維生素B12聯(lián)合鼠神經(jīng)生長因子治療腦癱患兒的療效

孫來信，朱龍云，李成林，申紅英，翟華杰，劉 丁

1.聊城市東昌府區(qū)婦幼保健院兒童康復科，聊城 252000；2.東阿縣婦幼保健院兒童康復科，東阿 252200；3.聊城市東昌府區(qū)婦幼保健院兒科，聊城 252000

腦性癱瘓簡稱腦癱，是發(fā)育期的胎兒或嬰幼兒因腦部神經(jīng)元非進行性受損引起的一組癥候群，表現(xiàn)為中樞性運動和姿勢發(fā)育障礙、活動受限，其中痙攣型腦癱是最常見的腦癱類型，占60%～70%[1]。該類型腦癱患兒會出現(xiàn)肌張力增加、運動障礙、姿勢異常等臨床表現(xiàn)，臨床上主要采取神經(jīng)營養(yǎng)、康復鍛煉等手段進行治療。近年有研究發(fā)現(xiàn)，同型半胱氨酸(Hcy)代謝異常與腦癱的發(fā)病密切相關，維生素B12(Vit B12)是Hcy代謝循環(huán)中重要的輔因子，腦癱患兒存在Hcy增多、Vit B12不足[2]。另有動物實驗證實，補充Vit B12可顯著改善腦癱大鼠的神經(jīng)功能并抑制神經(jīng)元的凋亡[3]。本研究將Vit B12聯(lián)合鼠神經(jīng)生長因子用于治療痙攣型腦癱患兒，觀察聯(lián)合治療方案的療效及對細胞凋亡的影響，旨在為發(fā)現(xiàn)腦癱新的治療方案提供臨床研究證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇64例痙攣型腦癱患兒作為研究對象，納入標準：①符合痙攣型腦癱的診斷標準[4]；②年齡為6個月～6歲；③取得患兒家長知情同意。排除標準：①合并癲癇或其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病、精神疾??；②合并先天畸形或其他先天疾病。采用隨機數(shù)表法將入組的64例患兒分為觀察組和對照組，每組各32例。2組一般資料見表1，組間比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會的批準。

表1 2組患兒一般資料比較

1.2 治療方法

2組患兒均參照指南[4]進行康復訓練，每次30 min，每日1次，每周訓練5 d，連續(xù)訓練6個月。對照組在康復訓練的基礎上給予鼠神經(jīng)生長因子(未名生物制藥有限公司，規(guī)格18 μg)18 μg，溶于生理鹽水2 mL，肌肉注射，隔日1次，連續(xù)給藥6個月；觀察組在康復訓練的基礎上給予鼠神經(jīng)生長因子聯(lián)合Vit B12，鼠神經(jīng)生長因子肌肉注射的方案同對照組，同時給予Vit B12(山西云鵬醫(yī)藥集團有限公司，國藥準字H14023321)，規(guī)格：25 μg)片，每次25 μg，口服，每日2次，連續(xù)服用6個月。

1.3 臨床量表的評定

治療前及治療后6個月，均參照指南[4]對2組患兒進行臨床量表的評定，所用量表分別為粗大運動功能分級系統(tǒng)(GMFCS)、粗大運動功能評估量表88項(GMFM-88)和改良Tardieu量表(MTS)。

1.4 腦血流動力學指標的檢測

治療前及治療后6個月，采用經(jīng)顱彩色多普勒超聲儀進行腦血流動力學指標的檢測，首先探查大腦中動脈(MCA)，獲得穩(wěn)定的血流信號后檢測收縮期峰流速(Vs)、平均血流速(Vm)和血管阻力指數(shù)(RI)。

1.5 血清指標的檢測

治療前及治療后6個月，分別取空腹外周靜脈血1～2 mL，靜置30 min后在離心機中以12 000 r·min-1、溫度4 ℃、半徑4.5 cm離心10 min，分離血清后采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)試劑盒檢測Hcy、Vit B12、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)和Bcl-2相關X蛋白(Bax)水平，均嚴格按照試劑盒說明書進行檢測操作。

1.6 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 治療前后GMFCS分級比較

治療前，2組GMFCS分級比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，2組GMFCS分級均較治療前降低，組內(nèi)治療前后比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且觀察組GMFCS分級低于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 治療前后GMFCS分級比較 (n=32)

2.2 治療前后MTS評分、GMFM-88評分比較

治療前，2組MTS評分、GMFM-88評分比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，2組MTS評分均較治療前降低，GMFM-88評分均較治療前升高，組內(nèi)治療前后比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，治療后觀察組MTS評分低于對照組，GMFM-88評分高于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 治療前后MTS評分、GMFM-88評分比較 (n=32，

2.3 治療前后血清Hcy、Vit B12水平比較

治療前，2組間血清Hcy、Vit B12水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，觀察組血清Hcy水平較治療前降低，Vit B12水平較治療前升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，對照組血清Hcy、Vit B12水平與治療前比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；觀察組治療后血清Hcy水平低于對照組，Vit B12水平高于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 治療前后血清Hcy、Vit B12水平比較

2.4 治療前后腦血流動力學參數(shù)比較

治療前，2組間MCA的Vs、Vm、RI水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，2組MCA的Vs、Vm水平均較治療前增加，RI水平均較治療前降低，組內(nèi)治療前后比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且觀察組MCA的Vs、Vm水平高于對照組，RI水平低于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 治療前后腦血流動力學參數(shù)比較

2.5 治療前后血清凋亡指標比較

治療前，2組間血清Caspase-3、Bax、Bcl-2水平比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；治療后，觀察組血清Caspase-3、Bax水平均較治療前降低，Bcl-2水平均較治療前升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且觀察組血清Caspase-3、Bax水平低于對照組，Bcl-2水平高于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表6。

表6 治療前后血清凋亡指標比較

3 討論

Hcy是蛋氨酸代謝循環(huán)的副產(chǎn)物，Vit B12在蛋氨酸循環(huán)中作為輔因子促進Hcy的代謝。在腦梗死、腦出血等疾病的發(fā)病過程中，Hcy升高、Vit B12降低均被證實與神經(jīng)功能的損害有關，也有細胞實驗證實Hcy直接誘導神經(jīng)元發(fā)生損害[5-7]。在腦癱的發(fā)病過程中，腦內(nèi)神經(jīng)元發(fā)生非進行性損害，有研究報道，腦癱患兒血清中Hcy水平明顯升高，參與Hcy代謝的輔因子Vit B12水平明顯降低，且Hcy、Vit B12的變化與腦癱病情加重有關。Vit B12能夠促進Hcy代謝，多項動物實驗在腦癱大鼠、阿爾茨海默病大鼠、帕金森病大鼠等模型中證實補充Vit B12可顯著改善大鼠的神經(jīng)功能[8-10]。

近年陸續(xù)有臨床研究報道了補充Vit B12治療帕金森病、預防腦梗死后癲癇的價值[11-14]，但Vit B12在腦癱中的價值尚缺乏臨床證據(jù)。本研究在腦癱常規(guī)治療藥物鼠神經(jīng)生長因子的基礎上加用Vit B12，治療前后通過3種量表對腦癱病情進行評價。粗大運動障礙是腦癱的特征之一，GMFCS分級、MTS評分、GMFM-88評分均能評價粗大運動的發(fā)育狀況，治療后觀察組患兒的GMFCS分級、MTS評分較對照組降低，GMFM-88評分較對照組增加，表明加用Vit B12可顯著改善腦癱患兒的粗大運動障礙。

近年關于腦癱發(fā)病機制的研究不斷深入，腦部血流動力學異常及細胞凋亡過度激活均與腦癱發(fā)病過程中神經(jīng)功能的損害有關[15-16]。腦梗死、腦出血相關的研究已經(jīng)證實，Hcy增加會影響腦部血流動力學，同時也對細胞凋亡具有激活作用[17-20]。本研究在補充Vit B12后檢測到觀察組患兒血清中Hcy水平明顯降低，而未補充Vit B12的對照組患兒治療后血清中Hcy水平無明顯變化，表明補充Vit B12能夠改善腦癱患兒的Hcy代謝，降低血清Hcy水平，進而可能通過糾正Hcy對腦部血流動力學及細胞凋亡的影響發(fā)揮治療腦癱的價值。

為了探究Vit B12治療腦癱的可能機制，本研究進一步分析了治療后腦部血流動力學及細胞凋亡的變化。經(jīng)多普勒檢測腦部血流動力學參數(shù)可知，觀察組治療后MCA的Vs、Vm均高于對照組，RI低于對照組，表明用Vit B12治療腦癱能夠增加腦部血流灌注、降低血管阻力。Hcy的刺激以及血流動力學異常造成的缺氧均可激活細胞凋亡，Bax、Bcl-2、caspase-3是目前已知功能明確的凋亡調(diào)控分子，本研究對血清中上述3種凋亡分子進行了檢測，結(jié)果顯示，觀察組血清中促凋亡分子Bax、caspase-3的水平較對照組降低，抗凋亡分子Bcl-2的水平較對照組升高，表明Vit B12治療腦癱能夠抑制細胞凋亡，這一抗凋亡作用可能與降低Hcy水平、改善腦部缺血缺氧有關。

綜上所述，Vit B12聯(lián)合鼠神經(jīng)生長因子治療痙攣型腦癱患兒能夠改善痙攣狀態(tài)，這一改善作用可能與降低Hcy含量并抑制細胞凋亡有關。以上結(jié)果為今后臨床治療腦癱提供了新思路，關于Vit B12治療腦癱相關的分子機制仍有待更多的研究。