自擬補(bǔ)腎祛瘀方對(duì)多囊卵巢綜合征模型大鼠的作用及機(jī)制研究*

牛永莉，王艷，孔麗，謝廣妹

（1.酒泉市人民醫(yī)院 生殖醫(yī)學(xué)科，甘肅 酒泉 735000；2.甘肅省婦幼保健院 生殖中心，甘肅 蘭州 730050）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome,PCOS）為育齡女性常見(jiàn)病，發(fā)病率約8%[1]。PCOS 是一種生殖功能障礙與糖代謝異常并存的內(nèi)分泌紊亂綜合征，目前認(rèn)為與雄激素及促黃體生成素異常、胰島素抵抗等多種因素有關(guān)[2]。PCOS 屬中醫(yī)“閉經(jīng)”“不孕”范疇，以腎功能失調(diào)為本，痰濁、血淤為標(biāo)，中醫(yī)治療宜補(bǔ)腎為主，祛瘀為輔[3]。以往研究表明[4]，中醫(yī)治療PCOS 費(fèi)用低廉、不良反應(yīng)少且無(wú)絕對(duì)用藥禁忌，在PCOS 的臨床治療中受到重視。研究認(rèn)為[5]，PCOS 的發(fā)生與腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）介導(dǎo)的核因子κB（nuclear factor κB, NF-κB）/核因子IκB（inhibitor of NF-κB,IκBα）信號(hào)通路激活有關(guān)。其中，NF-κB 有多項(xiàng)調(diào)控功能，調(diào)控TNF-α/NF-κB/IκBα 信號(hào)通路可成為PCOS 防治的新靶點(diǎn)，但目前相關(guān)的研究較少。本研究采用自擬補(bǔ)腎祛瘀方治療PCOS 并分析其對(duì)TNF-α/NF-κB/IκBα 信號(hào)通路的影響，以期明確其治療PCOS 的可能作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物80 只SPF 級(jí)SD 雌性大鼠，6 周齡，體重（180±10）g[由中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2020-0005]。喂養(yǎng)條件：溫度20℃、濕度50%，每日喂新鮮水及飼料。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑和藥物TNF-α 抗體、NF-κB（P65）抗體及IκBα 抗體（英國(guó)Abcam 公司），鼠抗人β-actin（生工生物工程上海股份有限公司），羊抗鼠二抗、DAB 顯色試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司），SYBP?Premix Ex TaqTM（日本TaKaRa 公司），PCR 引物（寶生物工程大連有限公司），TRIzol（美國(guó)英杰生命技術(shù)有限公司），TBST 試劑（上?？评噭┯邢薰荆?。補(bǔ)腎化瘀方（酒泉市人民醫(yī)院中醫(yī)藥劑室配置），達(dá)英-35（拜耳醫(yī)藥保健有限公司），來(lái)曲唑（大連美侖生物技術(shù)有限公司），羧甲基纖維素鈉、水合氯醛、0.9%氯化鈉溶液（北京博爾邁生物技術(shù)有限公司）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器臺(tái)式高速離心機(jī)（美國(guó)Sigma 公司），電泳儀（美國(guó)BIO-RAD 公司），實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀、PCR 擴(kuò)增儀、恒溫箱（美國(guó)Thermo 公司），顯微鏡（日本奧林巴斯株式會(huì)社），酶標(biāo)儀（美國(guó)Benchmark 公司），血糖儀（德國(guó)羅氏診斷有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 模型復(fù)制80 只大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組20 只、模型復(fù)制組60 只。采用來(lái)曲唑法復(fù)制模型：來(lái)曲唑灌胃1 mg/（kg·d），連續(xù)28 d，模型復(fù)制組給予高脂高糖飼料和9%葡萄糖水。模型復(fù)制成功后分為模型組、西藥組及聯(lián)合組，每組20 只。

1.2.2 藥物干預(yù)對(duì)照組和模型組根據(jù)大鼠體重給予1 mL/（kg·d）氯化鈉溶液灌胃，參考《中藥藥理研究方法學(xué)》[6]換算用藥劑量。自擬補(bǔ)腎祛瘀方組成：女貞子、墨旱蓮各15 g，菟絲子、山茱萸、丹參、川芎、赤芍、桃仁、紅花各10 g，由醫(yī)院中醫(yī)藥劑室加水煎煮成湯劑，湯劑終濃度為1 g/mL。聯(lián)合組每天根據(jù)體重給予補(bǔ)腎祛瘀湯劑11 g/kg 和4.5 mg/kg 二甲雙胍灌胃，西藥組僅給予4.5 mg/kg 二甲雙胍灌胃，聯(lián)合組與西藥組均灌胃28 d。

1.2.3 大鼠體重檢測(cè)藥物干預(yù)前及藥物干預(yù)28 d 后稱(chēng)量各組大鼠體重，比較藥物干預(yù)前后大鼠體重變化。

1.2.4 大鼠性激素水平檢測(cè)大鼠于16 周齡、動(dòng)情間期當(dāng)晚20 點(diǎn)開(kāi)始禁食，至次日早晨8 點(diǎn)空腹取腹主動(dòng)脈血5～8 mL，3 500 r/min離心15 min，取上清液，置入-20℃冰箱冷凍保存待測(cè)。參照放射免疫法試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定睪酮（T）、促卵泡激素（FSH）、黃體生成素（LH）的水平。抽血稱(chēng)重后采用脊椎脫臼法處死所有大鼠，取大鼠卵巢組織待測(cè)。

1.2.5 Western blotting檢測(cè)大鼠卵巢組織中TNF-α、NF-κB、IκBα 蛋白相對(duì)表達(dá)量剪碎30 mg 卵巢組織，加1 mL PBS，10 000 r/min、4℃下離心1 min，洗凈組織上的血污及黏液等。加300 μL 蛋白裂解液，研磨后置于冰上20 min 至細(xì)胞裂解。12 000 r/min、4℃下離心15 min，所得上清液即為全蛋白提取液，置于-80℃冷凍保存?zhèn)溆?。提取蛋白液，電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，取出PVDF 膜放入TBST 中漂洗3 次，分別加入TNF-α 抗體、NF-κB（P65）抗體、IκBα 抗體及鼠抗人β-actin，震蕩過(guò)夜。取出膜，放入TBST 中漂洗3 次后置于二抗中震蕩2 h。放入TBST 中漂洗3 次，滴加顯色液，緊密結(jié)合膜蛋白面與膠片，強(qiáng)曝光5 min 左右，用Image Quant 350 成像系統(tǒng)掃描并保存圖像，分析TNF-α、NF-κB、IκBα 蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測(cè)大鼠卵巢組織中TNF-α、NF-κB、IκBα mRNA 相對(duì)表達(dá)量洗凈研缽等器皿，用雙蒸水和焦碳酸二乙酯水分別沖洗，于180℃下烘烤4 h 去除RNA 酶。切取50～100 mg 組織在研缽中研磨成粉，將粉末移至無(wú)RNA 酶的EP 管中，加1 mL TRIzol 后混勻。靜置5 min 后加入氯仿200 μL，震蕩15 s 混勻，靜置5 min，4℃下離心15 min。待EP 管中液體分層后，用100 μL 移液槍將上層液體吸到新的無(wú)RNA酶的EP 管中，并加入等體積異丙醇，混勻后靜置10 min 并再次離心10 min。EP 管底部白色物質(zhì)即為RNA，倒掉管中液體后加入1 mL 75%乙醇，顛倒EP 管數(shù)次，離心5 min。倒掉上清液，用移液槍吸凈管底液體，靜置5 min 干燥。加入30～50 μL DEPC 水并用移液槍吹打使RNA 充分溶解。取2 μL總RNA，凝膠電泳檢測(cè)完整性。各組大鼠總RNA 的電泳圖中可見(jiàn)明顯2 個(gè)條帶，根據(jù)遷移率分別是18 S 和28 S，且電泳圖中無(wú)明顯雜帶和向前拖尾的現(xiàn)象，說(shuō)明RNA 提取成功，完整性較高，純度滿(mǎn)足后續(xù)PCR 擴(kuò)增要求。參照TaKaRa試劑盒說(shuō)明書(shū)配制逆轉(zhuǎn)錄體系20 μL（5×PrimeScriptTMBuffer 4 μL、Total RNA 4 μL、RNase Free dH2O 12 μL），37℃15 min，85℃5 s，4℃30 min 獲取cDNA。qRT-PCR 反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性30 s，95℃變性5 s，95℃退火5 s、60℃延伸30 s，40 個(gè)循環(huán)，循環(huán)結(jié)束后95℃延伸15 s。引物序列：①TNF-α：正向5'-TCTCTTCAAGGGACAA GGCT-3'，反 向5'-TCCTGGTATGAAATGGCAAA-3'，引物長(zhǎng)度78 bp；②NF-κB：正向5'-GCCTCATCCAC ATGAACTTG-3'，反向5'-CGCTTCTTCACACACTGG AT-3'，引物長(zhǎng)度120 bp；③IκBα：正向5'-CTGTACG CCCCAGCATCT-3'，反向5'-GCACCCAAAGTCACCAA G-3'，引物長(zhǎng)度144 bp；④β-actin：正向5'-CGGTCA GGTCATCACTATCG-3'，反向5'-TTCCATACCCAGGA AGGAAG-3'，引物長(zhǎng)度79 bp。以β-actin 為內(nèi)參，計(jì)算各組ΔΔCt，ΔCt=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因，ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組。目的基因相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCt表示。

1.2.7 免疫組織化學(xué)檢測(cè)大鼠卵巢組織中TNF-α、NF-κB、IκBα 蛋白陽(yáng)性表達(dá)卵巢組織常規(guī)固定、石蠟包埋、切片（厚度4 μm），脫蠟止水，5%的牛血清白蛋白封閉10 min。滴加一抗后4℃下過(guò)夜；滴加二抗后37℃下孵育20 min。蘇木精復(fù)染2 min，脫水后常規(guī)透明、封片，顯微鏡下拍照，取5 個(gè)不同高倍鏡視野，IPP 6.0 軟件分析圖像，記錄陽(yáng)性細(xì)胞平均光密度（OD）值，取3 次平均值作為最終結(jié)果，OD 值越高表示陽(yáng)性表達(dá)率越高。陽(yáng)性判定：TNF-α、NF-κB、IκBα 以細(xì)胞核中可見(jiàn)棕黃或棕褐色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較采用方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采取LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠藥物干預(yù)前后體重比較

各組大鼠藥物干預(yù)前體重比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組大鼠藥物干預(yù)28 d 后體重比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，模型組的體重高于另外3 組（P＜0.05），西藥組高于聯(lián)合組和對(duì)照組（P＜0.05），聯(lián)合組高于對(duì)照組（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠藥物干預(yù)前及藥物干預(yù)28 d后的體重比較（n=20，g，±s）

表1 各組大鼠藥物干預(yù)前及藥物干預(yù)28 d后的體重比較（n=20，g，±s）

注：①與模型組比較，P ＜0.05；②與西藥組比較，P ＜0.05；③與對(duì)照組比較，P ＜0.05。

藥物干預(yù)28 d后210.78±10.33①②231.16±15.17 225.65±13.02①219.32±11.62①②③5.150 0.003組別對(duì)照組模型組西藥組聯(lián)合組F 值P 值藥物干預(yù)前190.54±8.11 189.18±9.13 188.69±10.14 190.88±10.52 0.245 0.865

2.2 各組大鼠血清性激素水平比較

各組大鼠血清T、FSH、LH 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；進(jìn)一步兩兩比較，模型組血清T、FSH、LH 水平高于另外3 組（P＜0.05），西藥組高于聯(lián)合組與對(duì)照組（P＜0.05），聯(lián)合組高于對(duì)照組（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠血清性激素水平比較 （n=20，±s）

表2 各組大鼠血清性激素水平比較 （n=20，±s）

注：①與模型組比較，P ＜0.05；②與西藥組比較，P ＜0.05；③與對(duì)照組比較，P ＜0.05。

LH/（mIU/mL）34.51±6.78①②47.15±11.63 43.12±10.97①39.22±7.56①②③6.512 0.001組別對(duì)照組模型組西藥組聯(lián)合組F 值P 值T/（ng/dL）11.91±2.26①②17.5±5.76 15.87±4.98①13.66±4.21①②③5.999 0.001 FSH/（mIU/mL）9.94±2.82①②14.79±4.63 13.08±3.99①11.71±3.41①②③6.343 0.001

2.3 各組大鼠TNF-α、NF-κB、IκBα 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較

各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步兩兩比較，模型組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB 蛋白相對(duì)表達(dá)量高于另外3 組，IκBα 蛋白相對(duì)表達(dá)量低于另外3 組（P＜0.05）；西藥組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB 蛋白相對(duì)表達(dá)量高于聯(lián)合組與對(duì)照組（P＜0.05），同時(shí)聯(lián)合組高于對(duì)照組（P＜0.05）；西藥組大鼠卵巢組織IκBα 蛋白相對(duì)表達(dá)量低于聯(lián)合組與對(duì)照組（P＜0.05），同時(shí)聯(lián)合組低于對(duì)照組（P＜0.05）。見(jiàn)圖1 和表3。

表3 各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較 （n=20，±s）

表3 各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較 （n=20，±s）

注：①與模型組比較，P ＜0.05；②與西藥組比較，P ＜0.05；③與對(duì)照組比較，P ＜0.05。

IκBα蛋白相對(duì)表達(dá)量0.71±0.22①②0.46±0.12 0.55±0.16①0.61±0.20①②③6.495 0.001組別對(duì)照組模型組西藥組聯(lián)合組F 值P 值TNF-α蛋白相對(duì)表達(dá)量0.38±0.07①②1.45±0.21 1.13±0.19①0.67±0.14①②③6.416 0.001 NF-κB蛋白相對(duì)表達(dá)量0.53±0.18①②0.81±0.26 0.73±0.24①0.64±0.20①②③5.867 0.001

圖1 各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα蛋白的表達(dá)

2.4 各組大鼠TNF-α、NF-κB、IκBα mRNA 相對(duì)表達(dá)量的比較

各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα mRNA 相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步兩兩比較，模型組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于另外3 組，IκBα mRNA 相對(duì)表達(dá)量低于另外3 組（P＜0.05）；西藥組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB mRNA 相對(duì)表達(dá)量高于聯(lián)合組與對(duì)照組（P＜0.05），聯(lián)合組高于對(duì)照組（P＜0.05）；西藥組大鼠卵巢組織IκBα mRNA 相對(duì)表達(dá)量低于聯(lián)合組與對(duì)照組（P＜0.05），聯(lián)合組低于對(duì)照組（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠TNF-α、NF-κB、IκBα mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 （n=20，±s）

表4 各組大鼠TNF-α、NF-κB、IκBα mRNA相對(duì)表達(dá)量比較 （n=20，±s）

注：①與模型組比較，P ＜0.05；②與西藥組比較，P ＜0.05；③與對(duì)照組比較，P ＜0.05。

TNF-α mRNA 0.67±0.21①②1.01±0.34 0.90±0.29①0.76±0.24①②③5.990 0.001組別對(duì)照組模型組西藥組聯(lián)合組F 值P 值NF-κB mRNA 0.53±0.18①②0.83±0.24 0.72±0.20①0.61±0.19①②③6.498 0.001 IκBα mRNA 0.58±0.20①②0.39±0.11 0.44±0.13①0.52±0.15①②③6.750 0.001

2.5 各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα 的OD值比較

各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα 的OD 值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。進(jìn)一步兩兩比較，模型組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB 的OD 值高于另外3 組，IκBα 的OD 值低于另外3 組（P＜0.05）；西藥組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB 的OD 值高于聯(lián)合組與對(duì)照組（P＜0.05），聯(lián)合組高于對(duì)照組（P＜0.05）；西藥組大鼠卵巢組織IκBα 的OD 值低于聯(lián)合組與對(duì)照組（P＜0.05），聯(lián)合組低于對(duì)照組（P＜0.05）（見(jiàn)表5）。各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα 陽(yáng)性表達(dá)見(jiàn)圖3～5。

表5 各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα的OD值比較 （n=20，±s）

表5 各組大鼠卵巢組織TNF-α、NF-κB、IκBα的OD值比較 （n=20，±s）

注：①與模型組比較，P ＜0.05；②與西藥組比較，P ＜0.05；③與對(duì)照組比較，P ＜0.05。

IκBα 0.78±0.24①②0.44±0.16 0.59±0.17①0.67±0.19①②③6.302 0.001組別對(duì)照組模型組西藥組聯(lián)合組F值P值TNF-α 0.40±0.14①②0.76±0.23 0.65±0.21①0.52±0.16①②③11.165 0.001 NF-κB 0.49±0.15①②0.74±0.23 0.66±0.21①0.58±0.17①②③6.195 0.001

圖3 各組大鼠卵巢組織TNF-α蛋白陽(yáng)性表達(dá) （免疫組織化學(xué)×200）

圖4 各組大鼠卵巢組織NF-κB蛋白陽(yáng)性表達(dá) （免疫組織化學(xué)×200）

圖5 各組大鼠卵巢組織IκBα蛋白陽(yáng)性表達(dá) （免疫組織化學(xué)×200）

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)[7]，PCOS 易增加子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，積極治療PCOS 對(duì)女性月經(jīng)失調(diào)、不孕癥及各種遠(yuǎn)期并發(fā)癥有較好的預(yù)防作用。由于對(duì)PCOS發(fā)病機(jī)制認(rèn)識(shí)的局限性，目前國(guó)內(nèi)外尚無(wú)統(tǒng)一的規(guī)范治療方案，臨床治療多以促排卵等對(duì)癥處理為主，但存在停藥復(fù)發(fā)或治療無(wú)效等問(wèn)題。西藥基礎(chǔ)上聯(lián)合中醫(yī)藥治療PCOS 具有不良反應(yīng)少，且能有效改善患者癥狀，受到臨床歡迎。

3.1 自擬補(bǔ)腎祛瘀方對(duì)PCOS 大鼠性激素水平的影響

本研究通過(guò)來(lái)曲唑法復(fù)制大鼠PCOS 模型。來(lái)曲唑可促進(jìn)促性腺激素持續(xù)分泌，刺激LH、FSH持續(xù)合成，使LH、FSH 無(wú)法達(dá)到排卵高峰，誘發(fā)排卵功能障礙，造成卵巢多囊樣改變[8]。本研究結(jié)果顯示，藥物干預(yù)后，模型組大鼠體重增加最為顯著，高于另外3 組；西藥組高于聯(lián)合組和對(duì)照組，聯(lián)合組高于對(duì)照組。此外，模型組血清T、FSH、LH 高于對(duì)照組；且與模型組相比，血清T、FSH、LH 明顯降低，其中聯(lián)合組更低，但仍高于對(duì)照組。這提示PCOS 會(huì)造成血清T、FSH、LH 水平的升高，西藥治療可促進(jìn)血清T、FSH、LH 降低，而聯(lián)合自擬補(bǔ)腎化瘀方治療后，血清T、FSH、LH 會(huì)進(jìn)一步降低。中醫(yī)認(rèn)為[9]，PCOS 病機(jī)主要為腎虛、瘀血阻致胞宮，兩者互為因果，形成腎虛血瘀癥，補(bǔ)腎化瘀是PCOS 的主要治療思路。本研究所用自擬補(bǔ)腎化瘀方中，菟絲子、山茱萸補(bǔ)腎益精為君藥，女貞子、墨旱蓮共用為臣藥，可養(yǎng)肝腎、益精血；丹參、赤芍、桃仁活血養(yǎng)血為佐藥，補(bǔ)益而不留瘀；川芎、紅花解郁通達(dá)、活血祛瘀，為使藥。諸藥合用精充血足、氣血暢通則經(jīng)自調(diào)，共奏補(bǔ)腎化瘀、活血調(diào)經(jīng)之功[10-11]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明[12-13]，菟絲子可以TNF-α 為靶點(diǎn)調(diào)控TNF-α/NF-κB，抑制PCOS 的炎癥反應(yīng)，從而治療PCOS；墨旱蓮具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫等功效，可通過(guò)對(duì)卵巢炎癥的抑制作用改善卵巢功能[14-15]；山茱萸的抗炎抑菌作用可有效改善PCOS 大鼠的胰島素抵抗，從而減輕炎癥及氧化應(yīng)激，降低血清TNF-α 水平，促進(jìn)卵巢功能的恢復(fù)[16]；丹參可通過(guò)對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞NF-κB 活化及TNF-α 表達(dá)的影響來(lái)調(diào)控炎癥反應(yīng)，且與NF-κB/IκBα 炎癥反應(yīng)通路之間存在量效時(shí)效關(guān)系[17-18]。上述研究提示自擬補(bǔ)腎祛瘀方可能是通過(guò)對(duì)TNF-α/NF-κB/IκBα 炎癥通路的調(diào)控來(lái)改善卵巢循環(huán)與病理狀態(tài)，達(dá)到治療目的。

3.2 自擬補(bǔ)腎祛瘀方對(duì)PCOS 大鼠TNF-α/NF-κB/IκBα 信號(hào)通路的調(diào)控作用

為探討自擬補(bǔ)腎祛瘀方治療PCOS 的機(jī)制，本研究檢測(cè)大鼠卵巢組織的TNF-α、NF-κB、IκBα表達(dá)，結(jié)果顯示模型組大鼠卵巢組織的TNF-α、NF-κB 蛋白表達(dá)，mRNA 表達(dá)，OD 值均高于對(duì)照組，IκBα 蛋白表達(dá)，mRNA 表達(dá)，OD 值均低于對(duì)照組。與模型組相比，西藥組和聯(lián)合組卵巢組織TNF-α、NF-κB 蛋白表達(dá)，mRNA 表達(dá)，OD 值均降低，其中聯(lián)合組更低，但仍高于對(duì)照組；與模型組相比，西藥組和聯(lián)合組卵巢組織IκBα 蛋白表達(dá)，mRNA 表達(dá)，OD 值均升高，其中聯(lián)合組更高，但仍低于對(duì)照組。上述結(jié)果表明自擬補(bǔ)腎化瘀方治療PCOS 可上調(diào)卵巢組織TNF-α、NF-κB 表達(dá)，下調(diào)IκBα 表達(dá)，PCOS 發(fā)病與NF-κB/IκBα 信號(hào)通路有關(guān)。國(guó)外研究表明[19]，細(xì)胞在正常生理情況下，NF-κB 與抑制蛋白IκBα 結(jié)合成無(wú)活性的三聚體并存在于細(xì)胞質(zhì)中；TNF-α 升高會(huì)刺激IκBα 磷酸化后與NF-κB 解離，使NF-κB 進(jìn)入細(xì)胞核并轉(zhuǎn)錄，誘發(fā)PCOS[20]。也有研究發(fā)現(xiàn)[21]，炎癥因子IκBα 是NF-κB/IκBα 信號(hào)通路的關(guān)鍵下游因子，抑制IκBα可阻斷該通路，改善PCOS。自擬補(bǔ)腎化瘀方可補(bǔ)益肝腎，活血化瘀，切中病機(jī)，并通過(guò)影響TNF-α調(diào)控的IκBα/NF-κB 信號(hào)通路來(lái)改善卵巢功能，且可對(duì)TNF-α、IκBα、NF-κB 多個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)，最終促進(jìn)性激素水平的恢復(fù)。本研究不足之處：PCOS 的發(fā)病過(guò)程復(fù)雜，自擬補(bǔ)腎祛瘀方治療PCOS可能不只對(duì)單一信號(hào)通路的調(diào)控發(fā)揮治療作用，其可能涉及的其他信號(hào)通路及靶點(diǎn)仍有待進(jìn)一步探究。

綜上所述，自擬補(bǔ)腎化瘀方治療PCOS 可有效促進(jìn)LH、FSH、T 等的恢復(fù)，且這一作用考慮與TNF-α 介導(dǎo)的NF-κB/IκBα 信號(hào)通路的調(diào)控有關(guān)。