加味三仁湯聯(lián)合石榴皮多酚乳膏對濕熱痰瘀型金黃地鼠痤瘡模型脂質(zhì)組學的影響

張娟娟，張 曦，楊逸璇，康 慰，謝小麗，朱明芳*

（1.湖南中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410005；2.瀏陽市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 瀏陽 410300）

痤瘡是一種毛囊皮脂腺單位的慢性炎癥性皮膚病，好發(fā)于年輕人群顏面、胸背等皮脂腺分布豐富的部位。皮脂生成增多，皮脂成分改變等皮脂腺穩(wěn)態(tài)的改變與痤瘡的發(fā)病密切相關(guān)[1]。MENLIK 提出痤瘡是一種發(fā)生于皮脂腺毛囊的代謝綜合征[2]。 飲食誘導的脂質(zhì)代謝改變可促進皮脂腺炎癥反應的發(fā)生，進而誘導加重痤瘡的發(fā)生[3]。 研究顯示，痤瘡患者的主要體質(zhì)類型為濕熱質(zhì)[4]。 濕熱體質(zhì)者，素體陽熱旺盛，過食肥甘厚味、辛辣炙煿之品，致濕熱內(nèi)蘊，循經(jīng)上蒸于顏面；脾胃內(nèi)傷，失于健運，濕濁內(nèi)生，郁久化熱，煉津成痰，加上久坐少動、憂思煩勞過重，易致氣機郁滯不暢，肝之疏泄失調(diào)，日久氣郁生瘀，濕熱痰瘀凝滯肌膚而發(fā)痤瘡。 諸因或獨或合，易成脾胃濕熱、痰瘀阻絡證[5]。

三仁湯始載于清代吳鞠通《溫病條辨·上焦·濕溫》，由杏仁、飛滑石、白通草、白蔻仁、淡竹葉、厚樸、生薏苡仁、半夏8 味藥組成[6]。 全方化濕于宣暢氣機之中，清熱于滲利濕濁之間，三焦兼顧，偏重中焦，治則正合痤瘡中焦脾胃濕熱的病因病機。 三仁湯組方側(cè)重于祛濕之功，化痰之力稍遜，痰和濕屬于一類，故加味三仁湯在此基礎上加一味海藻，取其咸能軟堅、消痰散結(jié)兼利水，與方中利濕藥同用，進一步加強化痰、除濕的作用；三仁湯用藥多在氣分，加一味郁金引入血分，可活血化瘀、疏肝、降脂[7]。 本課題組前期臨床觀察發(fā)現(xiàn)， 加味三仁湯內(nèi)服行宣氣化濕、化痰化瘀之功，可有效改善濕熱痰瘀型痤瘡患者面部油脂分泌過多的癥狀。實驗研究表明石榴皮多酚對金黃地鼠皮脂腺斑的作用機制可能與其抑制皮脂腺脂質(zhì)合成、抑制炎癥反應有關(guān)[8-9]。 然而，加味三仁湯與石榴皮多酚乳膏二者合用對濕熱痰瘀型痤瘡皮脂脂質(zhì)代謝的作用機制尚不清楚。

因此，本研究采用非靶向脂質(zhì)代謝組學技術(shù)，研究濕熱環(huán)境+肥甘飲食+限制動物活動空間的復合因素下內(nèi)服加味三仁湯聯(lián)合外用石榴皮多酚乳膏干預金黃地鼠后，其皮脂腺斑脂質(zhì)代謝物含量的變化及對代謝通路的影響，為運用中藥內(nèi)外合治治療濕熱痰瘀型痤瘡提供新的研究思路和理論依據(jù)。

1 材料

1.1 動物

SPF 級健康雄性金黃地鼠，體質(zhì)量110～130 g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供，許可證號：SCXK（京）2021-0011。每只分籠圈養(yǎng)于湖南普瑞瑪藥物研究中心有限公司動物實驗室，許可證號：SYXXK（湘）2020-0015。 自然飼養(yǎng)環(huán)境：全價營養(yǎng)顆粒飼料飼養(yǎng)，自由飲水活動，12 h 光照及12 h 黑夜，飼養(yǎng)溫度（22±2） ℃，濕度59%～65%。 本研究經(jīng)湖南普瑞瑪藥物研究中心有限公司動物倫理委員會審查批準[審批號：IACUC-2021（5）037]。

1.2 藥品

加味三仁湯藥材選用中藥顆粒劑，由瀏陽市中醫(yī)醫(yī)院智能中藥房提供（四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。 姜半夏批號20090183，濃縮比1∶21，1 g 配方顆粒相當于飲片21 g；火單苦杏仁批號20090015，濃縮比1∶12.5，1 g 配方顆粒相當于飲片12.5 g；生薏苡仁批號20100043，濃縮比1∶15，1 g配方顆粒相當于飲片15 g；滑石批號20090168，濃縮比1∶11，1 g 配方顆粒相當于飲片11 g；豆蔻批號21010128，濃縮比1∶21，1 g 配方顆粒相當于飲片21 g；姜厚樸批號20110128，濃縮比1∶21，1 g 配方顆粒相當于飲片21 g；小通草批號20080027，濃縮比1∶11，1 g配方顆粒相當于飲片11 g；淡竹葉批號20050118，濃縮比1∶11，1 g 配方顆粒相當于飲片11 g；海藻批號20050079，濃縮比1∶21，1 g 配方顆粒相當于飲片21 g；郁金批號20030179，濃縮比1∶17，1 g 配方顆粒相當于飲片17 g）。 石榴皮多酚乳膏由課題組參考前期研究臨方配制[10]。

1.3 主要儀器與試劑

1.3.1 儀器 超高效液相色譜儀（美國賽默飛世爾科技公司，型號：Ultimate 3000）；高分辨質(zhì)譜儀（美國ABSCIEX 公司，型號：TripleTOF 5600）；離心機（美國賽默飛世爾科技公司，型號：Heraeus Frescol17）；純水儀（默克密理博公司，型號：明澈D24UV）；色譜柱（Waters 科技有限公司，型號：ACQUITY UPLC）。1.3.2 試劑 甲醇、乙腈、甲酸（美國霍尼韋爾Burdick＆Jackson 公司），有機溶劑均為分析純、色譜級。60%石榴皮多酚（西安悅?cè)簧锟萍加邢薰?，批號?0210916）；水包油型乳膏基質(zhì)(鄭州市津北化工有限公司)；高糖高脂飼料（80%全價營養(yǎng)顆粒飼料+12%豬油+8%蜂蜜）由湖南普瑞瑪藥物研究中心有限公司提供。

2 方法

2.1 藥物的制備

加味三仁湯藥物組成：三仁湯加海藻、郁金。 三仁湯藥物組成參照《溫病條辨》原組成比例，姜半夏、火單苦杏仁各15 g，生薏苡仁、滑石各18 g，豆蔻、姜厚樸、小通草、淡竹葉各6 g，加海藻15 g、郁金12 g。1劑中藥配方顆粒的重量為759 mg （60 kg 體質(zhì)量成人的每日用量），參考《人類疾病動物模型》[11]中動物模型藥物劑量的換算方法，確定金黃地鼠日給藥量680 mg·kg-1。每次使用前將其用蒸餾水溫水配制成混懸液。

石榴皮多酚乳膏：參考課題組前期研究結(jié)果[10]，配成10%石榴皮多酚乳膏[0.32 g 生藥/(kg·d)，通過體表面積換算[12]，相當于等效劑量的2 倍]。 將棕紅色的石榴皮多酚粉末溶于少量水中， 再加入至水包油型乳膏基質(zhì)中，配成10%的濃度。 每天上午配制1次，供當日上午和下午使用，10 h 內(nèi)用完。

2.2 濕熱痰瘀型金黃地鼠痤瘡動物模型的建立

以國內(nèi)外公認的可作為研究藥物抗皮脂腺增生活性的金黃地鼠兩側(cè)側(cè)腹部皮脂腺斑為痤瘡動物模型[13]，通過復合因素（外部濕熱環(huán)境+肥甘飲食+限制動物活動空間）模擬痤瘡患者進食肥甘厚味、久坐少動等不良的生活方式，構(gòu)建濕熱痰瘀型痤瘡動物模型[14-15]。 具體方法如下：動物適應性飼養(yǎng)5 d 后開始造模，造模前禁食12 h，自由飲水活動。 肥甘飲食飼料喂養(yǎng)10 d，每天上午9:00 至11:00 將動物置于仿真模擬氣候倉[環(huán)境設置為：溫度(33±2) ℃，相對濕度70%～80%]，共18 d，整個造模期間每天下午1:00 至6:00 限制金黃地鼠活動空間（模擬少動）。 第19 天上午9:00 移出置于自然飼養(yǎng)環(huán)境。經(jīng)上述造模干預，金黃地鼠毛發(fā)濕潤雜亂，小便量偏多色黃，異味明顯，大便溏或質(zhì)稠，墊料餿臭。另外，通過金黃地鼠目內(nèi)眥取血并進行檢測，與正常飼養(yǎng)的金黃地鼠比較，結(jié)果顯示造模金黃地鼠低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol, LDL-C）、甘油三酯（triglyceride, TG）、膽固醇（cholesterol, CHO）指標上升，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），高密度膽固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C）指標變化不明顯，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），提示造模成功。 詳見表1。

表1 兩組動物LDL-C、TG、CHO、HDL-C 比較（mmol/L，±s）

表1 兩組動物LDL-C、TG、CHO、HDL-C 比較（mmol/L，±s）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05。

組別正常對照組造模組n 55 LDL-C 0.94±0.11 2.31±0.49*TG 1.92±0.47 3.49±1.35*CHO 3.94±0.39 5.72±0.56*HDL-C 2.51±0.34 2.91±0.19

2.3 動物分組與給藥

造模成功后，采用2×2 析因?qū)嶒炘O計將32 只動物隨機分成4 組，每組8 只，分別為模型組、中藥外治組、中藥內(nèi)服組、中藥內(nèi)外合治組，依次給予生理鹽水（相同給藥體量）灌胃、外用10%石榴皮多酚乳膏于兩側(cè)皮脂腺斑（每側(cè)1 mL/次）、加味三仁湯灌胃（680 mg·kg-1地鼠體質(zhì)量）、加味三仁湯灌胃聯(lián)合外用10%石榴皮多酚乳膏（方法、給藥量與外治組、內(nèi)服組相同），2 次/d，療程14 d。

2.4 皮脂腺斑總面積測量

每天觀察各組動物的精神狀況、皮毛、活動狀態(tài)、二便情況。 給藥前及末次給藥24 h 后，金黃地鼠取仰臥位，剃毛后暴露兩側(cè)皮脂腺斑，強光照射下用照相機以同一焦距記錄皮脂腺斑大體照片，并用游標卡尺測量并記錄左右兩側(cè)皮脂腺斑的最大橫徑（transverse diameter, TD）、最大縱徑（longitudinal diameter, LD），計算兩側(cè)皮脂腺斑總面積（DT×DL）之和。

2.5 皮脂腺斑組織形態(tài)病理變化觀察

末次用藥后24 h，取金黃地鼠左側(cè)皮脂腺斑組織，置于10%甲醛固定液中固定待檢。經(jīng)脫水、石蠟包埋、切片、HE 染色后，光學顯微鏡下觀察各組組織病理學變化。

2.6 皮脂腺斑樣本預處理方法

取模型組、中藥內(nèi)外合治組2 組右側(cè)皮脂腺斑樣本，每組6 份生物學重復樣本進行非靶向脂質(zhì)組學分析。 非靶向脂質(zhì)代謝物的提?。海?） 稱取200 mg的組織樣品，進行液氮研磨；（2）向每個樣品加入120 μL 50%甲醇，震動充分混勻，提取樣品中的脂質(zhì)，常溫靜置10 min；（3）提取液放-20 ℃過夜，沉淀樣品中的蛋白質(zhì)；（4）離心20 min（4000 r/min），轉(zhuǎn)移上清液脂質(zhì)提取液到96 孔板；（5）樣品利用稀釋液（異丙醇∶乙腈∶水=2∶1∶1，體積比）稀釋脂質(zhì)提取液；（6）每個樣品等量取出10 μL 稀釋液混合成QC樣品；（7）所有代謝樣品在上樣前放-80 ℃冰箱保存。

2.7 色譜-質(zhì)譜條件

色譜條件： 色譜柱為ACQUITY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），柱溫35 ℃，流速為0.4 mL/min。 流動相為溶劑A（含0.1%甲酸的水）和溶劑B（含0.1%甲酸的乙腈）。 液相梯度設置為：0～0.5 min，5% B；0.5 ～7.0 min，5%～100% B；7.0 ～8.0 min，100% B；8.0 ～8.1 min，100%～5% B；8.1～10.0 min，5% B。

質(zhì)譜條件：ESI 離子源，正、負離子采集模式。 離子源的遮蔽氣壓30 psi，輔氣、鞘氣壓60 psi。 源溫度650 ℃。電壓設置：正離子5 kV，負離子-4.5 kV。信息依賴性模式采集數(shù)據(jù)。 采用2 組樣本一一對應的方法進行樣本的連續(xù)分析，在樣本采集開始、每間隔6 個樣本、樣本采集結(jié)束時進行一次QC 品的掃描。用QC 間的質(zhì)量差距來校正整批實驗的系統(tǒng)誤差。

2.8 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學分析

原始數(shù)據(jù)經(jīng)MSConvert 軟件轉(zhuǎn)換為mzXML 格式，利用xcms 軟件進行峰提取、保留時間矯正。使用基于R 語言的metaX 將Compound Discoverer 3.1.0導出的質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)進行歸一化、峰提取和過濾、樣本保留時間對齊、加合離子合并、缺失值填充等處理。 結(jié)合HMDB、KEGG、LipidMaps 等多個數(shù)據(jù)庫得到各個離子的分子量、保留時間、峰面積和代謝物鑒定結(jié)果等信息。 將鑒定所得差異代謝物數(shù)據(jù)通過MetaboAnalyst 5.0（https://www.metaboanalyst.ca/）進行通路富集分析。 差異代謝物的統(tǒng)計采用單變量分析差異倍數(shù)和Test 統(tǒng)計檢驗，進行BH 校正得到qvalue，結(jié)合多變量統(tǒng)計分析PLS-DA 得到變量權(quán)重（variable important for the projection, VIP）值，篩選差異表達的代謝離子，多元統(tǒng)計分析包括無監(jiān)督主成分分析（PCA）、有監(jiān)督最小二乘法判別分析（PLS-DA）。 以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

采用SPSS 25.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以“±s”表示，T 檢驗分析用于檢測兩組數(shù)據(jù)間差異的統(tǒng)計學意義，單因素方差分析用于檢測3組或以上數(shù)據(jù)間差異的統(tǒng)計學意義，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果

3.1 一般狀況

肥甘飼料+濕熱環(huán)境喂養(yǎng)下，金黃地鼠開始出現(xiàn)小便量多、色黃、異味大等“濕熱”表現(xiàn)，伴隨毛發(fā)潮濕油膩，呈雜亂狀，大便便溏或黏稠色暗，墊料餿臭等“痰濕”癥狀，造模后期限制動物活動空間后，金黃地鼠出現(xiàn)體形較肥胖，懶動，精神低靡，喜蜷縮，進食減少等典型“濕熱痰瘀”表現(xiàn)。與模型組、中藥外治組相比，中藥內(nèi)服組和中藥內(nèi)外合治組金黃地鼠毛發(fā)油膩程度好轉(zhuǎn)，小便異味減少，大便稀溏程度減輕。

3.2 皮脂腺斑總面積比較

給藥前，各組金黃地鼠皮脂腺斑總面積大小比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。 給藥后，中藥內(nèi)服組金黃地鼠皮脂腺斑總面積減小，與模型組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。中藥外治組和中藥內(nèi)外合治組金黃地鼠皮脂腺斑總面積均明顯減小，與模型組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。詳見表2、圖1。

圖1 治療后各組金黃地鼠皮脂腺斑大體圖

表2 給藥前后兩側(cè)皮脂腺斑面積比較（mm2，±s）

表2 給藥前后兩側(cè)皮脂腺斑面積比較（mm2，±s）

注：與模型組相比，*P＜0.05。

組別 n 皮脂腺斑總面積給藥前 給藥后模型組中藥外治組中藥內(nèi)服組中藥內(nèi)外合治組F 值P 值8 88 8 76.96±16.48 74.55±5.85 72.66±9.59 73.47±6.61 0.316 0.814 30.39±7.15 23.70±3.85*26.37±3.48 23.58±3.88*3.506 0.028

3.3 皮脂腺斑組織病理學觀察

模型組皮脂腺腺體飽滿，體積較大，腺葉數(shù)目較多，排列緊密整齊；中藥外治組皮脂腺腺體變小，厚度變薄，重疊腺葉數(shù)減少，排列松散；中藥內(nèi)服組多數(shù)皮脂腺腺體厚度變薄，排列松散；中藥內(nèi)外合治組皮脂腺腺體明顯變小，厚度明顯變薄，數(shù)目明顯減少，部分腺小葉中心區(qū)見崩解的無定形脂質(zhì)團塊向皮膚表面移位，腺體周圍炎性細胞浸潤。與模型組比較，中藥內(nèi)外合治組皮脂腺斑顯微結(jié)構(gòu)變化最明顯，故取模型組與中藥內(nèi)外合治組皮脂腺斑樣本進一步行非靶向脂質(zhì)組學研究。 詳見圖2。

圖2 各組金黃地鼠皮脂腺斑病理變化（HE，×40）

3.4 皮脂腺斑代謝組學多元化分析

3.4.1 實驗質(zhì)量控制 將分析得到的QC 樣本基峰色譜圖（base peak chromatogram, BPC）進行譜圖重疊比較，總離子流圖（total ion chromatogram, TIC）顯示樣本的色譜峰響應強度和保留時間基本重疊，重復性好，表明本實驗的儀器、數(shù)據(jù)可靠性和穩(wěn)定性良好。 詳見圖3。

圖3 QC 樣本總離子流圖

3.4.2 代謝輪廓分析 篩選出的差異代謝物進行PCA，見圖4，在PCA 得分圖中，圖4A 顯示QC 樣本（藍色）在圖中原點附近緊密聚合，說明檢測穩(wěn)定。圖4B 顯示模型組和中藥內(nèi)外合治組聚類情況良好，僅有個別離散值，表明兩組數(shù)據(jù)檢測結(jié)果穩(wěn)定，所得差異物能反映樣本間的生物學差異。

在PCA 基礎上引入有監(jiān)督的差異辨別分析方法即PLS-DA 分析，進一步觀察兩組間的差異，見圖4C。 兩組樣本間較好分離，表明兩組代謝模式存在差異。 對模型進行200 次隨機排列組合實驗，得PLS-DA 模型的置換檢驗圖，見圖4D。 結(jié)果顯示模型不存在過擬合情況，表明模型存在且可靠，可用于后續(xù)進一步模型差異代謝物的篩選。

圖4 兩組樣本代謝輪廓圖

3.4.3 代謝物定量 熱圖展示不同代謝物在樣品間的重復性即聚類情況。 圖5A 按照表達量的信息進行聚類，顯示同組樣本聚合良好，圖5B 說明造模及給藥過程中代謝物脂類的脂肪酸（fatty acids, FA）、甘油酯（glycerolipids, GL）、甘油磷脂（glycerophospholipids, GP）、孕烯醇酮脂（prenol lipids, PR）、鞘脂（sphingolipids, SP）、固醇脂（sterol lipids, ST）的變化模式。

圖5 二級代謝物鑒定的熱圖

3.4.4 差異代謝物篩選 在兩組對比所得的共同差異代謝物中，共鑒定出13 個與金黃地鼠皮脂腺斑脂質(zhì)代謝相關(guān)的潛在生物學標志物，為二?；视推咸烟侨┧彳眨╠iacylglyceryl glucuronide, DGGA）、溶血磷脂酰膽堿（lysophophatidylcholine, LPC[42:5-SN2]）、己糖神經(jīng)酰胺及其硫苷脂（SHexCers）、卵磷脂（phosphatidylcholine, PC）、神經(jīng)酰胺（ceramides, Cer）、二酰甘油酯（diacylglycerol, DG）、磷酯酰絲氨酸（phosphatidylserine, PS）、磷脂酰肌醇（phosphatidyl inositol, PI）、鞘氨醇（sphingoid base, SPB）、鞘磷脂（sphingomyelin, SM）、TG、心磷脂（cardiolipin, CL）、溶血磷脂酰膽堿（lysophophatidylcholine, LPC[40:11-SN2]），詳見圖6。 正、負離子模式下，以變異倍數(shù)分析（fold change analysis, FC）值≥1.8 或≤0.5，注：1M.模型組；4M.中藥內(nèi)外合治組；A.兩組樣本聚類情況；B.兩組樣本代謝物脂類的變化模式。 圖中不同顏色表示強度袁顏色從藍色到紅色表示強度由低到高。VIP 值＞1 和P＜0.05 作為篩選標準，比較兩組皮脂腺斑脂質(zhì)的整體差異表達倍數(shù)情況。 與模型組比較，中藥內(nèi)外合治組差異倍數(shù)最大且顯著相關(guān)的主要脂質(zhì)成分是SM、SHexCer、CL、SPB、Cer、DG、TG、PS、LPC、PI。 詳見表3。

表3 模型組和中藥內(nèi)外合治組差異脂質(zhì)成分分析

圖6 兩組樣本差異二級代謝物熱圖

3.4.5 代謝通路分析 根據(jù)差異代謝物結(jié)果，采用ggplot2 對KEGG 通路富集。 KEGG 通路富集分析發(fā)現(xiàn)代謝途徑相關(guān)通路占主導地位，其他涉及細胞過程相關(guān)通路、環(huán)境信息處理相關(guān)通路、人類疾病相關(guān)通路、器官系統(tǒng)相關(guān)通路。 代謝途徑相關(guān)通路的脂質(zhì)代謝通路富集分析結(jié)果顯示，經(jīng)中藥內(nèi)外合治干預后，對差異代謝物影響顯著的代謝通路為亞油酸代謝、GL 代謝、花生四烯酸代謝、α-亞麻酸代謝，影響不顯著的代謝通路是SP、GP 代謝。 詳見圖7。

圖7 差異代謝物KEGG 通路富集圖

4 討論

痤瘡病因復雜，多采用綜合手段治療。 皮脂脂質(zhì)代謝紊亂或許是導致痤瘡發(fā)生的主要原因，現(xiàn)代醫(yī)學改善皮脂代謝通常使用維甲酸類、性激素等藥物，其生殖毒性、肝功能損害、胃腸道反應等不良反應發(fā)生率高，迫使很多患者尋求中醫(yī)藥治療。 多項研究結(jié)果表明，三仁湯及三仁湯加減方具有很好的調(diào)脂、改善脂代謝紊亂的作用[16-19]。 外用石榴皮多酚乳膏直達病所，經(jīng)皮吸收，抑制皮脂分泌[20]。 故本研究從改善皮脂脂質(zhì)代謝角度出發(fā)，觀察加味三仁湯聯(lián)合石榴皮多酚乳膏內(nèi)外合治對濕熱痰瘀型金黃地鼠痤瘡模型一般狀況、皮脂腺斑總面積及組織病理學變化的影響。經(jīng)中藥內(nèi)外合治后，金黃地鼠相關(guān)代謝紊亂情況改善。與模型組相比，中藥外治、中藥內(nèi)外合治均能使皮脂腺斑總面積縮小，有效抗皮脂腺斑增生。組織病理學顯示，二者內(nèi)外合治后，濕熱痰瘀型金黃地鼠皮脂腺斑腺體變小、厚度變薄、數(shù)目減少，腺小葉中心區(qū)無定形的脂質(zhì)團塊逐漸向皮膚表面移位，組織結(jié)構(gòu)改善最明顯。

皮脂成分種類繁多，結(jié)構(gòu)變化多端，很多分析皮脂的方法都有一定的局限性。 脂質(zhì)代謝組學分析技術(shù)可從整體角度認知痤瘡皮脂脂質(zhì)含量及成分改變，評估皮膚脂質(zhì)屏障功能，為監(jiān)測皮脂穩(wěn)態(tài)在痤瘡發(fā)生發(fā)展及治療中的作用提供新的思路。 我們采用非靶向脂質(zhì)代謝組學分析加味三仁湯聯(lián)合石榴皮多酚乳膏內(nèi)外合治干預濕熱痰瘀型金黃地鼠痤瘡模型，旨在發(fā)現(xiàn)內(nèi)外結(jié)合治療共同發(fā)揮作用機制的可能作用代謝產(chǎn)物，為使用內(nèi)外合治綜合治療手段治療濕熱痰瘀型痤瘡提供有力的科學證據(jù)。

皮脂主要由皮脂腺分泌和排泄。 它是一種混合物，其中包含有多種脂類物質(zhì)，主要有飽和及不飽和游離脂肪酸、甘油酯類、蠟酯類、固醇類、角鯊烯及神經(jīng)酰胺等[21-22]。 一項對青年男性痤瘡患者的皮脂分析研究顯示，甘油磷脂類、脂肪酸類、固醇類含量顯著升高，孕烯醇酮脂類和糖脂類含量降低[23]。從輕度到中度青春期痤瘡，TG、DG、FA、Cer 的相對平均含量及不飽和脂肪酸（unsaturated fatty acid, UFA）水平顯著升高。 同時，TG、UFA、Cer 含量與痤瘡嚴重程度呈正相關(guān)關(guān)系[24]。 另一項利用脂質(zhì)組學研究青少年痤瘡皮脂功能紊亂的研究發(fā)現(xiàn)，痤瘡患者皮脂中含有豐富的甘油二酯，其次是脂肪酰類、固醇脂類，且皮脂成分紊亂程度與痤瘡嚴重度呈正相關(guān)[25]。

本研究基于液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)從整體角度發(fā)現(xiàn)，加味三仁湯聯(lián)合石榴皮多酚乳膏的內(nèi)外合治手段對濕熱痰瘀型痤瘡動物模型的作用機制主要通過調(diào)節(jié)皮脂亞油酸代謝、甘油酯代謝、花生四烯酸代謝、α-亞麻酸代謝，從而影響脂肪酸類、甘油酯含量的表達，發(fā)揮治療痤瘡的作用。