胃癌患者幽門(mén)螺桿菌感染與EGF、EGFR、HER2表達(dá)相關(guān)性分析*

王 楠,房玉海,高雪茹,姜 葵

(1.天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院消化內(nèi)科 300042；2.天津市東麗醫(yī)院消化內(nèi)科 300300)

胃癌是我國(guó)發(fā)病率第二位的腫瘤，每年新發(fā)胃癌人數(shù)約占全球的40%[1]。由于目前我國(guó)胃癌早期患者診斷率較低，導(dǎo)致胃癌患者整體5年生存率仍不足50%[1]。幽門(mén)螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)在胃癌進(jìn)展中發(fā)揮作用，35%～60%的胃癌與Hp感染有關(guān)[2-3]。但Hp引發(fā)腫瘤形成和進(jìn)展?jié)撛诜肿訖C(jī)制仍未完全明確[4]，目前Hp感染是否能影響與胃癌發(fā)生相關(guān)蛋白表達(dá)也存在爭(zhēng)議[5]。盡管多項(xiàng)研究已表明表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor,EGF)家族中的EGF、EGF受體(EGF receptor,EGFR)、人EGF受體-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)在胃癌組織中表達(dá)增加，并被認(rèn)為與胃癌形成和進(jìn)展有關(guān)[6-8]。但關(guān)于Hp感染與胃癌組織中EGF、EGFR、HER2表達(dá)的關(guān)系的研究結(jié)論仍存在矛盾[9]。如有研究表明胃癌患者Hp感染與HER2表達(dá)無(wú)關(guān)[7]，而有文獻(xiàn)報(bào)道Hp感染可誘導(dǎo)胃黏膜HER2過(guò)表達(dá)[10-11]。本研究探討了胃癌患者Hp感染與EGF、EGFR、HER2表達(dá)的關(guān)系，旨在為今后進(jìn)一步對(duì)胃癌患者的研究和治療提供研究基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象

收集2019年9月至2021年9月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院和天津市東麗醫(yī)院診斷的249例胃癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)通過(guò)手術(shù)或內(nèi)鏡下標(biāo)本病理檢查確診為胃癌；(2)通過(guò)組織病理學(xué)檢查明確為Hp感染；(3)未行Hp根治治療或治療失敗。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)既往有化療史；(2)病理標(biāo)本過(guò)小無(wú)法進(jìn)行病理診斷；(3)合并其他惡性腫瘤。本研究開(kāi)始前經(jīng)天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院倫理委員會(huì)備案，由于回顧性研究不涉及患者身份信息，本研究獲得了倫理委員會(huì)的知情同意豁免。

1.2方法

1.2.1資料收集

收集患者一般資料包括年齡、性別、腫瘤位置、病理類(lèi)型、淋巴結(jié)浸潤(rùn)情況、泌尿系統(tǒng)侵犯情況、Lauren分型、美國(guó)東部腫瘤協(xié)作組(eastern cooperative oncology group,ECOG)評(píng)分、TNM分期等。收集患者Hp感染情況，以及胃癌組織和周邊淋巴結(jié)中EGF、EGFR、HER2表達(dá)情況等。

1.2.2Hp感染判斷方法

首先使用HE染色，對(duì)于Hp陰性組織再使用吉姆薩染色確認(rèn)Hp感染情況，兩種方法同為陰性則無(wú)Hp感染[12]。根據(jù)慢性胃炎悉尼系統(tǒng)對(duì)Hp感染患者病理組織學(xué)的炎癥和嚴(yán)重程度進(jìn)行評(píng)估：0-無(wú)感染，1-低，2-中等，3-高[13]。

1.2.3EGF、EGFR、HER2表達(dá)檢測(cè)及判斷方法

使用熒光原位雜交檢測(cè)標(biāo)本中HER2表達(dá)情況。至少測(cè)量20個(gè)連續(xù)腫瘤細(xì)胞核中HER2基因的平均拷貝數(shù)和第17號(hào)染色體著絲粒(centromeric probe for chromosome 17，CEP17)平均拷貝數(shù)。HER2/CEP17比值大于或等于2為HER2陽(yáng)性[14]。利用免疫組織化學(xué)染色半定量評(píng)估胃癌組織和周邊淋巴結(jié)中EGF、EGFR、HER2蛋白表達(dá)情況。使用顯微鏡(×400)計(jì)算每個(gè)組織切片中至少500個(gè)腫瘤細(xì)胞。腫瘤和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中小于30%的細(xì)胞存在EGF、EGFR、HER2表達(dá)陰性；腫瘤和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中大于或等于30%細(xì)胞存在EGF、EGFR、HER2表達(dá)陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1納入胃癌患者的Hp感染情況

249例患者中胃癌組織通過(guò)手術(shù)標(biāo)本獲得208份和內(nèi)鏡活檢獲得41份。根據(jù)HE染色情況，Hp陽(yáng)性86例，Hp陰性163例。Hp陰性患者組織切片再使用吉姆薩染色重新識(shí)別Hp狀態(tài)后陽(yáng)性18例，陰性145例。最終根據(jù)組織病理學(xué)檢查結(jié)果，249例患者中Hp陽(yáng)性104例(41.77%)，Hp陰性145例(58.23%)。

2.2Hp陽(yáng)性和陰性胃癌患者一般資料比較

249例患者年齡27～89歲，其中男178例，女71例。組織病理學(xué)診斷為腺癌139例(55.82%)，印戒細(xì)胞癌61例(24.50%)，腺癌-印戒細(xì)胞混合腺癌49例(19.68%)。Hp陽(yáng)性和陰性患者年齡、性別、腫瘤位置、病理類(lèi)型、淋巴結(jié)浸潤(rùn)、泌尿系統(tǒng)侵犯情況、Lauren分型、ECOG評(píng)分、TNM分期比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 Hp陽(yáng)性和陰性患者一般資料

續(xù)表1 Hp陽(yáng)性和陰性患者一般資料

2.3Hp感染程度與胃癌EGF家族相關(guān)蛋白表達(dá)的關(guān)系

249例患者EGF表達(dá)陽(yáng)性112例(44.98%)、EGFR表達(dá)陽(yáng)性94例(37.75%)、HER2表達(dá)陽(yáng)性37例(14.86%)。Hp感染程度與胃癌患者EGF、EGFR、HER2表達(dá)均無(wú)關(guān)，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 Hp感染程度與EGF、EGFR、HER2表達(dá)的相關(guān)性[n(%)]

2.4Hp感染與腫瘤、淋巴結(jié)EGF蛋白的關(guān)系

Hp感染與胃癌患者腫瘤、淋巴結(jié)中EGF、EGFR、HER2蛋白無(wú)關(guān)。腫瘤組織中HER2蛋白表達(dá)與腫瘤組織EGF、EGFR、局部淋巴結(jié)中HER2蛋白表達(dá)中度相關(guān)。腫瘤組織中EGF與EGFR、淋巴結(jié)中EGF與EGFR表達(dá)也呈中度相關(guān)，見(jiàn)表3、圖1。

圖1 胃癌患者Hp感染與不同位置EGF家族相關(guān)蛋白相關(guān)性熱圖

表3 胃癌Hp感染與腫瘤、淋巴結(jié)EGF家族相關(guān)蛋白表達(dá)的相關(guān)性(r)

3 討 論

Hp感染是導(dǎo)致胃癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素。在不同地區(qū)和人群中，胃癌患者Hp感染率為35%～94%[2-3,12]。而Hp感染根治后可降低患者發(fā)生胃癌的風(fēng)險(xiǎn)[15]。Hp感染與腸型胃腺癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，Hp感染患者胃癌好發(fā)于胃竇部位[1]。本研究比較Hp感染患者胃癌發(fā)生部位發(fā)現(xiàn)其胃癌發(fā)生位置均多位于胃竇和胃角，Hp感染與胃癌發(fā)生位置關(guān)系不大。目前Hp感染導(dǎo)致胃癌過(guò)程所涉及的潛在機(jī)制仍不清楚。為此，國(guó)內(nèi)外學(xué)者長(zhǎng)期以來(lái)一直致力于研究Hp感染與不同腫瘤相關(guān)蛋白的關(guān)系。尤其是對(duì)EGF、EGFR、HER2基因及其蛋白的表達(dá)水平一直有較高的研究興趣，但關(guān)于Hp感染與上述EGF家族基因和蛋白表達(dá)狀態(tài)的關(guān)系仍缺少具有高等級(jí)證據(jù)的研究。

腫瘤癌基因——HER-2可編碼與EGFR密切相關(guān)的跨膜糖蛋白。HER2在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化及與細(xì)胞存活相關(guān)的其他活動(dòng)中具有重要作用。胃癌HER2過(guò)表達(dá)比例為2%～45%，國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道為12%～20%[14，16]。本研究納入的胃癌患者中HER2陽(yáng)性者占14.86%，且Hp感染與患者HER2表達(dá)無(wú)關(guān)。與本研究結(jié)論類(lèi)似的其他研究人員也發(fā)現(xiàn)Hp感染與HER2蛋白表達(dá)無(wú)關(guān)[7]。但SHIM等[10]研究表明患者HER2表達(dá)與CagA陽(yáng)性的Hp感染相關(guān)。

CagA蛋白是一種Hp細(xì)菌毒力因子，通過(guò)細(xì)菌Ⅳ型分泌系統(tǒng)遞送到胃上皮細(xì)胞中[17]。目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)研究并未討論不同毒力Hp感染與HER2蛋白的關(guān)系。因此，今后仍需要大樣本研究進(jìn)一步探討HER2表達(dá)與胃癌患者CagA陽(yáng)性和CagA陰性Hp的關(guān)系。

EGF是由53個(gè)氨基酸組成的單一多肽，在細(xì)胞相互作用中發(fā)揮著重要作用。細(xì)胞的EGF與相鄰細(xì)胞上EGFR之間的協(xié)同作用與細(xì)胞的遷移、生長(zhǎng)，以及腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)特性的改變密切相關(guān)[18]。在一項(xiàng)經(jīng)典研究中通過(guò)流式細(xì)胞分析技術(shù)證實(shí)Hp感染患者EGF和EGFR蛋白水平加倍，Hp根除后兩種蛋白水平顯著降低[19]。這與Hp可能調(diào)節(jié)胃黏膜中EGFR的表達(dá)有關(guān)，當(dāng)感染未經(jīng)治療時(shí)EGF和EGFR水平升高可能刺激細(xì)胞增殖并啟動(dòng)新的增殖過(guò)程[19]?？梢?jiàn)根除Hp對(duì)于胃癌的預(yù)防和治療至關(guān)重要。但本研究并未發(fā)現(xiàn)Hp感染與EGF、EGFR的表達(dá)相關(guān)。造成這種差異的原因可能與EGF、EGFR檢測(cè)方法不同，Hp基因型和人種差異等均存在潛在關(guān)系。但本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中HER2與EGF、EGFR和淋巴結(jié)中HER2表達(dá)相關(guān)。而EGF在腫瘤和淋巴結(jié)中的表達(dá)均與EGFR水平相關(guān)。因此，今后也需要更多大樣本的研究來(lái)闡明Hp感染與EGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性。

本研究存在一定的不足：(1)部分內(nèi)鏡活檢患者未獲得胃癌周?chē)馨徒Y(jié)組織，對(duì)相關(guān)性分析結(jié)果可能產(chǎn)生一定影響；(2)受研究條件限制，并未分析Hp基因型差異對(duì)結(jié)果的影響；(3)受限于本研究為回顧性研究，未探討Hp感染與不同EGF蛋白表達(dá)差異對(duì)患者長(zhǎng)期預(yù)后的影響，也未探討Hp根治后對(duì)EGF、EGFR、HER2表達(dá)變化；(4)同樣受限于研究性質(zhì)，本研究并未比較非胃癌患者中Hp感染情況與不同EGF蛋白表達(dá)的差異。因此，今后仍需要進(jìn)行前瞻性大樣本研究探討上述問(wèn)題。

綜上所述，胃癌患者Hp感染與胃癌組織中EGF、EGFR、HER2表達(dá)無(wú)關(guān)。腫瘤組織中HER2與EGF、EGFR和淋巴結(jié)中HER2表達(dá)相關(guān)。而EGF在腫瘤和淋巴結(jié)中的表達(dá)均與EGFR表達(dá)中度相關(guān)。今后仍值得進(jìn)一步探討不同Hp毒力因素與EGF家族之間的關(guān)系。