yù)后不良的重要因素。

本研究進(jìn)一步分析了腎癌中SKP1和SKP2表達(dá)水平的影響因素，結(jié)果顯示其表達(dá)水平與臨床病理特征以及甲基化位點(diǎn)等相關(guān)。ch.5.2450351R、cg19957803、cg04691829、cg20261922、cg00854995、cg26922706、cg04136748等7個(gè)甲基化位點(diǎn)與這3種腎癌SKP1表達(dá)水平均顯著相關(guān)。cg04696559與腎乳頭狀細(xì)胞癌和腎透明細(xì)胞癌的SKP2表達(dá)水平顯著相關(guān)。對(duì)于SKP1或SKP2甲基化位點(diǎn)，腎乳頭狀細(xì)胞癌中有17個(gè)，腎嫌色細(xì)胞癌中12個(gè)，腎透明細(xì)胞癌中23個(gè)與總生存期相關(guān)。說(shuō)明SKP1和SKP2甲基化位點(diǎn)也可以成為腎癌的預(yù)后預(yù)測(cè)因子。

除了SKP1和SKP2的表達(dá)譜外，本研究還分析了其基因突變情況。發(fā)現(xiàn)腎透明細(xì)胞癌中SKP1和SKP2突變占14%。KMT2C、HERC2、PRKDC、SETD2和HMCN1這5種基因突變與腎癌中SKP1或SKP2表達(dá)高低相關(guān)。其中前4種基因均和DNA損傷修復(fù)和基因組不穩(wěn)定相關(guān)，參與免疫應(yīng)答，可能影響免疫治療效果和預(yù)后。而HMCN1在細(xì)胞連接中起穩(wěn)定作用，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞侵襲和腫瘤轉(zhuǎn)移。其中KMT2C具有組蛋白H3K4賴氨酸特異性甲基化活性，參與基因的表觀遺傳修飾，包括DNA甲基化、組蛋白修飾和非編碼RNA調(diào)控，導(dǎo)致染色質(zhì)重塑和調(diào)控基因表達(dá)，其功能主要通過(guò)影響增強(qiáng)子和啟動(dòng)子之間的交流來(lái)實(shí)現(xiàn)。KMT2C缺失影響DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因的表達(dá)。有研究報(bào)道KMT2C突變或KMT2C mRNA水平較低的乳腺癌樣本的腫瘤突變負(fù)荷升高。SETD2能特異性催化組蛋白H3第36位賴氨酸的三甲基化。腎透明細(xì)胞癌中SETD2突變與廣泛DNA低甲基化、RNA處理障礙和染色體結(jié)構(gòu)暴露相關(guān)[20-24]。SETD1A通過(guò)調(diào)控有絲分裂基因啟動(dòng)子上的H3K4甲基化，維持了細(xì)胞內(nèi)有絲分裂過(guò)程的完整性。SETD1A敲除可誘導(dǎo)細(xì)胞衰老，而其中SKP2與細(xì)胞周期阻滯相關(guān)。Akt通過(guò)SETDB1進(jìn)行K64甲基化，組蛋白去甲基化酶JMJD2A可以識(shí)別Akt K64甲基化并招募SKP2-SCF到Akt復(fù)合物，啟動(dòng)K63連接的泛素化、細(xì)胞膜募集和Akt的激活。在非小細(xì)胞肺癌中，SETDB1介導(dǎo)的Akt K64甲基化上調(diào)并與Akt過(guò)度活化相關(guān)，促進(jìn)腫瘤發(fā)展并預(yù)測(cè)不良預(yù)后。由SETDB1介導(dǎo)的Akt k64甲基化協(xié)調(diào)的Akt激活調(diào)控，驅(qū)動(dòng)腫瘤發(fā)生[25-26]。腎癌中SETD2、KMT2C突變和SKP1、SKP2表達(dá)以及甲基化調(diào)節(jié)之間的具體機(jī)制需要進(jìn)一步研究明確。

研究報(bào)道，SKP2可以通過(guò)影響E鈣黏蛋白、CKIs、FOXM1、FOXO1、p21、p27、p57、基質(zhì)金屬蛋白酶9蛋白表達(dá)水平、p300等調(diào)節(jié)細(xì)胞周期進(jìn)程，影響細(xì)胞凋亡和DNA損傷，改變細(xì)胞的遷移和侵襲能力等，并可促進(jìn)癌細(xì)胞的糖酵解，調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞的分化等影響腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)等[8，11，27]。SKP2 還與多種抗腫瘤藥物的耐藥性相關(guān)。研究報(bào)道，泛素-蛋白酶體系統(tǒng)E3連接酶通過(guò)干擾細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄、凋亡、細(xì)胞有絲分裂和紡錘體組裝等促進(jìn)耐藥性。SKP2抑制可以使鼻咽癌、前列腺癌、乳腺癌等多種腫瘤對(duì)傳統(tǒng)的抗癌藥物敏感，包括紫杉醇、順鉑、赫賽汀等[10，28-31]。本研究結(jié)果顯示腎癌中SKP2共表達(dá)基因與細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞代謝、DNA修復(fù)等細(xì)胞功能相關(guān)，而這些均參與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)。

另外，泛素化系統(tǒng)可以調(diào)控免疫細(xì)胞的成熟和免疫檢查分子的表達(dá)，參與腫瘤微環(huán)境的塑造[5-7]。腫瘤微環(huán)境由巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和髓源性抑制細(xì)胞等組成，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中起關(guān)鍵作用[32]。研究報(bào)道在腎透明細(xì)胞癌中CD8細(xì)胞毒性T細(xì)胞浸潤(rùn)的程度與生存獲益呈負(fù)相關(guān)，這可能與其T細(xì)胞功能障礙特征相關(guān)[33-34]。最新研究表明，當(dāng)黑色素瘤、軟組織肉瘤和腎細(xì)胞癌等腫瘤內(nèi)出現(xiàn)B細(xì)胞和三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)這兩個(gè)關(guān)鍵要素時(shí)，癌癥患者接受免疫治療會(huì)有更好的效果[35-38]。因此，筆者推測(cè)泛素化系統(tǒng)在腫瘤的免疫調(diào)節(jié)及免疫治療效果中可能具有重要作用。

總之，SKP2是腎癌預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。KMT2C、HERC2、PRKDC、SETD2和HMCN1這5種基因突變與腎癌中SKP1或SKP2表達(dá)高低相關(guān)。SKP1或SKP2多個(gè)甲基化位點(diǎn)與腎透明細(xì)胞癌、腎嫌色細(xì)胞癌、腎乳頭狀細(xì)胞癌預(yù)后相關(guān)。腎癌中SKP2共表達(dá)基因部分富集于細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞代謝、DNA修復(fù)等細(xì)胞功能，這些均與免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)相關(guān)。