血漿絲氨酸蛋白酶抑制劑E1蛋白水平與幽門螺桿菌感染的關(guān)系研究

姚 勇， 奉 鐳， 雷洪軍， 張 描， 高明生

(四川省遂寧市中心醫(yī)院消化內(nèi)科， 四川 遂寧 629000)

胃癌在全球具有較高的發(fā)病率及死亡率，每年全球大約有70萬胃癌患者死亡[1]，同時(shí)胃癌也嚴(yán)重威脅我國人民的健康及生命，因此有必要對胃癌的危險(xiǎn)因素、發(fā)病機(jī)制、防治策略等作深入的探討。研究發(fā)現(xiàn)，幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有十分重要的作用。一項(xiàng)納入3365名受試者的前瞻性研究證實(shí)：根除Hp的治療可以降低胃癌患者的死亡率及發(fā)生率[2]。雖然Hp感染與胃癌的密切關(guān)系已得到大部分研究證實(shí)，但Hp導(dǎo)致胃癌的具體分子機(jī)制仍不清楚[3，4]。對Hp相關(guān)性胃癌發(fā)生機(jī)制的探討，有利于制定預(yù)防以及治療胃癌的策略。胃癌的發(fā)生、發(fā)展與癌基因及相關(guān)蛋白的異常水平密切相關(guān)。絲氨酸蛋白酶抑制劑E1(serpin peptidase inhibitor clade E member 1,SERPINE1)，又稱纖溶酶原激活物抑制劑-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)，由SERPINE1基因編碼的蛋白，參與細(xì)胞遷移、增殖、分化等過程，是胃癌發(fā)生、發(fā)展過程中的關(guān)鍵癌蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，SERPINE1可以通過調(diào)節(jié)上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化機(jī)制，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的發(fā)生、增殖及轉(zhuǎn)移[5]。如果胃癌患者在癌組織中高水平表達(dá)SERPINE1，則該患者極大可能會出現(xiàn)預(yù)后欠佳，生存率低下[6]。因此，SERPINE1是胃癌發(fā)生、發(fā)展的重要促進(jìn)因子，可能參與了Hp相關(guān)性胃癌的發(fā)生進(jìn)程。Hp感染作為胃癌發(fā)生、發(fā)展的重要風(fēng)險(xiǎn)因素，理論上應(yīng)該和SERPINE1關(guān)系密切。然而，目前卻沒有SERPINE1與Hp關(guān)系的相關(guān)研究。本文對血漿SERPINE1蛋白水平與Hp感染的關(guān)系進(jìn)行了初步的探討，為進(jìn)一步的相關(guān)機(jī)制研究提供一定的基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1一般資料:依據(jù)相應(yīng)的納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究納入417名在遂寧市中心醫(yī)院體檢的成年受試者作為研究對象。本研究納入標(biāo)準(zhǔn)為：①已完成13C呼氣試驗(yàn)，已明確目前Hp感染狀態(tài)的受試者；②臨床病史及血漿生化指標(biāo)均完整記錄的受試者，排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往有根除Hp的治療史；②近一月內(nèi)使用過抗生素；③近兩周服用過質(zhì)子泵抑制劑、鉍劑等影響Hp感染的藥物；④合并有惡性腫瘤、嚴(yán)重器官功能障礙、妊娠及其他部位的嚴(yán)重感染；依據(jù)受試者13C呼氣試驗(yàn)結(jié)果，分為Hp陰性組(192例)及Hp陽性組(225例)。

1.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay,Elisa):使用人纖溶酶原激活物抑制因子1Elisa試劑盒(武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司)檢測血漿SERPINE1蛋白水平,具體步驟如下：①在反應(yīng)板的空白孔中，加入樣本及不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，并進(jìn)行37℃孵箱孵育；②洗板后加入生物素化抗體工作液，并進(jìn)行37℃孵箱孵育；③洗板后加入酶結(jié)合物工作液，并進(jìn)行37℃孵箱孵育；④洗板后加入顯色底物，并進(jìn)行37℃孵箱孵育；⑤加入終止液，并依據(jù)分光光度儀及標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程，得出樣本中SERPINE1蛋白水平。

2 結(jié) 果

2.1兩組受試者一般情況及血漿生化指標(biāo)、SERPINE1蛋白水平的比較:Hp陽性組中受試者的體重指數(shù)(BMI)、血漿SERPINE1蛋白水平、低密度脂蛋白水平(LDL)、載脂蛋白B(APOB)水平明顯高于Hp陰性組受試者的相應(yīng)指標(biāo)(P<0.001)，兩組受試者之間的年齡、性別、空腹血糖(FPG)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表1。

表1 比較兩組受試者之間的臨床數(shù)據(jù)

2.2血漿SERPINE1蛋白水平與Hp感染狀態(tài)的相關(guān)性分析:依據(jù)血漿SERPINE1蛋白水平的四分位數(shù)間距，即≤5.34ng/mL,5.35～6.64ng/mL,6.65～8.37ng/mL,≥8.38ng/mL，將所有受試者分為四組(第一分位組、第二分位組、第三分位組、第四分位組)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)第一分位組、第二分位組、第三分位組、第四分位組受試者Hp感染率依次為13.3%、28.57%、77.67%、97.12%，將第一分位組受試者Hp感染率作為參考，第二分位組Hp感染率是其2.14倍，第三分位組Hp感染率是其5.83倍，第四分位組Hp感染率是其7.29倍，結(jié)果提示隨著血漿SERPINE1蛋白水平的不斷升高，受試者Hp感染率也相應(yīng)增加，兩者具有明顯的相關(guān)性(P<0.001),見表2。

表2 血漿SERPINE1蛋白水平與Hp感染率相關(guān)性分析

2.3血漿SERPINE1蛋白水平診斷Hp感染狀態(tài):利用血漿SERPINE1蛋白水平構(gòu)建診斷Hp感染狀態(tài)的ROC曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該ROC曲線下面積為0.906，最佳截點(diǎn)值取6.49ng/mL時(shí)，診斷Hp感染的靈敏度為84.4%，特異度為83.3%，提示血漿SERPINE1蛋白水平對Hp感染具有較好的預(yù)測價(jià)值。見圖1。

圖1 構(gòu)建血漿SERPINE1蛋白水平診斷Hp感染的ROC曲線

3 討 論

研究發(fā)現(xiàn)多種分子機(jī)制參與了Hp相關(guān)性胃癌的發(fā)生、發(fā)展，且SERPINE1在胃癌的進(jìn)展中扮演著十分重要的角色，但目前并沒有Hp與SERPINE1關(guān)系的研究。本文初步探討了Hp感染與血漿SERPINE1蛋白水平的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Hp陽性受試者具有較高的血漿SERPINE1蛋白水平，Hp感染率與血漿SERPINE1蛋白水平呈正相關(guān)，且血漿SERPINE1蛋白水平具有診斷Hp感染的潛力。Hp感染導(dǎo)致SERPINE1水平升高的具體機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。依據(jù)已有的研究，Hp相關(guān)性炎癥反應(yīng)可能會誘導(dǎo)SERPINE1的高表達(dá)。SERPINE1的過度表達(dá)常常由人體內(nèi)多種促炎因子，如腫瘤壞死因子、白介素等所誘導(dǎo)[7]，因此大多數(shù)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥反應(yīng)綜合征、代謝綜合征的患者體內(nèi)由于炎癥反應(yīng)較為活躍而出現(xiàn)SERPINE1表達(dá)水平的升高。既往研究證實(shí)，長期Hp感染可以導(dǎo)致胃及十二指腸的慢性炎癥，誘導(dǎo)機(jī)體釋放多種促炎因子，如腫瘤壞死因子、白介素-1、白介素-6等[8]，可能也會促進(jìn)SERPINE1的表達(dá)，提高血漿SERPINE1蛋白水平。雖然如此，進(jìn)一步的臨床以及基礎(chǔ)研究仍需開展，以驗(yàn)證上述假設(shè)的真實(shí)性。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)血漿SERPINE1蛋白水平對Hp感染具有一定的診斷價(jià)值，但因?yàn)闃颖玖康膯栴}，目前該結(jié)果并不適合臨床應(yīng)用。如果進(jìn)一步完成多中心、大樣本的研究，SERPINE1有可能成為Hp感染的血漿標(biāo)志物。

除了發(fā)現(xiàn)Hp感染與血漿SERPINE1蛋白水平的相關(guān)性，本研究還發(fā)現(xiàn)Hp陽性受試者的體重指數(shù)、低密度脂蛋白水平、載脂蛋白B水平明顯高于Hp陰性組受試者，提示Hp感染的個體可能合并脂質(zhì)代謝異常。BMI是衡量人體肥胖的一個重要指標(biāo)，其值過高常常導(dǎo)致嚴(yán)重的脂質(zhì)代謝紊亂。一項(xiàng)大型隊(duì)列研究顯示，Hp陽性人群具有較高的BMI值，且BMI值與Hp感染率呈正相關(guān)，其能獨(dú)立預(yù)測調(diào)查人群Hp感染的情況[9]。本研究關(guān)于BMI的結(jié)果與既往研究結(jié)果一致，但具體機(jī)制不清楚，其可能與Hp感染導(dǎo)致的脂質(zhì)代謝紊亂有關(guān)。Hp感染與多種代謝性疾病，如：2型糖尿病、胰島素抵抗、動脈粥樣硬化、非酒精脂肪肝等密切相關(guān)，具體的分子機(jī)制包括炎癥反應(yīng)、胃腸道微生態(tài)、激素的分泌等[10,11]。因此，Hp感染常常導(dǎo)致一些脂質(zhì)代謝指標(biāo)的異常。本研究中的Hp陽性受試者也出現(xiàn)了不同程度的脂質(zhì)代謝指標(biāo)異常，表現(xiàn)為高血漿低密度脂蛋白及載脂蛋白B水平。

本研究仍存在一定的問題。我們納入的研究對象為醫(yī)院里的體檢人群，這部分人群對自身健康情況的關(guān)注度相對其他大多數(shù)人群較高，其更愿意到醫(yī)院里來接受檢查，因此這部分人群有可能無法代表大多數(shù)人群的真實(shí)情況。其次，每個地區(qū)Hp感染率并不一致，因此該研究結(jié)果在其他地區(qū)的應(yīng)用受到了一定限制。

綜上所述，本文初步證實(shí)血漿SERPINE1蛋白水平與Hp感染具有一定的相關(guān)性，Hp感染可能會導(dǎo)致血漿SERPINE1蛋白水平升高，該結(jié)論為研究Hp相關(guān)性胃癌的分子機(jī)制提供新的切入點(diǎn)。不僅如此，高血漿SERPINE1蛋白水平或許可作為根除Hp的適應(yīng)癥之一，當(dāng)然還需要更加深入的基礎(chǔ)及臨床研究予以證實(shí)。