二氫辣椒素不依賴誘導(dǎo)亞低溫對心臟驟停復(fù)蘇后腦損傷的防治作用及分子機(jī)制

鐘曉芃， 郭 義， 張?jiān)娢?/p>

近年來心臟驟停(cardiac arrest, CA)患者生存率顯著提高[1]。但這一部分患者多數(shù)遺留神經(jīng)系統(tǒng)不可逆損傷及后遺癥，造成巨大的社會及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[2]。因此，心肺功能恢復(fù)不是心臟驟?；颊邚?fù)蘇成功的唯一指標(biāo)，腦復(fù)蘇意義重大[3]。

二氫辣椒素(dihydrocapsaicin, DHC)是激活瞬時(shí)受體電位香草型1(transient receptor potential vanilla 1, TRPV1)受體的激動劑，包括筆者在內(nèi)的多項(xiàng)研究[4-5]證明它對心臟驟停后的缺血-再灌注腦損傷有保護(hù)作用，并認(rèn)為這種保護(hù)作用與誘導(dǎo)亞低溫有關(guān)，然而我們前期的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)這種保護(hù)作用并不完全依賴于誘導(dǎo)亞低溫，但是機(jī)制并不完全清楚。為了證實(shí)二氫辣椒素不依賴誘導(dǎo)亞低溫的腦保護(hù)作用及其分子機(jī)制，本研究設(shè)計(jì)了動物實(shí)驗(yàn)及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，揭示二氫辣椒素對心臟驟停復(fù)蘇后缺血再灌注腦損傷的保護(hù)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物 健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(年齡49～60天，體質(zhì)量222～373 g)18只，由中國科學(xué)院放射學(xué)研究所動物中心提供，隨機(jī)分配到三組：①假手術(shù)組(n=6)，只行氣管插管，不誘導(dǎo)心臟驟停和進(jìn)行心肺復(fù)蘇(CPR); ②復(fù)蘇組(n=6)，應(yīng)用氣管夾閉窒息法誘導(dǎo)心臟驟停后行常規(guī)CPR; ③辣椒素組(n=6)，在常規(guī)的CPR基礎(chǔ)上腹腔注射二氫辣椒素。本研究經(jīng)天津市人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物管理委員會批準(zhǔn)(編號：2021-SYDWLL-000175)。

1.2CPR SD大鼠造模前晚禁食不禁水，使用戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉。使用14號氣管插管經(jīng)口直視插入。左股動脈置入23號PE-50聚乙烯管，并使用SIEMENS Siredoc220多功能生理監(jiān)測儀(Germany)監(jiān)測心電圖、血壓及直腸溫度。手術(shù)完成后，待大鼠生理參數(shù)穩(wěn)定開始夾閉氣管插管，觀察大鼠呼吸、心搏和血壓，心搏停止以動脈收縮壓<20 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)作為心臟驟停標(biāo)準(zhǔn)。心臟驟停后開始進(jìn)行CPR，胸外按壓頻率為200次/min，同步機(jī)械通氣頻率為100次/min，以胸廓前后徑的1/3為按壓深度標(biāo)準(zhǔn)，吸入100%濃度氧。2 min后，靜脈注射腎上腺素0.025 mg/kg，CPR 10 min，如果出現(xiàn)室顫立即除顫，如心率血壓恢復(fù)[恢復(fù)室上性心律，平均動脈壓(MAP)>60 mm Hg，維持5 min以上]則停止按壓，10 min后未恢復(fù)心率血壓為復(fù)蘇失敗。復(fù)蘇成功后1 h拔除所有插管，蘇醒后放回籠中飼養(yǎng)，使用保溫設(shè)備維持大鼠肛溫在36.5 ℃左右。

1.3二氫辣椒素預(yù)處理 使用 1%DMSO溶解二氫辣椒素溶液，誘導(dǎo)心臟驟停前3 h腹腔注射0.2 mg/kg[6]。

1.4紙帶移除實(shí)驗(yàn)[7]在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的3 d前開始對大鼠進(jìn)行訓(xùn)練。在復(fù)蘇成功后72 h進(jìn)行紙帶移除實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)大鼠移除黏性膠帶的時(shí)間，以180 s為觀察終點(diǎn)，共統(tǒng)計(jì)3次取平均值。

1.5TUNEL法檢測大腦皮層細(xì)胞凋亡 72 h后以斷頭法處死大鼠，取大鼠腦組織固定、包埋、切片，進(jìn)行TUNEL檢測。

1.6免疫組化法檢測大腦皮層區(qū)TRPV1、PKA及 UCP-4表達(dá) 復(fù)蘇成功后72 h斷頭處死大鼠，取大腦皮層組織切片、固定，加入山羊血清封閉液孵育1 h，兔抗鼠TRPV1抗體1∶1000，4 ℃過夜。次日切片用0.01 mol/L PBS(pH 7.4)漂洗，加入山羊抗兔抗體(1∶100)，室溫孵育1 h，充分清洗之后使用熒光顯微鏡觀察攝片。

1.7Western blot檢測大腦皮層區(qū)TRPV1、PKA及UCP-4蛋白表達(dá) 大鼠大腦皮層組織冰浴勻漿，4 ℃進(jìn)行兩次離心(12 000 r/min， 30 min)，蛋白定量之后電泳，轉(zhuǎn)膜，封閉，加兔抗大鼠TRPV1、caspase-3及UCP-4單克隆抗體(1∶1000)，二抗為羊抗兔IgG，使用凝膠成像圖像系統(tǒng)進(jìn)行分析。

1.8腦組織活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)檢測 測定0.5 g大腦皮層組織，置1.5 mL EP管中，加入1 mL PBS，勻漿，離心10 min(4000 r/min)，取上清液，根據(jù)試劑盒說明進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.9細(xì)胞培養(yǎng)和分組 將生長情況良好的神經(jīng)瘤母細(xì)胞(SH-SY5Y)放置于細(xì)胞培養(yǎng)箱(37 ℃，濕度飽和適宜，95%空氣和5%CO2)中培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)基組成為1%雙抗、10%FBS和90%高糖DMEM。按照1∶3比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)，3 d后把細(xì)胞分為五組。①對照組：細(xì)胞正常培養(yǎng)。②糖氧剝奪/復(fù)氧復(fù)糖組(OGD/R組)：將無糖的D.Hank′s液放入乏氧培養(yǎng)箱(5%CO2/95%N2) 30 min，使氧濃度<1%。使用無糖D.Hank′s液將細(xì)胞清洗4次，最終使葡萄糖濃度<1 mmol/L。把細(xì)胞放入?yún)捬豕迌?nèi)，自開始換液時(shí)開始計(jì)時(shí)至6 h，棄除無糖D.Hank′s液，更換為完全培養(yǎng)液，放入CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育到24 h，用來模擬人體內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞缺血-再灌注過程。③辣椒素組: 無糖培養(yǎng)基缺氧培養(yǎng)6 h，用PBS清洗，最后加入含二氫辣椒素(10 μmol/L)的培養(yǎng)基復(fù)糖復(fù)氧培養(yǎng)24 h。④辣椒平(capsazepine， CPZ)組：先加入辣椒平(10 μmol/L)處理1 h，再換無糖培養(yǎng)基缺氧培養(yǎng)6 h，用PBS清洗，最后加入含二氫辣椒素的完全培養(yǎng)基復(fù)氧復(fù)糖繼續(xù)培養(yǎng)24 h。⑤H-89組：先加入PKA抑制劑H-89(100 μmol/L)處理1 h，再換無糖培養(yǎng)基缺氧培養(yǎng)6 h，用PBS清洗，最后加入含二氫辣椒素的完全培養(yǎng)基復(fù)氧復(fù)糖繼續(xù)培養(yǎng)24 h。

1.10Western blot檢測SH-SY5Y細(xì)胞相關(guān)蛋白 蛋白定量、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉，一抗為兔抗大鼠單克隆抗體(1∶1000)，羊抗兔IgG為二抗，顯色，凝膠成像圖像分析。對照為抗β肌動蛋白抗體(β-actin)。

1.11流式細(xì)胞學(xué)檢測SH-SY5Y細(xì)胞凋亡 將各組細(xì)胞收集到離心管內(nèi)，1200 r/min 5 min離心，去上清，加PBS重懸；用PBS將細(xì)胞潤洗2次，離心1200 r/min 5 min；流式細(xì)胞儀分析。

1.12流式細(xì)胞學(xué)檢測SH-SY5Y細(xì)胞ROS熒光強(qiáng)度 將各組細(xì)胞收集到離心管內(nèi)，用不含EDTA的0.25%胰酶消化細(xì)胞終止消化后收集，離心1200 r/min 5 min，去上清，加PBS重懸；將細(xì)胞潤洗2次，離心1200 r/min 5 min；流式細(xì)胞儀分析檢測細(xì)胞內(nèi)DCFH-DA與ROS結(jié)合的熒光強(qiáng)度。

1.13流式細(xì)胞學(xué)檢測SH-SY5Y細(xì)胞線粒體膜電位 將各組細(xì)胞收集，離心1200 r/min 5 min，棄上清，加入0.5 mL JC-1染色工作液，細(xì)胞培養(yǎng)箱中37 ℃孵育20 min；孵育結(jié)束時(shí)，離心5 min (1200 r/min)，細(xì)胞沉淀，棄上清液； 經(jīng)JC-1染色緩沖液(1×)洗滌2次，重懸之后經(jīng)流式細(xì)胞儀分析。

1.14流式細(xì)胞學(xué)檢測SH-SY5Y細(xì)胞線粒體內(nèi)鈣熒光強(qiáng)度 根據(jù)說明書使用細(xì)胞線粒體提取試劑盒提取線粒體。經(jīng)3次洗滌，用胰酶消化，6000 r/min離心5 min后收取細(xì)胞。加入臺盼藍(lán)染色液30 μL，在陽性比超過50%時(shí)停止勻漿。把細(xì)胞勻漿4 ℃，11 000 r/min離心10 min。沉淀即為分離得到的細(xì)胞線粒體，流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測，利用流式細(xì)胞儀測得Fluo-3與線粒體內(nèi)Ca2+結(jié)合的熒光強(qiáng)度。

2 結(jié)果

2.1紙帶移除實(shí)驗(yàn) 假手術(shù)組、復(fù)蘇組及辣椒素組大鼠紙帶移除時(shí)間分別為 (15±2)s、(143±31)s和(98±17)s，假手術(shù)組明顯少于復(fù)蘇組(P<0.0001)，辣椒素組明顯少于復(fù)蘇組(P<0.0046)。見圖1。

注：*P<0.05圖1 各組大鼠紙帶移除時(shí)間

2.2大腦皮層神經(jīng)元凋亡 盡管假手術(shù)組大鼠大腦皮層中有一些染色表明凋亡細(xì)胞，但辣椒素組和復(fù)蘇組的染色程度更高。假手術(shù)組、復(fù)蘇組和辣椒素組的染色積分光密度值(IOD值)反映了凋亡細(xì)胞的數(shù)量，分別為1755.21±64.11、2473.24±279.71和2010.31±95.31，假手術(shù)組明顯少于復(fù)蘇組(P<0.00001)，辣椒素組明顯少于復(fù)蘇組(P=0.001)。見圖2。

2.3大腦皮層PKA表達(dá)

在假手術(shù)組中觀察到PKA染色，但在辣椒素組中染色程度更高，染色的IOD值反映了PKA表達(dá)水平，假手術(shù)組、復(fù)蘇組和辣椒素組分別為1711.13±51.35、2012.24±75.54和2451.41±87.21，辣椒素組明顯高于復(fù)蘇組(P<0.001)。見圖2。

假手術(shù)組、復(fù)蘇組和辣椒素組相對PKA含量分別為0.435±0.021、0.413±0.032和0.631±0.041，辣椒素組明顯低于復(fù)蘇組(P<0.0004)，假手術(shù)組與復(fù)蘇組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0699)。見圖3。

2.4大腦皮層UCP-4表達(dá)

在假手術(shù)組中觀察到UCP-4染色，但在復(fù)蘇組和辣椒素組中染色程度更高，染色的IOD值反映了UCP-4表達(dá)水平，假手術(shù)組、復(fù)蘇組和辣椒素組分別為1538.13±59.82、2011.41±103.22和2421.24±209.76，假手術(shù)組明顯低于復(fù)蘇組(P<0.001)，復(fù)蘇組明顯低于辣椒素組(P=0.0004)。 見圖2。

假手術(shù)組、復(fù)蘇組和辣椒素組相對UCP-4含量分別為0.3960±0.0410、0.3351±0.0490和0.601±0.0870，假手術(shù)組與復(fù)蘇組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.4970)， 辣椒素組明顯高于復(fù)蘇組(P=0.0047)。見圖3。

2.5大腦皮層TRPV1表達(dá)

假手術(shù)組、復(fù)蘇組切片的TRPV1染色強(qiáng)度低，而辣椒素組切片的TRPV1染色強(qiáng)度高。反映TRPV1表達(dá)的染色I(xiàn)OD值在假手術(shù)組、復(fù)蘇組和辣椒素組中分別為1523.12±82.23、1587.77±77.24和2301.12±61.23，辣椒素組明顯高于復(fù)蘇組(P<0.0001)及假手術(shù)組(P<0.0001)。見圖2。

注：TRPV1為瞬時(shí)受體電位香草型1；*P<0.05圖2 各組大鼠大腦皮層神經(jīng)元凋亡及PKA、UCP-4、TRPV-1表達(dá)

注：TRPV1為瞬時(shí)受體電位香草型1；*P<0.05圖3 各組大鼠大腦皮層相對TRPV1、UCP-4、PKA含量

假手術(shù)組、復(fù)蘇組和辣椒素組相對TRPV1含量分別為0.440±0.038、0.478±0.049和0.801±0.043，辣椒素組明顯高于復(fù)蘇組(P=0.0002)及假手術(shù)組(P=0.0020)。見圖3。

2.6大腦皮層組織ROS 假手術(shù)組、復(fù)蘇組和辣椒素組ROS含量分別為(18.2±2.0)pg/mg、(47.6±2.7)pg/mg和(35.64±2.2)pg/mg，復(fù)蘇組明顯高于假手術(shù)組(P<0.0001)及辣椒素組(P<0.0001)。見圖4。

注：ROS為活性氧簇；*P<0.05圖4 各組大鼠大腦皮層組織ROS含量

2.7二氫辣椒素對OGD/R條件下SH-SY5Y細(xì)胞TRPV1、PKA的影響

Western blot結(jié)果顯示，對照組、OGD/R組、辣椒素組、辣椒平組及H89組相對PKA蛋白含量為0.671±0.021、0.235±0.034、0.540±0.042、0.354±0.013、0.337±0.025。與對照組比較，OGD/R組SH-SY5Y細(xì)胞PKA表達(dá)明顯降低(P<0.0001)；與OGD/R組比較，辣椒素組SH-SY5Y細(xì)胞PKA表達(dá)明顯升高(P<0.0001)；與辣椒素組比較，H89組、辣椒平組SH-SY5Y細(xì)胞PKA表達(dá)明顯降低(P=0.0025、0.0047)；H89組、辣椒平組相似(P>0.9901)。

對照組、OGD/R組、辣椒素組、辣椒平組及H89組相對TRPV1蛋白含量分別為0.157±0.011、0.164±0.033、0.592±0.039、0.312±0.024、0.361±0.031。與對照組比較，辣椒素組SH-SY5Y細(xì)胞TRPV1表達(dá)明顯升高(P<0.00001)；與OGD/R組比較，辣椒素組SH-SY5Y細(xì)胞TRPV1表達(dá)明顯升高(P<0.0001)；與辣椒素組比較，H89組、辣椒平組SH-SY5Y細(xì)胞TRPV1表達(dá)明顯降低(P=0.0004、0.0001)；H89組、辣椒平組相似(P>0.6371)。見圖5。

注：TRPV1為瞬時(shí)受體電位香草型1；OGD/R為糖氧剝奪/復(fù)氧復(fù)糖；*P<0.05圖5 各組大鼠SH-SY5Y細(xì)胞UCP-4、caspase-3、PKA、TRPV1表達(dá)

2.8二氫辣椒素通過激活TRPV1/PKA信號途徑對OGD/R條件下SH-SY5Y細(xì)胞UCP-4的影響 Western blot結(jié)果顯示，對照組、OGD/R組、辣椒素組、辣椒平組及H89組相對UCP-4表達(dá)分別為0.197±0.022、0.213±0.043、0.517±0.048、0.344±0.026、0.381±0.027。與對照組、OGD/R組比較，辣椒素組SH-SY5Y細(xì)胞UCP-4表達(dá)升高(P<0.0001)；與辣椒素組比較，H89組、辣椒平組SH-SY5Y細(xì)胞UCP-4表達(dá)明顯降低(P=0.0023、0.0003)；H89組、辣椒平組相似。與對照組(11.226±0.911)比較，其余各組JC-1探針紅綠色熒光強(qiáng)度比明顯減小，OGD/R組(0.988±0.002，P<0.001)，辣椒素組(5.104±0.001，P<0.001)，辣椒平組(2.034±0.011,P<0.001)，H89組(1.445±0.009,P<0.001)；與辣椒素組比較，OGD/R組、辣椒平組及H89組紅綠色熒光強(qiáng)度比明顯減小(P<0.001、=0.075、=0.021)。見圖6。

2.9二氫辣椒素通過激活TRPV1/PKA信號途徑抑制OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞線粒體Ca2+超載 流式細(xì)胞結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，其余四組線粒體內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，其中OGD/R組(P=0.0002),辣椒素組(P=0.0272),辣椒平組(P=0.0035),H89組(P=0.0153)；與辣椒素組比較，OGD/R組、辣椒平組及H89組線粒體內(nèi)鈣離子熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P=0.0082、0.0043、0.0010)。見圖6。

2.10二氫辣椒素通過激活TRPV1/PKA信號途徑抑制OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激因子產(chǎn)生 流式細(xì)胞結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組比較，OGD/R組ROS熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P<0.0001)；與OGD/R組比較，辣椒素組ROS熒光強(qiáng)度明顯減小(P<0.001)；與辣椒素組比較，辣椒平組、H89組ROS熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)(P<0.001、=0.001)。見圖6。

2.11二氫辣椒素通過激活TRPV1/PKA信號途徑抑制OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞caspase-3蛋白表達(dá) Western blot結(jié)果顯示，對照組、OGD/R組、辣椒素組、辣椒平組及H89組相對caspase-3表達(dá)分別為0.162±0.013、0.669±0.023、0.299±0.038、0.518±0.046、0.516±0.041。與辣椒素組比較，OGD/R組、H89組、辣椒平組SH-SY5Y細(xì)胞caspase-3表達(dá)明顯升高(P=0.0004、0.0199、0.0190)；與對照組比較，辣椒素組SH-SY5Y細(xì)胞caspase-3表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.182)。見圖5。

2.12二氫辣椒素通過激活TRPV1/PKA信號途徑抑制OGD/R誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡 流式細(xì)胞結(jié)果顯示，與對照組比較，OGD/R組SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率明顯升高(P=0.0102)；與辣椒素組比較，OGD/R組、辣椒平組、H89組SH-SY5Y細(xì)胞凋亡率明顯升高(P=0.0279、0.0271、0.0150)。見圖6。

注：OGD/R為糖氧剝奪/復(fù)氧復(fù)糖；ROS為活性氧簇；*P<0.05圖6 各組大鼠SH-SY5Y細(xì)胞凋亡、線粒體膜電位、ROS和鈣離子熒光強(qiáng)度

3 討論

Fosgerau等[8]研究發(fā)現(xiàn)，二氫辣椒素可以激活TRPV1受體引起實(shí)驗(yàn)動物的亞低溫。隨后的研究集中于二氫辣椒素誘導(dǎo)亞低溫治療心臟驟停復(fù)蘇后腦損傷[4-5]及缺血性中風(fēng)腦損傷[6,9-10]，這些研究者認(rèn)為這種保護(hù)作用是因?yàn)閬喌蜏氐淖饔谩６緦?shí)驗(yàn)使用加溫設(shè)備使各組實(shí)驗(yàn)動物保持相同的體溫，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)更是很好地消除了溫度的影響，而二氫辣椒素對心臟驟停、氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧的中樞神經(jīng)細(xì)胞均有保護(hù)作用，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

有研究顯示，神經(jīng)細(xì)胞在缺血-再灌注時(shí)，因?yàn)榻M織氧灌注恢復(fù)，引起激烈的線粒體氧化應(yīng)激反應(yīng)，線粒體ROS及活性氮簇(RNS)生成增加[11]。過度的線粒體氧化應(yīng)激將引起線粒體功能障礙，表現(xiàn)為線粒體膜電位降低，線粒體內(nèi)出現(xiàn)鈣超載[12-13]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，OGD/R可導(dǎo)致SH-SY5Y細(xì)胞線粒體內(nèi)鈣離子濃度增加，ROS生成增加，線粒體膜電位降低，給予二氫辣椒素預(yù)處理后，可減少OGD/R損傷下ROS的生成，提高線粒體膜電位，減少線粒體內(nèi)鈣離子濃度，提示二氫辣椒素可減輕OGD/R誘導(dǎo)的線粒體氧化應(yīng)激，保護(hù)線粒體功能。

已知大腦皮層和海馬都含有大量的UCP-4。UCP-4激活可以調(diào)節(jié)神經(jīng)元能量生成，達(dá)到神經(jīng)保護(hù)和腦細(xì)胞氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)的作用[14]。當(dāng)大腦神經(jīng)細(xì)胞處于氧化應(yīng)激時(shí)，UCP-4可通過降低ROS 生成而起到抗氧化作用，減少細(xì)胞凋亡[15-16]。二氫辣椒素預(yù)處理可使UCP-4過表達(dá)，caspase-3蛋白表達(dá)降低，SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡細(xì)胞數(shù)量減少，由此推測UCP-4可能也參與了缺血再灌注損傷導(dǎo)致的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，提高大鼠海馬組織cAMP含量，可以促進(jìn)PKA磷酸化，活化cAMP-PKA信號通路，從而保護(hù)海馬神經(jīng)元[17]；如果減低PKA蛋白磷酸化水平，會導(dǎo)致海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡[18-19]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，氧糖剝奪6 h再復(fù)氧復(fù)糖24 h后，SH-SY5Y細(xì)胞PKA表達(dá)和對照組比較有所降低，說明氧糖剝奪再復(fù)糖復(fù)氧可以抑制PKA表達(dá)；二氫辣椒素預(yù)處理后，PKA表達(dá)增加，且UCP-4表達(dá)增加，凋亡細(xì)胞減少；同時(shí)使用二氫辣椒素抑制劑辣椒平抑制TRPV1表達(dá)和應(yīng)用PKA抑制劑H89抑制PKA 表達(dá)，則 UCP-4表達(dá)降低，凋亡細(xì)胞增加。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，心臟驟停前3 h應(yīng)用二氫辣椒素預(yù)處理可改善心臟驟停后大鼠的神經(jīng)功能,同時(shí)TUNEL分析顯示，與對照組比較,二氫辣椒素預(yù)處理組實(shí)驗(yàn)動物大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞凋亡得到改善。進(jìn)一步的組織學(xué)檢查及Western檢查也證實(shí)了大腦皮層增加了PKA和UCP-4表達(dá),同時(shí)ROS含量減少,從而減少了缺血-再灌注的氧化應(yīng)激損傷。

綜上所述，二氫辣椒素激活TRPV1受體可通過cAMP/PKA信號通路，增加線粒體解偶聯(lián)蛋白表達(dá)，提高被缺血再灌注損傷降低的線粒體膜電位,減少ROS的產(chǎn)生,抑制凋亡因子釋放,從而減少缺血再灌注損傷導(dǎo)致的神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。