分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在家兔鼻腔中的分布特征

房映棟，程翠翠，陸 佳，程玉嬌，張 睿，李沛軒，王雯慧

(甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070)

鼻腔是呼吸道的重要結(jié)構(gòu)之一，發(fā)揮著預(yù)熱空氣、分辨氣味、過濾灰塵、輔助發(fā)聲等功能。由于呼吸道與外界直接相通，外界環(huán)境中的有害氣體、致病微生物等易侵入呼吸道內(nèi)，引起呼吸系統(tǒng)疾病。有研究表明，鼻腔免疫能夠提供對多種細(xì)菌、病毒等黏膜致病原侵襲的保護(hù)，通過鼻腔免疫能夠在呼吸道誘導(dǎo)高效的免疫應(yīng)答從而預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病，也能在遠(yuǎn)端黏膜部位產(chǎn)生免疫反應(yīng)，誘導(dǎo)機體全身免疫應(yīng)答。分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞作為鼻腔免疫中參與免疫應(yīng)答的兩類重要的效應(yīng)細(xì)胞，所分泌形成的分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A，SIgA)和IgG抗體在機體抵抗病原微生物入侵中發(fā)揮著重要的功能。其中，SIgA作為黏膜免疫中重要的效應(yīng)分子，發(fā)揮著免疫清除、調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡、誘發(fā)免疫耐受、抑制炎癥和過敏反應(yīng)、中和病毒及抵御病原菌在黏膜上皮黏附的功能，是機體黏膜免疫的第一道防御屏障。IgG是體液免疫中最重要的抗體，具有吞噬、凝集、沉淀抗原和中和毒素的作用，可被相應(yīng)受體轉(zhuǎn)運至氣道腔分泌物中，發(fā)揮黏膜免疫清除功能；IgG也作為黏膜免疫的第二道防御屏障，當(dāng)?shù)谝坏榔琳显诟鞣N因素作用下被破壞即將有病原入侵時發(fā)揮著重要的作用。因此，研究鼻腔中分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞的分布規(guī)律在預(yù)防呼吸系統(tǒng)疾病中具有重要意義。

家兔作為重要的經(jīng)濟(jì)動物，肉質(zhì)細(xì)嫩味美，營養(yǎng)價值高，深受消費者青睞，長期攝取兔肉能夠預(yù)防心臟病、動脈粥樣硬化。然而，在家兔養(yǎng)殖中，消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)疾病是危害養(yǎng)兔業(yè)發(fā)展的兩類重要疾病，其中呼吸系統(tǒng)疾病占20%以上。鼻腔免疫具有生物利用度高、避免肝的首過效應(yīng)、引發(fā)免疫反應(yīng)迅速等優(yōu)點，能夠在呼吸道誘導(dǎo)高效的免疫應(yīng)答來預(yù)防呼吸道疾病，并已有相應(yīng)的實例，這將為家兔養(yǎng)殖中呼吸系統(tǒng)疾病的預(yù)防提供一定的參考。

目前，關(guān)于分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞分布的研究大多是在胃腸黏膜，有部分研究也涉及扁桃體等部位，在呼吸道黏膜中的研究相對較少，研究對象已涉及雙峰駝、家兔、豬、雞、黃牛等動物。然而，家兔作為常用的實驗動物，關(guān)于分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在家兔鼻腔中的分布特點仍不清楚。因此，本試驗是在課題組研究家兔鼻腔的形態(tài)學(xué)特點及鼻黏膜相關(guān)淋巴組織(nose-associated lymphoid tissue，NALT)分布規(guī)律的基礎(chǔ)上，運用組織學(xué)、免疫組織化學(xué)、圖像分析及統(tǒng)計學(xué)方法，對分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在家兔鼻腔中的分布特征進(jìn)行了詳細(xì)的研究，旨在闡明家兔鼻腔中分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞的分布特征、鼻腔不同段與不同部位兩類效應(yīng)細(xì)胞的分布規(guī)律，將為家兔呼吸系統(tǒng)疾病的預(yù)防及進(jìn)一步研究家兔鼻腔免疫應(yīng)答的機制提供重要的理論依據(jù)，也為其他動物鼻腔免疫的研究提供有價值的理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

健康成年家兔20只(均購自蘭州市)，雌雄各半，平均體重為(2.5±0.3) kg。

1.2 主要試劑與儀器

主要試劑：10% EDTA 脫鈣液；多聚賴氨酸；0.1%胰蛋白酶；山羊抗兔IgA多克隆抗體(一抗，ab97186，abcam)；生物素標(biāo)記驢抗山羊IgG多克隆抗體(二抗，博奧森)；小鼠抗兔IgG單克隆抗體(一抗，R2655，SIGMA)；生物素標(biāo)記山羊抗小鼠IgG多克隆抗體(二抗，博士德)；濃縮型DAB試劑盒(中杉金橋)；Harris氏蘇木精染液；伊紅染液等。

主要儀器：自動組織脫水機(ASP300S，Leica德國)；全自動包埋儀(EG1160，Leica德國)；輪轉(zhuǎn)式切片機(HistoCore MULTICUT，Leica德國)；恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DHG-9240B，上?，槴\實驗設(shè)備有限公司)；OlympusDP-71顯微照相系統(tǒng)(BX51+DP71，Olympus日本)；光學(xué)顯微鏡(13395H2X，Leica德國)等。

1.3 樣品的采集與固定

將家兔頸動脈放血致死，取其頭部，將頭部皮毛去掉后固定于10%的福爾馬林溶液中。固定7 d去掉其下頜，除去多余結(jié)締組織并按照下述試驗方案進(jìn)行樣品處理：參照Uraih和Maronpot的研究方法并進(jìn)行完善，將去掉下頜的頭部用流水沖洗24 h(去掉部分福爾馬林)后冷凍于-20 ℃的冰箱12 h，以硬腭褶皺和牙齒為標(biāo)志分為以下5個橫斷面：鼻尖到硬腭第1腭褶前端為第Ⅰ段，硬腭第1腭褶到第4腭褶為第Ⅱ段，第5腭褶到第1前臼齒前端為第Ⅲ段，第1前臼齒前端到第1后臼齒前端為第Ⅳ段，第1后臼齒前端到第3后臼齒末端為第Ⅴ段(每段長度約為1 cm)，做好相應(yīng)標(biāo)記后，分別進(jìn)行固定。所有樣品繼續(xù)固定1周后，用流水沖洗各組織3 h并置于10%的EDTA脫鈣液中進(jìn)行脫鈣，每3周更換1次脫鈣液，直到組織能夠輕松用大頭針刺透證明鈣已脫好。

1.4 家兔鼻腔分泌IgA和IgG漿細(xì)胞的免疫組織化學(xué)染色

取已脫鈣好的鼻腔樣品，經(jīng)取材、流水緩慢沖洗48 h、常規(guī)梯度酒精脫水、二甲苯透明、組織浸蠟與包埋后制成蠟塊，經(jīng)連續(xù)切片(厚度5 μm)、展片、貼片、烤片處理后，HE常規(guī)染色，顯微鏡觀察家兔鼻腔的組織學(xué)結(jié)構(gòu)。

本試驗采用間接SABC免疫組織化學(xué)染色法。切片脫蠟至水，室溫下使用3% HO溶液作用15 min， 以去除內(nèi)源性過氧化物酶活性，蒸餾水洗2 min ×3次；使用0.1%胰蛋白酶修復(fù)抗原，37 ℃孵育40 min，蒸餾水洗 2 min×3次；滴加5% BSA封閉，37 ℃孵育40 min，以減少非特性染色，不洗；滴加稀釋后的一抗(山羊抗兔IgA多克隆抗體，稀釋濃度為1∶400；小鼠抗兔IgG單克隆抗體，稀釋濃度為1∶8 000)，4 ℃孵育18 h，使抗原抗體充分反應(yīng)，PBS緩沖液洗5 min×4次(陽性、陰性切片分開洗，下同)，滴加二抗37 ℃孵育40 min，PBS緩沖液洗5 min×4次；滴加SABC(鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物)37 ℃下孵育30 min，PBS緩沖液洗5 min ×4次；室溫避光進(jìn)行DAB顯色，光鏡下觀察顯色效果，及時洗去多余顯色液；蘇木精染液輕度復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明后，使用中性樹膠封片，待中性樹膠凝固后，光學(xué)顯微鏡觀察。陰性對照用0.01 mol·LPBS代替一抗，其他操作與陽性切片一致。

1.5 家兔鼻腔分泌IgA和IgG漿細(xì)胞的統(tǒng)計分析

每個組織隨機選擇切片5張，每10張連續(xù)切片取1張，用OlympusDP-71顯微照相系統(tǒng)在40×10倍 鏡下觀察切片，每張切片隨機選擇10個視野并拍照。用Image-Pro Plus 6.0統(tǒng)計每個視野內(nèi)IgA與IgG陽性細(xì)胞的數(shù)量，并計算各自的細(xì)胞密度。用IBM SPSS 21.0單因素方差分析每種陽性細(xì)胞在鼻腔不同段與不同部位分布密度的差異性，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，差異顯著水平為<0.05。

2 結(jié) 果

2.1 分泌IgA的漿細(xì)胞在家兔鼻腔中的分布特征

分泌IgA的漿細(xì)胞呈圓形或卵圓形，胞質(zhì)豐富，核圓一般位于細(xì)胞的一側(cè)，為典型的漿細(xì)胞樣，胞質(zhì)被染成強陽性，呈棕黃色。分泌IgA的漿細(xì)胞在家兔鼻腔不同段與不同部位組織中都有分布(圖1 B1～B5、圖2 B1～B4)，主要彌散分布于鼻黏膜固有層，在緊靠上皮的淺層黏膜固有層中，分泌IgA的漿細(xì)胞分布數(shù)量相對較多，在深層黏膜固有層分布數(shù)量相對較少，在固有層鼻腺周圍也分布有少量分泌IgA的漿細(xì)胞(圖2B4)。統(tǒng)計結(jié)果顯示(圖3)：在鼻腔的5段組織中，分泌IgA的漿細(xì)胞分布密度由高到低依次是鼻腔第Ⅳ段、第Ⅴ段、第Ⅲ段、第Ⅱ段、第Ⅰ段。其中分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔Ⅰ和Ⅱ段之間以及鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段之間的分布密度差異不顯著(>0.05)；但在鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段分泌IgA的漿細(xì)胞分布密度顯著高于鼻腔Ⅰ、Ⅱ段(<0.05)；分泌IgA的漿細(xì)胞在上頜鼻甲、篩鼻甲與鼻中隔之間的分布密度差異不顯著(>0.05)；但在這些部位的分布密度顯著高于上鼻甲(<0.05)。

A. 鼻腔不同段的HE染色結(jié)果；B. 分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔不同段的免疫組織化學(xué)結(jié)果；C. B中相應(yīng)部位的局部放大(箭頭所指為分泌IgA的漿細(xì)胞)；D. 陰性對照。1～5. 分別對應(yīng)鼻腔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段A. HE staining results of different segments of nasal cavity; B. Immunohistochemical results of plasma cells secreting IgA in different segments of nasal cavity; C. Partial enlarged view of the corresponding part of figure B(Plasma cells secreting IgA marked by the arrow); D. Negative control. 1-5. Corresponding to five(Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ and Ⅴ)segments of nasal cavity圖1 分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔不同段的分布特征Fig.1 Distribution characteristics of plasma cells secreting IgA in different segments of nasal cavity

A.鼻腔不同部位的HE染色結(jié)果；B. 分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔不同部位的免疫組織化學(xué)結(jié)果；C. B中相應(yīng)部位的局部放大(箭頭所指為分泌IgA的漿細(xì)胞)；D. 陰性對照。1～4. 分別對應(yīng)上鼻甲、上頜鼻甲、篩鼻甲與鼻中隔A. HE staining results of different parts of nasal cavity; B. Immunohistochemical results of plasma cells secreting IgA in different parts of nasal cavity; C. Partial enlarged view of the corresponding part of figure B(Plasma cells secreting IgA marked by the arrow); D. Negative control. 1-4. Corresponding to superior tuibinate, maxilloturbinate, ethmoid turbinate, nasal septum圖2 分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔不同部位的分布特征Fig.2 Distribution characteristics of plasma cells secreting IgA in different parts of nasal cavity

A.分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔不同段分布密度比較；B.分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔不同部位分布密度比較。柱上不同小寫字母代表差異顯著(P<0.05)；相同小寫字母代表差異不顯著(P>0.05)；下同A.Comparison of the distribution density of plasma cells secreting IgA in different segments of nasal cavity; B.Comparison of the distribution density of plasma cells secreting IgA in different parts of nasal cavity. Column with different lowercase letters represent significant difference(P<0.05); Identical lowercase letters represent no significant difference(P>0.05); The same as below圖3 分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔不同段與不同部位分布密度比較Fig.3 Comparison of the distribution density of plasma cells secreting IgA in different segments and parts of nasal cavity

2.2 分泌IgG的漿細(xì)胞在家兔鼻腔中的分布特征

分泌IgG的漿細(xì)胞呈圓形或卵圓形，胞質(zhì)豐富，核圓多偏于細(xì)胞一側(cè)，胞質(zhì)呈陽性反應(yīng)，為棕黃色。分泌IgG的漿細(xì)胞在家兔鼻腔不同段與不同部位組織中也有分布(圖4B1～B5、圖5B1～B4)，主要彌散分布于鼻黏膜固有層，在黏膜上皮下的固有層中分泌IgG的漿細(xì)胞分布數(shù)量較多，在深層黏膜固有層分布數(shù)量較少，在固有層的鼻腺周圍也分布有分泌IgG的漿細(xì)胞(圖4B4、圖5B3)。統(tǒng)計結(jié)果顯示(圖6)：在鼻腔的5段組織中，分泌IgG的漿細(xì)胞分布密度由高到低依次是鼻腔第Ⅳ段、第Ⅴ段、第Ⅲ段、第Ⅱ段、第Ⅰ段。其中分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔Ⅰ、Ⅱ段之間；鼻腔Ⅲ、Ⅴ段之間的分布密度差異不顯著(>0.05)，但在鼻腔第Ⅳ段中分泌IgG的漿細(xì)胞分布密度顯著高于鼻腔Ⅲ、Ⅴ段(<0.05)；分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔Ⅲ、Ⅴ段的分布密度顯著高于鼻腔Ⅰ、Ⅱ段(<0.05)，分泌IgG的漿細(xì)胞在上頜鼻甲、篩鼻甲和鼻中隔之間的分布密度差異不顯著(>0.05)，但在這些部位的分布密度顯著高于上鼻甲(<0.05)。綜上所述，分泌IgG的漿細(xì)胞在家兔鼻腔中總體的分布變化趨勢與分泌IgA的漿細(xì)胞相似。

A. 鼻腔不同段的HE染色結(jié)果；B. 分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔不同段的免疫組織化學(xué)結(jié)果；C. B中相應(yīng)部位的局部放大(箭頭所指為分泌IgG的漿細(xì)胞)；D. 陰性對照。1～5.分別對應(yīng)鼻腔Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段A. HE staining results of different segments of nasal cavity; B. Immunohistochemical results of plasma cells secreting IgG in different segments of nasal cavity; C. Partial enlarged view of the corresponding part of figure B(Plasma cells secreting IgG marked by the arrow); D. Negative control. 1-5. Corresponding to five(Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ and Ⅴ)segments of nasal cavity圖4 分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔不同段的分布特征Fig.4 Distribution characteristics of plasma cells secreting IgG in different segments of nasal cavity

A. 鼻腔不同部位的HE染色結(jié)果；B. 分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔不同部位的免疫組織化學(xué)結(jié)果；C. B中相應(yīng)部位的局部放大(箭頭所指為分泌IgG的漿細(xì)胞)；D. 陰性對照。1～4.上鼻甲、上頜鼻甲、篩鼻甲與鼻中隔A. HE staining results of different parts of nasal cavity; B. Immunohistochemical results of plasma cells secreting IgG in different parts of nasal cavity; C. Partial enlarged view of the corresponding part of figure B(Plasma cells secreting IgG marked by the arrow); D. Negative control. 1-4. Corresponding to superior tuibinate, maxilloturbinate, ethmoid turbinate, nasal septum圖5 分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔不同部位的分布特征Fig.5 Distribution characteristics of plasma cells secreting IgG in different parts of nasal cavity

A. 分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔不同段分布密度比較；B. 分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔不同部位分布密度比較A. Comparison of the distribution density of plasma cells secreting IgG in different segments of nasal cavity; B. Comparison of the distribution density of plasma cells secreting IgG in different parts of nasal cavity圖6 分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔不同段與不同部位分布密度比較Fig.6 Comparison of the distribution density of plasma cells secreting IgG in different segments and parts of nasal cavity

3 討 論

SIgA和IgG作為兩種重要的免疫球蛋白，在機體黏膜免疫中發(fā)揮著重要的功能。由分泌IgA的漿細(xì)胞分泌所形成的多聚免疫球蛋白A(polymeric immunoglobulin A，pIgA)能夠被其特異性跨膜轉(zhuǎn)運受體pIgR轉(zhuǎn)運至胃腸道，呼吸道以及泌尿生殖道等的黏膜表面，以SIgA形式參與免疫保護(hù)作用。由分泌IgG的漿細(xì)胞所分泌的IgG也被黏膜上皮轉(zhuǎn)運受體FcRn轉(zhuǎn)運至呼吸道外分泌物中，發(fā)揮免疫清除功能。本研究顯示，分泌IgA的漿細(xì)胞主要彌散分布于家兔每段鼻腔的鼻黏膜固有層中，分泌IgG的漿細(xì)胞的分布特征與其相似。Zhang等的研究表明，在不同年齡組雙峰駝的皺胃淋巴集結(jié)區(qū)，分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞主要彌散分布于黏膜固有層內(nèi)，并且衰老可以顯著降低兩類效應(yīng)細(xì)胞密度，但不會改變其彌散分布的特征；在雙峰駝小腸中，分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞均彌散分布于小腸黏膜固有層內(nèi)，兩類效應(yīng)細(xì)胞在小腸中的分布密度呈先增加后減少趨勢；張學(xué)鋒等的研究表明，在雙峰駝眼結(jié)膜相關(guān)淋巴組織中，分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞彌散分布于結(jié)膜上皮下淺層固有層；車傳燕和楊倩的研究表明，在斷奶仔豬胃腸道中，分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞主要分布在黏膜固有層，其數(shù)量沿胃腸道呈先增加后減少的趨勢，上述研究結(jié)果與本研究一致。提示鼻黏膜固有層屬于黏膜免疫的重要效應(yīng)部位，保護(hù)鼻黏膜免受病原微生物的侵襲。有文獻(xiàn)表明，肺中的支氣管黏膜相關(guān)淋巴組織被抗原物質(zhì)刺激后，其內(nèi)的T、B淋巴細(xì)胞被激活，激活的淋巴細(xì)胞被引流淋巴管運送到達(dá)血液，最后經(jīng)血液歸巢到支氣管黏膜固有層，引發(fā)免疫應(yīng)答，產(chǎn)生以SIgA和IgG為主的免疫效應(yīng)分子，保護(hù)肺部免受感染。分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在鼻黏膜固有層分布可能也與其歸巢機制相關(guān)。SIgA需要穿過上皮發(fā)揮功能，分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻黏膜固有層淺層分布數(shù)量較多或許更有利于抗體轉(zhuǎn)運進(jìn)入黏膜表面，發(fā)揮相應(yīng)的免疫功能。分泌IgG的漿細(xì)胞在黏膜上皮下的固有層分布數(shù)量較多，或許可以更好地阻止穿過黏膜上皮的外源性病原體到達(dá)深層組織進(jìn)行破壞，發(fā)揮黏膜免疫第二道屏障的作用。另外，分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞也分布在固有層的鼻腺周圍。楊樹寶等的研究發(fā)現(xiàn)，4日齡雛雞鼻黏膜固有層鼻腺周圍分布有分泌IgA的漿細(xì)胞；李鵬成等的研究也發(fā)現(xiàn)，在豬氣管中分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在氣管腺周圍也有分布，與本研究結(jié)果相似，以此推測，SIgA和IgG可以隨著腺體的分泌進(jìn)入黏膜表面發(fā)揮屏障作用。同時，分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在家兔每段鼻腔的鼻黏膜固有層呈彌散分布，可能有利于SIgA和IgG在整個鼻黏膜形成完整的保護(hù)屏障。

近年來，隨著國家經(jīng)濟(jì)迅速發(fā)展，伴隨著規(guī)?；s化養(yǎng)殖場的不斷增多，在家兔養(yǎng)殖中，呼吸系統(tǒng)疾病已逐漸成為當(dāng)前養(yǎng)兔業(yè)防控的重點和難點。鼻腔作為呼吸道的重要組成部分，需要不停地吸入外界的空氣，是機體最先接觸大量病原微生物的部位，這使得許多傳染病可能通過鼻腔感染和傳播，然而程翠翠等的研究發(fā)現(xiàn)，家兔鼻腔中存在較為豐富的鼻黏膜相關(guān)淋巴組織，且分布部位較為廣泛，這使得家兔鼻腔可能具有更多的抗原誘導(dǎo)位點，提示其鼻腔免疫效果可能會優(yōu)于其他動物。

也有研究顯示，通過鼻腔免疫能夠在呼吸道局部產(chǎn)生特異性抗體，證明這些部位分布有相應(yīng)的抗體分泌細(xì)胞。本研究以家兔鼻腔為研究對象，關(guān)于分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在家兔鼻腔中的分布規(guī)律進(jìn)行了研究。本試驗統(tǒng)計結(jié)果顯示：分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔不同段均有分布，但在鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段的分布較為集中，顯著高于鼻腔Ⅰ、Ⅱ段(<0.05)，分泌IgG的漿細(xì)胞分布規(guī)律與其基本類似。Yang等的研究表明，分泌IgA的漿細(xì)胞在巴馬香豬鼻腔中后部分布較多，在鼻腔前部分布較少，分泌IgA的漿細(xì)胞在鼻腔中分布趨勢由前向后遞增，與本研究基本相似。提示家兔鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段是鼻黏膜重要效應(yīng)分子SIgA和IgG產(chǎn)生的關(guān)鍵部位，也是家兔鼻腔免疫的重要效應(yīng)部位，對病原微生物入侵鼻黏膜具有重要的保護(hù)作用。分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段分布較為集中可能是因為：家兔鼻腔Ⅲ～Ⅴ段大部分是呼吸區(qū)，其上皮分布有豐富的杯狀細(xì)胞，是鼻腔中產(chǎn)生黏液最多的地方，SIgA能在黏膜表面形成一層保護(hù)層，配合杯狀細(xì)胞分泌的黏液或許能夠更有效地清除抗原；也有文獻(xiàn)表明，SIgA與抗原形成的復(fù)合物能夠刺激腸道黏膜中的杯狀細(xì)胞分泌大量黏液，使游離于腸道分泌液中的病原體被清除，保護(hù)機體免受感染；分泌IgA的漿細(xì)胞集中分布在鼻腔Ⅲ～Ⅴ段的黏膜固有層內(nèi)或許有利于及時補充黏膜表面的SIgA。同時，家兔鼻腔Ⅲ～Ⅴ段存在豐富的NALT，因而B細(xì)胞的數(shù)量較多，可以分化形成特異性的分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞；此外，與鼻腔Ⅰ、Ⅱ段相比，鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段的結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，使得吸入的空氣不容易快速通過鼻腔進(jìn)入鼻咽道，所以該段鼻腔與抗原的接觸時間較長，需要機體產(chǎn)生較多的SIgA與IgG等抗體發(fā)揮免疫功能。

在家兔鼻腔的不同部位，分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞在上頜鼻甲、篩鼻甲和鼻中隔的分布密度顯著高于上鼻甲(<0.05)，提示這些部位也作為家兔鼻腔免疫的重要效應(yīng)位點在免疫應(yīng)答中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞主要分布在上頜鼻甲、篩鼻甲及鼻中隔可能是因為：在家兔鼻腔中，相比于上鼻甲，上頜鼻甲和篩鼻甲的卷曲程度較大，使得其表面積增大，并且這些部位的黏膜固有層中分布大量的毛細(xì)血管，吸入的空氣在此與鼻甲骨充分接觸使空氣溫暖并對空氣起到過濾作用，同時充分接觸也容易使抗原滯留，抗原充分刺激鼻黏膜，并進(jìn)一步刺激B細(xì)胞更多地轉(zhuǎn)化為抗體分泌細(xì)胞；鼻中隔是篩骨嵴向前的延續(xù)，將鼻腔分為左右兩部分，而且表面平坦，分布范圍較廣，能第一時間接觸抗原的數(shù)量和種類也較多，所以需要黏膜固有層的大量抗體分泌細(xì)胞分泌抗體來處理抗原。

雖然SIgA形成黏膜免疫的第一道屏障，但I(xiàn)gG作為另一種重要效應(yīng)分子，在黏膜免疫中也發(fā)揮著重要的作用，IgG能夠募集具有吞噬功能的天然免疫細(xì)胞發(fā)揮免疫清除功能，也可誘發(fā)強烈的炎癥反應(yīng)從而控制病原體的擴散。本研究也顯示：分泌IgG的漿細(xì)胞在鼻腔不同段與不同部位的分布規(guī)律與分泌IgA的漿細(xì)胞基本相似，這使得IgG能夠成為保護(hù)鼻黏膜的第一后備分子，當(dāng)SIgA的分泌量受限或黏膜受損使得病原微生物即將到達(dá)黏膜時，IgG可以迅速募集具有吞噬功能的免疫細(xì)胞來清除病原微生物，進(jìn)而發(fā)揮相應(yīng)的免疫功能。提示IgG作為黏膜免疫的第二道防線，有利于在鼻黏膜形成完整的保護(hù)屏障。

4 結(jié) 論

分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞彌散分布于家兔每段鼻腔的鼻黏膜固有層中，有利于SIgA和IgG分子在整個鼻黏膜形成完整的保護(hù)屏障；分泌IgA和IgG的漿細(xì)胞主要分布在家兔鼻腔Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ段及上頜鼻甲、篩鼻甲和鼻中隔，提示這些區(qū)域是家兔鼻腔免疫的重要效應(yīng)部位。本研究將為家兔呼吸系統(tǒng)疾病的預(yù)防及進(jìn)一步探討家兔鼻腔免疫應(yīng)答的機制提供重要的理論依據(jù)。