抗幽門螺旋桿菌功能食品功效及其研究

⊙文 歐陽海玉 趙阿丹 崔巍 周雯婧 戴智勇 澳優(yōu)乳業(yè)（中國）有限公司

本文對幽門螺旋桿菌進(jìn)行了有關(guān)介紹，分析了益生菌抗幽功能食品的作用機(jī)制，然后通過斑馬魚實(shí)驗(yàn)，對蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉抑制胃幽門螺旋桿菌的功效進(jìn)行了驗(yàn)證研究。結(jié)果顯示，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉對抑制胃幽門螺旋桿菌具有明顯作用，與對照組相比，產(chǎn)品組具備顯著的幽門螺旋桿菌抑制效果，在相同濃度下，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉抗幽比克拉霉素的效果顯著，隨著樣品濃度增加，其抗幽抑制功效上升。

一、胃部疾病的患病關(guān)鍵病因——幽門螺旋桿菌

幽門螺旋桿菌作為人類的I類致癌因子，與消化道潰瘍、慢性胃炎、胃黏膜相關(guān)淋巴組織淋巴癌和胃癌等人類常見疾病緊密相關(guān)。根據(jù)2020年央視新聞報(bào)道，幽門螺旋桿菌全球自然人群感染率超過50%，我國平均感染率為59%，兒童平均感染率為40%。其中，約10%-15%的感染者可發(fā)展為消化性潰瘍，約5%可發(fā)展為胃黏膜萎縮，小于1%感染者可發(fā)展為胃癌，因此幽門螺旋桿菌目前依然是我國人民生命健康的重要威脅。

目前，預(yù)防幽門螺旋桿菌的方式主要是避免家庭群集性感染幽門螺旋桿菌，以及做好口腔健康預(yù)防。幽門螺旋桿菌可以在自來水環(huán)境中存活4-10天，可以在自然河流中存活3年，因此需要在飲食方面做好預(yù)防工作。

幽門螺旋桿菌的治療方法主要有四聯(lián)抗生素療法和三聯(lián)抗生素療法。四聯(lián)抗生素療法一般兩周14天為一療程，療程結(jié)束后一周內(nèi)復(fù)查，或一個(gè)月后復(fù)查。三聯(lián)療法即使用奧美拉唑、阿莫西林和克林霉素，三種藥物的用量需遵醫(yī)囑，且按時(shí)按量服用，不過由于很多地區(qū)出現(xiàn)了耐藥性，所以使用三聯(lián)療法的人越來越少。

抗生素療法的大量使用導(dǎo)致幽門螺旋桿菌整體耐藥性上升，愈后再感染率升高，并且感染者服藥體驗(yàn)不佳，多會出現(xiàn)嘔吐、惡心、食欲不振等不良反應(yīng)。因此，找出預(yù)防幽門螺旋桿菌的適宜方法，改善治療方法勢在必行。通過查閱多個(gè)文獻(xiàn)資料發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)或者合并使用益生菌產(chǎn)品改善胃部不適以預(yù)防幽門螺旋桿菌，可能是一種有效的途徑。

二、益生菌抗幽功能食品的作用機(jī)制

目前主要的抗幽功能食品原料有巖藻多糖（fucoidan）、IgY免疫球蛋白、姜黃素、蜂膠等，可以有效抵抗幽門螺旋桿菌，降低感染風(fēng)險(xiǎn)。近年來，抗幽益生菌的研究取得了突破并已形成產(chǎn)品化產(chǎn)業(yè)鏈，感染者體驗(yàn)也較好，抗幽產(chǎn)品中所含有的益生菌可以有效識別胃幽門螺旋桿菌并進(jìn)行特異性聚合，后經(jīng)由消化道排出體外。同時(shí)，益生菌不是抗生素，不易造成不良反應(yīng)，也可防止由于長期用藥而產(chǎn)生幽門螺桿菌的耐藥性。

在抗幽益生菌的研究方面，更多研究表明通過聯(lián)合使用益生菌進(jìn)行胃部養(yǎng)護(hù)效果較好，比如羅伊氏乳桿菌Pylopass、植物乳桿菌CN2018、唾液乳桿菌AP-32、約氏乳桿菌MH-68、植物乳桿菌LPL28、副干酪乳桿菌ET-66和乳酸乳球菌LY66等均有一定的研究基礎(chǔ)，聯(lián)合運(yùn)用的養(yǎng)護(hù)效果較好。

益生菌抗幽功能食品的作用機(jī)制主要有三個(gè)方面：一是形成黏膜屏障。胃腸道黏膜的上皮細(xì)胞是病原體的強(qiáng)大屏障，益生菌通過改變黏液和上皮連接蛋白的表達(dá)，釋放具有生物活性的分子來穩(wěn)定屏障，防止病原體破壞黏膜屏障，保護(hù)黏膜屏障免受不良機(jī)制的破壞。二是分泌抗菌素。益生菌通過發(fā)酵而產(chǎn)生有機(jī)物質(zhì)，如乳酸（Lactic acid）、醋酸（acetic acid）和過氧化氫（HO），可以降低胃內(nèi)的pH值，制造出不利于幽門螺旋菌生長的酸性環(huán)境。三是共聚體（Coaggregation）。共聚體是不同物種生物的結(jié)合，益生菌的聚集特性可以將病原體排除到腸道黏膜之外，在體外和體內(nèi)研究中發(fā)現(xiàn)，羅伊氏乳桿菌能夠與幽門螺旋桿菌呈現(xiàn)共聚集現(xiàn)象。

三、抗幽功能食品功效的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

實(shí)驗(yàn)樣品由澳優(yōu)乳業(yè)（中國）有限公司提供，樣品為粉末狀，于2022年5月5日被接收并登記，于干燥、陰涼處儲存。用標(biāo)準(zhǔn)稀釋水配制成2.00mg/mL的母液，現(xiàn)配現(xiàn)用。陽性對照實(shí)驗(yàn)組為克拉霉素，白色粉末，批號為E1529013，于4℃條件下保存。用DMSO配制成12.5mg/mL的母液，在-20℃條件下儲存。

實(shí)驗(yàn)使用的斑馬魚均飼養(yǎng)于28℃的養(yǎng)魚用水中（水質(zhì)：每1L反滲透水中加入200mg速溶海鹽，電導(dǎo)率為450-550uS/cm，pH為6.5-8.5，硬度為50-100mg/L CaCO），實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號為SYXK（浙）2022-0004，飼養(yǎng)管理符合國際AAALAC認(rèn)證（認(rèn)證編號：001458）的要求。

斑馬魚品系：隨機(jī)選取3dpf野生型AB品系于6孔板中，每孔（實(shí)驗(yàn)組）為30尾斑馬魚，在28℃培養(yǎng)箱中孵育。

模型建立：水溶給予實(shí)驗(yàn)組樣品處理48h、陽性對照組克拉霉素125μg/mL濃度處理48h后，所有組別添加5×10CFU/mL幽門螺旋桿菌，建立斑馬魚幽門螺旋桿菌感染模型。

給藥方式：樣品以水溶給藥的方式處理模型斑馬魚。

實(shí)驗(yàn)方法采用杭州環(huán)特生物科技股份有限公司抗幽門螺旋桿菌功效模型評價(jià)研究方法。

（1）確定樣品最大檢測濃度（MTC）。實(shí)驗(yàn)組別：共7組，樣品設(shè)置5個(gè)檢測濃度、1個(gè)模型對照組和1個(gè)正常對照組。實(shí)驗(yàn)方法：經(jīng)幽門螺旋桿菌處理24h后，統(tǒng)計(jì)各實(shí)驗(yàn)組的斑馬魚死亡數(shù)量與毒性情況，確定樣品的MTC。如果在最初的濃度檢測實(shí)驗(yàn)中不能得到MTC，就擴(kuò)大樣品的檢測濃度范圍，上限為2000μg/mL或最大溶解度，下限為0.01μg/mL。

（2）樣品抗幽門螺旋桿菌功效評價(jià)。實(shí)驗(yàn)組別：共5組，每個(gè)樣品3個(gè)檢測濃度（一般為1/4MTC，1/2MTC，MTC）、1個(gè)陽性對照組（克拉霉素）和1個(gè)模型對照組。實(shí)驗(yàn)方法：經(jīng)幽門螺旋桿菌處理24h后，每組隨機(jī)選取10尾斑馬魚，在熒光顯微鏡下觀察、拍照并保存；使用NISElements D 3.20高級圖像處理軟件采集數(shù)據(jù)，分析斑馬魚胃腸道熒光強(qiáng)度，以該指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果評價(jià)樣品對幽門螺旋桿菌的抑制功效。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果采用mean±SE表示，并用SPSS26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，p＜0.05表明差異顯著并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

（1）MTC結(jié)果。在本實(shí)驗(yàn)條件下，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉對幽門螺旋桿菌感染模型斑馬魚最大檢測濃度（MTC）為2000μg/mL。

組別 濃度（μg/mL） 胃腸道幽門螺旋桿菌熒光強(qiáng)度（像素，mean±SE）模型對照組 - 345633±15812克拉霉素 125 191994±12728***蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉500 170975±15340**1000 167794±12510**2000 126417±10056***

（2）樣品抗幽門螺旋桿菌功效評價(jià)。在本實(shí)驗(yàn)條件下，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉具有抑制幽門螺旋桿菌的功效，具體如表2、圖1和圖2所示。

圖1：斑馬魚胃腸道幽門螺旋桿菌熒光強(qiáng)度典型圖

圖2：斑馬魚胃腸道幽門螺旋桿菌熒光強(qiáng)度

本次實(shí)驗(yàn)在野生型AB品系斑馬魚上進(jìn)行，通過水溶液給藥的方式處理模型斑馬魚，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉在抑制胃幽門螺旋桿菌方面具有顯著效果。在相同濃度下，樣品比克拉霉素的抗幽效果顯著，隨著樣品濃度增加，抗幽抑制功效上升，在2000ug/mL達(dá)到最高。通過與克拉霉素的對照實(shí)驗(yàn)，蘇芙衛(wèi)益生菌即食型乳酸菌粉表現(xiàn)出更好的抗幽功能效果。

四、展望與討論

抗幽食品發(fā)展多年，已有大量的上市產(chǎn)品，特別是抗幽益生菌等抗幽功能食品發(fā)展迅猛，在2019年全球益生菌市場價(jià)值約400億歐元，中國益生菌食品平均年增速約15%，具有廣闊的發(fā)展前景。

幽門螺旋桿菌在我國傳播較廣，如何預(yù)防和干預(yù)幽門螺旋桿菌的感染和傳播是緊迫的難題。抗幽功能食品具備良好的抗幽功能，在有效保護(hù)國民身體健康方面市場前景廣闊，存在很大的發(fā)展空間。

目前抗幽功能食品的研究多集中于單一產(chǎn)品和物質(zhì)的抗幽效果，后續(xù)在胃炎發(fā)展進(jìn)程中可以形成針對幽門螺旋桿菌的產(chǎn)品聯(lián)組，研究多種物質(zhì)聯(lián)合作用下的抗幽效果，充分發(fā)揮其市場潛力。