栗斑腹鹀和三道眉草鹀物種分化研究

張 雪，張立世，尚偉平，嚴(yán)蓉飛，姜云壘，李 時(shí)

(1.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長春 130118；2.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林 長春 130118)

隔離是物種分化的條件之一.一般而言，新物種的形成，先是不同種群間由于某種原因發(fā)生了地理隔離，而后各種群內(nèi)的基因型和表型受到選擇壓力的影響而朝著不同的方向發(fā)生適應(yīng)性進(jìn)化，最終出現(xiàn)生殖隔離形成新的物種.但對(duì)于分布區(qū)域距離較近的物種而言，性別隔離則可能是促進(jìn)其發(fā)生分化的主要原因.

物種形成是一個(gè)復(fù)雜而又漫長的過程[1].傳統(tǒng)的理論認(rèn)為，地理隔離是物種形成的前提，但越來越多的研究表明，地理隔離并不是影響物種形成的唯一因素，尤其是對(duì)于擴(kuò)散能力較強(qiáng)的鳥類而言，即使是在有基因流存在的情況下也能發(fā)生分化[2].近年來，研究者們已通過分子鐘推測(cè)出古氣候的變化也是驅(qū)動(dòng)物種分化的一個(gè)因素，例如：由于更新世冰期-間冰期的氣候波動(dòng)以及冰期避難所的存在，導(dǎo)致不同避難所內(nèi)的動(dòng)物種群發(fā)生了獨(dú)立的進(jìn)化，進(jìn)而形成了新的物種[3].有研究[4]表明，分布于北方地區(qū)的鳥類更易受到第四紀(jì)冰期的影響而被隔離在不同的破碎化地理分布區(qū)內(nèi)發(fā)生分化.此外，生態(tài)因子也是驅(qū)動(dòng)物種形成的一個(gè)重要因素，在沒有明顯的地理屏障存在的條件下，生活在不同環(huán)境中的同一物種的不同種群，由于對(duì)不同環(huán)境條件的適應(yīng)而產(chǎn)生了遺傳分歧，甚至出現(xiàn)生殖隔離形成新的物種[5-6].然而，對(duì)于分化時(shí)間未超過200萬年的年輕物種，在發(fā)生二次接觸時(shí)，可能會(huì)發(fā)生雜交并產(chǎn)生可育后代[7]，也可能將特定性狀不對(duì)稱地從一個(gè)物種向另一個(gè)物種滲透[8-10].

歷史上，栗斑腹鹀(Emberizajankowskii)曾是一種常見鳥類[11-12]，主要分布區(qū)包括中國、俄羅斯和朝鮮[12-13].在過去50年間，由于棲息地喪失和破碎化等原因?qū)е吕醢吒果c個(gè)體數(shù)量劇減，已于2010年被世界自然保護(hù)聯(lián)盟(IUCN)列為瀕危物種[14]，現(xiàn)存栗斑腹鹀種群主要分布于我國內(nèi)蒙古的中東部地區(qū).

三道眉草鹀(E.cioides)和栗斑腹鹀同為鹀屬鳥類，已有研究[15-16]表明二者為形態(tài)相似的近緣物種，且在栗斑腹鹀分布區(qū)內(nèi)為同域分布物種.然而，驅(qū)動(dòng)二者發(fā)生物種分化的主要原因，以及第四紀(jì)冰期是否對(duì)二者物種分化產(chǎn)生了影響仍不清楚.為此，本文通過分子鐘追溯了二者的分化時(shí)間，進(jìn)而推測(cè)了驅(qū)動(dòng)二者間發(fā)生物種分化的歷史原因；同時(shí)，通過形態(tài)特征和鳴聲特征研究了性別隔離對(duì)其物種分化的影響，研究結(jié)果將有助于更深入地認(rèn)識(shí)和了解生物演化的過程，并為第四紀(jì)冰期在物種分化中的作用提供更為廣泛的科學(xué)依據(jù).

1 材料和方法

1.1 野外采樣和數(shù)據(jù)收集

2012—2019年每年的4—7月，在內(nèi)蒙古自治區(qū)的通遼市和赤峰市等地，對(duì)栗斑腹鹀和三道眉草鹀的繁殖情況進(jìn)行調(diào)查，并采集形態(tài)數(shù)據(jù)、鳴聲數(shù)據(jù)和血液樣本.

在繁殖期內(nèi)，栗斑腹鹀和三道眉草鹀的雄鳥常站在樹梢進(jìn)行警戒，利用便攜式數(shù)字錄音機(jī)(TASCAM HD-P2)配以強(qiáng)指向話筒(Sennheiser MKH416 P48)對(duì)其進(jìn)行錄音，收集兩種鳥的鳴聲數(shù)據(jù).為避免對(duì)栗斑腹鹀和三道眉草鹀的繁殖產(chǎn)生過大影響，待雛鳥7～8日齡時(shí)，利用霧網(wǎng)捕捉成鳥，在翼下肱靜脈采集成鳥和雛鳥的血液樣本，每巢采集3～5只雛鳥.將采集到的血液樣本(10～20 μL/只)與1 mL無水乙醇混合于1.5 mL已滅菌的離心管中，于-20℃冰箱或液氮中保存，帶回實(shí)驗(yàn)室后保存于-80℃冰箱中.繁殖期結(jié)束后，利用霧網(wǎng)捕捉成鳥，并用電子秤和數(shù)顯游標(biāo)卡尺對(duì)捕獲成鳥的體重、體長、頭喙長、喙長、喙寬、喙高、頭長、頭高、頭寬、尾長、翅長、跗跖長、爪長和中趾長，共14個(gè)主要形態(tài)參數(shù)進(jìn)行測(cè)量，收集形態(tài)數(shù)據(jù).

收集完形態(tài)數(shù)據(jù)和血液樣本后，將成鳥原地放飛，并將雛鳥重新放回到所在巢中.根據(jù)后續(xù)的跟蹤觀察，采集血樣和形態(tài)測(cè)量均未造成雛鳥或成鳥的死亡.

2012—2019年，共采集到234份栗斑腹鹀血液樣本和60份三道眉草鹀血液樣本.2017—2019年，一共錄制到131只栗斑腹鹀的1 254個(gè)鳴聲和77只三道眉草鹀的759個(gè)鳴聲.共對(duì)79只栗斑腹鹀和20只三道眉草鹀成鳥的主要身體指標(biāo)進(jìn)行了測(cè)量.

1.2 鳴聲和形態(tài)數(shù)據(jù)分析

首先，利用SPSS中非參數(shù)檢驗(yàn)的1-樣本K-S(Kolmogorov-Smirnov)檢驗(yàn)，檢測(cè)所用形態(tài)數(shù)據(jù)和鳴聲數(shù)據(jù)是否符合正態(tài)分布.

對(duì)所有個(gè)體的形態(tài)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙尾T檢驗(yàn)(2-TailedtTest)，判別其性別二態(tài)性.因?yàn)槔醢吒果c和三道眉草鹀在繁殖期內(nèi)主要是雄鳥站在枝頭鳴唱、鳴叫和報(bào)警，因此錄制的鳴聲均為雄鳥鳴聲.由于本文所使用的均為雄鳥的鳴聲數(shù)據(jù)，因此，未對(duì)鳴聲數(shù)據(jù)進(jìn)行性別二態(tài)性檢測(cè).

如研究數(shù)據(jù)參數(shù)符合正態(tài)分布，則利用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)(Independent Samples Test)判定不同物種間各形態(tài)和聲信號(hào)參數(shù)是否存在顯著差異，根據(jù)給出的Levene方差齊性檢驗(yàn)結(jié)果判斷方差是否相等.如方差相等(P>0.05)，則依據(jù)假設(shè)方差相等時(shí)的顯著值判斷；如果方差不相等(P<0.05)，則依據(jù)假設(shè)方差不相等時(shí)的顯著值判斷.

如研究數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則利用非參數(shù)檢驗(yàn)中的兩獨(dú)立樣本檢驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè).

選取61只錄音效果好(栗斑腹鹀30只，三道眉草鹀31只)，且每只個(gè)體均具有10條以上可用聲波數(shù)據(jù)的樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析.鳴聲數(shù)據(jù)的非參數(shù)檢驗(yàn)結(jié)果顯示，所有的鳴聲數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布(P>0.05).

選擇2018—2019年記錄的14個(gè)形態(tài)參數(shù)的個(gè)體用于后續(xù)研究，包括栗斑腹鹀51只(雌性26只、雄性25只)，三道眉草鹀19只(雌性12只、雄性7只).各形態(tài)參數(shù)的1-樣本K-S正態(tài)分布檢驗(yàn)結(jié)果表明，栗斑腹鹀各形態(tài)參數(shù)中，除頭喙長和中趾長外，其余各形態(tài)參數(shù)均符合正態(tài)分布(P>0.05)；三道眉草鹀各形態(tài)參數(shù)均符合正態(tài)分布(P>0.05).

利用SPSS 19.0軟件對(duì)栗斑腹鹀和三道眉草鹀的主要形態(tài)和鳴聲特征參數(shù)進(jìn)行聚類分析，并構(gòu)建聚類圖.

1.3 DNA提取和線粒體ND2基因擴(kuò)增

利用AxyPrep血液基因組DNA試劑盒和苯酚-氯仿法，對(duì)234份栗斑腹鹀和60份三道眉草鹀血液的全基因組進(jìn)行提取，并參考文獻(xiàn)[17]給出的引物和方法進(jìn)行PCR擴(kuò)增.

所有的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物均用1%的瓊脂糖凝膠，在裝有1×TAE緩沖液的電泳槽中進(jìn)行電泳檢測(cè)，所用標(biāo)志物(Marker)為DL 2000.擴(kuò)增所得樣本送生物公司進(jìn)行測(cè)序.

1.4 遺傳距離和系統(tǒng)發(fā)育分析

測(cè)序所得序列用BioEdit version 7.2.5和Editseq version 5.0軟件進(jìn)行編輯.用Clustal X ver.1.8軟件對(duì)測(cè)序所得的線粒體ND2基因進(jìn)行比對(duì)，并對(duì)比對(duì)后的序列輔以人工校正，截取起始密碼子(AUG)和終止密碼子(UAA，UGA，UAG)之間的序列用于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析.

分別利用PHYML軟件中的最大似然法(maximum likelihood，ML)，PAUP* ver.4.0b10軟件中的鄰接法(neighbor joining，NJ)和最大簡約法(maximum parsimony，MP)，以及MrBayes ver.3.1.2軟件中的貝葉斯法(Bayesian inference，BI)重建基于線粒體ND2單倍型序列的ML，MP，NJ和BI系統(tǒng)發(fā)育樹.利用PopArt1.7軟件構(gòu)建栗斑腹鹀和三道眉草鹀的單倍型網(wǎng)格圖.

1.5 物種分化時(shí)間

基于線粒體ND2基因序列，用BEAST version 1.6.2軟件估算兩個(gè)物種最近的共同祖先時(shí)間.ND2的突變率參考文獻(xiàn)[17]關(guān)于黃鹀和白頭鹀的研究，采用每百萬年2%的突變率.應(yīng)用jModeltest 2.1.10軟件計(jì)算所得的栗斑腹鹀和三道眉草鹀單倍型的最優(yōu)堿基替代模型為TIM2+I，而在Bayesian Evolutionary Analysis Utility Version(BEAUti)v1.6.2平臺(tái)中并沒有TIM模型，因此，本文采用與最優(yōu)模型最相似的堿基替代模型.估算分析共運(yùn)行3次，每次運(yùn)行100萬次，采樣頻率為1 000次/代，開始的10%作為“老化(burn-in)”結(jié)果舍棄.最終的結(jié)果在TRACER version1.5平臺(tái)中合并后進(jìn)行分析.

2 結(jié)果

2.1 栗斑腹鹀和三道眉草鹀的鳴聲分化

基于物種間鳴聲數(shù)據(jù)的持續(xù)時(shí)間、最高頻率、最低頻率和時(shí)間間隔4個(gè)參數(shù)的分析發(fā)現(xiàn)，栗斑腹鹀和三道眉草鹀鳴聲間除持續(xù)時(shí)間外，均不具有顯著性差異，其中三道眉草鹀鳴唱語句持續(xù)時(shí)間更長(見表1)，說明栗斑腹鹀和三道眉草鹀在語句結(jié)構(gòu)上存在差異，需進(jìn)一步研究揭示二者語句結(jié)構(gòu)上的差異.

表1 栗斑腹鹀和三道眉草鹀鳴聲特征(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

基于不同區(qū)域栗斑腹鹀種群間鳴聲數(shù)據(jù)的持續(xù)時(shí)間、最高頻率、最低頻率和時(shí)間間隔4個(gè)參數(shù)的分析發(fā)現(xiàn)，查干套力皋和嘎亥圖兩地分布的栗斑腹鹀個(gè)體除時(shí)間間隔外，均不具有顯著差異(見表2).

表2 查干套力皋栗斑腹鹀和嘎亥圖栗斑腹鹀鳴聲特征(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

利用栗斑腹鹀和三道眉草鹀的鳴聲數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析，結(jié)果見圖1.由圖1可見，61只個(gè)體樣本聚成了2個(gè)主要分枝(A和B)，然而聚類分析并沒有將栗斑腹鹀和三道眉草鹀完全分開，在分枝A中，栗斑腹鹀和三道眉草鹀聚在了一起.

紅色為三道眉草鹀，藍(lán)色為栗斑腹鹀

2.2 栗斑腹鹀和三道眉草鹀的形態(tài)分化

基于物種間形態(tài)數(shù)據(jù)的分析發(fā)現(xiàn)，栗斑腹鹀的翅長、跗趾長、體長、體重、頭喙長和尾長在雌、雄間存在顯著差異，其他形態(tài)參數(shù)雌雄間無顯著差異(見表3)；三道眉草鹀的翅長、體長和尾長在雌、雄間存在顯著差異，其他形態(tài)參數(shù)雌、雄間無顯著差異(見表3).二者在主要形態(tài)參數(shù)上均表現(xiàn)為雄性個(gè)體較雌性個(gè)體略大.

表3 栗斑腹鹀和三道眉草鹀外部形態(tài)特征比較(平均值±標(biāo)準(zhǔn)差)

分別對(duì)栗斑腹鹀和三道眉草鹀沒有性別差異的形態(tài)參數(shù)、雌性形態(tài)參數(shù)和雄性形態(tài)參數(shù)進(jìn)行聚類分析，三種方法得到了一致的聚類圖.其中，依據(jù)二者雌性形態(tài)參數(shù)構(gòu)建的聚類圖(見圖2)，栗斑腹鹀和三道眉草鹀聚在了一起.

紅色為三道眉草鹀個(gè)體，藍(lán)色為栗斑腹鹀

2.3 栗斑腹鹀和三道眉草鹀的系統(tǒng)發(fā)育樹和分化時(shí)間

通過4種方法重建的栗斑腹鹀和三道眉草鹀的系統(tǒng)發(fā)育樹獲得了一致的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，由其中的 ML進(jìn)化樹(見圖3)可見，多數(shù)的栗斑腹鹀和三道眉草鹀的單倍型被分為兩大進(jìn)化枝，且具有高的節(jié)點(diǎn)支持率(ML：76.2%，MP：100%，NJ：100%，BI：0.9).然而，被聚入到三道眉草鹀進(jìn)化枝中的單倍型Hap29為兩個(gè)物種的共享單倍型，包含了4只栗斑腹鹀和21只三道眉草鹀個(gè)體.使用PopArt平臺(tái)制作的栗斑腹鹀和三道眉草鹀單倍型網(wǎng)絡(luò)圖(見圖4)顯示，兩個(gè)物種間存在51次堿基改變.

紅色為三道眉草鹀個(gè)體，藍(lán)色為栗斑腹鹀

圖4 ND2基因序列單倍型網(wǎng)絡(luò)圖

從每巢中選擇一只雛鳥，估算栗斑腹鹀和三道眉草鹀的遺傳多樣性，結(jié)果(見表4)表明，栗斑腹鹀的單倍型多樣性(h=0.94，標(biāo)準(zhǔn)差=0.01)和核苷酸多樣性(π=0.006 2，標(biāo)準(zhǔn)差=0.000 1)均高于三道眉草鹀(h=0.52，標(biāo)準(zhǔn)差=0.11；π=0.000 8，標(biāo)準(zhǔn)差=0.000 2).

表4 栗斑腹鹀和三道眉草鹀線粒體ND2基因遺傳多樣性

對(duì)兩個(gè)物種的最近共同祖先時(shí)間的計(jì)算結(jié)果表明，栗斑腹鹀和三道眉草鹀的最近共同祖先生活在136萬年前(95%置信區(qū)間(HPD)=1.05～1.70).實(shí)驗(yàn)結(jié)果中所有參數(shù)的有效樣本量(ESS值)都超過了500，其中TMRCA平臺(tái)的ESS值達(dá)到了7 902.從計(jì)算結(jié)果來看，栗斑腹鹀所有單倍型的最近共同祖先可以追溯到2萬年前(95%置信區(qū)間=0.15～0.31)，三道眉草鹀所有單倍型的最近共同祖先可以追溯到15萬年前(95%置信區(qū)間=0.08～0.23).

3 討論

3.1 鳴聲分化

鳴聲是鳥類重要的通訊手段，包含著豐富的信息，在吸引和穩(wěn)定配偶關(guān)系、保衛(wèi)領(lǐng)域、育雛等環(huán)節(jié)發(fā)揮著重要作用，具有物種特異性[18].本文對(duì)內(nèi)蒙古扎魯特旗區(qū)域內(nèi)，栗斑腹鹀和三道眉草鹀兩個(gè)物種鳴聲參數(shù)的分析結(jié)果表明，二者間除持續(xù)時(shí)間外，其他聲學(xué)參數(shù)均不具有顯著性差異(見表1).已有研究[19]表明，鳴聲差異受到很多因素的影響，比如生境類型、地理差異和學(xué)習(xí)行為等.三道眉草鹀具有學(xué)習(xí)栗斑腹鹀鳴聲的能力[18]，通過本文利用鳴聲參數(shù)構(gòu)建的聚類圖可見，61只個(gè)體聚成了2個(gè)主要分枝(A和B)，但是在A分支中，栗斑腹鹀和三道眉草鹀聚在了一起，聚類分析并未將栗斑腹鹀和三道眉草鹀完全分開.因此，二者間鳴聲的相似性可能是由于三道眉草鹀的學(xué)習(xí)所致.對(duì)不同區(qū)域內(nèi)生活的栗斑腹鹀的鳴聲特征進(jìn)行分析后發(fā)現(xiàn)，在查干套力皋和嘎亥圖地區(qū)分布的栗斑腹鹀鳴聲參數(shù)中，只有時(shí)間間隔存在顯著差異(見表2)，推測(cè)可能是由于地理差異導(dǎo)致的不同區(qū)域的栗斑腹鹀間出現(xiàn)了鳴聲分化.有研究表明，很多鳥類都具有鳴聲微地理變異，如：楊曉菁等[20]對(duì)武漢地區(qū)的白頭鵯進(jìn)行的鳴聲研究表明，相隔2.5 km的兩個(gè)種群就能產(chǎn)生完全不同的鳴唱特征，地理距離越近鳴唱特征越相似.關(guān)于栗斑腹鹀不同種群間鳴聲特征是否存在微地理變異仍需要進(jìn)一步研究.

3.2 形態(tài)分化

多數(shù)鳥類的形態(tài)和鳴聲一樣，具有物種特異性，這在鳥類分類學(xué)中具有重要的作用.本文的研究表明，栗斑腹鹀和三道眉草鹀的喙高具有顯著差異，三道眉草鹀的喙要比栗斑腹鹀高(見表3)，這可能是由于二者食物來源的差異所導(dǎo)致的.Haavie等[21]對(duì)西叢鴉(Aphelocomacalifornica)和西叢鴉落基山亞種(A.c.woodhouseii)進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)，這兩個(gè)最近分化的物種，由于食物資源的不同，在喙形上表現(xiàn)出明顯的不同，西叢鴉有更重的鉤狀喙，而西叢鴉落基山亞種的喙則較窄、較長，因此認(rèn)為鳥喙的大小和形狀反映了鳥類食物資源的差異[22].此外，栗斑腹鹀在體型上也較三道眉草鹀略小一些.兩個(gè)物種的雄性個(gè)體都較雌性個(gè)體略大，這可能是性選擇的結(jié)果，雌性更偏愛體型較大的雄性[19，23-24].

鳥類的尾，作為飛行特性的一個(gè)組成部分，具有輔助飛行的作用，可以很好地提高鳥類在飛行時(shí)的穩(wěn)定性.尾羽這一功能的進(jìn)化促進(jìn)了鳥類的多樣化，使它們能夠更廣泛的飛行，從而開發(fā)更大范圍的生態(tài)位[25].本文的研究表明，三道眉草鹀的尾長要長于栗斑腹鹀，同時(shí)三道眉草鹀的翅長也要長于栗斑腹鹀(見表3)，表明三道眉草鹀可能具有更好的飛行能力和適應(yīng)性.然而，利用栗斑腹鹀和三道眉草鹀的形態(tài)參數(shù)構(gòu)建的聚類圖同樣未將栗斑腹鹀和三道眉草鹀完全分開(見圖2)，表明栗斑腹鹀和三道眉草鹀間尚未出現(xiàn)完全的形態(tài)分化，二者間仍具有相似的形態(tài)特征.

3.3 分子分化

分子進(jìn)化的中性理論認(rèn)為，DNA中的大部分突變是中性或者近中性的，并不會(huì)改變生物的表型，也不會(huì)對(duì)生物的適合度產(chǎn)生影響或影響很小.因此，DNA中同義突變的累積會(huì)遠(yuǎn)高于非同義突變，而同義突變一般不會(huì)導(dǎo)致表型改變[26].這一結(jié)果表明，僅僅依據(jù)表型特征對(duì)物種分化進(jìn)行研究是不全面的，可能會(huì)忽略掉DNA中存在的大量并未引起表型改變的遺傳變異.本研究利用線粒體數(shù)據(jù)重建了栗斑腹鹀和三道眉草鹀的系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)大部分個(gè)體都被歸入到了正確的分類群中.但Hap29單倍型為栗斑腹鹀和三道眉草鹀共有的單倍型.盡管單倍型網(wǎng)格圖顯示兩個(gè)物種在歷史上出現(xiàn)了快速分化，二者間存在51次堿基改變[27]，但仍不能否定栗斑腹鹀和三道眉草鹀間可能由于較近的分化時(shí)間和不完全的表型分化而在同域分布區(qū)內(nèi)發(fā)生過雜交漸滲.之前的研究表明，一些物種間由于分化尚不完全，在接觸區(qū)內(nèi)常常會(huì)發(fā)生種間雜交并產(chǎn)生可育后代[7]，即便物種分化時(shí)間達(dá)到1 700萬年，也可能誕生可遺傳的后代[28].

研究[27]表明，第四紀(jì)冰期-間冰期旋回的氣候變化對(duì)物種形成、分布區(qū)演變、種群分化、遺傳格局等方面產(chǎn)生了重要影響.許多新物種的形成以及種群分化都發(fā)生在這一時(shí)期.本文參考Irwin等[17]關(guān)于黃鹀和白頭鹀的研究，以2%每百萬年作為ND2基因的突變率，用BEAST version 1.6.2平臺(tái)估算了兩個(gè)物種的最近共同祖先時(shí)間，結(jié)果表明栗斑腹鹀和三道眉草鹀的最近共同祖先生活在136萬年前(95%置信區(qū)間=1.05～1.70).這一時(shí)期，中國正處于“鄱陽冰期—鄱陽-大姑間冰期—大姑冰期”的轉(zhuǎn)換時(shí)期[29]，氣候的波動(dòng)和溫度的下降可能迫使這兩個(gè)物種的祖先被隔離在不同的冰期避難所中，并在不同的冰期避難所內(nèi)發(fā)生了獨(dú)立的進(jìn)化，進(jìn)而形成新的物種.

本文的研究表明，栗斑腹鹀和三道眉草鹀的分化時(shí)間未超過200萬年，為典型的年輕物種[4]，這也可以解釋二者間在形態(tài)特征和鳴聲特征上尚未發(fā)生完全分化的原因.在內(nèi)蒙古繁殖分布區(qū)內(nèi)的栗斑腹鹀所有單倍型的最近共同祖先可以追溯到23萬年前(95%置信區(qū)間=0.15～0.31)，三道眉草鹀所有單倍型最近共同祖先可以追溯到15萬年前(95%置信區(qū)間=0.08～0.23).