亞麻籽油對多囊卵巢綜合征大鼠炎癥細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用

汪婷，李一唯，柳媛媛，禹文文，胡富寧，羅曉靜，魯奕男，張曉霞*，王浩,5*

（1.寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，寧夏銀川 750004）（2.寧夏醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，寧夏銀川 750004）（3.寧夏醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院，寧夏銀川 750004）（4.寧夏醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，寧夏銀川 750004）（5.寧夏常見傳染病防治重點實驗室，寧夏銀川 750004）

多囊卵巢綜合征（Polycystic Ovary Syndrome，PCOS）是育齡期女性常見的內(nèi)分泌紊亂疾病[1]。依據(jù)鹿特丹診斷標(biāo)準(zhǔn)，我國漢族育齡期女性患病率約為5.6%[2,3]，患者主要表現(xiàn)為高雄激素血癥、卵巢多囊性改變和排卵障礙[4]。如果不及時治療，還會增加患糖尿病、心血管疾病等慢性代謝性疾病的風(fēng)險[5]。然而，PCOS發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，確切發(fā)病機(jī)制尚不清楚，二甲雙胍等常用藥物在治療PCOS的同時往往伴隨一定的胃腸道反應(yīng)和肝、腎損傷[6]。因此，尋找更加安全有效的治療方案至關(guān)重要。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，在飲食中添加益生元Omega-3多不飽和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acids，PUFAs）有助于改善PCOS患者內(nèi)分泌紊亂[4,7]，提示Omega-3 PUFAs對PCOS具有潛在益處。亞麻籽油（Flaxseed Oil，F(xiàn)O）是omega-3α-亞麻酸（α-linolenic Acid，ALA）最主要的植物來源，具有降血壓、降血脂、抗炎等多種功效，被譽(yù)為“液體黃金”[8,9]。動物和臨床研究證實，ALA來源的FO和魚油干預(yù)能夠有效降低PCOS血脂和睪酮水平，改善胰島素代謝紊亂[10,11]。本團(tuán)隊前期研究[4]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)O攝入8 w后PCOS大鼠血漿和卵巢的促炎因子白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）-6、IL-1β和腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factorα，TNF-α）顯著降低，抑炎因子IL-10增加，提示富含ALA的FO對PCOS炎癥的調(diào)節(jié)作用。但是，F(xiàn)O調(diào)控炎癥因子釋放的機(jī)制尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

眾所周知，PCOS是一種慢性低度炎癥性疾病，患者常表現(xiàn)為促炎性細(xì)胞因子升高和炎癥細(xì)胞的改變[12]。髓源性抑制細(xì)胞（Myeloid-derived Suppressor Cells，MDSCs）是病理條件下調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的關(guān)鍵因子，主要分布在骨髓、外周血、脾、肝、肺或各種器官的腫瘤中[13]。研究發(fā)現(xiàn)，MDSCs能夠通過負(fù)調(diào)控2型輔助性T細(xì)胞（Helper T cell 2，Th2）減輕過敏性哮喘小鼠的呼吸道炎癥[14]，提示MDSCs具有抗炎和免疫抑制作用。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Regulatory T cell，Treg）能夠通過細(xì)胞與細(xì)胞間接觸釋放IL-10和轉(zhuǎn)化生長因子-β（Transforming Growth Factor-β，TGF-β）發(fā)揮抗炎效應(yīng)[15]。此外，巨噬細(xì)胞（Macrophages，Mψs）也具有免疫調(diào)控作用[16]，其中M1型Mψs能夠分泌大量促炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α[17]，M2型Mψs主要分泌IL-10抑制炎癥反應(yīng)[17]。因此，本研究猜測FO可能通過調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞MDSCs、Treg和Mψs影響PCOS炎癥因子的釋放。

根據(jù)以往研究[18]，采用經(jīng)典的來曲唑造模法建立PCOS大鼠模型，給予FO灌胃干預(yù)，探討其對PCOS大鼠免疫細(xì)胞MDSCs、Treg和Mψs的作用，以期為臨床防治PCOS提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 主要儀器設(shè)備

奧林巴斯BX51顯微鏡，日本Olympus；CytoFLEX流式細(xì)胞儀，美國Beckman。

1.1.2 試劑和材料

來曲唑，江蘇恒瑞；質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%羧甲基纖維素（Carboxymethyl Cellulose，CMC）溶液，上海源葉；FO（ALA含量＞56%），寧夏六盤珍坊；瑞氏-吉姆薩染色試劑盒，珠海貝索生物；大鼠流式抗體CD11b-FITC和His48-FITC，美國Thermo公司；CD4-PE、CD25-BV421（APC）、CD45-PC7和CD86-FITC，美國BD公司；Foxp3-FITC，美國eBioscience公司；CD68-APC，英國Abcam公司；CD163-PE，北京博奧森生物；破膜/固定試劑盒，美國BD公司；大鼠免疫熒光抗體CD68-CY3，武漢賽維爾；一次性負(fù)壓真空采血管，山東君諾；大鼠飼料，北京科澳。

1.2 實驗設(shè)計及模型建立

6周齡SPF級雌性SD大鼠32只（193±10 g）購買并飼養(yǎng)于寧夏醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，許可證號：SCXK（寧）2015-0001，相關(guān)研究通過了寧夏醫(yī)科大學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號：2016-017）。大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w后隨機(jī)分為陰性對照組、模型組、FO對照組和FO干預(yù)模型組。采用來曲唑造模法建立PCOS大鼠模型[18]。首先，模型組和FO干預(yù)模型組灌胃攝入量為每天1 mg/kg（以小鼠質(zhì)量為基準(zhǔn)計）來曲唑（溶于質(zhì)量分?jǐn)?shù)1% CMC溶液），連續(xù)灌胃給藥21 d；陰性對照組和FO對照組灌胃等量質(zhì)量分?jǐn)?shù)1% CMC溶液；期間采集大鼠陰道涂片進(jìn)行瑞氏-吉姆薩染色，根據(jù)鏡下細(xì)胞形態(tài)和種類評估造模是否成功。造模成功后，F(xiàn)O對照組和FO干預(yù)模型組每天灌胃攝入1 mL/kg（以小鼠質(zhì)量為基準(zhǔn)計）的FO[19]；陰性對照組和模型組灌胃等量生理鹽水，持續(xù)灌胃干預(yù)8 w。末次灌胃后禁食8 h，稱重并麻醉大鼠，收集大鼠外周血、脾臟、骨髓、卵巢等相關(guān)樣本處理后用于后續(xù)檢測。

1.3 測定指標(biāo)及方法

1.3.1 陰道涂片及染色

從造模第1天開始到第21天，每天上午9:00收集各組大鼠陰道涂片，參照瑞氏-吉姆薩染色試劑盒說明書立即進(jìn)行染色，隨后在光學(xué)顯微鏡下觀察各組大鼠陰道脫落細(xì)胞形態(tài)和種類的變化。

1.3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠外周血、脾臟和骨髓中MDSCs

新鮮全血置于抗凝管中離心，分離出血漿和血細(xì)胞，下層血細(xì)胞通過密度梯度離心法分離出外周血單個核細(xì)胞[20]。新鮮脾臟組織研磨后300目濾膜過濾，加入紅細(xì)胞裂解液裂紅、洗滌，分離出單個核細(xì)胞。取適量預(yù)冷的RPMI 1640反復(fù)沖洗大鼠雙側(cè)脛骨和股骨的骨髓腔，收集全部的沖洗液300目濾膜過濾，加入紅細(xì)胞裂解液裂紅、洗滌，分離出單個核細(xì)胞。所有細(xì)胞懸液濃度均調(diào)整為每毫升1×106個細(xì)胞。隨后，吸取上述細(xì)胞懸液各100 μL加入流式管中，分別加入1 μL抗大鼠FITC標(biāo)記的His48以及PE標(biāo)記的CD11b表面抗體，震蕩混勻；4 ℃避光孵育30 min，孵育結(jié)束后加入1 mL PBS清洗細(xì)胞；棄上清，加入300 μL RPMI 1640重懸，立即上機(jī)檢測。

1.3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測大鼠外周血和脾臟中Treg

外周血和脾臟中單個核細(xì)胞的分離方法如上所述，所有細(xì)胞懸液濃度均調(diào)整為每毫升1×106個細(xì)胞。隨后，吸取上述細(xì)胞懸液各100 μL加入流式管中，分別加入1 μL抗大鼠PE標(biāo)記的CD4以及APC標(biāo)記的CD25表面抗體，震蕩混勻；4 ℃避光孵育30 min，孵育結(jié)束后加入1 mL PBS清洗細(xì)胞；棄上清，加入300 μL破膜固定液孵育30 min；孵育結(jié)束后加入1 mL透化液清洗細(xì)胞；棄上清，加入1 μL抗大鼠FITC標(biāo)記的Foxp3抗體，吹打混勻；后續(xù)方法同前，上機(jī)檢測。

1.3.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測卵巢Mψs、M1型Mψs和M2型Mψs

大鼠卵巢組織在解剖鏡下用注射器針頭刺破卵泡，使顆粒細(xì)胞釋放入預(yù)冷的RPMI 1640中[21]；加入0.25%胰蛋白酶1 mL置于37 ℃培養(yǎng)箱中消化12 min；終止消化后300目濾膜過濾，加入紅細(xì)胞裂解液裂紅、洗滌，分離出單個核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為每毫升1×106個細(xì)胞。吸取各組細(xì)胞懸液100 μL加入流式管中，分別加入1 μL抗大鼠PC7標(biāo)記的CD45、APC標(biāo)記的CD68、FITC標(biāo)記的CD86以及PE標(biāo)記的CD163表面抗體，震蕩混勻；后續(xù)方法同前，上機(jī)檢測。

1.3.5 免疫熒光檢測卵巢Mψs

參照前人研究[22]，進(jìn)行卵巢Mψs免疫熒光染色。卵巢石蠟切片在65 ℃恒溫箱中烘烤2 h后脫蠟至水，隨后進(jìn)行抗原修復(fù)，加入牛血清白蛋白常溫封閉30 min；滴加兔抗大鼠CD68抗體（1:200），濕盒內(nèi)4 ℃孵育過夜；滴加CY3標(biāo)記的山羊抗兔抗體（1:200），避光室溫孵育60 min；滴加含DAPI的封片劑；在熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0和GraphPad Prism 6.01軟件處理實驗數(shù)據(jù)。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間差異比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用SNK-q檢驗法。以p＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果與討論

2.1 卵巢病理組織形態(tài)學(xué)

PCOS患者臨床表現(xiàn)多樣化且病因復(fù)雜，建立與臨床表現(xiàn)吻合度高且創(chuàng)傷性小的動物模型對疾病的深入研究至關(guān)重要。大量研究證明，來曲唑造模法誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型動情周期紊亂，卵巢組織呈多囊性改變，很大程度上具備了臨床PCOS患者的病理生理特點，廣泛用于PCOS動物研究[23]。因此，本研究選用6周齡雌性SD大鼠通過來曲唑灌胃法建立模型。

陰道涂片法對實驗動物無創(chuàng)傷性且具有準(zhǔn)確、實用等優(yōu)點，是判定大鼠動情周期最常用的方法之一[24]。因此，每日采集大鼠陰道涂片進(jìn)行染色以判定各組大鼠的動情周期是否正常以及各周期持續(xù)的時間。如圖1所示，動情周期包括四個階段，動情前期：多為有核上皮細(xì)胞、少量無核的角化上皮細(xì)胞（圖1a）；動情期：全部為無核的角化上皮細(xì)胞（圖1b）；動情后期：可見有核上皮細(xì)胞、角化上皮細(xì)胞及白細(xì)胞（圖1c）；動情間期：大量白細(xì)胞及少量黏液（圖1d）。結(jié)果顯示，陰性對照組和FO對照組大鼠陰道涂片可見周期性變化，一個周期約為4～5 d（圖1e～1g），該結(jié)果提示有排卵。模型組和FO干預(yù)模型組大鼠在來曲唑干預(yù)12 d后逐漸失去規(guī)律的動情周期，干預(yù)18 d后處于持續(xù)的動情間期（圖1f～1h）。以往有研究證實，SD大鼠在來曲唑誘導(dǎo)16 d后處于持續(xù)的動情間期[25]，本研究結(jié)果與之類似，說明來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠出現(xiàn)了排卵障礙。此外，結(jié)合本課題前期研究，模型組大鼠卵巢組織中黃體消失、卵泡發(fā)育異常、呈多囊樣改變的結(jié)果[26]，表明來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠模型建立成功。

圖1 光鏡下大鼠陰道脫落細(xì)胞染色圖和動情周期統(tǒng)計圖Fig.1 Staining of vaginal exfoliative cells under light microscope and statistical chart of estrus cycles in rats

2.2 FO干預(yù)增加PCOS大鼠外周血、脾臟、骨髓細(xì)胞中MDSCs比例

前期研究證實，PCOS進(jìn)程與慢性低度炎癥密切相關(guān)，富含ALA的FO干預(yù)后通過降低促炎因子水平和增加抗炎因子產(chǎn)生改善了PCOS炎癥狀態(tài)[4]。然而，F(xiàn)O調(diào)控炎癥因子釋放的機(jī)制尚不清楚。MDSCs主要分布在骨髓、外周血、脾、肝、肺等組織器官中，在調(diào)節(jié)炎癥過程中具有雙向作用，既可以防止過度的炎癥反應(yīng)，同時又能維持一種慢性低度炎癥狀態(tài)[27]。有研究發(fā)現(xiàn)，在感染和炎癥過程中，未成熟的髓樣細(xì)胞（Immature Myeloid Cells，IMC）可以通過不同的激活信號（如炎癥刺激）分化為MDSCs，并誘導(dǎo)MDSCs在炎癥組織富集，從而維持慢性炎癥反應(yīng)[28]。然而，當(dāng)MDSCs在外周血、脾以及炎癥組織中持續(xù)增殖后，又能夠抑制其向成熟的髓系細(xì)胞分化，從而抑制炎癥反應(yīng)，觸發(fā)炎癥消退和啟動修復(fù)過程，發(fā)揮免疫抑制功能[29]。據(jù)此，本研究對外周血、脾臟、骨髓中的MDSCs進(jìn)行了分析。

圖2 FO干預(yù)對PCOS大鼠外周血、脾臟、骨髓MDSCs比例的影響Fig.2 Effects of FO intervention on the proportion of MDSCs in peripheral blood, spleen and bone marrow of PCOS in rats

圖2結(jié)果顯示，骨髓中MDSCs比例最高，外周血中次之，脾臟中MDSCs相對較少（圖2a～2c）。陰性對照組外周血、脾臟、骨髓中MDSCs細(xì)胞比例分別是11.14%、3.02%和19.37%（圖2d～2f）。與陰性對照組相比，模型組外周血、脾臟和骨髓中MDSCs顯著高至20.53%、4.48%和23.88%（p＜0.05，圖2d～2f）。已有研究證實，脫氫表雄酮加高脂誘導(dǎo)的PCOS小鼠外周血、脾臟和肝臟中MDSCs比例增加，且與炎癥因子呈現(xiàn)顯著相關(guān)性，本研究結(jié)果與之一致[12]。結(jié)合前期研究[4]，本研究推測可能是促炎性細(xì)胞因子升高促進(jìn)了MDSCs在大鼠外周血、脾臟、骨髓中募集。有趣的是，與模型組下相比，膳食FO干預(yù)后外周血、脾臟、骨髓中MDSCs仍持續(xù)升高至25.87%、5.63%和28.36%（p＜0.05，圖2d～2f），可能是FO干預(yù)后MSDCs大量增殖進(jìn)一步發(fā)揮了免疫抑制作用。一項研究[20]發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)O攝入5 w后能夠顯著增加2型糖尿?。═ype 2 Diabetes Mellitus，T2DM）大鼠外周血和脾臟中MDSCs比例，降低促炎因子IL-1β和TNF-α釋放。由此說明，F(xiàn)O干預(yù)可能通過促進(jìn)PCOS大鼠外周血、脾臟、骨髓中MDSCs增殖改善炎癥因子釋放。

2.3 FO干預(yù)增加PCOS大鼠外周血和脾臟中Treg比例

Treg細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞的一種特異性譜系，能夠適應(yīng)局部微環(huán)境的變化進(jìn)行遷移、增殖、存活和分化，在維持免疫穩(wěn)態(tài)和限制過度免疫反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用[30]。研究發(fā)現(xiàn)，Treg細(xì)胞激活能夠產(chǎn)生抗炎因子IL-10和TGF-β來抑制幼稚T細(xì)胞增殖[31]，發(fā)揮抗炎效應(yīng)。因此，研究Treg細(xì)胞的變化和作用可能為防治PCOS提供新的分子靶點。

采用CD4、CD25和Foxp3標(biāo)記Treg細(xì)胞[32]。如圖3所示，陰性對照組外周血和脾臟中Treg細(xì)胞比例分別是2.85%和1.50%。與陰性對照組相比，模型組外周血和脾臟中Treg細(xì)胞顯著降低至1.29%和0.76%（p＜0.01，圖3c～3d），與本課題前期研究PCOS大鼠抗炎細(xì)胞因子IL-10降低相一致[4]。臨床研究[33]發(fā)現(xiàn)，PCOS患者外周血Treg細(xì)胞較對照組顯著降低，同時伴隨著慢性低度炎癥，這與本研究結(jié)果相一致。與模型組相比，F(xiàn)O干預(yù)后外周血和脾臟中Treg細(xì)胞升高至2.06%和1.07%（p＜0.05，圖3c～3d），但仍低于陰性對照組。結(jié)合前期研究推測[4]，F(xiàn)O干預(yù)后在一定程度上增加了Treg細(xì)胞比例，進(jìn)而刺激抗炎因子IL-10產(chǎn)生，增強(qiáng)抗炎作用，維持免疫穩(wěn)態(tài)。

2.4 FO干預(yù)降低PCOS大鼠卵巢中Mψs比例

Mψs是機(jī)體固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分，廣泛分布在各個組織與器官，具有極強(qiáng)的異質(zhì)性和可塑性[16]。在不同微環(huán)境下Mψs可極化為M1型Mψs和M2型Mψs[34]，M1型Mψs通過分泌促炎性細(xì)胞因子和趨化因子參與正向免疫應(yīng)答[34]，在炎癥反應(yīng)的啟始階段起關(guān)鍵作用，同時引起組織損傷[34]；M2型Mψs分泌IL-10和TGF-β等發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)控作用[17]，促進(jìn)炎癥消除和組織損傷修復(fù)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，Mψs在LPS等炎癥刺激物的誘導(dǎo)下激活，迅速合成并釋放大量炎癥介質(zhì)、炎癥細(xì)胞因子和黏附分子等，引起M1/M2極化失衡，從而引發(fā)全身組織炎癥和代謝功能障礙[35]。然而，至今仍沒有公認(rèn)的分子標(biāo)志來鑒定和區(qū)分不同類型的Mψs[36]。目前，報道最多的譜系標(biāo)志是CD45+CD68+為Mψs，CD45+CD68+CD86+為M1型Mψs，CD45+CD68+CD163+為M2型Mψs[37]，故本研究采用其作為檢測標(biāo)志分子。

圖4結(jié)果顯示，陰性對照組卵巢Mψs、M1型Mψs以及M2型Mψs比例分別是8.09%、1.54%和2.27%（圖4d～4f）。與陰性對照組相比，模型組卵巢Mψs和M1型Mψs顯著升高至18.30%和2.85%（p＜0.01，圖4d～4e），M2型Mψs升高至2.73%，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05，圖4f）。動物研究發(fā)現(xiàn)，脫氫表雄酮誘導(dǎo)的PCOS小鼠脾臟Mψs和M1型Mψs顯著增加，并伴隨全身炎癥反應(yīng)和排卵障礙[38]，本研究結(jié)果與之類似，提示卵巢Mψs增加與PCOS全身慢性炎癥密切相關(guān)。與模型組相比，膳食FO干預(yù)后，卵巢Mψs和M1型Mψs比例均降低至13.51%和2.27%（p＜0.05，圖4d～4e），但仍高于陰性對照組；M2型Mψs升高至2.64%，但無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05，圖4f）。動物研究發(fā)現(xiàn)，omega-3 PUFA通過與G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein-coupled Receptors，GPR）120相互作用抑制Mψs遷移和浸潤，進(jìn)而減輕小鼠的血管炎癥、動脈血栓形成和新生內(nèi)膜增生[39]。上述結(jié)果提示，F(xiàn)O干預(yù)能夠抑制PCOS大鼠卵巢Mψs和M1型Mψs增殖，但對M2型Mψs作用不明顯，推測FO干預(yù)可能通過抑制Mψs和M1型Mψs增殖改善PCOS大鼠炎癥。

圖4 FO干預(yù)對PCOS大鼠卵巢Mψs、M1型Mψs和M2型Mψs比例的影響Fig.4 Effects of FO intervention on the percentage of Mψs, M1 Mψs and M2 Mψs of ovary in PCOS rats

注：a：卵巢中Mψs免疫熒光；b：卵巢中Mψs熒光強(qiáng)度的定量分析；*p＜0.05，***p＜0.001。

近年來研究發(fā)現(xiàn)，卵巢組織中定居的單核Mψs可誘導(dǎo)PCOS患者卵巢顆粒細(xì)胞凋亡[40]。卵巢中Mψs分泌的各種細(xì)胞因子還會影響卵泡的生長發(fā)育、排卵以及黃體的形成和功能，提示卵巢Mψs參與PCOS進(jìn)程[41]。因此，本研究進(jìn)一步通過免疫熒光對卵巢Mψs進(jìn)行定量、定位分析。圖5b結(jié)果顯示，陰性對照組Mψs熒光強(qiáng)度為0.62%，模型組Mψs熒光強(qiáng)度較陰性對照組顯著升高至2.55%（p＜0.001，圖5b），說明PCOS大鼠卵巢出現(xiàn)了Mψs浸潤，與前人脫氫表雄酮誘導(dǎo)的PCOS大鼠卵巢組織中Mψs浸潤的報道相一致[42]。與模型組相比，膳食FO干預(yù)后Mψs熒光強(qiáng)度降低至1.59%（p＜0.05，圖5b），但仍高于陰性對照組，該結(jié)果與流式結(jié)果趨勢一致，推測FO干預(yù)后可能通過改善Mψs在卵巢的浸潤降低PCOS的慢性低度炎癥狀態(tài)。綜上所述，F(xiàn)O干預(yù)能夠降低卵巢Mψs水平，以其為靶點可能為治療PCOS提供新的思路。

此外，近年來研究發(fā)現(xiàn)，γδT細(xì)胞、固有淋巴樣細(xì)胞（Innate Lymphoid Cells，ILCs）和Th17細(xì)胞等炎癥細(xì)胞也參與了炎癥性疾病的發(fā)生和發(fā)展[43,44]。本研究推測，F(xiàn)O對PCOS大鼠MSDCs、Treg和Mψs的調(diào)節(jié)作用只是改善炎癥的機(jī)制之一，其他免疫細(xì)胞也可能參與了PCOS發(fā)展進(jìn)程。

3 結(jié)論

本研究在前期研究證實富含ALA的FO能夠改善PCOS大鼠炎癥的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討其對炎癥相關(guān)免疫細(xì)胞MSDCs、Treg和Mψs的作用。本研究證實了來曲唑誘導(dǎo)的PCOS大鼠存在動情周期紊亂和炎癥細(xì)胞改變，F(xiàn)O攝入能夠促進(jìn)MDSCs在外周血、脾臟和骨髓細(xì)胞中富集，增加PCOS大鼠外周血和脾臟中Treg比例以及抑制卵巢中Mψs和M1型Mψs增殖，進(jìn)而發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用，改善PCOS炎癥狀態(tài)。本研究為臨床進(jìn)一步探索PCOS的作用靶點提供了新的方案和思路。