復(fù)方二至丸的研究進(jìn)展

李旺廷，陳海霞，陳錦儀，黃少杰，王婧雯*

1.陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，咸陽 712046；2.空軍軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院藥劑科，西安 710032

二至丸是由中藥女貞子和墨旱蓮等量配伍成的傳統(tǒng)方劑，具有滋補(bǔ)肝腎的作用。近年來對二至丸的研究結(jié)果顯示，二至丸在人體血液系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)等方面表現(xiàn)出良好的效果，對治療肝炎、骨質(zhì)疏松癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸癌、皮膚病和帕金森病等有顯著的療效。

作為經(jīng)典方藥，明確中藥女貞子和墨旱蓮含有的多種化學(xué)成分配伍后的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用以及臨床應(yīng)用、藥理作用和作用機(jī)制，對后續(xù)二至丸以及二至丸聯(lián)合其他方藥的深入研究和開發(fā)利用具有深遠(yuǎn)的影響。

1 二至丸的組方

二至丸，原名女貞丹，最早記載于1530年明代吳旻輯的《扶手精方》[1]，最后在王三才的《醫(yī)便》中將女貞丹稱為二至丸。其中女貞子為木樨科植物女貞的果實(shí)，墨旱蓮為菊科植物鱧腸的地上部分。女貞子除去梗葉，用酒浸泡一夜，去皮、曬干，研磨成粉，將墨旱蓮搗汁，兩者等量配伍組成二至丸。二至是指冬至和夏至。8～12月為女貞子的果實(shí)期，于冬至之日采摘；而墨旱蓮夏、秋枝葉茂盛，于夏至之日割取全草，故名為二至丸[2]。

根據(jù)中醫(yī)藥理論，女貞子性平，偏寒涼，味甘、苦，入肝、肺和腎經(jīng)，具有補(bǔ)益肝腎、涼血補(bǔ)血、滋陰清熱和清肝明目的功效；墨旱蓮性涼，味甘、酸，入肝、腎、胃、大腸和小腸五經(jīng)，具有涼血止血、養(yǎng)陰烏發(fā)和祛濕止癢的功效。女貞子與墨旱蓮兩者配伍，相須為用，補(bǔ)肝腎，治肝腎陰虛所致耳鳴、頭暈、目昏和崩漏等證[3]。

2 二至丸的成分分析

2.1 女貞子的有效成分

女貞子在我國已使用2 000余年，具有保肝、抗氧化、降血糖、抗腫瘤和抗骨質(zhì)疏松等生物活性，被廣泛用于各種復(fù)方用藥[4]。國內(nèi)外學(xué)者在女貞子不同部位中發(fā)現(xiàn)大量的化學(xué)成分，包括：齊墩果酸、熊果酸等三萜類化合物，芹菜素、槲皮素等黃酮類化合物，女貞苷以及特女貞苷等環(huán)烯醚萜類化合物[5]。

女貞子中黃酮類化合物的含量較高，為13.61%[6]，三萜類化合物的含量為5.61%，多糖的含量為1.525%～9.891%，磷脂的含量為0.39%[7]。女貞子有效成分分類見表1。

表1 女貞子有效成分的分類

2.2 墨旱蓮的有效成分

墨旱蓮不僅是二至丸的原料之一，也是安坤膠囊、參鹿補(bǔ)膏、二至天癸顆粒和涼血安神片等制劑的組成成分之一，具有保肝、抗衰老、抗腫瘤、抗炎、止血和免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[8]。墨旱蓮中主要含有：芹菜素、木犀草素和槲皮素等黃酮類化合物，蟛蜞菊內(nèi)酯、去甲蟛蜞菊內(nèi)酯等香豆草醚類化合物，熊果酸、旱蓮皂苷等三萜類化合物。其中香豆草醚類和噻吩類化合物是墨旱蓮中最具代表性的化學(xué)成分[9]，香豆草醚類化合物中的蟛蜞菊內(nèi)酯和異去甲基蟛蜞菊內(nèi)酯等化學(xué)成分具有保肝、抗腫瘤等生物活性[10]。見表2。

表2 墨旱蓮有效成分的分類

2.3 二至丸的有效成分

復(fù)方二至丸僅由兩味中藥女貞子和墨旱蓮組成，在抗衰老、抗骨質(zhì)疏松和免疫調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮著明顯的藥理作用。其中發(fā)揮藥理作用的化學(xué)成分主要是含量比較高的5種化合物，如環(huán)烯醚萜苷類、香豆草醚類、苯乙醇苷類、酚酸類和黃酮類化合物[11]。其他成分如齊墩果酸、紅景天苷等也在二至丸的臨床應(yīng)用中具有重要地位。見表3。

表3 二至丸主要有效成分的分類

3 二至丸的臨床應(yīng)用研究

3.1 肝炎

刀豆蛋白A(ConA)誘導(dǎo)的小鼠肝損傷模型接近于自身免疫性肝損傷，可用于二至丸抗免疫性肝炎研究[12]。李亞洲等[13]通過給小鼠尾靜脈注射ConA造模，結(jié)果表明，二至丸作用24 h能改善ConA引起的肝腫大，降低肝組織中腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-4(IL-4)炎癥因子的釋放，顯著降低天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的含量，而對丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的影響并不明顯，增強(qiáng)核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子(Nrf2)蛋白的表達(dá)，減小對肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)，對肝細(xì)胞起到保護(hù)作用。董玲等[14]通過給小鼠尾靜脈注射ConA造模，結(jié)果表明，二至丸能顯著降低ConA引起的肝細(xì)胞凋亡和肝組織中的炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-6(IL-6)和干擾素-γ(IFN-γ)的釋放，二至丸聯(lián)合姜黃素可增強(qiáng)抗炎因子白細(xì)胞介素-10(IL-10)的mRNA表達(dá)，抑制核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)信號通路，從而減少炎癥因子對肝細(xì)胞的損傷。

3.2 骨質(zhì)疏松癥

二至丸是補(bǔ)益肝腎的常用良方，對絕經(jīng)后女性發(fā)生的骨質(zhì)疏松有明顯的改善作用[15]。姜宜妮等[16]摘除大鼠雙側(cè)卵巢造模絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，二至丸中、高劑量組能顯著減少大鼠脂肪細(xì)胞，降低脂肪細(xì)胞密度和面積，提高大鼠彈性模量、最大載荷和骨密度。梁文娜等[17]摘除大鼠雙側(cè)卵巢造模絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，二至丸可增加骨密度以及骨小梁的數(shù)量，維持骨代謝平衡，提高骨特異性堿性磷酸酶(BALP)的表達(dá)，抑制組織蛋白酶K(Cath-K)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)以及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)。

3.3 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎

劉牧秋等[18]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析二至丸對治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的作用成分、靶點(diǎn)和信號通路，結(jié)果顯示，包括槲皮素、二氫槲皮素、蟛蜞菊內(nèi)酯、去甲蟛蜞菊內(nèi)酯、木犀草素、β-谷固醇、山柰酚和刺槐素等12種化合物是治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的活性成分，其機(jī)制與槲皮素抑制核因子κB受體活化因子配體(RANKL)的表達(dá)有關(guān)，并與木犀草素、β-谷固醇和山柰酚共同抑制滑膜成纖維細(xì)胞(RA-FLS)的異常增殖、減少基質(zhì)金屬蛋白酶相關(guān)。

3.4 皮膚病

根據(jù)中醫(yī)藥理論，肝腎在皮膚病的發(fā)生發(fā)展中起關(guān)鍵作用。二至丸在肝腎方面的滋補(bǔ)作用明顯，與其他方藥配伍使用，對斑禿、黃褐斑、銀屑病、白癜風(fēng)、脂溢性脫發(fā)、痤瘡和紅斑狼瘡等皮膚病有顯著的療效[19]，其機(jī)制可能與免疫調(diào)節(jié)有關(guān)[20]。

3.5 結(jié)腸癌

余文燕等[21]將二至丸用于結(jié)腸癌的治療中，結(jié)果顯示，二至丸抑制結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的增殖，并通過增強(qiáng)Bax蛋白的表達(dá)和降低Bcl-2蛋白的表達(dá)促使癌細(xì)胞凋亡，且聯(lián)合化療藥奧沙利鉑(L-OHP)用藥的抑制率遠(yuǎn)高于單用二至丸或化療藥的結(jié)果。

3.6 帕金森病

吳欣芳等[22]用1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶(MPTP)致小鼠帕金森病造模，結(jié)果表明，二至丸給藥組能明顯縮短帕金森病小鼠爬桿時間和Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)中逃避潛伏期時間，增加Morris水迷宮空間搜索實(shí)驗(yàn)中的穿越次數(shù)和滯留時間，顯著升高2種抗氧化酶的活性，明顯增加多巴胺能神經(jīng)元，緩解多巴胺能神經(jīng)元的損傷和凋亡，改善小鼠的運(yùn)動和認(rèn)知障礙。

SHARMA S等[23]用秀麗隱桿線蟲模型造模，結(jié)果顯示，蟛蜞菊內(nèi)酯能抗帕金森病，表現(xiàn)出劑量依賴性減少α-突觸核蛋白(α-syn)的聚集水平，升高多巴胺能神經(jīng)元水平和氧化應(yīng)激能力，降低蛋白質(zhì)羰基化水平，其機(jī)制與調(diào)控lrk-1、lagr-1、ymel-1和grk-1基因的表達(dá)有關(guān)。

4 二至丸的藥理作用

4.1 保肝

胡冬梅等[24]通過四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷模型，結(jié)果表明，特女貞苷能降低血清中ALT和AST的含量，降低丙二醛(MDA)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)和IL-6的含量，同時升高谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPx)和超氧化物歧化酶(SOD)的抗氧化活性，從而改善肝損傷。徐汝明等[25]通過小鼠尾注射ConA建立小鼠肝損傷模型，結(jié)果表明，墨旱蓮提取物中的蟛蜞菊內(nèi)酯能顯著降低小鼠血清中的ALT水平，減少肝細(xì)胞的損傷和凋亡，抑制ConA導(dǎo)致的T淋巴細(xì)胞的增殖活化。

4.2 抗衰老

在研究二至丸抗衰老的實(shí)驗(yàn)中，通常給大鼠腹腔注射D-半乳糖造模，以增強(qiáng)抗氧化酶消除自由基的能力達(dá)到延緩衰老、抗衰老的作用。高會麗等[26]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，二至丸能提高衰老大鼠的總抗氧化能力(T-AOC)，升高大腦皮層神經(jīng)元線粒體膜電位(MMP)，改善線粒體功能，明顯降低衰老大鼠神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。劉其南等[27]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，二至丸可以減少腎細(xì)胞β-半乳糖苷酶的釋放，顯著降低衰老腎細(xì)胞的β-半乳糖苷酶染色陽性率，劑量型降低β-半乳糖苷酶的活性，提高抗氧化酶的活性，降低大鼠體內(nèi)MDA的含量，減輕大鼠腎細(xì)胞的衰老程度。

4.3 免疫調(diào)節(jié)

劉雪英等[28]在墨旱蓮乙酸乙酯總提物對正常小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)中顯示，大劑量總提物對小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)均有所增長，對小鼠的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)和溶血素均有一定的抑制作用，可調(diào)節(jié)小鼠的免疫功能。許小華等[29]研究表明，墨旱蓮多糖能增強(qiáng)正常小鼠的免疫功能，特別是低劑量組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)的變化更明顯，同時對小鼠溶血素和溶血空斑的形成有明顯的促進(jìn)作用。吳喜鳳等[30]用環(huán)磷酰胺造模使小鼠的免疫受到抑制，結(jié)果顯示，高劑量的女貞子提取物可增加免疫抑制小鼠的脾指數(shù)，顯著提高淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能以及巨噬細(xì)胞的吞噬功能。

4.4 抗骨質(zhì)疏松

卞琴等[31]將女貞子用于去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠，結(jié)果表明，其有效成分齊墩果酸能夠增加骨小梁的體積與樣本體積的比值、骨小梁的間隙和骨小梁的厚度，提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨分化的能力。

CHENG M等[32]檢測二至丸對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠的骨代謝標(biāo)志物各項(xiàng)指標(biāo)的影響，結(jié)果顯示，各劑量組均能顯著提高去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠的血清鈣(S-Ca)、血清磷(S-P)、尿鈣(U-Ca)和磷(U-P)水平，影響第四腰椎和脛骨的骨密度。其中二至丸中劑量組能顯著提高第四腰椎和脛骨的骨密度，達(dá)到抗骨質(zhì)疏松的效果。

5 二至丸的藥理作用機(jī)制研究

5.1 保肝降酶

閆冰等[33]通過CCl4致小鼠急性肝損傷造模，結(jié)果表明，二至丸水提物能夠改善肝細(xì)胞壞死、變性及炎性細(xì)胞浸潤程度，其機(jī)制與增加SOD的活性、增強(qiáng)肝細(xì)胞抗氧化能力、顯著降低MDA的含量有關(guān)。王莉英[34]在二至丸水煎劑、醇提取物對CCl4致小鼠急性肝損傷的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，二至丸水煎劑、醇提取物均能降低ALT水平，小劑量水煎劑比醇提取物作用更明顯。

5.2 抗肝纖維化

安德明等[35]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，二至丸可以減緩膽汁淤積性肝纖維化大鼠的肝纖維化過程，其機(jī)制與降低酶活性[堿性磷酸酶(ALP)、AST和ALT]、上調(diào)尿激酶型纖溶酶原激活劑(uPA)的蛋白含量及促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的降解有關(guān)。周娟娟等[36]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，熊果酸可減少肝細(xì)胞的壞死，減輕肝纖維化的程度，其機(jī)制可能與抑制煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶的活化及抑制磷脂酰肌醇-3-激酶/絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)、P38絲裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)等信號通路的活化有關(guān)，降低轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)表達(dá)和抑制肝星狀細(xì)胞(HSC)的激活，減少活性氧的產(chǎn)生。

5.3 調(diào)節(jié)機(jī)體免疫

劉大基等[37]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，二至丸中的女貞子和墨旱蓮能協(xié)同配合發(fā)揮免疫作用，在一定濃度范圍內(nèi)，女貞子中的多糖成分可以協(xié)調(diào)ConA使小鼠脾臟質(zhì)量增加，同時顯著提高小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-2(IL-2)的能力，當(dāng)女貞子多糖和墨旱蓮的質(zhì)量濃度均為25 μg·mL-1時，墨旱蓮能彌補(bǔ)女貞子使小鼠脾淋巴細(xì)胞分泌IL-2的能力達(dá)到最佳狀態(tài)，協(xié)調(diào)發(fā)揮免疫作用。

5.4 抗氧化應(yīng)激

段冷昕等[38]建立CCl4致小鼠急性肝損傷模型，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同劑量的二至丸能減輕氧化應(yīng)激導(dǎo)致的肝損傷，抑制活性氧(ROS)和MDA的產(chǎn)生，并呈劑量依賴性降低2種轉(zhuǎn)氨酶、2種抗氧化酶的活性以及肝細(xì)胞的凋亡率，抑制CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CHOP)和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)在肝細(xì)胞的表達(dá)，減少CHOP和GRP78的含量，抑制肝細(xì)胞的凋亡。

5.5 調(diào)控骨重建

閔愈等[39]采用去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠建模，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，女貞子、墨旱蓮和二至丸是調(diào)節(jié)骨重建和骨代謝的重要因子，如骨保護(hù)素(OPG)、RANKL、β鏈蛋白(β-catenin)和趨化素(chemerin)，其機(jī)制與RANKL/RANK(核因子κB受體活化因子)通路和Wnt/β-catenin通路的表達(dá)有關(guān)，影響成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的增殖分化。

6 加味二至丸

在臨床實(shí)踐中，加味二至丸對多種疾病有一定的療效。黃芪二至丸能改善慢性腎小球腎炎[40]，二至丸合知柏地黃丸能治療腎病綜合征和慢性精囊炎[41-42]，二至天癸顆粒能改善卵細(xì)胞和胚胎質(zhì)量[43]。這為二至丸組方后續(xù)的藥理作用和臨床應(yīng)用的深入研究提供了新思路。

張和針等[44]將女貞子、墨旱蓮和淫羊藿三者配伍組成加味二至丸，彌補(bǔ)二至丸滋補(bǔ)腎陰的功效，達(dá)到陰陽互補(bǔ)的效果，可降低總膽固醇(TC)、內(nèi)皮素-1(ET-1)和三酰甘油(TG)的含量，并對雌激素缺乏癥狀和血管內(nèi)皮功能有一定的改善作用。中藥淫羊藿能改善骨質(zhì)疏松，療效確切[45]，可與二至丸組合深入研究其對絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松的作用。

7 小結(jié)

綜上所述，二至丸的主要有效成分包含：特女貞苷、女貞酸等環(huán)烯醚萜類化合物，蟛蜞菊內(nèi)酯、異蟛蜞菊內(nèi)酯等香豆草醚類化合物，齊墩果酸、熊果酸和旱蓮皂苷等三萜類化合物，對羥基苯乙醇、紅景天苷等苯乙醇苷類化合物。

作為滋補(bǔ)方藥，二至丸對肝腎方面的療效顯著，對肝炎、骨質(zhì)疏松癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、皮膚病、結(jié)腸癌和帕金森病等有一定的療效，具有保肝、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)、抗骨質(zhì)疏松和降血脂等藥理作用，能通過保肝降酶、抗肝纖維化、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、抗氧化應(yīng)激和調(diào)控骨重建等機(jī)制發(fā)揮作用。但對皮膚病和高脂血癥等的機(jī)制尚不明確，需要進(jìn)一步的研究；中藥女貞子具有降糖作用，為復(fù)方二至丸的研究提供了新的方向；二至丸與淫羊藿均可用于治療骨質(zhì)疏松，可組方進(jìn)一步研究對絕經(jīng)后女性骨質(zhì)疏松的治療作用和作用機(jī)制。

在中醫(yī)藥的臨床實(shí)踐過程中，二至丸常與其他單味藥以及方藥聯(lián)合組方配伍治療相關(guān)疾病，拓寬了二至丸的臨床應(yīng)用，為后續(xù)在二至丸的基礎(chǔ)上的組方研究提供了一定的臨床依據(jù)。