高壓液相色譜法測(cè)定呋喃丹方法研究

王 靜，姚 靜，王海亞

（石家莊高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)區(qū)供水排水公司，河北 石家莊 050035）

呋喃丹是一種氨基甲酸酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑和殺線(xiàn)蟲(chóng)劑。純品為白色結(jié)晶，按中國(guó)農(nóng)藥毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，呋喃丹屬于高毒農(nóng)藥，不能用在蔬菜和果樹(shù)上。在《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB5749-2006）及《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB5749-2022）中呋喃丹均為毒理指標(biāo)。因此，準(zhǔn)確測(cè)定呋喃丹意義重大。

1 實(shí)驗(yàn)方法與驗(yàn)證參數(shù)

高壓液相色譜法，參數(shù)：線(xiàn)性方程、有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)等；對(duì)照《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750.9-2006）15.1對(duì)高壓液相色譜法進(jìn)行驗(yàn)證，參照該標(biāo)準(zhǔn)方法，建立線(xiàn)性方程，進(jìn)行準(zhǔn)確度（正確度、精密度、加標(biāo)回收率、標(biāo)準(zhǔn)樣品）、檢出限等參數(shù)驗(yàn)證。

2 標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)

《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750.9-2006）[1]15.1高壓液相色譜法；《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T 27417-2017）[2]；《環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)導(dǎo)則》（HJ168-2020）[3]；《化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控制要求》（GB/T 32465-2015）[4]。

3 采用方法學(xué)驗(yàn)證參數(shù)

驗(yàn)證方法：有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)、加標(biāo)回收率測(cè)定；

驗(yàn)證參數(shù)：檢出限、正確度。

4 方法原理

樣品經(jīng)過(guò)濾后注入反相HPLC柱中，其各種組分經(jīng)梯度洗脫色譜方式分離。經(jīng)過(guò)柱分離后，氨基甲酸酯類(lèi)化合物與氫氧化鈉發(fā)生水解反應(yīng)，生成的甲胺與鄰苯二醛（OPA）和2-巰基乙醇（MERC）反應(yīng)生成一種強(qiáng)熒光的異吲哚產(chǎn)物，可用熒光檢測(cè)器定量。柱后反應(yīng)一般對(duì)伯胺類(lèi)比較敏感，因?yàn)樗鼈兡苌蓽y(cè)定的熒光加合物。干擾的大小取決于它們的洗脫時(shí)間或熒光強(qiáng)度，干擾還可能來(lái)源于污染，因此，要求使用高純度試劑和溶劑[5]。

5 試劑和材料

柱后反應(yīng)產(chǎn)生干擾較大，干擾還可能來(lái)源于污染，因此，要求使用高純度的試劑和色譜純的或相當(dāng)?shù)娜軇ㄒ?HPLC 檢驗(yàn)無(wú)雜峰出現(xiàn)）。衍生劑、流動(dòng)相、上機(jī)樣品采用0.45 pm過(guò)濾膜過(guò)濾。

①甲醇：HPLC級(jí)；②純水：電阻大于18.0 MΩ；③水解試劑；④衍生試劑：OPA溶液。

6 儀器設(shè)備

液相色譜儀

7 測(cè)定條件

儀器的調(diào)整，見(jiàn)表1

表1 流動(dòng)相：梯度洗脫

流量：1.0 ml/min；

熒光檢測(cè)器Ex=339 nm；Em=445 nm；

柱后反應(yīng)條件：

A水解試劑：0.3 ml/min；

B銜生：OPA溶液，0.3 ml/min。

8 校準(zhǔn)

8.1 線(xiàn)性回歸方程及相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表1

參考《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750-2006）配制標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度范圍2.00～200.00 μg/L。

分別移取濃度為1.0 mg/l呋喃丹標(biāo)準(zhǔn)使用液20 μl，100 μl，400 μl，1.00 ml，2.00 ml溶于10 ml容量瓶中，用甲醇+水溶液定容（42+58）。則呋喃丹溶液的濃度分別為2.00 μg/L，10.00 μg/L，40.00 μg/L，100.00 μg/L，200.00 μg/L。見(jiàn)表2。

表2 呋喃丹的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

8.2 結(jié)論

通過(guò)以上檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果，可以計(jì)算得出方法的相關(guān)系數(shù)滿(mǎn)足《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750.9-2006）質(zhì)量控制要求；方法的線(xiàn)性范圍符合《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750.9-2006）質(zhì)量控制要求。

9 方法檢出限的測(cè)定

根據(jù)《環(huán)境檢測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制定技術(shù)導(dǎo)則》（HJ168-2020）相關(guān)要求，對(duì)空白中未檢出目標(biāo)物的樣品，按照樣品分析的全部步驟，對(duì)濃度值或含量為估計(jì)檢出限值的3～5倍的樣品進(jìn)行n次（n≥7）平行測(cè)定。計(jì)算n次平行測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)偏差，計(jì)算出方法檢出限。

方法檢出限測(cè)定：測(cè)定濃度為2.00 μg/L的樣品，7次測(cè)定結(jié)果分別為：2.83 μg/L，2.90 μg/L，3.03 μg/L，3.03 μg/L，3.14 μg/L，3.21 μg/L，3.25 μg/L。通過(guò)Dixon檢驗(yàn)法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)，未檢測(cè)出離群值。見(jiàn)表3。

表3 方法檢出限、測(cè)定下限的測(cè)試數(shù)據(jù)

檢出限和測(cè)定下限的確定

方法檢出限：MDL=t（n-1，0.95）*S=3.143*0.156 μg/L=0.49 μg/L

測(cè)定下限：0.49*4=1.96 μg/L

根據(jù)以上測(cè)定數(shù)據(jù)，結(jié)合本單位實(shí)際水樣測(cè)定情況，規(guī)定方法測(cè)定下限為2 μg/L，能夠滿(mǎn)足本實(shí)驗(yàn)室方法項(xiàng)目要求。

10 準(zhǔn)確度測(cè)定

10.1 精密度的驗(yàn)證

選取北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制標(biāo)準(zhǔn)系列，分別選取低、中、高三個(gè)不同濃度值進(jìn)行測(cè)定，每個(gè)濃度測(cè)定7次，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 精密度驗(yàn)證

通過(guò)以上檢測(cè)數(shù)據(jù)對(duì)精密度進(jìn)行評(píng)估，以上檢測(cè)數(shù)據(jù)結(jié)果符合《合格評(píng)定化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T 27417-2017）、《化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控制要求》（GB/T 32465-2015）相關(guān)要求。

10.2 正確度的驗(yàn)證

10.2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定

選用北京壇墨質(zhì)檢科技股份有限公司標(biāo)準(zhǔn)樣品，產(chǎn)品批號(hào)A2007096，標(biāo)準(zhǔn)值：83.8 μg/L，擴(kuò)展不確定度（K=2）：4.2 mg/L稀釋1000倍后標(biāo)準(zhǔn)值為83.8 μg/L，擴(kuò)展不確定度（K=2）：4.2 μg/L。見(jiàn)表5。

表5 標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定

從以上測(cè)定結(jié)果可知，質(zhì)控樣品的測(cè)定值在規(guī)定范圍內(nèi)，符合要求。

10.2.2 加標(biāo)回收率測(cè)定

對(duì)兩個(gè)樣品分別進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，低濃度原液和加標(biāo)后的樣品各測(cè)定7次，高濃度樣品原液和加標(biāo)后的樣品各測(cè)定10次，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 加標(biāo)回收率測(cè)定

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，加標(biāo)回收率測(cè)定結(jié)果滿(mǎn)足《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T 27417-2017）、《化學(xué)分析方法驗(yàn)證確認(rèn)和內(nèi)部質(zhì)量控制要求》（GB/T 32465-2015）要求。

總結(jié)：根據(jù)以上檢測(cè)數(shù)據(jù)可知方法相關(guān)系數(shù)r=0.999 96符合《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》（GB/T 5750.6-2006）質(zhì)量控制要求；精密度范圍2.8%～5.3%符合相關(guān)要求；標(biāo)準(zhǔn)樣品滿(mǎn)足要求；加標(biāo)回收率為98.3%～100%，滿(mǎn)足《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》（GB/T 27417-2017）要求，所有測(cè)定參數(shù)均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。本實(shí)驗(yàn)室有能力正確使用該方法。