平喘顆粒薄層色譜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

馬春琳

平喘顆粒為醫(yī)院自制制劑，處方由蜜麻黃、杏仁、桔梗、甘草、葶藶子、細(xì)辛、地龍、石膏、五味子、枳殼、丹參、蜜枇杷葉12味中藥組成，具有清熱化痰，宣肺平喘功效。用于喘息性支氣管炎，支氣管哮喘急性發(fā)作，痰熱壅肺，肺失宣降等癥。該品種為醫(yī)院生產(chǎn)品種，共收集6個(gè)批次樣品，批號(hào)分別為150313、150314、150315、150316、150317、150318進(jìn)行測(cè)定，薄層色譜結(jié)果均達(dá)到一致，該品種選取蜜麻黃、枇杷葉、丹參的有效成分分別為麻黃堿、熊果酸、丹酚酸B，在藥典及相關(guān)文獻(xiàn)中均用薄層色譜法（TLC）進(jìn)行定性鑒別[1-13]，用于藥品質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

ZF-2型三用紫外分析儀；328A分析天平；PQ3120超聲波清理器；青島海浪硅膠干燥劑廠制造硅膠G板；鹽酸麻黃堿對(duì)照品（171241-201007）為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，熊果酸對(duì)照品（110742-201421）為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，丹酚酸B對(duì)照品（11562-201615）為中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。自制制劑供試品6批樣品；分別除去蜜麻黃、枇杷葉、丹參陰性對(duì)照樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 蜜麻黃的TLC鑒別

照TLC《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則0502試驗(yàn)。1）供試品溶液制備：取3批次本品各10 g，分別研細(xì)，加濃氨試液5 ml使?jié)駶?rùn)，加三氯甲烷20 ml，超聲處理15 min后，過濾并將濾液干燥。用1 ml甲醇將殘?jiān)芙?，制成供試品溶液。點(diǎn)樣量：5 μl。2）對(duì)照品溶液制備：精密稱取鹽酸麻黃堿對(duì)照品10 mg，加甲醇至10 ml，制成每毫升含有1 mg的溶液，用作對(duì)照品溶液。點(diǎn)樣量：5 μl。3）陰性對(duì)照溶液制備：將麻黃從處方中去除，方中剩余的11味藥，根據(jù)原處方用量比例制成缺少麻黃的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品12 g，制備方法同供試品溶液，制成陰性對(duì)照溶液[14-15]。點(diǎn)樣量：5 μl。

溫度：25 ℃；相對(duì)濕度：55%；薄層板：預(yù)制硅膠G薄層板，規(guī)格10×10 cm；展開劑：三氯甲烷-甲醇-濃氨（20∶5∶0.5）；展距：上行展開8 cm；顯色及檢視：取出晾干，5%茚三酮乙醇試液噴霧，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯示清晰顏色。

結(jié)果：平喘顆粒3個(gè)批次供試品色譜與鹽酸麻黃堿對(duì)照品顯示相同顏色的斑點(diǎn)，在色譜圖的相應(yīng)位置顯示一致，而陰性對(duì)照品在相應(yīng)位置沒有斑點(diǎn)。結(jié)果表明色譜圖中的斑點(diǎn)清晰，分離效果較好。見圖1。

圖1 蜜麻黃的薄層色譜

2.2 枇杷葉的TLC鑒別

照TLC《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則0502試驗(yàn)。1）供試品溶液的制備：取3批次本品各12 g，分別研細(xì)，加入50 ml甲醇，超聲處理20 min后，過濾并將濾液揮干，用5 ml甲醇將殘?jiān)芙猓瞥晒┰嚻啡芤簜溆?。點(diǎn)樣量：5 μl。2）對(duì)照溶液制備：取枇杷葉對(duì)照藥材1 g用相同方法制成對(duì)照藥材溶液。取熊果酸對(duì)照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液用作對(duì)照品溶液。點(diǎn)樣量：5 μl。3）陰性對(duì)照溶液制備：將枇杷葉從處方中去除，方中剩余的11味藥，根據(jù)原處方用量比例制成缺少枇杷葉的陰性對(duì)照樣品。取陰性對(duì)照樣品12 g，制備方法同供試品溶液，用作陰性對(duì)照溶液。點(diǎn)樣量：5 μl。

溫度：25 ℃；相對(duì)濕度：55%；薄層板：預(yù)制硅膠G薄層板，規(guī)格：10×10 cm；展開劑：甲苯-丙酮（5∶1）；展距：上行展開8 cm；顯色及檢視：晾干，10%硫酸乙醇溶液噴霧，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯示清晰顏色。

結(jié)果：平喘顆粒3個(gè)批次供試品色譜與熊果酸對(duì)照品及枇杷葉對(duì)照藥材溶液顯示相同顏色的斑點(diǎn)，在色譜圖的相應(yīng)位置顯示一致，而陰性對(duì)照品在相應(yīng)位置沒有斑點(diǎn)。結(jié)果表明色譜圖中的斑點(diǎn)清晰，分離效果較好。見圖2。

圖2 枇杷葉、熊果酸的薄層色譜

2.3 丹參的TLC鑒別

照TLC《中華人民共和國(guó)藥典》2020年版四部通則0502試驗(yàn)。1）供試品溶液的制備：取本品3 g，研細(xì)，加75%甲醇25 ml，加熱回流1 h，過濾，濾液濃縮至約1ml，制成供試品溶液。點(diǎn)樣量：5 μl。2）丹參對(duì)照藥材和對(duì)照品溶液的制備：用相同方法取丹參對(duì)照藥材同法制成對(duì)照藥材溶液；取丹酚酸B對(duì)照品10 mg，加75%甲醇制成每毫升含2 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。點(diǎn)樣量：5 μl。3）陰性對(duì)照溶液制備：從處方中去除丹參，將處方中剩余其他藥味，根據(jù)原處方用量比例制成缺少丹參的陰性對(duì)照樣品。取上述陰性對(duì)照樣品3 g，與供試品溶液的制備方法相同，制成陰性對(duì)照溶液。點(diǎn)樣量：5 μl。

溫度：25 ℃；相對(duì)濕度：55%；薄層板：預(yù)制硅膠GF254薄層板，規(guī)格：10×10 cm；展開劑：甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2∶3∶4∶0.5∶2）為展開劑；展距：上行展開8 cm；顯色及檢視：展開，取出，晾干，置日光或紫外線燈（254 nm）下檢視。

結(jié)果：平喘顆粒4個(gè)不同批次供試品檢品色譜斑點(diǎn)與丹酚酸B對(duì)照品及丹參對(duì)照藥材溶液顯示相同顏色的斑點(diǎn)，在色譜圖的相應(yīng)位置顯示一致，而陰性對(duì)照品在相應(yīng)位置沒有斑點(diǎn)。結(jié)果表明色譜圖中的斑點(diǎn)清晰，分離效果較好。見圖3。

圖3 丹酚酸B的薄層色譜

3 討論

TLC系將供試品溶液點(diǎn)于薄層板上，在展開容器內(nèi)用展開劑展開，使供試品所含成分分離。所得色譜圖與適宜的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)按同法所得的色譜對(duì)比[1]，亦可用薄層色譜掃描儀進(jìn)行掃描，用于鑒別檢查或含量測(cè)定。TLC經(jīng)制版，點(diǎn)樣，展開，檢出，操作方便簡(jiǎn)單，在醫(yī)藥工業(yè)中應(yīng)用廣泛。尤其在中草藥、中成藥的成分分析中，藥典及文獻(xiàn)均有大量記載，可作為藥物質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

平喘顆粒共12味中藥組成，方中麻黃為君藥。來源麻黃科麻黃屬植物草麻黃、中麻黃或木賊麻黃的干燥草質(zhì)莖。其性溫，味辛、微苦，歸肺經(jīng)、膀胱經(jīng)。《神農(nóng)本草經(jīng)》：“主中風(fēng)，傷寒頭痛，溫瘧，發(fā)表出汗，祛邪熱氣，止咳逆上氣，除寒熱”，具有發(fā)汗解表，宣肺平喘，利水消腫的作用。其發(fā)汗力峻猛，為治療外感風(fēng)寒感冒常用藥?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，其具有解熱發(fā)汗，平喘，鎮(zhèn)咳，抗炎，抗過敏，抗菌，抗病毒，利尿等作用。其發(fā)揮作用的主要有效成分為麻黃堿、偽麻黃堿和揮發(fā)油等，成分明確，療效確切。故列入該制劑控制標(biāo)準(zhǔn)[16]。枇杷葉來源薔薇科植物枇杷的干燥葉，產(chǎn)于浙江、廣東，性苦，微寒。歸肺胃經(jīng)，具有清肺止咳，降逆止嘔的功效，用于肺熱咳嗽，氣逆喘急，胃熱嘔逆，煩熱口渴，為治療肺熱咳喘要藥?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，其具有鎮(zhèn)咳，祛痰，平喘，抗炎的作用。其藥用價(jià)值獨(dú)特，在臨床上也普遍應(yīng)用，尤其在內(nèi)科肺病科常用。從該藥中分離出來的成分主要有三萜酸類、黃酮類、有機(jī)酸類、揮發(fā)油、皂苷類、多酚類等。其發(fā)揮主要藥理作用成分為三萜酸類化合物，以熊果酸和齊墩果酸含量較高，因此將熊果酸列入該制劑質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)[8]。丹參也是臨床一味應(yīng)用較多的藥物，來源于唇形科鼠松草屬丹參的干燥根及根莖，味苦，性微寒，歸心肝二經(jīng)，始載《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。主產(chǎn)于河北、山西、山東等地。具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰的功效，治療胸痹心痛，脘腹肋痛，癥瘕積聚，熱痹疼痛，心煩不眠，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)經(jīng)閉，瘡瘍腫痛等。其主要藥理作用為抗炎，抗腫瘤，抗氧化，免疫調(diào)節(jié)，對(duì)心血管系統(tǒng)疾病及糖尿病等均有效果，其主要成分為水溶性酚酸類和脂溶性的丹參酮化合物。在平喘顆粒中，丹參活血化瘀，能降低血黏稠度，并能降低氣道的高反應(yīng)性。諸藥合用能減輕患者的喘息、哮喘、咳嗽，咳痰等臨床癥狀，對(duì)肺功能有一定的改善作用。丹參中含有酚酸類成分，多是苯丙素類結(jié)構(gòu)縮合而成，具有良好的抗氧化活性，因此選取丹酚酸B進(jìn)行薄層色譜鑒別有效成分，并列為該制劑的標(biāo)準(zhǔn)[17]。

麻黃、枇杷葉、丹參3種藥物有效成分明確。供試品與對(duì)照品和對(duì)照藥材的色譜在色譜圖中顯示相同的斑點(diǎn)，且在相應(yīng)位置一致，而缺少該樣藥品的陰性對(duì)照無斑點(diǎn)，表明對(duì)結(jié)果沒有干擾。在平喘顆粒中3味藥物為主要藥物，方中君臣藥味，治療成分確定，臨床效果顯著，選取作為自制制劑質(zhì)量控制品種。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，均能達(dá)到色譜斑點(diǎn)清晰，辨識(shí)度高，試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的效果，因此其可作為平喘顆粒定性及質(zhì)量控制的依據(jù)。