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    不同嫩化劑改善豬大腸嫩度的工藝優(yōu)化

    2022-08-18 04:17:34程成鵬賀稚非唐春李芳廖林李洪軍
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2022年15期
    關(guān)鍵詞:豬大腸嫩化剪切力

    程成鵬,賀稚非,2,唐春,李芳,廖林,李洪軍,2*

    1(西南大學 食品科學學院,重慶,400715)2(重慶市特色食品工程技術(shù)研究中心,重慶,400715) 3(四川高金實業(yè)集團股份有限公司,四川 遂寧,629000)

    豬大腸又叫豬臟、肥腸、葫蘆頭,是豬的內(nèi)臟器官,包括盲腸、結(jié)腸和直腸,管壁分為黏膜層、黏膜下層、肌肉層、漿膜層,是我國飲食體系中常見的食材。同時豬大腸在中醫(yī)體系中還有潤燥、補虛、止渴止血等醫(yī)療養(yǎng)生價值[1]。但豬大腸存在口感堅韌,久煮不爛的缺點。

    嫩度是影響肉感官的重要因素之一[2-3],其在消費者的購買決策中,尤其是重復性購買中起著重大的作用。嫩度受到一系列生物和環(huán)境因素的影響,例如肌肉組成、脂肪含量、畜種和品種、鈣蛋白酶及鈣蛋白酶抑制蛋白、宰前和宰后的處理等[4]。目前物理嫩化方法主要有沖擊波法、超高壓法、滾揉法等。滾揉嫩化是通過機械作用對肉進行翻滾、摔打從而使肉質(zhì)表面結(jié)構(gòu)松軟柔嫩,但這種方法存在交叉污染的風險[5]。超高壓技術(shù)是通過高壓破壞肌漿網(wǎng)膜和溶酶體膜,激活鈣蛋白酶,增加胞漿內(nèi)組織蛋白酶數(shù)量,從而降解肌原纖維蛋白,肉品得到嫩化,但該方法可能對肉品的色澤、持水力和風味造成一定的負面影響[6]。沖擊波是指在幾分之一毫秒產(chǎn)生的高達1 GPa的壓力波,具有低成本、效率高的優(yōu)點,該技術(shù)最先應用于牛肉的嫩化,但其對產(chǎn)品包裝要求較高,商業(yè)化推廣具有一定的局限性[7]。化學嫩化方法中常用嫩化劑主要有鹽類、有機酸、磷酸鹽等[8]。這些化學物質(zhì)主要是通過改變蛋白質(zhì)溶解度或影響蛋白酶作用從而提高食品嫩度[8]。生物嫩化方法主要是利用外源蛋白酶消化結(jié)締組織和肌肉蛋白質(zhì)[9],降低肉的剪切力,從而達到嫩化的效果。目前,木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、獼猴桃蛋白酶的應用較為廣泛,其中木瓜蛋白酶為含疏基肽鏈內(nèi)切酶,穩(wěn)定性高,對蛋白質(zhì)、多肽類、酯類等物質(zhì)有著較強的水解能力[10-11],可以作用于膠原蛋白和彈性蛋白從而水解肌肉蛋白并增加肉的嫩度[12]。

    本研究通過響應面設(shè)計,以NaOH、木瓜蛋白酶為嫩化方法,對豬大腸進行嫩化處理,以得率、蒸煮損失、剪切力和感官評分為評價手段,對比研究化學和生物方法對豬大腸嫩化的最佳條件,填補豬大腸嫩化研究的空白,以期為豬大腸嫩化方法提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 樣品采集

    豬大腸由四川高鑫食品股份有限公司提供,于-18 ℃的環(huán)境下貯藏。

    1.2 主要試劑

    NaOH,重慶躍翔化工有限公司;NaHCO3(純度≥99%)、CaCl2(純度≥99%),均為分析純,上海源葉生物科技有限公司,木瓜蛋白酶(5萬U/g)、菠蘿蛋白酶(3萬U/g),河北萬邦實業(yè)有限公司。

    1.3 儀器與設(shè)備

    FA214A分析天平,上海豪晟科學儀器有限公司;C-LM3B型數(shù)顯式肌肉嫩度儀,北京天翔飛域儀器設(shè)備有限公司;磁力攪拌水浴鍋,常州恩培儀器制造有限公司。

    1.4 實驗方法

    1.4.1 單因素試驗

    研究不同NaOH質(zhì)量濃度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L)、時間 (20、25、30、35、40 min)和溫度(25、30、35、40、45 ℃)對豬大腸嫩化效果的影響。研究不同木瓜蛋白酶質(zhì)量濃度(1.6、1.8、2.0、2.2、2.4 g/L)、時間(70、80、90、100、110 min)和溫度(25、30、35、40、45 ℃)對豬大腸嫩化效果的影響。

    1.4.2 樣品嫩化處理

    將豬大腸置于4 ℃條件下解凍12 h,去除表面可見脂肪,清洗干凈,將其分為大小均勻,質(zhì)量約3.5 g的肉塊,每10 g豬大腸為1組。之后按照料液比1∶10(g∶mL)放入盛有嫩化劑的燒杯中,在恒溫水浴鍋中進行浸泡處理,一定時間后將豬大腸取出。

    1.4.3 制成率測定

    先將豬大腸水分濾干,之后用濾紙吸干表面水分,準確稱其質(zhì)量并記錄,制成率計算如公式(1)所示:

    (1)

    1.4.4 剪切力的測定

    參照文獻[13-14]的方法,稍作修改,取適量豬大腸肉按照上述方法嫩化處理后,置于蒸煮袋中在90 ℃條件下進行恒溫水浴加熱,20 min后取出樣品。將處理好的樣品切成1 cm×1 cm×5 cm的長方體,用嫩度儀進行測試,每個樣品測3次取其平均值。

    1.4.5 蒸煮損失測定

    參考李明奇等[13]的方法稍做修改,將處理后的肉進行稱重,記為m1,然后置于蒸煮袋中,于90 ℃恒溫水浴鍋中蒸煮20 min后取出,用濾紙吸干表面水分并稱重,記為m2,每個樣品需平行測定3次。蒸煮損失計算如公式(2)所示:

    (2)

    1.4.6 感官評定

    參考SALLAM[15]的方法略作修改,經(jīng)過感官評定實驗培訓,選擇10名(5男5女)食品科學學院研究生組成感官評價小組,按照感官評定實驗要求,對嫩化后的豬大腸色澤、咀嚼性、氣味、硬度和風味進行感官評定,感官評分標準見表1。

    表1 感官評分標準Table 1 Sensory evaluation standards

    1.4.7 響應面設(shè)計

    以NaOH質(zhì)量濃度、時間和溫度為自變量進行單因素試驗,感官評分為響應值,用Design-Expert 8.0.6.1進行響應面試驗設(shè)計。試驗各因素水平見表2。

    表2 感官評分響應面優(yōu)化的因素水平表Table 2 Factors and levels of response surface optimization on sensory score

    以木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù)、時間和溫度為自變量進行單因素試驗,以剪切力為響應值,用Design-Expert 8.0.6.1進行響應面試驗設(shè)計。試驗各因素水平見表3。

    表3 剪切力響應面優(yōu)化的因素水平表Table 3 Factors and levels of response surface optimization on shear force

    1.5 數(shù)據(jù)處理

    所有數(shù)據(jù)均采用Design-Expert.V8.0.6.1軟件進行響應面分析, 單因素方差分析采用SPSS Statistics 19.0軟件進行處理,采用Origin 2018繪圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同嫩化劑對豬大腸嫩化效果對比

    由圖1可知,NaHCO3、菠蘿蛋白酶對豬大腸剪切力影響比NaOH和木瓜蛋白酶小,CaCl2使豬大腸剪切力增加。NaOH、木瓜蛋白酶能夠明顯降低剪切力,其中NaOH降低豬大腸剪切力效果最好,但蒸煮損失比木瓜蛋白酶大??赡苁且驗樨i大腸在堿液中表面膜和結(jié)締組織被部分破壞,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。木瓜蛋白酶水解膠原蛋白和彈性蛋白從而增加豬大腸的嫩度[8]。因此,綜合考慮選擇NaOH和木瓜蛋白酶這2種嫩化劑進行工藝優(yōu)化。

    圖1 不同嫩化劑對豬大腸的嫩化效果對比結(jié)果Fig.1 Comparison of tenderizing effect of different tenderizing agents on pig large intestine

    2.2 單因素試驗結(jié)果

    2.2.1 NaOH質(zhì)量濃度對豬大腸品質(zhì)的影響

    由圖2可知,隨著NaOH質(zhì)量濃度的增加,得率呈現(xiàn)先上升后降低的趨勢,當NaOH質(zhì)量濃度達到1 g/L時,得率達到最大,此時豬大腸吸水最多。NaOH質(zhì)量濃度在0.5~2 g/L時,蒸煮損失顯著下降。當達到2 g/L時,蒸煮損失達到最小。NaOH質(zhì)量濃度在0.5~1 g/L時,剪切力顯著下降,而感官評分顯著增加,達到最大值。之后隨著濃度的增加,剪切力和感官評分都有下降,但不顯著。這可能是因為適當濃度的堿液能夠使蛋白質(zhì)溶解暴露親水基團,從而提高吸水性和降低剪切力。當堿的濃度過大,會破壞豬大腸結(jié)構(gòu),吸水過多,從而降低口感[16]。

    a-得率和蒸煮損失;b-剪切力和感官評分圖2 NaOH質(zhì)量濃度對豬大腸品質(zhì)的影響Fig.2 Effect of NaOH concentration on the quality of pig large intestine

    2.2.2 NaOH處理時間對豬大腸品質(zhì)的影響

    由圖3可知,隨著處理時間的增加,得率和蒸煮損失都呈上升趨勢,說明處理時間對得率和蒸煮損失都存在顯著影響。剪切力和感官評分在20~25 min時分別呈顯著下降和上升的趨勢,并且感官評分在25 min時達到最大值,之后逐漸下降。說明在25 min時,豬大腸嫩度較好,感官品質(zhì)最佳。當時間為35 min時,剪切力顯著下降,此時感官評分較低。說明此時豬大腸內(nèi)部結(jié)構(gòu)已經(jīng)遭到破壞,咀嚼性差。

    a-得率和蒸煮損失;b-剪切力和感官評分圖3 NaOH處理時間對豬大腸品質(zhì)的影響Fig.3 Effect of NaOH treatment time on the quality of pig large intestine

    2.2.3 NaOH處理溫度對豬大腸品質(zhì)的影響

    由圖4可知,隨著溫度的增加,得率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢,當溫度40 ℃時達到最大值,吸水最多。蒸煮損失在35~40 ℃時,顯著下降,說明此時豬大腸持水性較好。剪切力隨著溫度升高呈現(xiàn)一個先下降后上升的趨勢。當溫度為40 ℃時,達到最低值。感官評分隨著溫度的升高呈先上升后下降的趨勢。當溫度達到40 ℃時,感官評分最高。說明溫度為40 ℃時,豬大腸品質(zhì)最佳。

    a-得率和蒸煮損失;b-剪切力和感官評分圖4 NaOH處理溫度對豬大腸品質(zhì)的影響Fig.4 Effect of NaOH treatment temperature on pig large intestine quality

    2.2.4 木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù)、處理時間和溫度對蒸煮損失和剪切力影響

    由圖5-a可知,隨著木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù)的增加蒸煮損失和剪切力都呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢。質(zhì)量分數(shù)達到2%時剪切力達到最小值。木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù)處于2%~2.2%時蒸煮損失處于最小值且變化不大。根據(jù)前人研究,木瓜蛋白酶是一種低特異性巰基酶,它能夠?qū)⒌鞍踪|(zhì)分子內(nèi)部的肽鏈—CO—NH—分解成多肽和氨基酸[17]。在適宜條件下,可以提高保水性,獲得更好的口感。當木瓜蛋白酶添加過量時,剪切力和蒸煮損失都上升。這是因為木瓜蛋白酶過量使用會導致蛋白水解過度,保水性和感官品質(zhì)下降[18]。如圖5-b所示,隨著酶處理的時間增加,蒸煮損失和剪切力都呈現(xiàn)先下降后上升的趨勢,并且都在100 min時達到最小值。豬大腸嫩化是一定程度的水解,當木瓜蛋白酶處理時間適宜,可以有效降低豬大腸剪切力,提高嫩度。當處理時間超過100 min,豬大腸過度水解,失水老化,嫩度降低[8]。木瓜蛋白酶有最適的反應溫度,如圖5-c所示,當溫度處于25~35 ℃時,豬大腸的剪切力隨著溫度的升高而逐漸降低,木瓜蛋白酶嫩化效果十分明顯;當嫩化溫度大于35 ℃時,豬大腸的剪切力反而增加。因此,木瓜蛋白酶處理豬大腸最佳溫度為35 ℃,在此溫度條件下,豬大腸的嫩化和保水效果較好。

    a-木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù);b-木瓜蛋白酶處理時間;c-木瓜蛋白酶溫度圖5 木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù)、處理時間和溫度對蒸煮損失和剪切力影響Fig.5 Effects of papain mass fraction, treatment time and temperature on cooking loss and shear force

    2.3 響應面法優(yōu)化豬大腸的嫩化工藝

    2.3.1 響應面分析因素和水平選擇

    響應面優(yōu)化豬大腸嫩化工藝試驗結(jié)果見表4和表5。

    表4 感官評分Box-Behnken 試驗設(shè)計及結(jié)果Table 4 The design matrix and result of Box-Behnken experiments (sensory score)

    表5 剪切力Box-Behnken 試驗設(shè)計及結(jié)果Table 5 The design matrix and result of Box-Behnken experiments (shear force)

    運用Design-Expert.V8.0.6.1軟件對表中的數(shù)據(jù)進行二次多元回歸擬合,得到堿處理后感官評分(Y1) 與3個嫩化因子A、B、C的關(guān)系如公式(3)所示:

    Y1=7.68+0.45A-0.20B+0.25C+0.25AB-0.95AC-0.95BC-0.86A2-0.86B2-0.96C2

    (3)

    式中:Y1,感官評分;A,NaOH質(zhì)量濃度;B,堿處理時間;C,堿處理溫度。

    得到木瓜蛋白酶處理后剪切力(Y2)與3個嫩化因子A、B、C的關(guān)系如公式(4)所示:

    Y2=11.74-0.13A-0.15B-0.23C+0.022AB-0.16AC-0.030BC+2.03A2+0.29B2+0.71C2

    (4)

    式中:Y2,剪切力;A,木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù);B,時間;C,溫度。

    回歸方程中每項系數(shù)絕對值的大小直接反映了各個因素對響應值的影響程度,系數(shù)的正負則反映了影響的方向。

    2.3.2 多元回歸模型分析

    表6 感官評分多元回歸模型方差分析Table 6 Analysis of variance and multiple regression model on sensory scores

    表7 剪切力多元回歸模型方差分析Table 7 Analysis of variance and multiple regression model (shear force)

    2.3.3 響應面模型中各因素的交互效應分析

    應用Design-Expert.V8.0.6.1軟件進行響應面分析,各因素對響應值的影響可以用等高線和響應曲面來表示,結(jié)果如圖6與圖7所示。

    圖6顯示了不同NaOH質(zhì)量濃度(A)、時間(B)、溫度(C)對豬大腸感官評分的影響,響應面圖為曲面,說明3個因素之間有一定的交互作用,其中AC、BC之間存在極顯著交互作用(P<0.001),AB之間存在高度顯著作用(P<0.01)。由圖6-a可知,當嫩化時間為24 min左右,NaOH質(zhì)量濃度為1.1 g/L左右時,豬大腸的感官評分最高,兩因素對比,NaOH質(zhì)量濃度對感官評分影響較大。在適宜NaOH濃度范圍內(nèi),豬大腸的脂蛋白分解率會隨著NaOH質(zhì)量濃度提高而增加,擴散到豬大腸內(nèi)部的水分增加,從而增加制成率、增加嫩度。但NaOH質(zhì)量濃度過高,會使豬大腸吸水過多,豬大腸的內(nèi)部組織結(jié)構(gòu)遭到破壞,從而保水性、感官品質(zhì)變差[19]。由圖6-b可知,當嫩化溫度在41 ℃左右,NaOH質(zhì)量濃度為1.1 g/L左右時,豬大腸的感官評分最高,且響應曲面的等高線圖呈現(xiàn)橢圓形,說明二者之間有顯著交互作用。這可能是因為適當濃度的堿液和溫度能夠使蛋白質(zhì)溶解暴露親水基團,提高吸水性和降低剪切力[18, 20-21]。由圖6-c可知,當嫩化溫度為41 ℃左右,嫩化時間為24 min左右時,豬大腸的感官評分最高。

    a-NaOH處理時間和質(zhì)量濃度;b-NaOH處理溫度和質(zhì)量濃度;c-NaOH處理溫度和處理時間圖6 各因素的交互效應對感官評分的影響Fig.6 Effect of interaction of various factors on sensory score

    a-木瓜蛋白酶處理時間和溫度;b-木瓜蛋白酶處理時間和酶用量;c-木瓜蛋白酶處理溫度和酶用量圖7 各因素的交互效應對剪切力的影響Fig.7 Effect of interaction of various factors on shear force

    圖7顯示了不同木瓜蛋白酶質(zhì)量(A)、時間(B)、溫度(C)對豬大腸感官品分的影響,響應面圖為曲面,說明3個因素之間有一定的交互作用,其中AC之間存在顯著交互作用(P<0.05)。由圖7-a可知,當嫩化時間為102 min左右,嫩化溫度為36 ℃左右時,豬大腸的剪切力最低。肌內(nèi)結(jié)締組織的變化對肉的嫩度影響較大,其中肌束膜和肌內(nèi)膜中的膠原蛋白起關(guān)鍵作用[22]。隨著溫度升高到適宜范圍,膠原蛋白適當變性,豬大腸的剪切力降低。由圖7-b可知,當嫩化時間為102 min左右,酶用量為2.0%左右時,豬大腸的剪切力最高,由圖7-c可知,當嫩化溫度為36 ℃左右,酶用量為2.0%左右時,豬大腸的剪切力最高。

    2.4 驗證試驗結(jié)果

    結(jié)合回歸模型和響應曲面圖,得到2種嫩化劑嫩化豬大腸的感官評分和剪切力最佳工藝條件是:以NaOH為嫩化劑時最佳參數(shù)組合為NaOH質(zhì)量濃度為1.08 g/L,時間為24.2 min,溫度為40.63 ℃,此時豬大腸的感官評分為7.750。以木瓜蛋白酶為嫩化劑時最佳參數(shù)組合為木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù)為2.01%,時間為101.69 min,溫度為36.32 ℃,此時豬大腸的剪切力為11.695 N。

    為進一步驗證響應面優(yōu)化的準確性,根據(jù)實際操作對最優(yōu)條件進行調(diào)整,在NaOH質(zhì)量濃度為1.1 g/L,時間為24 min,溫度為41 ℃的條件下進行3次驗證實驗,得到嫩化后的豬大腸感官評分為7.4,與響應面優(yōu)化的結(jié)果相對誤差為4.73%,響應面優(yōu)化結(jié)果準確可信。在木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù)為2.0%,時間為102 min,溫度為36 ℃的條件下進行3次驗證實驗,得到嫩化后的豬大腸剪切力為12.36 N,與響應面優(yōu)化的結(jié)果相對誤差為5.38%,響應面優(yōu)化結(jié)果準確可信。

    3 結(jié)論

    NaOH與木瓜蛋白酶來嫩化豬大腸制品,都可以顯著增加得率,降低剪切力。以NaOH為嫩化劑時最佳參數(shù)組合為NaOH質(zhì)量濃度為1.1 g/L,時間為24 min,溫度為41 ℃,此時豬大腸的感官評分為7.7。以木瓜蛋白酶為嫩化劑時最佳參數(shù)組合為木瓜蛋白酶質(zhì)量分數(shù)為2.0%,時間為102 min,溫度為36 ℃,此時豬大腸的剪切力為11.70 N。說明這2種嫩化劑對豬大腸的嫩化和品質(zhì)改善效果較好,有一定實用價值,可以為豬大腸的精深加工提供參考。

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