T10 脊髓損傷后T10～L2 脊髓組織中差異表達蛋白的生物信息學(xué)分析

唐麗亞，瞿啟睿，吳 霞，龍軼映，許 明，張 泓，劉 瓊，艾 坤*，周 璐*

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208；2.長沙醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410219；3.郴州市第一人民醫(yī)院，湖南 郴州 423000）

神經(jīng)源性膀胱（neurogenic bladder, NB）是脊髓損傷后常見的并發(fā)癥之一[1]。 膀胱正常的排尿反射由脊髓的交感神經(jīng)區(qū)（T10～L2 脊髓節(jié)段）、副交感神經(jīng)區(qū)（S2～S4 脊髓節(jié)段）和腦橋等高級中樞共同控制。脊髓損傷后由于炎癥反應(yīng)、膠質(zhì)細胞增生和氧化應(yīng)激等繼發(fā)性損傷，導(dǎo)致神經(jīng)組織損傷范圍進一步擴大，出現(xiàn)膠質(zhì)瘢痕增生和軸突再生障礙。T10 及以上脊髓損傷后，支配膀胱的交感神經(jīng)失去腦橋等高級排尿中樞的控制而出現(xiàn)過度興奮，其支配的膀胱括約?。ò螂最i）過度收縮，最終導(dǎo)致膀胱頸梗阻和膀胱排尿障礙[2]，繼而引起尿液反流和腎功能損傷等一系列泌尿系統(tǒng)問題[3-4]。

因此，減輕脊髓損傷后的繼發(fā)性損傷，保護神經(jīng)組織，抑制T10～L2 脊髓節(jié)段交感神經(jīng)區(qū)過度興奮是治療脊髓損傷后膀胱頸功能障礙（bladder neck dysfunction, BND）的重要思路之一。 目前，臨床上主要通過膀胱頸切開術(shù)和注射α 受體阻滯劑來治療BND，雖然取得一定療效，但依然存在術(shù)后并發(fā)癥、藥物毒副作用等缺陷[5-6]。 因此，從T10～L2 脊髓節(jié)段尋找其他潛在的干預(yù)靶點來指導(dǎo)治療脊髓損傷后BND，其臨床意義尤為重要。

TMT 標記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)能更全面地檢測出組織中表達的蛋白質(zhì)，這也為蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用實現(xiàn)高靈敏度和高深度的蛋白質(zhì)組覆蓋[7]。通過篩選目標組織中的差異表達蛋白（differentially expressed proteins, DEPs），并對DEPs 進行生物信息學(xué)分析，重點探討潛在的關(guān)鍵靶點蛋白，能從多個角度探討疾病的病理機制[8]，有助于挖掘出疾病潛在的臨床干預(yù)靶點。

本研究通過橫斷T10 脊髓節(jié)段制備脊髓損傷后BND 模型[9]，使用TMT 標記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)檢測T10～L2 脊髓節(jié)段的DEPs，再對這些DEPs 進行生物信息學(xué)分析，從而尋找新的生物標志物來指導(dǎo)治療脊髓損傷后BND。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

健康成年雌性SD 大鼠40 只，體質(zhì)量250～280 g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供，合格證編號：1107271911006889。標準條件下（溫度24～26 ℃，濕度50%～70%）分籠飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動物中心實驗室，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。 40 只大鼠采用隨機數(shù)字表法分為假手術(shù)組（12 只）和造模組（28 只），造模組大鼠采用Hassan Shaker 脊髓橫斷法[9]制備T10 脊髓損傷模型，脊髓休克期過后共存活25 只，其中13 只模型組大鼠出現(xiàn)尿潴留，采用隨機數(shù)字表法抽取12只納入模型組。

1.2 主要試劑與儀器

水合氯醛（國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20131031）；青霉素鈉（哈藥集團有限公司，80 萬U/支，批號：H23021600）；胰蛋白酶（上海嶸崴達科技公司，批號：11047841001）；蛋白酶抑制劑（上海嶸崴達科技公司，批號：10109878001）；BCA 蛋白質(zhì)定量試劑盒（美國Thermo Scientific 公司，批號：QB214754）；TMT10plexTM同量異序質(zhì)量標簽試劑盒（美國Thermo Scientific 公司，批號：90113CH）；碘乙酰胺（美國SIGMA-ALDRICH 公司，批號：I1149）；無水乙腈（美國SIGMA-ALDRICH 公司，批號：271004）。

MP-150 多通道生理記錄儀（美國BIOPAC 公司，型號：MP150-WSW）；微量注射泵（浙江史密斯醫(yī)學(xué)儀器有限公司，型號：WZ-50C6）；Q Exactive 質(zhì)譜儀（美國Thermo Scientific 公司，型號：0726090）；加熱混合器（美國Thermo Scientific 公司，型號：13687711）；酶標儀（美國Thermo Scientific 公司，型號：1425955）。

1.3 動物造模

大鼠造模前2 h 腹腔注射青霉素鈉20 萬U/只以抗炎。 用10%水合氯醛按30 mg/kg 腹腔麻醉，大鼠俯臥固定在鼠板上，以T13 椎體作為骨性標志，往上數(shù)至T8～T9 椎體處備皮、消毒，做2～3 cm的縱向切口，切開皮下組織，鈍性分離兩側(cè)豎脊肌和棘突旁肌肉，暴露T8 和T9 的棘突和相鄰椎弓。 用顯微咬骨器咬除T8 椎板和兩側(cè)椎弓根，暴露脊髓，牙科彎鉤勾出脊髓，11 號手術(shù)刀片橫斷，多次切斷確保脊髓完全橫斷。 縫合肌肉，用5%聚維酮碘消毒切口及周圍，縫合皮膚。

術(shù)后將大鼠放置恒溫電熱毯上直至蘇醒，單籠飼養(yǎng)；術(shù)后1 周早晚各1 次腹腔注射青霉素鈉（20萬U/只）；每天早、中、晚定時采用Crede 手法[10]輔助排尿；出現(xiàn)壓瘡、自殘現(xiàn)象者用5%聚維酮碘消毒并在對應(yīng)部位撒上青霉素粉。

對動物模型進行后肢運動功能評估（后肢不能參與行走，在前肢行走時處于拖動狀態(tài)，BBB 評分[11]為0 分）和膀胱排尿功能評估（在脊髓休克期過后，膀胱持續(xù)處于尿潴留狀態(tài)，膀胱脹大明顯，不能自主排尿），同時符合這兩個條件則造模成功。

假手術(shù)組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)直至尿流動力學(xué)檢測，期間不做其他處理。

1.4 觀察指標及檢測方法

造模后第19 天行尿流動力學(xué)檢查[12]，而后斷頭處死大鼠，取T10～L2 脊髓組織和膀胱頸備檢，取3只大鼠的T10～L2 脊髓組織液氮冷凍用于TMT 蛋白質(zhì)組學(xué)檢測，剩余的膀胱頸組織和T10～L2 脊髓組織用于HE 染色。

1.4.1 尿流動力學(xué)檢測 大鼠麻醉后進行膀胱灌注實驗，導(dǎo)尿管插入膀胱頂后與膀胱水平放置，設(shè)置MP150 主機壓力基線為零。 將F3 導(dǎo)尿管、MP150-WSW 型16 通道生理記錄儀與WZ-50C6 微量注射泵通過三通管相連接。打開微量注射泵，灌注速度為6 mL/h，灌注的生理鹽水溫度為25～35 ℃。 觀察并記錄膀胱壓力曲線的變化和漏尿情況：觀察有無尿液從尿道口溢出，大鼠首次出現(xiàn)尿液溢出，此時記錄的膀胱壓力即為漏尿壓（leak point pressure, LPP）；最大膀胱容量（maximum cystometric capacity, MCC）則為從開始灌注生理鹽水到尿液漏出尿道口所灌注液體的體積。 繼續(xù)灌注出現(xiàn)穩(wěn)定波形。

1.4.2 HE 染色 大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后剪開右心耳，用生理鹽水從左心室快速灌注直至流出液體變清透后用4%多聚甲醛固定，取T10～L2脊髓組織和膀胱頸用4%多聚甲醛48 h 固定、乙醇梯度脫水、二甲苯透明、浸蠟、包埋、切片、脫蠟、蘇木精和伊紅染色、脫水和中性樹膠封片后，光學(xué)顯微鏡下觀察T10～L2 脊髓和膀胱頸的組織學(xué)變化。

1.5 TMT 蛋白組學(xué)分析

1.5.1 蛋白質(zhì)樣品制備 在10%水合氯醛麻醉下，提取大鼠T10～L2 脊髓組織。樣品中各加入1000 μL 工作液（RIPA 裂解液與蛋白酶抑制劑混合，置于冰上預(yù)冷，得到工作液）充分混勻，冰浴超聲5 min，充分溶解；14 000 r/min、4 ℃離心15 min，轉(zhuǎn)移上清至新的EP 管中；使用BCA 蛋白測定試劑盒按照說明書要求定量測定蛋白濃度。

1.5.2 TMT 定量標記 每個樣品取100 μL 上清液進行還原、烷基化、丙酮沉淀和蛋白重溶，得到相應(yīng)樣品的多肽，吸取20 μL 不同的TMT 溶液至對應(yīng)樣品中，混勻并離心，室溫孵育1 h 后加入羥氨至100 mmol/L，室溫孵育15 min 終止反應(yīng)；將各組標記樣品等量混合；去除脫氧膽酸鈉（sodium deoxy cholate, SDC）后取上清至新EP 管，得到標記的多肽樣品；經(jīng)過多肽脫鹽和RP-RP 分級和真空干燥后-80 ℃凍存，用于LC-MS/MS 分析。

1.5.3 蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)分析 經(jīng)過LC-MS/MS 分析后得到的原始數(shù)據(jù)使用MaxQuant（version1.6.1.0）進行搜庫和TMT 定量分析，蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫為uniprot_rattus_20190711_iso，多肽和蛋白水平FDR＜0.01。 隨后對樣品進行標準化，使各組樣品總蛋白或中位數(shù)一致。將差異倍數(shù)（fold change, FC）＞1.2 或＜1/1.2，P＜0.05，unique peptide≥2 的蛋白定義為DEPs，并對DEPs進行京都基因與基因組百科全書 （Kyoto encyclope dia of genes and genomes, KEGG）通路富集分析、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction,PPI）分析。

1.6 DEPs 的生物信息學(xué)分析

將DEPs 對應(yīng)的基因名導(dǎo)入kobass 數(shù)據(jù)庫（http://kobas.c bi.pku.edu.cn/）[13]， 選擇物種 Rattus.norvegicus，P＜0.05 對DEPs 進行KEGG 分析。 利用STRING(https://string-db.org/)構(gòu)建PPI 網(wǎng)絡(luò)，下載tsv格式的分析結(jié)果并導(dǎo)入到Cytoscape 軟件[14]，對PPI做進一步可視化分析。 利用cytoHubba 插件[15]并根據(jù)DEPs 的度（Degree）值篩選出排名前35 位的關(guān)鍵DEPs，并通過GluGO 插件[16]對35 個關(guān)鍵DEPs 參與的生物過程進行分析。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 25.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。 計量資料符合正態(tài)分布，以“±s”表示，滿足正態(tài)性和方差齊性用t 檢驗，不滿足則用Wilcoxon 檢驗。 以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

假手術(shù)組一般情況良好。 模型組大鼠脊髓休克期后后肢隨意運動消失，爬行時處于拖動狀態(tài)；膀胱脹大，可在下腹部觸摸到“橄欖型”膀胱；大鼠下腹部和籠內(nèi)墊料輕度潮濕，手法排尿時可感覺到尿道口有阻力。

2.2 尿流動力學(xué)結(jié)果

與假手術(shù)組相比，模型組LPP 和MCC 均明顯增高（P＜0.01）。 詳見表1。

表1 大鼠膀胱LPP、MCC 比較（±s）

表1 大鼠膀胱LPP、MCC 比較（±s）

注：與假手術(shù)組相比，**P＜0.01。

MCC/mL 0.36±0.08 4.68±0.44**組別假手術(shù)組模型組n 12 12 LPP/mmHg 18.05±1.64 49.78±2.68**

2.3 HE 染色結(jié)果

HE 染色顯示，假手術(shù)組大鼠膀胱頸組織層次清晰，排列整齊緊密，無炎細胞浸潤，部分區(qū)域有水腫改變；模型組膀胱頸組織中可見大量炎細胞浸潤、彈性纖維減少，肌層可見肌纖維增粗、平滑肌壁增厚，詳見圖1。假手術(shù)組大鼠脊髓組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，未見壞死神經(jīng)元；模型組脊髓組織結(jié)構(gòu)破壞、排列紊亂，有神經(jīng)元崩解現(xiàn)象，壞死后空洞增多，神經(jīng)膠質(zhì)細胞增生，詳見圖2。

圖1 各組大鼠膀胱頸組織病理形態(tài)學(xué)比較（HE 染色）

圖2 各組大鼠T10～L2 脊髓組織病理形態(tài)學(xué)比較（HE 染色）

2.4 脊髓的TMT 定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析

采用TMT 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)共檢測到47 947個多肽，6684 個蛋白質(zhì)，其中有3439 個可量化的蛋白質(zhì)。 根據(jù)fc＞1.2 或fc＜1/1.2、P＜0.05、unique peptide≥2 篩選出模型組與假手術(shù)組中T10～L2 脊髓組織的151 個DEPs，其中84 個表達升高、67 個表達下降，詳見圖3A。聚類分析直觀地展示了DEPs 在假手術(shù)組和模型組之間的表達，詳見圖3B。

圖3 151 個差異蛋白表達譜的火山圖（A）和聚類分析結(jié)果圖（B）

2.5 DEPs 的生物信息分析

2.5.1 DEPs 的KEGG 分析 使用KOBAS 3.0 對151 個DEPs 行KEGG 通路富集分析，設(shè)置P＜0.01共篩選出前16 條KEGG 通路：肌動蛋白細胞骨架的調(diào)節(jié)、趨化因子信號通路、NOD-樣受體信號通路、細胞壞死、細胞凋亡、多巴胺能神經(jīng)突觸和谷氨酸能突觸等。 詳見圖4、表2。

表2 151 個DEPs 的KEGG 通路分析結(jié)果

圖4 151 個DEPs 的KEGG 通路分析結(jié)果

2.5.2 DEPs 的PPI 網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和關(guān)鍵靶點的篩選 采用STRING 數(shù)據(jù)庫聯(lián)合Cytoscape 軟件構(gòu)建151 個DEPs 的PPI 圖。圖中每個節(jié)點代表一個DEPs，去除無相互作用的DEPs，PPI 圖中共有108 個節(jié)點和332 條邊，詳見圖5。 使用cytoHubba 插件根據(jù)DEPs的Degree 值篩選出前35 位的關(guān)鍵DEPs， 詳見圖6A、表3。使用ClueGO 對35 個關(guān)鍵DEPs 參與的生物過程進行分析，發(fā)現(xiàn)35 個關(guān)鍵DEPs 主要參與了突觸修剪、樹突細胞分化、5-羥色胺運輸、巨噬細胞活化、神經(jīng)膠質(zhì)細胞的激活、小膠質(zhì)細胞的激活、神經(jīng)炎癥反應(yīng)和活性氧代謝過程的正調(diào)控等生物學(xué)過程，詳見圖6B。

圖6 35 個關(guān)鍵DEPs 的PPI 圖（A）和參與的生物學(xué)過程（B）

表3 35 個關(guān)鍵DEPs 的具體信息

圖5 DEPs 的PPI 圖

3 討論

BND 是T10 及以上脊髓損傷后臨床干預(yù)的難點問題[17]，其臨床最大的危害在于排尿時，由于交感神經(jīng)過度興奮，膀胱括約肌持續(xù)收縮，膀胱內(nèi)壓持續(xù)升高，最終造成尿液反流和腎功能損傷[18]。

由于T10～L2 脊髓節(jié)段在排尿過程中有重要作用，臨床上通常將其作為治療BND 的目標靶位。因此，本研究團隊制備了T10 脊髓節(jié)段橫斷性損傷后的BND 大鼠模型，選擇T10～L2 脊髓節(jié)段作為本研究的觀察對象。

本實驗結(jié)果顯示，模型組大鼠脊髓休克期過后BBB 評分為0 分；尿流動力學(xué)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，較假手術(shù)組相比，模型組大鼠MCC 和LPP 均增大（P＜0.01）；HE 染色結(jié)果顯示，模型組大鼠T10～L2 脊髓組織有神經(jīng)元崩解現(xiàn)象、壞死后空洞增多、神經(jīng)膠質(zhì)細胞增生，模型組大鼠膀胱頸組織大量炎細胞浸潤、彈性纖維減少，肌層可見肌纖維增粗、平滑肌壁增厚。 以上結(jié)果提示，通過橫斷T10 脊髓節(jié)段能夠形成BND 大鼠模型。

利用TMT 定量標記技術(shù)篩選出模型組/假手術(shù)組的151 個DEPs，通過KEGG 分析挖掘出151 個DEPs 之間潛在的相互作用關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)富集到的KEGG 通路主要參與了炎癥反應(yīng)（趨化因子信號通路和NOD-樣受體信號通路）、凋亡（細胞壞死和細胞凋亡）和突觸傳遞（多巴胺能突觸和谷氨酸能突觸）。 利用Cytoscape 及其插件對151 個DEPs 進行可視化分析，篩選出了Lgals3、Apoe、Dhcr24、Snca 等35 個關(guān)鍵DEPs，利用ClueGO 對35 個DEPs 參與的生物過程進行注釋來展示單個DEPs 的功能，結(jié)果發(fā)現(xiàn)35 個DEPs 主要參與了突觸修剪、5-羥色胺運輸、巨噬細胞活化、神經(jīng)炎癥反應(yīng)、神經(jīng)膠質(zhì)細胞的激活和小膠質(zhì)細胞的激活等生物過程。

脊髓損傷后周圍炎細胞的浸潤、星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞的激活是引起脊髓繼發(fā)性損傷的主要原因之一[19]。其中，被激活的小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞釋放多種氧化應(yīng)激調(diào)節(jié)因子、趨化因子和炎癥介質(zhì)從而介導(dǎo)炎癥反應(yīng)[20]。有研究表明，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中膠質(zhì)細胞介導(dǎo)的慢性炎癥會使神經(jīng)組織損傷進一步加重，從而引起神經(jīng)元損傷和脫髓鞘等病理改變[21]。 目前，針對炎癥反應(yīng)治療繼發(fā)性脊髓損傷，主要通過靶向CD11d/CD18 或α4β1 整合素的抗體來減少小膠質(zhì)細胞/巨噬細胞的活化，最終減少脊髓組織的炎性損傷[20]。 本研究中對151 個DEPs 進行KEGG 分析，發(fā)現(xiàn)趨化因子信號通路和NOD-樣受體信號通路等炎癥相關(guān)途徑顯著富集。 此外，35 個關(guān)鍵DEPs 的生物過程分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，C1qa、Clu、Snca 主要參與了巨噬細胞活化、神經(jīng)炎癥反應(yīng)、神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活和小膠質(zhì)細胞激活等生物過程。 因此，本次生物信息分析富集到的C1qa、Clu 和Snca可能是抑制脊髓炎性損傷的潛在治療靶點。

此外，本次KEGG 分析富集到了細胞壞死和細胞凋亡兩條信號通路。 151 個DEPs 中Pycard、Glul、Capn1 參與了細胞壞死通路，其中：Pycard 泛素化可以促進白細胞介素-1β 活化，加重組織的炎癥反應(yīng)，最終導(dǎo)致細胞壞死和凋亡[22]；Glul 編碼的谷氨酰胺合成酶活性的升高會增加活性氧（reactive oxygen species, ROS）的產(chǎn)生，最終導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化和細胞壞死[23]；Capn1 通過激活半胱天冬酶-3 觸發(fā)神經(jīng)元細胞壞死和凋亡[24]。 此外，151 個DEPs 中Ctsz 和Ctsd參與了細胞凋亡途徑，Ctsz 和Ctsd 編碼的溶酶體半胱氨酸蛋白酶家族可通過降解BCL-2 蛋白從而啟動細胞凋亡過程[25]。 細胞壞死和凋亡是脊髓繼發(fā)性損傷的重要原因[26]，因此，從抑制細胞壞死和凋亡的角度出發(fā)尋找潛在靶點是減輕脊髓繼發(fā)性損傷的治療思路之一。

在T10～L2 脊髓組織的KEGG 分析結(jié)果中，多巴胺能突觸和谷氨酸能突觸兩條信號通路顯著富集。 多巴胺（dopamine, DA）和谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中常見的神經(jīng)遞質(zhì)， 二者在控制膀胱的排尿過程中發(fā)揮著重要作用[27-28]。 研究發(fā)現(xiàn)，在脊髓中存在能產(chǎn)生內(nèi)源性DA 的多巴胺能神經(jīng)元，在T10 脊髓完全橫斷后，脊髓中的多巴胺能神經(jīng)元合成DA 的能力增強，脊髓中依然能夠檢測到內(nèi)源性DA[29]。 已有研究發(fā)現(xiàn)，通過鞘內(nèi)注射DA 信號藥物可以改善脊髓損傷后逼尿肌-外括約肌協(xié)同失調(diào)型膀胱的排尿功能[30]，而脊髓交感神經(jīng)中樞中的DA 可以調(diào)節(jié)膀胱頸的功能[31]。本研究發(fā)現(xiàn)，參與多巴胺能突觸通路中的Comt 在模型組脊髓中顯著升高，Ddc 顯著降低。 研究表明，Comt 具有降解DA 的功能[32]，Ddc能加速DA 的合成[33]。 因此，多巴胺能突觸以及參與該條信號通路的Ddc 和Comt 可能是治療脊髓損傷后BND 的潛在治療靶點。

谷氨酸是影響膀胱排尿的主要興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，其通過與突觸后膜上的谷氨酸受體結(jié)合促進排尿反射[34]。已有研究表明，腰骶脊髓節(jié)段副交感神經(jīng)區(qū)的谷氨酸可激活膀胱逼尿肌從而促進膀胱排尿，目前，谷氨酸受體拮抗劑類藥物已運用于膀胱逼尿肌過度活動的治療中[35]。有研究發(fā)現(xiàn)，胸段脊髓交感神經(jīng)區(qū)仍然有谷氨酸能突觸[36]，在谷氨酸能突觸中，Gng4 可抑制突觸前膜釋放谷氨酸，從而降低突觸間隙的谷氨酸濃度[37]，而Homer1 有助于突觸后膜上的代謝型谷氨酸受體與鈣離子示釋放偶聯(lián)，從而發(fā)揮谷氨酸能突觸作用[38]。 本次實驗的KEGG 分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，谷氨酸能突觸顯著富集，此外151 個DEPs中，Homer1、Gng4 參與了該信號通路，相比于假手術(shù)組，模型組脊髓組織中Homer1 和Gng4 的表達顯著下降。 這說明在T10 脊髓損傷后，由于Gng4 表達下降，T10～L2 脊髓組織中谷氨酸的釋放增加，但由于Homer1 的表達明顯下降，導(dǎo)致谷氨酸能突觸不能發(fā)揮正常的生物學(xué)作用，這可能是T10脊髓損傷后出現(xiàn)下尿路功能障礙的原因之一。 目前，對于交感神經(jīng)中的谷氨酸能突觸是否能對膀胱頸的活動產(chǎn)生作用尚未有報道，因此從谷氨酸能突觸的角度展開進一步研究對治療T10 脊髓損傷后BND 是有意義的。

綜上所述，C1qa、Clu、Snca、Pycard、Glul、Capn1、Ctsz 和Ctsd 可能是減輕T10 脊髓損傷后T10～L2 脊髓組織的炎癥反應(yīng)、保護神經(jīng)細胞、降低脊髓繼發(fā)性損傷風險的潛在治療靶點；脊髓組織中DA 和谷氨酸的含量及相關(guān)受體的活性也可能是治療T10 脊髓損傷后BND 的新思路。 本研究通過TMT 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選出了T10 脊髓節(jié)段損傷后T10～L2 脊髓組織的DEPs，然而并未對篩選出的潛在治療靶點進行驗證。 接下來，將會對篩選出來的DEPs展開驗證工作，進一步探討這些潛在靶點對T10～L2 脊髓組織及脊髓損傷后BND 起到的治療作用。