不同保鮮方法對枸杞抗壞血酸過氧化物基因表達(dá)和植物激素含量的影響

方婕，羅毅皓，孫萬成

（青海大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院，青海西寧 810000）

枸杞（Lycium chinense），茄科枸杞屬，果實(shí)呈紡錘形或卵形，果肉柔潤香甜，是我國泡茶、釀酒的理想原料之一，具有清熱明目、補(bǔ)虛益精、護(hù)腎補(bǔ)血等藥理作用[1]。枸杞廣泛分布于我國、朝鮮及日本等地，中華枸杞和寧夏枸杞是我國的主要分布品種，寧夏枸杞主要生長在我國的西北部地區(qū)[2]。枸杞鮮果富含甜菜堿、枸杞多糖、類胡蘿卜素、維生素等營養(yǎng)活性物質(zhì)[3]，目前有研究表明，枸杞多糖具有提高免疫力、延緩衰老、減輕疲勞的作用[4]。青海省紅枸杞品質(zhì)上等，籽少肉厚，研究表明，柴達(dá)木紅枸杞富含大量的維生素和18種人體必需氨基酸，有機(jī)硒、硒和鋅濃度也是相對較高的，這有助于促進(jìn)人類健康和智力的發(fā)展[5]。

枸杞屬于呼吸非躍變型果實(shí)，采后的鮮果帶有大量的田間熱，呼吸作用十分旺盛，使果實(shí)內(nèi)物質(zhì)消耗較快，細(xì)胞膜在衰老進(jìn)程中會遭到破壞，從而導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)變化，極易腐爛變質(zhì)[6]。枸杞成熟后，體內(nèi)會產(chǎn)生大量的乙烯，這些成分在枸杞收獲后會大量釋放出來，乙烯的存在會加快枸杞的呼吸消耗速率，促進(jìn)枸杞的進(jìn)一步衰老和死亡，提高枸杞的腐爛速率[7]。目前枸杞的保鮮方法主要有低溫貯藏、氣調(diào)冷藏、化學(xué)試劑保鮮及生物酶活性保藏。

殼聚糖涂層能夠保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的完整性，減緩褐色色素的形成[8]。馮美等[9]研究表明，外源一氧化氮處理可有效降低果實(shí)失重率和果實(shí)腐爛指數(shù)，延緩果實(shí)可溶性固形物含量的下降，抑制乙烯的產(chǎn)生和呼吸速率，提高超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（POD）的活性。王瑞慶等[10]研究表明CF保鮮劑（主要成分：0.05 g/L水楊酸、4 g/L氯化鈣、1 g/L抗壞血酸、1 g/L檸檬酸）處理可以降低枸杞果實(shí)的腐爛率，提高固/酸比和香氣等其他感官品質(zhì)，但其加速了可溶性固形物和可滴定酸含量的減少，對色澤、果皮狀況、含液量和質(zhì)地?zé)o明顯影響。

目前，國內(nèi)關(guān)于不同處理對新鮮枸杞保鮮效果及其對關(guān)鍵基因表達(dá)影響的研究鮮有報(bào)道。本文以新鮮紅枸杞為研究對象，通過不同保鮮處理比較分析保鮮的效果，確定一種較好的保鮮方法，同時研究不同處理對抗壞血酸過氧化物酶（APX）基因表達(dá)的影響，為形成有效并綠色環(huán)保的枸杞保鮮工藝提供技術(shù)支持。抗壞血酸過氧化物酶是一種很好的活性氧清除劑，是清除H2O2的關(guān)鍵酶，參與植物生長發(fā)育和多種逆境脅迫的響應(yīng)過程。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

柴達(dá)木紅枸杞；cDNA第一鏈合成試劑盒、SYBR Green Master Mix、枸杞Lcactin引物、枸杞LcAPX引物、TRIzol（細(xì)胞裂解液），生工生物工程（上海）股份有限公司；愈創(chuàng)木酚、鄰苯二酚，上海麥克林生化科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

熒光定量儀（CFX96）、凝膠成像系統(tǒng)（Gel Doc XR），美國BIO-RAD公司；梯度PCR儀（System 9700），美國ABI公司；核酸電泳儀（JY600），北京君意東方電泳儀設(shè)備有限公司；全波長紫外分光光度計(jì)（UV-1780），日本SHIMADZU公司；多管渦旋振蕩器（MIX-200）上海凈信。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理

將采購的新鮮枸杞在10 ℃預(yù)冷30 min。

1.3.2 保鮮處理

酒精保鮮處理：將處理后的枸杞樣品置于經(jīng)過體積分?jǐn)?shù)75%酒精擦拭過的保鮮盒中，用體積分?jǐn)?shù)75%酒精分別噴灑枸杞表面形成一層保護(hù)膜，噴灑比例分別為枸杞重量的1%、2%和3%，將保鮮盒分別置于室溫和4 ℃冰箱中冷藏。殼聚糖保鮮處理：將不同脫乙酰度的殼聚糖用1.0 mol/L乙酸溶解后加氫氧化鈉調(diào)pH值至5.4，加水調(diào)配成質(zhì)量濃度為1.0 g/L、1.5 g/L和2.0 g/L的溶液，將果實(shí)分別在9種殼聚糖溶液中浸泡處理3 min，室溫下自然干燥成膜，每個脫乙酰度每個濃度處理2盒，用保鮮盒包裝；分別置于室溫和4 ℃冰箱中冷藏。

乳酸保鮮處理：將乳酸加水配成體積分?jǐn)?shù)為3%、4%和5%的溶液，將果實(shí)分別在3種乳酸溶液中浸泡處理3 min，處理完將枸杞自然干燥成膜，每個濃度處理2盒，用保鮮盒包裝；分別置于室溫和4 ℃冰箱中冷藏。

氣調(diào)保鮮：隨機(jī)選取果肉致密的枸杞20 g左右放入PE塑料袋中，50%氮?dú)夂?0%空氣充氣，同時設(shè)置一組空白實(shí)驗(yàn)；將包裝好的枸杞鮮果在4 ℃冰箱中保存15 d，每組每5 d采樣一次。采樣后，將樣品分為兩部分：一部分用于測定APX基因的相對表達(dá)量，標(biāo)記后放入-80 ℃冰箱保存，以確保遺傳物質(zhì)不受影響；另一部分用于測定酶活性，并在-20 ℃冰箱保存。

1.3.3 感官評定

枸杞鮮果感官評價指標(biāo)及評分見表1。

表1 感官分析評定標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Standard for sensory quality evaluation

1.3.4 過氧化氫酶（PPO）活性測定

采用鄰苯二酚法[11]測定。稱量約5 g的果實(shí)放入研缽中（事先預(yù)冷），然后加入5 mL PBS緩沖液（0.05 mol/L pH 5.5）研磨，4 ℃離心15 min（1 000 r/min）得到酶的粗提物。依次加入1.5 mL PBS緩沖液和0.5 mL鄰苯二酚溶液（0.1 mol/L），35 ℃水浴保溫20 min，然后加入0.5 mL酶液，立即開始測定。在420 nm波長下每30 s測量吸光度變化，總測定時間為3 min。重復(fù)測量2次，用PBS緩沖液調(diào)零。

1.3.5 多酚氧化酶（POD）活性測定

采用愈創(chuàng)木酚法[12]測定。稱量約5 g果實(shí)置于事先預(yù)冷的研缽中，然后加入5 mL PBS緩沖液（0.05 mol/L pH 5.5）研磨，4 ℃離心15 min（1 000 r/min）得到酶的粗提物。依次加入2.9 mL磷酸緩沖液、1.0 mL過氧化氫溶液（2%）、1.0 mL愈創(chuàng)木酚溶液（0.05 mol/L）、0.5 mL酶液。溶液在35 ℃水浴中保溫20 min，迅速冷卻，在470 nm波長下每30 s測量吸光度值的變化，總反應(yīng)時間為3 min，重復(fù)測定2次，用PBS緩沖液置零。

1.3.6 抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性測定

稱取5 g果實(shí)，置于事先預(yù)冷的研缽中，加入5 mL預(yù)冷的PBS緩沖液（pH值7.5 0.1 mol/L），充分研磨，4 ℃離心15 min（1 000 r/min），得到酶的粗提取物。依次加入2.6 mL反應(yīng)緩沖液（含2.9 mg EDTA和8.8 mg抗壞血酸，等體積pH 7.5緩沖液至100 mL）和0.1 mL酶提取物，加入0.3 mL過氧化氫溶液（2 mol/L）開始測定。在290 nm處測量吸光度值的變化。

1.3.7LcAPX基因相對表達(dá)水平的測定

枸杞總RNA的提取及cDNA的合成 采用TRIzol提取液提取每組樣品的總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA并進(jìn)行電泳檢測。

QRT-PCR引物設(shè)計(jì)及反應(yīng)條件的優(yōu)化：引物設(shè)計(jì)：根據(jù)枸杞LcAPX基因，由生工生物工程（上海）股份有限公司合成，用于QRT-PCR。

LcAPX引物：上游序列5’-3’AGGGCTTCTACA GTTGCCATCAG，下游序列5’-3’GTGAGCCTCAGCA TAGTCAGCAA；內(nèi)參引物：上游序列5’-3’CCATCTA CGAGGAGGGTTACGCTTTG，下游序列5’-3’AGTC AAGAGCCACATAGGCAAGC。用上述內(nèi)參引物及枸杞LcAPX引物進(jìn)行QRT-PCR。采用相對定量法，以0 d未處理的鮮樣為對照。

反應(yīng)體系：2X SYBR Green Master Mix 10 μL，上、下游引物各0.8 μL，cDNA模板2 μL，ddH2O補(bǔ)足至20 μL。

QRT-PCR反應(yīng)程序：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，58 ℃復(fù)性30 s，39個循環(huán)。融解曲線的程序：95 ℃變性10 s；65 ℃復(fù)性5 s，40 ℃冷卻30 s，重復(fù)3次，記錄CT值。其中，CT值定義為：每個反應(yīng)中的熒光信號達(dá)到閾值所需要的循環(huán)數(shù)。結(jié)果取算術(shù)平均值。

1.3.8 植物激素測定

取出超低溫保存的枸杞樣本，用研磨儀研磨（30 Hz，1 min）至粉末狀；取50 mg研磨后的樣本，加入適量內(nèi)標(biāo)，用1 mL甲醇/水/甲酸（15:4:1，V/V/V）進(jìn)行提??；提取液濃縮后用100 μL 80%甲醇/水溶液復(fù)溶，過0.22 μm濾膜，置于進(jìn)樣瓶中，用于LC-MS/MS分析。

色譜質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集條系統(tǒng)主要包括超高效液相色譜（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）（ExionLC? AD）和串聯(lián)質(zhì)譜（Tandem Mass Spectrometry，MS/MS）（QTRAP? 6500+）。

液相條件主要包括：色譜柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C18柱（1.8 μm，100 mm×2.1 mm i.d.）；流動相：A相，超純水（加入0.04%的乙酸）；B相，乙腈（加入0.04%的乙酸）；梯度洗脫程序：0 min A/B為95:5（V/V），1.0 min A/B為95:5（V/V），8.0 min為5:95（V/V），9.0 min為5:95（V/V），9.1 min為95:5（V/V），12.0 min為95:5（V/V）；流量0.35 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣量2 μL。

質(zhì)譜條件主要包括：電噴霧離子源（Electrospray Ionization，ESI）溫度550 ℃，正離子模式下質(zhì)譜電壓5 500 V，負(fù)離子模式下質(zhì)譜電壓-4 500 V，氣簾氣（Curtain Gas，CUR）35 psi。在Q-Trap 6500+中，每個離子對是根據(jù)優(yōu)化的去簇電壓（declustering potential，DP）和碰撞能（collision energy，CE）進(jìn)行掃描檢測。

1.3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均進(jìn)行方差的分析，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD）的形式表示。所使用的分析軟件為SPSS 18.0。作圖所使用軟件為Origin 9.0。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同處理方式下貯存10 d枸杞鮮果感官品質(zhì)評分

不同處理方式對枸杞鮮果感官品質(zhì)評分的影響見圖1。如圖1所示，氣調(diào)處理可以顯著改善貯存枸杞的感官品質(zhì)，乙醇噴灑處理后腐敗較為嚴(yán)重，失去了枸杞固有的香味。氣調(diào)處理效果較好，除在液汁方面與對照組無差異（p＞0.05），其余結(jié)果均優(yōu)于對照組（p＜0.05）。葛玉萍等[7]用30、50、70 μm 3種厚度的保鮮膜密封包裝新鮮枸杞，在4 ℃下進(jìn)行保鮮試驗(yàn)，結(jié)果表明，50 μm保鮮膜保鮮效果最好，但試驗(yàn)未設(shè)置對照，因此，氣調(diào)包裝作用效果并不明確。李穎超等[13]用塑料薄膜單層覆蓋包裹枸杞，分別在25 ℃和0 ℃下進(jìn)行貯藏，薄膜包裝果實(shí)的腐爛率均明顯高于對照，可能由于包裝未處于密封狀態(tài)，包裝內(nèi)未形成氣調(diào)環(huán)境，而包裝內(nèi)部濕度相對較高，果實(shí)表面的病原物更易萌發(fā)、生長和繁殖所致。

圖1 不同處理方式下枸杞鮮果感官品質(zhì)評分Fig.1 Sensory quality score of fresh fruit of Lycium chinense under different treatments

2.2 不同處理方式下枸杞鮮果過氧化氫酶（POD）活性變化情況

不同處理方式下枸杞鮮果過氧化氫酶（POD）活性的影響見圖2。

過氧化氫酶有過氧化氫的存在下，可以將酚類物質(zhì)氧化為醌類物質(zhì)，進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為褐色化合物，導(dǎo)致植物中大量的酶促褐變[13]。由圖2可知，隨著貯藏時間的延長，POD活性一直呈上升趨勢，經(jīng)過處理的枸杞鮮果POD酶活性上升較未處理的枸杞鮮果上升較慢，貯藏第5天后，處理與對照間的差異逐漸明顯，第10天時，氣調(diào)處理者的POD活性較同期對照低8.2 U/g FW，貯藏15 d時，處理果實(shí)的POD酶活性仍低于對照（p＜0.05），這表明經(jīng)處理后特別是氣調(diào)處理可有效降低POD酶活性，從而減緩枸杞鮮果的酶促褐變。侯田瑩等[14]研究發(fā)現(xiàn)POD活力的增加表明果蔬進(jìn)入衰老階段，新鮮度下降，褐變增加。因此，抑制或者延緩POD活性的增加能延長貯藏時間，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究，氣調(diào)處理對于抑制枸杞組織POD活力有效果。

圖2 不同處理方式下枸杞鮮果過氧化氫酶（POD）活性變化情況Fig.2 Changes of peralase (POD) activity in fresh fruits of Lycium chinense under different treatments

2.3 不同處理方式下枸杞鮮果多酚氧化酶（PPO）活性變化情況

不同處理方式下枸杞鮮果多酚氧化酶（PPO）活性的變化見圖3。

圖3 不同處理方式下枸杞鮮果多酚氧化酶（PPO）活性變化情況Fig.3 Changes of polyphenol oxidase (PPO) activity in fresh fruits of Lycium chinense under different treatments

從圖3中可以看出，隨著貯藏天數(shù)的增加，PPO酶活性逐漸增加，其中氣調(diào)處理和殼聚糖處理在0～5 d內(nèi)增幅較為平緩，相比未經(jīng)處理的枸杞鮮果，其多酚氧化酶活性始終高于經(jīng)過處理的枸杞鮮果（p＜0.05），這表明，經(jīng)處理后可一定程度上抑制酚類物質(zhì)轉(zhuǎn)變形成醌類物質(zhì)，從而減緩枸杞鮮果的酶促褐變。趙建華等[15]在研究采后枸杞鮮果褐變與活性氧代謝中發(fā)現(xiàn)：在枸杞果實(shí)貯藏5～20 d內(nèi)，4 ℃下果實(shí)總酚含量高于10 ℃，PPO活性隨時間呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢。這就說明在枸杞果實(shí)貯藏前期伴隨著PPO活性降低果實(shí)體內(nèi)的總酚含量隨之而增大，但隨著貯藏時間延續(xù)果實(shí)體內(nèi)抗氧化能力不斷下降，膜脂氧化作用加重總酚含量不再隨PPO活性降低或增大而變化卻呈現(xiàn)出下降的趨勢。侯田瑩等[14]研究枸杞頭生理特性變化中發(fā)現(xiàn)枸杞頭組織中PPO活性很弱，幾乎檢測不到，這與大多數(shù)果蔬含有較高PPO活性的結(jié)果不同，推測不同類型、品種的蔬菜間PPO的活性作用存在差別。本試驗(yàn)中PPO活性一直呈上升趨勢，推測可能是保鮮處理對枸杞PPO活性變化產(chǎn)生影響。

2.4 不同處理方式下枸杞鮮果抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性變化情況

不同處理方式下枸杞鮮果抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性的變化見圖4。

圖4 不同處理方式下枸杞鮮果抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性變化情況Fig.4 Changes of ascorbate peroxidase (APX) activity in fresh fruits of Lycium chinense under different treatments

由圖4可知，在貯藏過程中，抗壞血酸過氧化物酶活性先升高后降低，在第5 d時空白組的APX活性達(dá)到了0.188 U/g FW，氣調(diào)處理組的APX活性僅為0.124 U/g FW，在5～15 d內(nèi)，空白組的APX活性仍高于處理組（p＜0.05）。這說明枸杞鮮果經(jīng)過處理后會減輕受到的CO2傷害，從而降低組織細(xì)胞收到過氧化氫的傷害。魏增宇[16]研究發(fā)現(xiàn)鮮切蘋果抗壞血酸過氧化物酶活性呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢這表明鮮切蘋果受到二氧化碳的傷害是一個不斷累積的過程隨著鮮切蘋果受到的二氧化碳傷害的不斷增加抗壞血酸過氧化物酶不斷降低機(jī)體受到的傷害進(jìn)一步加劇。本試驗(yàn)中枸杞抗壞血酸過氧化物酶活性同樣呈現(xiàn)先增加后降低的趨勢，這與魏增宇研究結(jié)果相一致。

2.5 不同處理方式下枸杞鮮果抗壞血酸過氧化物酶基因（LcAPX）表達(dá)量變化

2.5.1 總RNA的提取和cDNA的合成結(jié)果cDNA電泳結(jié)果

總RNA的提取和cDNA的合成結(jié)果見圖5。

提取后的RNA經(jīng)檢測后，其A260/A280值在1.8～2.2之間，表明純度符合要求，其A260/A230值大于1.6，表明質(zhì)量符合規(guī)定，無鹽類干擾，可以用于反轉(zhuǎn)錄cDNA。從圖可以看出，樣品內(nèi)參基因actin和基因LcAPX[17]（即后續(xù)qRT-PCR的引物）常規(guī)PCR電泳檢測成功擴(kuò)增出約1 500 bp和2 000 bp的目的條帶，可用于后續(xù)qRT-PCR實(shí)驗(yàn)。

圖5 樣品cDNA電泳圖Fig.5 cDNA electrophoresis of the sample

圖6 不同處理方式下枸杞鮮果抗壞血酸過氧化物酶（LcAPX）表達(dá)量變化比較Fig.6 Comparison of ascorbate peroxidase (LcAPX ) expressionlevel in fresh fruits of Lycium chinense under different treatments (n=5, ±s)

不同處理方式下枸杞鮮果抗壞血酸過氧化物酶（LcAPX）表達(dá)量變化見圖6。

由圖6可知，第2、5、10、15天，4種包裝的枸杞LcAPX基因相對表達(dá)水平，隨著貯存天數(shù)的增加，曲線先上升后下降。以空白組為對照，設(shè)LcAPX表達(dá)量為1，各處理后LcAPX表達(dá)量均低于1，說明各處理可抑制LcAPX基因的表達(dá)，其中貯藏5 d時乙醇處理在處理組中表達(dá)水平最高，相對表達(dá)量達(dá)到了0.81，乳酸處理、殼聚糖處理及氣調(diào)處理的相對表達(dá)量分別為0.71、0.68和0.59。第15天時，處理組LcAPX表達(dá)量水平降低幅度較大，其中氣調(diào)處理的相對表達(dá)量達(dá)到了0.379，各處理組LcAPX表達(dá)量均顯著低于對照組（p＜0.05）。

2.6 貯存10 d后枸杞關(guān)鍵激素含量

貯存10 d后枸杞鮮果關(guān)鍵激素含量對比見表2。

表2 貯存10 d后與空白對照組含量對比Table 2 The expression levels were compared with blank control group and the group after storage for 10 days

由表9可見，貯存10 d后，與對照組相比較，枸杞鮮果乙烯（ETH）類包括1-氨基環(huán)丙烷羧酸（ACC），赤霉素（GA）類包括赤霉素1（GA1）含量有所下降，生長素（auxin）類包括吲哚-3-乙腈（IAN）、吲哚乙酸-色氨酸（IAA-Trp）、吲哚-3-甲酸（ICA）、吲哚-3-乙酸（IAA）、吲哚-3-甲醛（ICAld）、吲哚-3-乙酸甲酯（MEIAA），脫落酸（ABA）和茉莉酸（JA）包括12-氧-植物-二烯酸（OPDA）、氧化戊烯基環(huán)戊烷己酸（OPC-6）、茉莉酸-異亮氨酸（JA-ILE）含量均較空白對照組上升（p＜0.05），細(xì)胞分裂素（CK）類包括順式玉米核苷-O-糖苷（cZROG）、2-甲硫基順式玉米素核苷（2MeScZR）、異戊烯腺嘌呤核苷（IPR）含量上升，二氫玉米素（DZ）、異戊烯腺嘌呤（IP）含量下降（p＜0.05），水楊酸（SA）含量上升，水楊酸-2-O-β-葡萄糖苷（SAG）含量下降（p＜0.05）。

生長素（Auxin）具有促進(jìn)植物器官伸長的作用，可以減少植物蒸騰作用的水分損失[18]，有研究表明，生長素在果實(shí)采收時含量達(dá)到高峰，試驗(yàn)結(jié)果表明，枸杞果實(shí)在貯存后生長素含量上升且變化量明顯，推測是果實(shí)在貯存后熟過程中分泌了大量生長素來減少果實(shí)水分的蒸騰。

赤霉素（GA）可以促進(jìn)果實(shí)發(fā)育[18]，脫落酸（ABA）能夠抑制細(xì)胞分裂，促進(jìn)果實(shí)衰老和脫落。有研究表明GA和ABA在調(diào)節(jié)植物發(fā)育過程中呈現(xiàn)出拮抗的關(guān)系，GA促進(jìn)生長，然而ABA促進(jìn)衰老[19]。試驗(yàn)結(jié)果顯示貯存后的枸杞果實(shí)GA含量下降，ABA含量上升，枸杞采收后已經(jīng)開始步入后熟和衰老，GA分泌量必定降低，ABA含量的上升可以促進(jìn)果實(shí)的衰老。

乙烯（ETH）有促進(jìn)果實(shí)成熟，促進(jìn)器官脫落和衰老的作用[20]，這與脫落酸的作用相似；有研究表明當(dāng)果實(shí)進(jìn)入衰老期后，ABA含量才會出現(xiàn)上升，并且在后熟衰老的過程中，ABA含量高于乙烯[21]。與乙烯相比，ABA具有促進(jìn)果實(shí)成熟和衰老的“優(yōu)先”效應(yīng)，乙烯則為輔助因子。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ABA含量上升而ETH含量下降，推測可能是ABA含量高峰還未出現(xiàn)，此時乙烯仍作為一種輔助因子存在，隨著貯存時間的延長，乙烯含量可能會逐漸升高。龐發(fā)虎等[22]研究表明果實(shí)硬度隨乙烯釋放量的增加而下降，果實(shí)呼吸強(qiáng)度隨ABA釋放量的增加而下降。曹永慶等[23]研究表明當(dāng)果實(shí)進(jìn)入衰老期后，ABA含量才會出現(xiàn)上升，并且在后熟衰老的過程中，ABA含量高于乙烯；與乙烯相比，ABA具有促進(jìn)果實(shí)成熟和衰老的“優(yōu)先”效應(yīng)，乙烯則為輔助因子。

采用Western blot檢測轉(zhuǎn)染48 h后各組AGS細(xì)胞蛋白表達(dá)水平變化，如圖4所示。與NC組比較，SI組CDK6、cyclinD1蛋白的表達(dá)水平均明顯下降，而p21蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.01);C組與NC組CDK6、cyclinD1及p21蛋白表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

茉莉酸（JA）具有按捺成長，促進(jìn)衰老的作用，試驗(yàn)結(jié)果顯示，貯存后的枸杞果實(shí)JA含量上升，表明JA分泌量的增加促進(jìn)了枸杞的后熟和衰老。

細(xì)胞分裂素（CK）能促進(jìn)細(xì)胞分裂，主要分布在細(xì)胞分裂最活躍的部位，試驗(yàn)結(jié)果顯示CK部分含量上升，部分含量下降，推測這與果實(shí)的細(xì)胞分裂部位有關(guān)。

植物被病原微生物侵染后，水楊酸（SA）可以誘導(dǎo)相關(guān)蛋白的合成，增強(qiáng)植物對病害的抵抗力[24]，試驗(yàn)結(jié)果顯示SA部分含量上升，部分含量下降，推測這與枸杞受到微生物感染有關(guān)。有關(guān)CK和SA含量變化的結(jié)果有待進(jìn)一步研究。

3 結(jié)論

對枸杞鮮果表面進(jìn)行乙醇噴灑、乳酸涂膜、殼聚糖涂膜處理和氣調(diào)保鮮，發(fā)現(xiàn)其能提升保鮮效果，延長貯存時間。并在一定程度上影響了枸杞成熟至腐敗過程中關(guān)鍵基因的相關(guān)表達(dá)，但這可能與處理方法與貯藏環(huán)境有關(guān)，因此還需要進(jìn)一步探究其機(jī)理。