刺五加提取物對(duì)人神經(jīng)細(xì)胞SH-SY5Y氧糖剝奪再灌注損傷的保護(hù)作用研究＊

王文杰，路嬌嬌，馬凱豐，王鳳格，馬 擎，華 欣

（東北林業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院 哈爾濱 150006）

1 前言

腦卒中（Stroke）是危害人類生命健康的三大疾病之一，該疾病由顱內(nèi)血液循環(huán)受阻引起，導(dǎo)致腦組織損傷及功能失常[1]。腦卒中分為缺血性和出血性兩類，其中，臨床上以缺血性腦卒中最為常見[2]。目前，缺血性腦卒中的治療手段主要是包括溶栓及機(jī)械取栓在內(nèi)的血管再通，但血管再通后血液中氧、糖含量的瞬間升高，會(huì)破壞缺血時(shí)大腦通過側(cè)支循環(huán)趨向建立的新平衡，進(jìn)而引發(fā)對(duì)腦組織的二次損傷，即腦缺血/再灌注損傷，這一損傷是腦缺血病理和治療過程中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)[3-4]。因此，尋找、開發(fā)能夠降低腦缺血/再灌注損傷的藥物對(duì)治療缺血性腦卒中來說意義重大。

目前，應(yīng)對(duì)腦缺血再灌注損傷的手段主要是使用神經(jīng)保護(hù)劑，包括:抗氧化藥物依達(dá)拉奉，依達(dá)拉奉能有效減少缺血區(qū)域氧自由基含量，抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡，但其會(huì)導(dǎo)致肝腎功能異常、皮疹等不良反應(yīng)；抑制神經(jīng)興奮毒性藥物如N-甲基-D-天冬氨酸受體阻斷劑等，存在腦保護(hù)作用有限且不良反應(yīng)嚴(yán)重等問題；其他藥物，如抗炎藥物、神經(jīng)生長(zhǎng)因子等[5-6]。此外，多靶點(diǎn)藥物丁基苯酞是一種芹菜提取物，是我國第三個(gè)自主產(chǎn)權(quán)化學(xué)藥物，能夠改善能量代謝、減輕腦缺血再灌注后神經(jīng)損傷，丁基苯酞的發(fā)現(xiàn)，提示了天然產(chǎn)物治療腦缺血再灌注損傷有巨大潛力[7-8]。然而目前治療腦缺血再灌注損傷仍存在藥物稀少、大部分藥物副作用嚴(yán)重等問題。

刺五加（Acanthopanax senticosus( Rupr. Maxim.)Harms）是一種歷史悠久、應(yīng)用廣泛的中藥材，主要分布在我國東北、河北、山西等地?！睹t(yī)別錄》認(rèn)為刺五加具有“補(bǔ)中，益精，堅(jiān)筋骨，強(qiáng)意志”等功效，將其視為補(bǔ)氣安神的良藥[9]。多項(xiàng)研究表明刺五加含有多種活性成分，包括萜類、黃酮類、皂苷類、多糖類、香豆素類、木脂素類等[10]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，刺五加藥材及相關(guān)制劑對(duì)缺血性腦卒中有一定的治療效果，例如刺五加注射液（主成分為黃酮類化合物），能夠促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞生長(zhǎng)分化及增殖、參與調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮和抑制過程、抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡；刺五加葉皂苷等皂苷類化合物能夠抗氧化、清除一氧化氮（NO）、抑制炎癥反應(yīng)[11-12]。雖然針對(duì)刺五加藥理的相關(guān)研究日益增多，但其緩解缺血性腦卒中導(dǎo)致的神經(jīng)損傷的成分及機(jī)制仍未被探明。

目前，缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)制仍不完全清晰，其中公認(rèn)的相關(guān)機(jī)制有細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、能量代謝紊亂等[13]。本研究通過體外建立SHSY5Y 細(xì)胞的氧糖剝奪再灌注（Oxygen and Glucose Deprivation/Reperfusion，OGD/R）模型來模擬腦缺血/再灌注過程，發(fā)現(xiàn)一種刺五加提取物可以減輕SH-SY5Y細(xì)胞氧糖剝奪再灌注后的損傷，并通過MTT 法檢測(cè)細(xì)胞活力、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率、熒光顯微鏡檢測(cè)活性氧水平、檢測(cè)胞內(nèi)抗氧化酶活力及脂質(zhì)氧化產(chǎn)物、檢測(cè)胞內(nèi)ATP 水平等手段，證實(shí)了其通過抑制氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡和保護(hù)線粒體功能來實(shí)現(xiàn)對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的保護(hù)作用。

2 實(shí)驗(yàn)材料

2.1 細(xì)胞與試劑

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞株（中科院上海細(xì)胞庫）、刺五加中藥飲片（黑龍江德順長(zhǎng)中藥飲片有限公司，用藥部位為刺五加的根和根莖，經(jīng)東北林業(yè)大學(xué)藥用植物分類學(xué)專家鄭寶江副教授鑒定為正品）、DMEM/F12 培養(yǎng)基（Hyclone, SH30023.01）、DMEM 無糖培養(yǎng)基（Procell, PM150271）、胎牛血清（Gibco,1099141）、青-鏈霉素溶液（Hyclone,SV30010）、0.25%胰蛋白酶（Gibco, 25200072）、PBS 磷酸鹽緩沖溶液（Hyclone，SH30256）、MTT（索萊寶, M8180）、95%氮?dú)?5%二氧化碳混合氣體（哈爾濱卿華氣體）、活性氧檢測(cè)試劑盒(南京建成生物公司，E004-1-1)、Annexin V-PI 細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（江蘇凱基生物公司，KGA106）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）活性檢測(cè)試劑盒（南京建成生物公司，A001-3-2）、丙二醛（Malondialdehyde，MDA）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物公司，A001-4-1）、BCA 蛋白定量試劑盒（索萊寶，PC0020）。

2.2 儀器

二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱（德國賓得）、超凈工作臺(tái)（上海博迅）、多功能酶標(biāo)儀（瑞士Tecan Spark）、普通光學(xué)顯微鏡（天津微儀）、熒光顯微鏡（日本Olympus）、流式細(xì)胞儀（美國貝克曼）、缺氧密封小室（加拿大Steamcell）、電泳儀（美國BIO RAD）。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 樣品制備

將刺五加飲片粉碎成粉，加15倍體積80%的乙醇溶液并超聲，然后進(jìn)行抽濾并收集濾液，將濾渣再次用15 倍無水乙醇超聲提取，抽濾后收集濾液，濾渣再次重復(fù)上述操作。合并三次抽濾得到的濾液，旋干得到刺五加粗提物浸膏。用蒸餾水溶解刺五加粗提物浸膏，再依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，最后將水相凍干得到刺五加提取物，產(chǎn)率為2.6%。

3.2 細(xì)胞培養(yǎng)

將細(xì)胞復(fù)蘇后，用含10%胎牛血清（FBS）和1%青鏈霉素雙抗的DMEM/F12 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于培養(yǎng)箱在37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)。兩次傳代確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)后，用于構(gòu)造損傷模型。

3.3 SH-SY5Y細(xì)胞氧糖剝奪再灌注模型建立

取對(duì)數(shù)期細(xì)胞接種于孔板中，培養(yǎng)24 h 后，用無糖DMEM 培養(yǎng)基清洗細(xì)胞，并換用無糖培養(yǎng)基，通以95%氮?dú)?5%二氧化碳混合氣體，在缺氧條件下培養(yǎng)6 h，然后再灌注恢復(fù)正常氧糖水平12 h。

3.4 實(shí)驗(yàn)分組及給藥

SH-SY5Y 細(xì)胞在DMEM/F12 培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)12 h后，分為5 組給藥，分別為：空白組（Natural Control，NC），模型組（缺氧6 h，再灌注12 h），陽性對(duì)照組（80 μM 依達(dá)拉奉Edaravone+氧糖剝奪再灌注）、刺五加提取物中劑量組（500 μg·mL-1+氧糖剝奪再灌注）、刺五加提取物高劑量組（1000 μg·mL-1+氧糖剝奪再灌注）。各給藥組需在藥物孵育12 h后進(jìn)行氧糖剝奪再灌注。

3.5 細(xì)胞存活率測(cè)定

利用MTT 法進(jìn)行細(xì)胞存活率測(cè)定。按8000 個(gè)/孔的密度將對(duì)數(shù)期細(xì)胞接種于96孔板內(nèi)，12 h后分別加入陽性對(duì)照藥物依達(dá)拉奉和不同濃度的刺五加提取物孵育12 h，缺氧缺糖6 h 后再灌注12 h。每孔加100 μL 0.5 mg·mL-1的含MTT 培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中避光孵育4 h后，用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔吸光度值OD490。

細(xì)胞存活率（%）= 樣品組OD490/空白組OD490×100%

3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡

按2×105個(gè)/孔的密度將對(duì)數(shù)期細(xì)胞接種于6 孔板中，培養(yǎng)12 h后加不同濃度的樣品孵育12 h，缺氧缺糖6 h后再灌注12 h。分別收集每組細(xì)胞，按試劑盒說明書染色處理后，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

3.7 熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS

細(xì)胞處理同步驟3.6。按試劑盒說明書染色處理后，分別用熒光顯微鏡和酶標(biāo)儀進(jìn)行觀察和定量。

3.8 細(xì)胞內(nèi)SOD、MDA、ATP水平檢測(cè)

細(xì)胞處理同步驟3.6。分別進(jìn)行BCA 蛋白定量并嚴(yán)格按試劑盒步驟進(jìn)行檢測(cè)操作后，用多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行SOD、MDA、ATP的含量檢測(cè)。

3.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

所有數(shù)據(jù)用GraphPad Prism 9和SPSS 24.0進(jìn)行分析。通過單因素方差分析統(tǒng)計(jì)，P＞0.05 表示不具有顯著性差異，0.01 ＜P＜0.05 表示具有顯著性差異，P＜0.01表示具有極顯著性差異。

4 結(jié)果

4.1 刺五加提取物對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞活力的影響

利用MTT 法，對(duì)各處理組細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞活力檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明（圖1），125 μg·mL-1，250 μg·mL-1，500 μg·mL-1，1000 μg·mL-1，2000 μg·mL-1，4000 μg·mL-1的刺五加提取物處理組的細(xì)胞活力（%）分別為100.00 ± 3.97，109.12 ± 2.36，110.20 ± 4.31，114.45 ±3.44，113.81 ± 2.36，108.50 ± 3.08，106.45 ± 5.90。細(xì)胞毒性以生物相容性國際標(biāo)準(zhǔn)（ISO10993-5）為根據(jù)進(jìn)行判定可得，125 μg·mL-1，250 μg·mL-1，500 μg·mL-1，1000 μg·mL-1，2000 μg·mL-1，4000 μg·mL-1的刺五加提取物對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞均無毒性（各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞活力均高于空白組細(xì)胞活力的70%）。而且，對(duì)比正常組，各刺五加提取物處理組的SH-SY5Y細(xì)胞活力均有提高，并在500 μg·mL-1和1000 μg·mL-1組顯示出極顯著性差異。

圖1 不同濃度的刺五加提取物對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞活力的影響

4.2 刺五加提取物能減輕氧糖剝奪再灌注（OGD/R）引起的SH-SY5Y細(xì)胞損傷

根據(jù)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，刺五加提取物在低于4000 μg·mL-1濃度時(shí)對(duì)SH-SY5Y 細(xì)胞沒有毒性。因此選取低于4000 μg·mL-1濃度的刺五加提取物進(jìn)行了SH-SY5Y 細(xì)胞OGD/R 實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，氧糖剝奪模型組的細(xì)胞活力是空白組的52%，且在普通光學(xué)顯微鏡下可觀察到胞體回縮、樹突結(jié)構(gòu)減少甚至消失，證明造模成功（圖2）。而陽性對(duì)照組、125 μg·mL-1、250 μg·mL-1、500 μg·mL-1、1000 μg·mL-1、2000 μg·mL-1、4000 μg·mL-1的刺五加提取物處理組的細(xì)胞活力（%）分別為68.10 ± 0.58，56.11 ± 0.58，67.18 ±3.69，68 ± 3.80，71.91 ± 7.19，67.31 ± 3.14，62.99 ±0.81?？梢钥闯?，當(dāng)給藥組刺五加提取物濃度低于1000 μg·mL-1時(shí)，細(xì)胞活力隨樣品濃度升高而上升，呈現(xiàn)出濃度依賴性，且細(xì)胞形態(tài)有所恢復(fù)，1000 μg·mL-1的刺五加提取物對(duì)比模型組細(xì)胞活力能提升20%，效果優(yōu)于陽性對(duì)照組依達(dá)拉奉（80 μM）；刺五加提取物濃度高于1000 μg·mL-1時(shí)，細(xì)胞活力不再上升甚至回落，表明1000 μg·mL-1為減輕損傷的最佳濃度。故選擇500 μg·mL-1和1000 μg·mL-1兩個(gè)濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)給藥濃度（圖3）。

圖2 各處理組普通光學(xué)顯微鏡觀察

圖3 不同濃度的刺五加提取物對(duì)OGD/R損傷下的SH-SY5Y細(xì)胞活力的影響

4.3 刺五加提取物能減輕OGD/R 引起的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡

凋亡是公認(rèn)的腦缺血再灌注損傷的重要機(jī)制之一，為了探究刺五加提取物與凋亡之間的關(guān)系，我們采用了流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了早期和晚期凋亡指標(biāo)[14]。各處理組的Annexin V-PI 凋亡檢測(cè)結(jié)果如圖4 所示，散點(diǎn)圖左上、右上、左下、右下部分分別代表處于壞死、晚凋、正常、早凋狀態(tài)的細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，空白對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組、500 μg·mL-1、1000 μg·mL-1的刺五加提取物處理組的凋亡率（%）分別為0.95 ±0.15，10.45 ± 1.34，1.46 ± 0.57，2.2 ± 0.51，1.47 ± 0.34。模型組處于凋亡時(shí)期（早凋+晚凋）的細(xì)胞和死細(xì)胞相較于空白組有明顯增加。而刺五加提取物處理組（500 μg·mL-1和1000 μg·mL-1）對(duì)比模型組處于凋亡時(shí)期（早凋+晚凋）的細(xì)胞和死細(xì)胞有明顯下降，顯示出極顯著性差異，說明刺五加能顯著減輕OGD/R 引起的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡。

圖4 各處理組Annexin V-PI凋亡流式檢測(cè)

4.4 刺五加提取物能減輕OGD/R 引起的SH-SY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激

細(xì)胞內(nèi)的活性氧（ROS）水平采用DCFH-DA（2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate，活性氧探針）染色進(jìn)行標(biāo)記后的檢測(cè)結(jié)果如圖5所示，模型組、陽性對(duì)照組、500、1000 μg·mL-1的刺五加提取物處理組相對(duì)于空白對(duì)照組的熒光強(qiáng)度（%）分別為285.98 ± 4.36,184.44 ± 1.21, 200.18 ± 12.29, 185.96 ± 4.12。由此可見，模型組熒光強(qiáng)度明顯高于空白組，氧糖剝奪損傷顯著提高了細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平（P＜0.01）；而陽性對(duì)照（依達(dá)拉奉）組和刺五加提取物處理組熒光強(qiáng)度相較于模型組明顯降低，1000 μg·mL-1刺五加提取物的效果優(yōu)于500 μg·mL-1的刺五加提取物。除此之外，抗氧化酶SOD 活力檢測(cè)和丙二醛MDA 含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示（表1），模型組SOD 活力下降，抗氧化能力下降，同時(shí)MDA 升高即受到氧自由基攻擊程度升高；而刺五加提取物處理組（500 μg·mL-1和1000 μg·mL-1）對(duì)比模型組，抗氧化酶SOD活力顯著提高且胞內(nèi)MDA含量下降，表明刺五加提取物能提高細(xì)胞抗氧化能力，并減輕細(xì)胞受氧自由基攻擊程度。由此可見，刺五加提取物能減輕OGD/R引起的氧化應(yīng)激。

表1 各處理組SOD活力及MDA含量

圖5 各處理組ROS水平檢測(cè)

4.5 刺五加提取物能保護(hù)SH-SY5Y細(xì)胞線粒體功能

ATP 是腦組織的能量來源，是維持腦細(xì)胞功能的重要物質(zhì)。線粒體的有氧呼吸是ATP 產(chǎn)生途徑，因此線粒體功能變化會(huì)導(dǎo)致ATP 含量的變化，ATP 的含量可體現(xiàn)線粒體功能的正常與否[15]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，空白對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組、500 μg·mL-1、1000 μg·mL-1的刺五加提取物處理組的胞內(nèi)ATP 含量分別為16.27 ± 0.18, 13.75 ± 0.10, 15.72 ± 0.35, 15.02 ±0.39, 15.50 ± 0.81 μmol·mg-1prot（圖6）。模型組較于空白組ATP 含量顯著降低，表明模型組線粒體功能失常。而刺五加提取物處理組（1000 μg·mL-1）對(duì)比模型組，ATP含量顯著提高，表明1000 μg·mL-1的刺五加提取物可減輕氧糖剝奪損傷對(duì)SH-SY5Y 細(xì)胞線粒體功能的抑制作用。

圖6 各處理組ATP含量檢測(cè)

5 討論

缺血性腦卒中的發(fā)生會(huì)造成供血受阻區(qū)域的腦細(xì)胞壞死，而圍繞梗死核心的缺血半暗帶的側(cè)支循環(huán)使得該區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞損傷在一定程度上可逆，而血管再通后的再灌注會(huì)進(jìn)一步損傷該區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞[16-17]，因此，保護(hù)該區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞、減輕腦缺血再灌注導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞損傷，對(duì)于缺血性腦卒中治療來說十分重要。

缺血半暗帶區(qū)域的缺血再灌注損傷引起的細(xì)胞死亡主要以凋亡為主，區(qū)別于壞死的無序死亡，凋亡是對(duì)生理病理信號(hào)、環(huán)境變化或損傷產(chǎn)生的有序變化死亡過程[18]。因此有希望通過干預(yù)凋亡過程，來延緩或阻止凋亡細(xì)胞走向死亡。

SH-SY5Y 人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系因其細(xì)胞形態(tài)、生理和生化功能與正常神經(jīng)元相似，并且可傳代培養(yǎng)，是研究神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的重要工具，被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)病機(jī)制和藥物作用機(jī)制方面的研究[19]。因此本研究選用了SH-SY5Y 細(xì)胞進(jìn)行氧糖剝奪再灌注模型的構(gòu)建及后續(xù)研究。

中藥材刺五加含有皂苷、黃酮、多糖、揮發(fā)油等多種物質(zhì)，使其具有保護(hù)心腦血管、增強(qiáng)免疫、抗疲勞等活性，而刺五加的提取方法直接影響提取物的活性有無及高低。乙醇提取法加以超聲輔助是中藥材及天然產(chǎn)物提取的常用方法，該法制備的中藥材提取物常具備較高藥理活性[20-21]。因此本研究采用該法制備刺五加粗提物，并根據(jù)極性由小及大，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇對(duì)水溶后的粗提物進(jìn)行了萃取，得到了石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相四種極性的粗提物組分。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，刺五加粗提物的水相組分對(duì)SH-SY5Y 細(xì)胞氧糖剝奪再灌注損傷的保護(hù)活性最高，因此選用刺五加粗提物的水相組分作為本研究的樣品（即刺五加提取物）進(jìn)行后續(xù)研究。根據(jù)極性分析，刺五加提取物中起保護(hù)作用的活性成分可能為皂苷類、生物堿類及黃酮的糖基綴合物。

本研究發(fā)現(xiàn)，刺五加提取物能顯著降低OGD/R 實(shí)驗(yàn)中SH-SY5Y細(xì)胞的凋亡率及促凋亡蛋白的表達(dá)，表明刺五加提取物能減輕OGD/R 引起的SH-SY5Y 細(xì)胞凋亡。

氧化應(yīng)激是腦缺血再灌注損傷級(jí)聯(lián)機(jī)制中的重要環(huán)節(jié)。腦缺血再灌注會(huì)破壞細(xì)胞內(nèi)原本的氧化還原動(dòng)態(tài)平衡，胞內(nèi)自由基含量遠(yuǎn)高于正常的生理需求量，與此同時(shí)，胞內(nèi)抗氧化酶體系失常使得過量自由基無法被及時(shí)清除，導(dǎo)致氧化應(yīng)激事件[22]。因此，本研究嘗試對(duì)刺五加提取物是否能改善缺血再灌注過程中氧化應(yīng)激進(jìn)行了探究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，刺五加提取物能夠顯著提升胞內(nèi)抗氧化酶SOD 活力、減少脂質(zhì)過氧化物MDA 產(chǎn)生，降低活性氧水平，表明刺五加提取物具有一定的抗氧化能力，能夠減輕OGD/R 引起的SHSY5Y細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷。

氧化應(yīng)激會(huì)使線粒體功能失常，影響細(xì)胞能量代謝，進(jìn)而加劇細(xì)胞損傷。本研究通過檢測(cè)ATP 水平來探究刺五加提取物在OGD/R 條件下對(duì)線粒體功能的影響。結(jié)果顯示，刺五加提取物能顯著提升ATP 含量，表明刺五加提取物對(duì)OGD/R 條件下的線粒體有一定的保護(hù)作用。

上述研究結(jié)果顯示，刺五加提取物可干預(yù)缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)的多個(gè)階段。在缺血性腦卒中神經(jīng)保護(hù)劑研究面臨著大量單一靶點(diǎn)激活或抑制藥物臨床轉(zhuǎn)化失敗的困境下，有必要將一部分研究轉(zhuǎn)向?qū)ふ叶嘈?、多靶點(diǎn)神經(jīng)保護(hù)劑[23]。而王擁軍等人進(jìn)行的依達(dá)拉奉右莰醇作為神經(jīng)保護(hù)劑治療缺血性腦卒中的研究表明，依達(dá)拉奉作為自由基清除劑與右莰醇作為抗炎癥藥物的多靶點(diǎn)藥物組合，能有效干預(yù)缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng)多個(gè)階段，阻止病理過程瀑布式發(fā)展，并在III 期臨床試驗(yàn)中取得了積極的結(jié)果[24]，這也驗(yàn)證了進(jìn)行多效、多靶點(diǎn)神經(jīng)保護(hù)劑研究思路的合理性，同時(shí)為刺五加提取物的進(jìn)一步研究提供了啟示。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)了一種刺五加提取物具有減輕SH-SY5Y細(xì)胞氧糖剝奪后再灌注損傷的作用，并證實(shí)其通過抑制氧化應(yīng)激、保護(hù)線粒體功能和抑制細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用。但其抑制氧化應(yīng)激、保護(hù)線粒體功能和抑制細(xì)胞凋亡的具體通路及分子機(jī)制仍需要進(jìn)一步探究，這也是我們課題接下來的一個(gè)重點(diǎn)研究方向。