MiR-let-7g-3p靶向HMGB2調(diào)控膀胱癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和凋亡

膀胱癌是目前最常見的9大癌癥之一，在所有新診斷的病例中，75%表現(xiàn)為非肌肉浸潤性膀胱癌（NMIBC），25%表現(xiàn)為肌肉浸潤性膀胱癌（MIBC），并且在所有實體癌中，膀胱癌的復(fù)發(fā)率最高。經(jīng)一線治療后，50%～70%的NMIBC患者會在5年內(nèi)復(fù)發(fā)，10%～30%的患者將進(jìn)展為MIBC?？梢?，如何降低膀胱癌復(fù)發(fā)率，改善患者生存預(yù)后是膀胱癌領(lǐng)域的重要問題。

微小核糖核酸（miRNAs）是一種小的非編碼核糖核酸，由19～25 個核苷酸組成。目前，已有多種miRNAs 在癌癥中被證明是促癌基因（如miR-92 和miR-194）或抑癌基因（如miR-199b和miR-99a）。然而在膀胱癌中，還有許多下調(diào)miRNAs尚未得到充分的研究，其功能和靶基因有待進(jìn)一步闡明。let-7g-3p是定位于3 號染色體上屬于let-7 基因家族編碼的一種miRNAs，let-7家族編碼的miRNAs已被證實能夠通過負(fù)性調(diào)控ras表達(dá)來發(fā)揮致癌作用。let-7g-3p參與多種人類代謝性疾病，例如阿爾茨海默癥、腫瘤以及Graves病等。在腫瘤研究方面，研究發(fā)現(xiàn)let-7g-3p參與細(xì)胞外基質(zhì)中受體的相互作用并且與癌癥中的蛋白多糖的合成有關(guān)，該機(jī)制與小兒星形細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。但目前尚未有研究報道let-7g-3p對膀胱癌生物學(xué)行為的影響并且其下游的相關(guān)信號因子和潛在機(jī)制仍然未知。

因此本研究將let-7g-3p作為研究對象，通過多種實驗方法，旨在明確let-7g-3p靶向HMGB2抑制膀胱癌的作用和分子機(jī)制，為臨床治療膀胱癌提供潛在的治療靶點和理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料及試劑

正常人尿路上皮細(xì)胞系SV-HUC-1，以及膀胱癌細(xì)胞系T24、5637 和EJ（中國科學(xué)院上海細(xì)胞庫）；RPMI 1640培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素-鏈霉素雙抗和胰酶（Gibco）；脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑Lipo2000、TRIzol、PowerUp SYBR Green Master MIX PCR試劑盒和山羊抗兔二抗（Thermo Fish）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara）；mimics-NC、let-7g-3p mimics、Inhibitor-NC、let-7g-3p inhibitor、si-NC以及si-HMGB2均由上海吉瑪公司設(shè)計并合成；HMGB2抗體（Abcam）。

1.2 組織樣本

所有組織樣本均來源于在蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院納入治療的BLCA患者，患者他們均未在術(shù)前接受放療或術(shù)前化療。所有標(biāo)本均按醫(yī)學(xué)倫理規(guī)范進(jìn)行處理。

1.3 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染

加蓬奧果韋河特大橋預(yù)應(yīng)力混凝土箱梁菱形掛籃施工分析…………………………………………… 曾進(jìn)虎，尹良帥（3-119）

1.4 CCK8細(xì)胞增殖實驗

將轉(zhuǎn)染后的T24細(xì)胞接種于96孔板中，分別培養(yǎng)24、48、72 h后，每孔加入10 μL CCK8溶液，避光，37 ℃條件下孵育1 h，酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞在450 nm處的吸光度值，實驗重復(fù)3次。

1.5 Transwell 小室法

收集轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，細(xì)胞侵襲實驗中，上室面制備Matrigel膠后，將細(xì)胞用無血清培養(yǎng)基調(diào)整為2×10/mL，吸取100 μL加入上室。下室加入含20%胎牛血清的1640 培養(yǎng)基。37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h 后，輕輕去除上室中的細(xì)胞和Matrigel 膠，4%多聚甲醛固定30 min后結(jié)晶紫染色，顯微鏡下拍照并分析。細(xì)胞遷移實驗中，Transwell上室不加入Matrigel膠，其余步驟同細(xì)胞侵襲實驗，實驗重復(fù)3次。

1.6 流式細(xì)胞術(shù)

為確定let-7g-3p下游靶基因的生物學(xué)功能和重要通路，對測序結(jié)果中的1597個差異表達(dá)基因進(jìn)行了GO和KEGG通路富集分析，結(jié)果顯示這些差異表達(dá)基因參與了與細(xì)胞進(jìn)程等相關(guān)的途徑（圖10A），此外，KEGG富集分析顯示這些差異表達(dá)基因與癌癥中的蛋白多糖、細(xì)胞凋亡以及一些致癌途徑如P53和TNF信號通路有關(guān)（圖10B）。

正常人尿路上皮細(xì)胞系HUC，以及膀胱癌細(xì)胞系T24、5637及EJ細(xì)胞置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)箱條件37 ℃、5%CO。當(dāng)細(xì)胞融合度在80%左右時0.25%胰酶消化傳代，每2 d換液或傳代1次。在其生長狀態(tài)良好時，將T24細(xì)胞接種于6孔板中，生長至60%融合度，按照Lipofectamine 2000 試劑說明書，將miR-NC、let-7g-3p-mimics、let-7g-3p-inhibitor、si-NC以及si-HMGB2、轉(zhuǎn)染入細(xì)胞（序列見表1）。

1.7 RNA的提取及實時熒光定量PCR

提升廣西中央預(yù)算內(nèi)投資執(zhí)行績效的思考 …………………………………………………………………………… 梁安柱（2/06）

1.8 轉(zhuǎn)錄組測序分析

收集轉(zhuǎn)染mimics-NC和let-7g-3p-mimics后的T24細(xì)胞，每組各3個樣本，采用TRIzol試劑提取總RNA，Nanodrop分光光度計（ND-ONE-W）檢測RNA樣品的純度、濃度和完整性，進(jìn)行文庫構(gòu)建，加入Fragmentation Buffer 將mRNA 進(jìn)行隨機(jī)打斷，以mRNA為模板，用六堿基隨機(jī)引物合成第一條cDNA鏈，然后加入緩沖液、dNTPs、RNase H 和DNA polymerase I合成第二條cDNA鏈，利用AMPure XP磁珠純化cDNA，純化的雙鏈cDNA再進(jìn)行末端修復(fù)、加A尾并連接測序接頭，然后用AMPure XP磁珠進(jìn)行片段大小選擇，最后通過PCR富集得到cDNA文庫。文庫構(gòu)建完成后，使用Q-PCR方法對文庫的有效濃度（文庫有效濃度＞2 nmol/L）進(jìn)行準(zhǔn)確定量，以保證文庫質(zhì)量。庫檢合格后，不同文庫按照目標(biāo)下機(jī)數(shù)據(jù)量進(jìn)行混合，用Illumina平臺進(jìn)行測序。

1.9 Western blot

收集細(xì)胞后使用冷PBS洗滌兩次，RIPA細(xì)胞裂解液冰上裂解30 min，將裂解物以4 ℃，12 000 r/min離心15 min，使用BCA蛋白定量試劑盒測定上清液中的蛋白質(zhì)濃度。在SDS-PAGE上加入等量的蛋白質(zhì)樣品并轉(zhuǎn)移到PVDF 膜上，隨后使用5%脫脂奶粉封閉1 h，4 ℃孵育一抗搖床過夜。第2天二抗室溫孵育1 h，TBST洗3 次，使用化學(xué)發(fā)光試劑觀察蛋白質(zhì)條帶并使用Image J進(jìn)行分析。

同志們，水利事業(yè)正處于新的發(fā)展階段，規(guī)劃計劃部門任務(wù)繁重，責(zé)任重大，使命光榮。讓我們在以胡錦濤同志為總書記的黨中央領(lǐng)導(dǎo)下，深入貫徹落實科學(xué)發(fā)展觀，全面落實中央的各項部署，加大工作力度，銳意改革進(jìn)取，扎實做好工作，努力開創(chuàng)水利規(guī)劃計劃工作新局面，為實現(xiàn)水利更好更快發(fā)展作出新的更大貢獻(xiàn)，以優(yōu)異成績迎接黨的十八大勝利召開！

1.10 雙熒光素酶報告實驗

構(gòu)建HMGB2野生型及突變型質(zhì)粒，將細(xì)胞接種于6孔板中，分別或同時轉(zhuǎn)染HMGB2野生型質(zhì)粒、HMGB2突變型質(zhì)粒、mimics-NC和let-7g-3p mimics，用雙熒光素酶報告基因試劑盒檢測各組熒光素酶活性。

1.11 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件和GraphPad Prism9進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間比較采用檢驗，以＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 let-7g-3p在膀胱癌中的表達(dá)水平

與癌旁組織相比，膀胱癌組織中l(wèi)et-7g-3p的表達(dá)水平下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.01，圖1）。

CCK8 增殖實驗顯示，與mimics-NC 組相比，let-7g-3p mimics組的T24細(xì)胞的增殖能力明顯減弱（＜0.01，圖4A）；Transwell遷移和侵襲實驗顯示，細(xì)胞的遷移和侵襲能力均減弱（＜0.01，圖4B、C）；流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，let-7g-3p mimics組的T24細(xì)胞凋亡增加（＜0.01，圖4D）。反之，與inhibitor-NC組相比，let-7g-3p inhibitor組的T24細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力明顯增強，且凋亡減少。

2.2 let-7g-3p和HMGB2轉(zhuǎn)染效率的驗證

將miR-NC、let-7g-3p-mimics、let-7g-3p-inhibitor、si-NC以及si-HMGB2、轉(zhuǎn)染入膀胱癌細(xì)胞后，通過qRTPCR進(jìn)行了轉(zhuǎn)染效率的驗證，結(jié)果顯示T24細(xì)胞中l(wèi)et-7g-3p和HMGB2的表達(dá)水平被成功敲低和過表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.01，圖3）。

2.3 let-7g-3p對膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及凋亡的影響

與正常尿路上皮細(xì)胞SV-HUC-1相比，膀胱癌細(xì)胞系T24、5637和EJ細(xì)胞中l(wèi)et-7g-3p的表達(dá)水平下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.01，圖2）。其中T24細(xì)胞的表達(dá)水平最低，且在膀胱癌細(xì)胞系中，T24侵襲性較強，因此后續(xù)選擇T24細(xì)胞作為實驗對象。

4.孵化器企業(yè)對政府的扶持政策的意見和建議。本調(diào)查問題，16家孵化器沒有回答。9家孵化器分別建議：制定更多的優(yōu)惠政策、加大扶持力度尤其是對初創(chuàng)小微企業(yè)的扶持力度、幫助孵化器形成產(chǎn)學(xué)研對接的產(chǎn)業(yè)鏈、繼續(xù)對創(chuàng)新企業(yè)租金補貼、提供一站式服務(wù)的營商環(huán)境、完善生活配套、營造招商氛圍等。

2.3 let-7g-3p和HMGB2的靶向關(guān)系

為尋找let-7g-3p下游的目的基因，我們對過表達(dá)let-7g-3p的T24細(xì)胞進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序，同組樣本的生物學(xué)重復(fù)相關(guān)性均在99%以上，經(jīng)過測序質(zhì)量控制，共得到73.38 Gb的總堿基數(shù)，結(jié)果顯示let-7g-3p mimics組與mir-NC組相比共有1597個差異表達(dá)的基因，其中有718個上調(diào)基因和879個下調(diào)基因（圖5A）。接著以let-7g-3p為結(jié)合靶點，從Targetscan，MiRDB和miRTabase這3個在線數(shù)據(jù)庫中獲取了let-7g-3p的下游目的基因并取交集，最終共有31個基因納入考慮（圖5B）。其中，HMGB2基因在測序結(jié)果中顯示表達(dá)下調(diào)，并且在線數(shù)據(jù)庫都表明let-7g-3p和HMGB2之間存在結(jié)合位點（圖5C、D），因此，我們選擇HMGB2作為let-7g-3p的下游靶標(biāo)并進(jìn)行了進(jìn)一步的驗證。

雙熒光素酶報告實驗的結(jié)果顯示，在野生型HMGB2中，轉(zhuǎn)染let-7g-3p mimics 的293T細(xì)胞的熒光素酶活性顯著降低（＜0.01），同時在突變型HMGB2中，兩者之間無明顯差異（＞0.05，圖6）。為明確let-7g-3p如何調(diào)控HMGB2，進(jìn)一步進(jìn)行qRT-PCR實驗，結(jié)果顯示，let-7g-3p mimics 組的HMGB2 的表達(dá)水平與mimics-NC組相比明顯下調(diào)（＜0.001，圖7A），Western blot 結(jié)果顯示let-7g-3p 組的HMGB2 的蛋白水平與mimics-NC組相比下調(diào)（＜0.01，圖7B、C）。而在過表達(dá)HMGB2后let-7g-3p的表達(dá)水平無明顯變化（＞0.05，圖7D）。

2.4 HMGB2在膀胱癌細(xì)胞中的表達(dá)水平

與正常尿路上皮細(xì)胞SV-HUC-1相比，膀胱癌細(xì)胞系T24、5637和EJ細(xì)胞中HMGB2的表達(dá)水平上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（＜0.01，圖8）。

傳統(tǒng)的電子提花機(jī)控制轉(zhuǎn)接口傳送數(shù)據(jù)的方法有兩種.最常見的適合小型提花機(jī)的一種方法是將每一緯的N個數(shù)據(jù)串行移位傳送至電磁提花裝置中，循環(huán)重復(fù)；另外一種方法是將每一緯的數(shù)據(jù)先分流到M個I/O接口板上，然后M個I/O接口板中的N/M個數(shù)據(jù)同時串行移位到每個電磁驅(qū)動板上，再循環(huán)重復(fù)[10].對于大針數(shù)的電子提花機(jī)，數(shù)據(jù)位有10 000多位，第一種方法完全采用串行移位傳送，傳輸速度太慢，并且出錯概率大；第二種方法雖然采用了數(shù)據(jù)分流，減少了串行移位的數(shù)據(jù)量，但是每一緯的數(shù)據(jù)都要先分流到M個I/O接口板上，消耗的時間多，對提高傳輸速度的效果不明顯.

2.5 let-7g-3p靶向HMGB2對膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲及凋亡的影響

CCK8細(xì)胞增殖實驗顯示敲低HMGB2部分逆轉(zhuǎn)了敲低let-7g-3p促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞增殖的作用（＜0.01，圖9A）；Transwell遷移和侵襲實驗顯示，敲低HMGB2同樣能夠逆轉(zhuǎn)敲低let-7g-3p 促進(jìn)膀胱癌細(xì)胞遷移和侵襲的作用（＜0.01，圖9B、C）；流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示，敲低HMGB2可以增加let-7g-3p抑制的細(xì)胞凋亡（＜0.01，圖9D）。

2.6 let-7g-3p下游靶基因的GO和KEGG通路富集分析

收集轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞，取5～10萬重懸的細(xì)胞，1000 g離心5 min，棄上清。195 μLAnnexin V-FITC結(jié)合液重懸細(xì)胞。加入5 μLAnnexin V-FITC，10 μL碘化丙啶染色液，混勻后室溫孵育10～20 min，流式上機(jī)檢測，實驗重復(fù)3次。

根據(jù)說明書，使用Trizol試劑從組織和細(xì)胞中分離總RNA，反轉(zhuǎn)錄成互補脫氧核糖核酸（cDNA），PowerUp SYBR Green Master MIX PCR試劑盒用于測定let-7g-3p 的表達(dá)水平（U6 作為內(nèi)參基因），SYBR Green Mix 用于測定HMGB2（GAPDH作為內(nèi)參基因）的表達(dá)水平。95 ℃預(yù)變性1 min 后，95 ℃變性20 s，60 ℃退火20 s，共40個循環(huán)，2法用于計算目的基因的相對表達(dá)量。使用Primer 5.0設(shè)計引物（表2）。

3 討論

本研究首次揭示了let-7g-3p在調(diào)節(jié)膀胱癌細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡中的功能作用及其下游的相關(guān)分子機(jī)制，通過qRT-PCR實驗發(fā)現(xiàn)let-7g-3p在膀胱癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)明顯下調(diào)，之后在過表達(dá)let-7g-3p后顯示膀胱癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力受到抑制同時凋亡增多，下調(diào)let-7g-3p后結(jié)果相反。以上結(jié)果表明let-7g-3p可以抑制膀胱癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。在之前的研究中，circ_0001017能夠通過靶向let-7g-3p抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、EMT、遷移和侵襲，促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡，該結(jié)果證明在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，let-7g-3p扮演著促癌因子的作用，這可能是由于let-7g-3p在不同腫瘤細(xì)胞中發(fā)揮相反的作用效果。

miRNA 通常靶向一個或多個mRNA，通過與下游的目的mRNA 特異性堿基配對引起mRNA的直接降解或翻譯抑制，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)，從而調(diào)控細(xì)胞分化、生長、增殖、遷移和凋亡等。目前發(fā)現(xiàn)微小核糖核酸參與了哺乳動物基因組中超過50%的mRNA的調(diào)控。因此，為進(jìn)一步探討let-7g-3p的作用機(jī)制，我們對過表達(dá)let-7g-3p的膀胱癌細(xì)胞進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測序，發(fā)現(xiàn)HMGB2基因的表達(dá)量降低，并且在3個在線生物信息學(xué)分析的網(wǎng)站中，均表明HMGB2的3’UTR區(qū)存在let-7g-3p的堿基結(jié)合位點。同時，雙熒光素酶報告實驗驗證了let-7g-3p和HMGB2的靶向關(guān)系。本研究qRT-PCR和Western blot進(jìn)一步證實過表達(dá)let-7g-3p可以下調(diào)HMGB2的表達(dá)水平。基于以上結(jié)果，推測let-7g-3p通過負(fù)性調(diào)控HMGB2來抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力，并促進(jìn)凋亡。HMGB2在膀胱癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平均明顯增高，在敲低HMGB2基因的膀胱癌細(xì)胞中，同時敲低let-7g-3p進(jìn)行Rescue實驗，實驗結(jié)果表明過敲低HMGB2基因可以部分挽救敲低let-7g-3p對膀胱癌細(xì)胞生長的的促進(jìn)作用。以上實驗證明了let-7g-3p是通過負(fù)性調(diào)控HMGB2來抑制膀胱癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。

為了確保鐵路運輸企業(yè)全面預(yù)算管理的順利推進(jìn)，應(yīng)該強化鐵路運輸企業(yè)全面預(yù)算管理的基礎(chǔ)工作。鐵路運輸企業(yè)的管理層在管理過程中應(yīng)該堅持全面預(yù)算管理理念，充分運用全面預(yù)算管理這種集成管理模式，對鐵路運輸企業(yè)的業(yè)務(wù)管理和財務(wù)管理活動進(jìn)行整合。同時，應(yīng)該完善鐵路運輸企業(yè)的內(nèi)部控制管理制度、財務(wù)會計核算制度、全面預(yù)算管理制度等，加強對與預(yù)算相關(guān)的各項基礎(chǔ)數(shù)據(jù)的全面記錄、統(tǒng)計以及核算分析等，為預(yù)算管控提供良好基礎(chǔ)。此外，還應(yīng)該加強內(nèi)部的信息化管理，對預(yù)算編制、執(zhí)行、監(jiān)控以及評估進(jìn)行動態(tài)管理。

高遷移率族盒蛋白（HMGB）在建立活性或非活性染色質(zhì)方面發(fā)揮著重要功能。哺乳動物HMGB 蛋白包含兩個HMG 盒結(jié)構(gòu)域和一個酸性C 末端。HMGB 蛋白可以進(jìn)行翻譯后修飾，以影響它們與DNA、蛋白質(zhì)伴侶和細(xì)胞定位的相互作用。例如，HMGB1 可以進(jìn)行乙?；?、磷酸化、甲基化、核糖基化和氧化，從而產(chǎn)生一系列復(fù)雜的潛在調(diào)控機(jī)制。有研究發(fā)現(xiàn)，HMGB2在肺腺癌組織中高表達(dá)，與肺腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，該機(jī)制可能是由于HMGB2參與了細(xì)胞周期的調(diào)控使得細(xì)胞的增殖能力增強，并且在肝細(xì)胞癌、胰腺癌和皮膚癌等不同類型的人類癌癥中均發(fā)現(xiàn)了HMGB2 的過表達(dá)。同時，有研究表明HMGB2的表達(dá)水平在膀胱癌患者中高度增加，并且HMGB2 的過表達(dá)與膀胱腫瘤的進(jìn)展和血管生成顯著相關(guān)，這與本研究結(jié)果相一致。

研究證實了let-7g-3p的過表達(dá)可以抑制膀胱癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力，并促進(jìn)凋亡，但let-7g-3p在膀胱癌進(jìn)展中的潛在機(jī)制仍未闡明。同時，過表達(dá)let-7g-3p組的膀胱癌細(xì)胞的增殖率明顯低于對照組，且凋亡率明顯高于對照組。因此，推斷l(xiāng)et-7g-3p主要通過抑制細(xì)胞增殖和促進(jìn)細(xì)胞凋亡來干擾膀胱癌細(xì)胞的生長。通過對轉(zhuǎn)錄組測序的結(jié)果進(jìn)行GO和KEGG富集分析，結(jié)果表明，let-7g-3p的下游靶基因參與了與細(xì)胞進(jìn)程等相關(guān)的途徑，并且主要富集于細(xì)胞凋亡以及P53、TNF等信號通路中。P53作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，由位于人類17號染色體短臂（17p13.1）的TP53基因位點編碼，在誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡中起到重要作用。目前，已有多種miRNA被證實通過靶向P53來影響腫瘤進(jìn)展。一項關(guān)于體細(xì)胞DNA突變分析表明，近一半的高級別肌肉浸潤性膀胱癌具有TP53突變，并且TP53功能在76%的患者中失活。因其在腫瘤細(xì)胞中有超過50%的突變率，通過誘導(dǎo)突變p53 降解，從而改善其促腫瘤功能已經(jīng)腫瘤靶向治療的一項新的策略。以上分析表明let-7g-3p可能主要通過靶向HMGB2/P53抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生壞死性凋亡來抑制膀胱癌細(xì)胞的生物學(xué)行為，但這仍然需要進(jìn)一步的實驗驗證。

式中：柴油機(jī)煙氣的比熱容通過經(jīng)驗公式計算得出［19］，ce1=0.808 kJ/（kg·℃），ρe1=0.627 kg/m3；ce2=0.762 kJ/（kg·℃），ρe2=0.892 kg/m3。

不久寒假終了，我就回到哈爾濱的學(xué)校念書去了?？墒歉绺鐩]有同來，因為他上半年生了點病，曾在醫(yī)院里休養(yǎng)了一些時候，這次伯父主張他再請兩個月的假，留在家里。

綜上所述，本研究證實了MiRNA-let-7g-3p 靶向負(fù)性調(diào)控HMGB2抑制膀胱癌細(xì)胞的生物學(xué)行為，這可能為膀胱癌細(xì)胞的治療和預(yù)后提供了新的靶點，有關(guān)let-7g-3p/HMGB2軸的下游機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。