STIL和PRR11在宮頸癌組織的表達(dá)水平及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性

甘 露， 劉 偉， 潘 琴， 居文惠

(1.長江大學(xué)附屬荊州醫(yī)院/荊州市中心醫(yī)院婦科， 湖北 荊州 434020 2.華潤武鋼總醫(yī)院放射科， 湖北 武漢 430080)

在我國宮頸癌發(fā)病逐漸趨向于年輕化使得女性生命健康受到嚴(yán)重威脅。宮頸癌因其病變組織位點(diǎn)較為特殊，極易出現(xiàn)浸潤等原因，因此導(dǎo)致中晚期宮頸癌患者術(shù)后局部轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)升高，嚴(yán)重影響患者預(yù)后情況，其中只有50%～60%患者生存率在5年以上[1]。目前，臨床上主要采取宮頸癌根治術(shù)對早期宮頸癌患者進(jìn)行治療，但在中晚期宮頸癌患者中，其治療方式并不唯一，主要分為髂內(nèi)動脈灌注化療、術(shù)前腔內(nèi)照射及術(shù)后輔助化療等。隨著相關(guān)研究不斷深入，機(jī)體相關(guān)蛋白與癌癥發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后存在關(guān)聯(lián)。SCL/TALl斷裂點(diǎn)(SCL/TALl interrupting locus，STIL)基因最早在人類急性T淋巴細(xì)胞白血病患者染色體上發(fā)現(xiàn)，隨后研究發(fā)現(xiàn)其可以通過介到細(xì)胞有絲分裂，來參與腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程[2]。脯氨酸蛋白11(proline-rich protein 11，PRR11)最早發(fā)現(xiàn)于骨肉瘤細(xì)胞系中，PRR11是一種細(xì)胞周期相關(guān)蛋白[3]。在肺癌患者中發(fā)現(xiàn)PRR11水平明顯升高，肺癌患者術(shù)后預(yù)后情況與PRR11水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，在腫瘤細(xì)胞周期中PRR11呈現(xiàn)節(jié)律性表達(dá)，同時(shí)也密切關(guān)系著腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程[4]。目前國內(nèi)外對于STIL和PRR11研究主要集中在結(jié)腸癌、肝細(xì)胞癌和肺癌方面[5]。但是關(guān)于宮頸癌這一領(lǐng)域研究較為少見，基于此本研究通過對宮頸癌組織中STIL和PRR11表達(dá)水平進(jìn)行檢測分析，探索其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，旨在為今后臨床宮頸癌治療新靶點(diǎn)選擇及其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)評估提供一定思路和意見。

1 資料與方法

1.1一般資料：選擇我院2020年1月至2022年1月收治的143例宮頸癌患者作為研究對象，術(shù)中對患者宮頸癌組織和距離腫瘤邊緣3～4cm的正常癌旁組織進(jìn)行切除。宮頸癌患者，年齡37～67歲，平均(49.01±4.29)歲；腫瘤直徑3～5cm，平均(4.23±0.52)cm；病理診斷類型：宮頸腺癌28例，宮頸癌鱗狀細(xì)胞癌115例，F(xiàn)IGO分期：Ⅰ期69例、Ⅱ期45例、Ⅲ期25例、Ⅳ期4例；分化程度：低分化26例、中分化97例、高分化20例；淋巴轉(zhuǎn)移：轉(zhuǎn)移64例，無轉(zhuǎn)移79例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理活檢診斷為宮頸癌，患者符合《宮頸癌診療規(guī)范(2018年版)》[6]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，鱗狀上皮細(xì)胞異常，細(xì)胞排列呈現(xiàn)癌巢或腺管狀，可以明顯看到組織間橋和角化珠；②肝腎功能無明顯異常；③心電圖基本正常；④無既往放化療藥物治療史。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并胃癌、肝癌等其他惡性腫瘤疾病患者；②患者存在嚴(yán)重精神障礙；③合并嚴(yán)重肝、腎等器官功能障礙；④患有嚴(yán)重泌尿系統(tǒng)及血液系統(tǒng)感染性疾病。

1.2觀察指標(biāo)：①采用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)對癌組織和癌旁組織中STIL和PRR11蛋白水平進(jìn)行檢測。首先將暫存于-80℃冰箱中的宮頸癌和癌旁組織取出，進(jìn)行組織勻漿，離心后取上清液，采用總蛋白提取試劑盒中說明書進(jìn)行總蛋白提取，測定蛋白含量及純度，將上樣緩沖液與待測液按一定比例進(jìn)行混勻，然后在凝膠中上樣，完成聚丙烯凝膠電泳(PAGE)實(shí)驗(yàn)。電泳完成后將蛋白轉(zhuǎn)到PVDF膜上，用5%牛血清白蛋白(BSA)在室溫下封閉PVDF膜1h，并與目的蛋白特異性抗體在4℃下孵育過夜。然后，加入對應(yīng)二抗在室溫下孵育1h，孵育完成后進(jìn)行顯色反應(yīng)，最后通過凝膠成像儀進(jìn)行顯影，對蛋白相對表達(dá)量進(jìn)行計(jì)算。STIL抗體、PRR11抗體均購于上海長島生物技術(shù)有限公司。②采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)檢測STIL和PRR11基因相對表達(dá)量。先用RNA提取試劑盒提取組織中總RNA，隨后通過逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后通過q-PCR試劑盒以cDNA為模板對目的基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量檢測，q-PCR擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性5min，95℃變性10s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共35個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因相對表達(dá)量，各目的基因引物序列，見表1。PCR相關(guān)試劑盒均購于北京擎科生物科技有限公司，操作均按照說明書嚴(yán)格進(jìn)行。

表1 PCR相關(guān)基因引物序列

2 結(jié) 果

2.1STIL和PRR11在宮頸癌組織患者中表達(dá)情況：宮頸癌組織中STIL、PRR11蛋白水平及基因相對表達(dá)量均明顯高于癌旁組織(P<0.05)。見圖1，表2。

表2 組織STIL PRR11水平變化

圖1 宮頸癌組織中STIL和PRR11水平情況

2.2STIL和PRR1水平與FIGO 分期關(guān)系：FIGO分期越高，STIL、PRR11蛋白水平越高，各組間差異顯著(P<0.05)，見表3。

表3 不同F(xiàn)IGO分期者宮頸癌組織中STIL PRR11蛋白水平比較

2.3STIL和PRR11表達(dá)水平與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系：將術(shù)后病理學(xué)檢查結(jié)果作為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移金標(biāo)準(zhǔn)，患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例，未轉(zhuǎn)移79例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中STIL和PRR11蛋白水平明顯高于未轉(zhuǎn)移(P<0.05)。見表4。

表4 有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者宮頸癌組織中STIL和PRR11蛋白水平比較

2.4STIL和PRR11對宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的診斷價(jià)值：STIL蛋白、PRR11蛋白診斷宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC分為0.733、0.729、(P<0.05)。見圖2、表5。

圖2 STIL和PRR11診斷宮頸癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移ROC曲線

表5 STIL和PRR11診斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的ROC特征

2.5STIL和PRR11蛋白表達(dá)之間相關(guān)性分析：STIL蛋白水平與PRR11蛋白水平呈現(xiàn)正相關(guān)(r=0.290、P=0.003)。見圖3。

圖3 STIL和PRR11蛋白水平相關(guān)性散點(diǎn)圖

3 討 論

在女性惡性腫瘤中宮頸癌最為常見，全世界范圍內(nèi)，因其人群、地域不同致使宮頸癌發(fā)病率和死亡率也呈現(xiàn)出差異。據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國近20年宮頸癌發(fā)病率呈逐步上升態(tài)勢，女性健康因?qū)m頸癌多發(fā)性受到嚴(yán)重威脅，因此，社會和政府對宮頸癌給予重點(diǎn)關(guān)注并實(shí)施了前所未有的防范措施[7]。目前，宮頸癌研究重心已經(jīng)開始從之前的治療向預(yù)防方面轉(zhuǎn)變。宮頸癌病理過程較為復(fù)雜，其中包括多種癌基因和抑癌基因的異常激活與失活，并伴隨多階段、多因素及多步驟過程[8]。因此對宮頸癌發(fā)展相關(guān)分子機(jī)制進(jìn)行深入研究有助于治療新靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)，對提高宮頸癌患者治療效果、預(yù)后改善具有積極影響。

細(xì)胞在增殖期中會大量表達(dá)STIL，尤其是在腫瘤細(xì)胞中，但是在機(jī)體正常組織中表達(dá)量極少。國外一些研究表明STIL表達(dá)水平上調(diào)有助于腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，可以明顯降低患者預(yù)后水平[9]。說明在腫瘤中STIL可能屬于一種致病基因。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)STIL表達(dá)水平在宮頸癌組織中明顯上升，且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中表達(dá)量要明顯高于未轉(zhuǎn)移，隨著FIGO分期越高，其表達(dá)量呈現(xiàn)上升趨勢。此研究結(jié)果與李垚[10]研究結(jié)果相似。分析其原因可能是與中心體異常擴(kuò)增有關(guān)。研究證實(shí)，腫瘤發(fā)展與中心體密切相關(guān)，中心體異常主要兩大表現(xiàn)分別是中心體數(shù)量異常以及結(jié)構(gòu)上異常。宮頸癌組織中中心體復(fù)合蛋白會大量富集。中心體大量產(chǎn)生會造成宮頸癌逐漸惡化，加快其轉(zhuǎn)移和浸潤速度。STIL是一種參與中心體合成的蛋白，其可以在細(xì)胞有絲分裂間期促進(jìn)前中心粒合成，造成中心粒復(fù)制數(shù)量增加。STIL還可以通過對DKl/CyclinBI復(fù)合體進(jìn)行激活，從而促進(jìn)癌細(xì)胞有絲分裂效率，同時(shí)調(diào)控下游一系列基因表達(dá)來促進(jìn)腫瘤發(fā)展。因此STIL表達(dá)水平會隨著FIGO分期升高及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增加。

PRR11位于染色體17q23區(qū)，其可以通過對糖皮質(zhì)激素受體信號通路進(jìn)行調(diào)控而參與到腫瘤形成過程中。在腫瘤細(xì)胞中PRR11高表達(dá)會加快細(xì)胞周期進(jìn)展，提高腫瘤細(xì)胞增殖能力，其同時(shí)可以促進(jìn)新血管形成幫助腫瘤轉(zhuǎn)移[11]。在肺癌組織中PRR11水平上調(diào)會加快腫瘤轉(zhuǎn)移和分化[12]。本研究結(jié)果顯示，PRR11在宮頸癌組織中表達(dá)水平以及其與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系與STIL類似。此研究結(jié)果與趙鄭[13]等研究結(jié)果存在部分相似。究其原因可能是當(dāng)PRR11表達(dá)上調(diào)后可能通過促進(jìn)β-連環(huán)蛋白(β-catenin)和波形蛋白(vimentin)表達(dá)，激活宮頸癌細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)過程，導(dǎo)致宮頸癌進(jìn)一步惡化和轉(zhuǎn)移，所以PRR11水平會隨著宮頸癌FIGO分期增加和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而增加。我們對PRR11和STIL蛋白在診斷淋巴結(jié)價(jià)值進(jìn)行分析。發(fā)現(xiàn)PRR11、STIL蛋白在診斷宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中均具有一定診斷價(jià)值，進(jìn)一步采用Pearson分析顯示在宮頸癌患者中STIL蛋白水平與PRR11蛋白表達(dá)呈現(xiàn)正相關(guān)，提示這兩種蛋白可能存在相互調(diào)控關(guān)系，在宮頸癌發(fā)生及發(fā)展過程中可能起著協(xié)同促進(jìn)作用，將來在臨床治療宮頸癌中可能是一種新型潛在靶點(diǎn)。但是目前關(guān)于這兩種蛋白具體調(diào)控機(jī)制尚不明確，還需通過后續(xù)實(shí)驗(yàn)加以證明。

綜上所示，在宮頸癌組織中，STIL和PRR11水平都會上升。我們推測在宮頸癌患者中STIL可能通過調(diào)控細(xì)胞有絲分裂進(jìn)程和中心粒形成來參與了宮頸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和發(fā)展過程。而PRR11可能是通過激活EMT過程參與宮頸癌發(fā)展和轉(zhuǎn)移，兩者蛋白之間表達(dá)可能存在聯(lián)系，共同促進(jìn)了宮頸癌發(fā)生及發(fā)展。