2018—2020年河南安陽部分地區(qū)種豬群豬偽狂犬病野毒的抗體檢測與分析

尉新華，王鵬翔

（1.安陽市動物衛(wèi)生監(jiān)督所，河南 安陽 455000；2.安陽市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測檢驗中心，河南 安陽 455000）

豬偽狂犬病野毒（Pseudorabies virus，PRV）是一種高致病性傳染病病毒，其對種豬的健康影響很大，會導(dǎo)致母豬出現(xiàn)中途流產(chǎn)、木乃伊胎、死胎等繁殖障礙現(xiàn)象；對于仔豬的影響是最大的，死亡率為100%；這種病對于成年豬的影響不大，感染了PRV的成年豬臨床表現(xiàn)為呼吸系統(tǒng)綜合征癥狀，但是成年豬一旦感染了此病，有可能長期成為病毒攜帶豬，而且有可能會長期排毒，導(dǎo)致整個豬群的免疫力下降，繁殖力變差，對規(guī)?；B(yǎng)豬場的打擊是致命的[1]。我國是豬肉的生產(chǎn)大國也是消費(fèi)大國，隨著我國人口的不斷增加，全國各地養(yǎng)豬場的規(guī)模越來越大，導(dǎo)致生豬養(yǎng)殖的密度不斷上漲，最惡劣的影響就是導(dǎo)致生豬養(yǎng)殖的環(huán)境不斷惡化，這對豬偽狂犬病的防治是非常不利的。我國的養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)與發(fā)達(dá)國家有明顯區(qū)別的一點就是我國農(nóng)村分布了很多生豬的散養(yǎng)戶，不但數(shù)量難以統(tǒng)計，而且養(yǎng)殖條件差，防疫觀念落后，導(dǎo)致豬偽狂犬病不斷發(fā)生，這就給規(guī)?；i場的豬病防治帶來了極大的挑戰(zhàn)[2]。據(jù)不完全統(tǒng)計，我國每年因感染豬偽狂犬病野毒死亡的豬有數(shù)千萬頭，因此病的流行而導(dǎo)致養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)20億人民幣以上，不但影響了我國的生豬出口，還影響我國的豬肉產(chǎn)品質(zhì)量，雖然我國已經(jīng)針對該病的防治大量使用了gE缺失疫苗以及gE鑒別診斷試劑盒，但是受我國經(jīng)濟(jì)情況的制約，目前在全國范圍內(nèi)實施清除豬偽狂犬病野毒的計劃顯然是不現(xiàn)實的，這是因為我國的小規(guī)模養(yǎng)豬場在一定時間內(nèi)還不可能完全禁止，而豬偽狂犬病野毒的傳播途徑多，且豬偽狂犬病野毒病毒的凈化規(guī)程還未制定，至今為止，對于豬偽狂犬病野毒的診斷和控制還僅限于在國內(nèi)科研機(jī)構(gòu)中進(jìn)行。根據(jù)我國現(xiàn)有養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展情況，該病目前僅能在控制階段，因此，必須采取一定手段控制豬偽狂犬病野毒的傳播和流行，而對規(guī)模化養(yǎng)豬場進(jìn)行種豬群豬偽狂犬病野毒的抗體檢測與分析顯然是一種相對來說現(xiàn)行有效的手段[3]。2020年7月，筆者所在安陽市動物衛(wèi)生監(jiān)督所監(jiān)測發(fā)現(xiàn)河南省安陽市某規(guī)模化豬場的繁育種豬出現(xiàn)偽狂犬病野毒明顯轉(zhuǎn)陽的現(xiàn)象，為此，筆者對該豬場2018—2020年送檢血清樣品的免疫（gB）抗體和偽狂犬病野毒抗體的檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行了統(tǒng)計和分析，旨在為掌握該規(guī)?；庇i場的豬群偽狂犬病野毒感染狀況和免疫抗體的水平，為安陽地區(qū)豬偽狂犬病的有效控制提供一些參考。

1 材料與方法

1.1 發(fā)病背景

河南省安陽市規(guī)?；i繁育場，共有存欄基礎(chǔ)母豬600頭，品種為長白，哺乳仔豬斷奶日齡為26 d。該養(yǎng)豬場一直存在仔豬成活率低的問題，而且母豬也容易在繁育過程中出現(xiàn)死胎、弱胎或者流產(chǎn)的問題，甚至還有木乃伊胎，因此母豬的年均窩產(chǎn)仔豬數(shù)很低，一頭母豬的PSY（年斷奶仔豬數(shù)）僅在15頭以內(nèi)，仔豬保育期的成活率也特別低，僅有80%，因此豬場的生產(chǎn)成績令人擔(dān)憂。僅2020年，豬場就出現(xiàn)了多次懷孕母豬流產(chǎn)現(xiàn)象，而且豬群有明顯的呼吸道癥狀，哺乳期仔豬有明顯的嘔吐、腹瀉，還有站立不動，渾身發(fā)抖的癥狀，該病應(yīng)用頭孢、青霉素等抗生素均無效，死亡仔豬19窩，共計300頭。豬場的檢疫人員根據(jù)經(jīng)驗判斷該豬場因為規(guī)模化養(yǎng)殖出現(xiàn)了豬偽狂犬病感染，因此檢疫人員積極應(yīng)對疫情，將病豬、死豬的樣本送到安陽市動物衛(wèi)生監(jiān)督所進(jìn)行檢測，另外，根據(jù)安陽市規(guī)模化豬繁育場的存欄數(shù)量，再對豬定期進(jìn)行采血，然后再對血清進(jìn)行分離，最后將這些血清送到安陽市動物衛(wèi)生監(jiān)督所進(jìn)行豬偽狂犬病的抗體檢測[4]。

1.2 病例分析

根據(jù)臨床癥狀以及該豬場用藥的情況，基本排除了常見細(xì)菌病的可能性。由于該豬場免疫的蜂膠苗，蜂膠苗為滅活苗，2005年以前我國許多豬場都應(yīng)用滅活苗，但是該疫苗有一個很大的缺陷，其主要激活機(jī)體的體液免疫，然而對豬群保護(hù)需要細(xì)胞免疫，所以該疫苗對豬群沒有起到一個很好的保護(hù)作用。經(jīng)過了解該豬場肥育豬35日齡免疫一次，母豬產(chǎn)前25 d免疫，由于該豬場未能進(jìn)行合理次數(shù)的免疫，所以導(dǎo)致本次偽狂犬病的發(fā)生[5]。

1.3 樣品來源

血清全部來源于河南安陽市某存欄600多頭母豬的規(guī)?；i場，被檢血樣共600份，采集種豬的靜脈血樣3～5 mL，由1個規(guī)?；i場提供。將采好的血樣3～6 h析出血清，取上清液置于滅菌的離心管中，并且進(jìn)行編號，置于-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.4 試劑與試驗設(shè)備

儀器和試劑詳見表1。

表1 儀器型號和廠家

2 方法

偽狂犬病gB、gE抗體采用武漢科前動物生物制品公司生產(chǎn)的偽狂犬病病毒ELISA抗體診斷試劑盒，參照說明書操作及標(biāo)準(zhǔn)判定。

3 結(jié)果與分析

3.1 豬偽狂犬病野毒抗體檢測情況

3.1.1 種豬PR野毒抗體檢測結(jié)果 由表2可知，該豬場2018年種豬PR野毒感染較為嚴(yán)重，第三季度的感染率升至44.8%，2019年第一季度到2020年第一季度的陽性率控制較好，在1.9%～11.5%之間，2020第二季度和2020年第三季度種豬PR野毒感染率有所上升，分別為23.8%和58.1%。

表2 不同時期種豬PR野毒抗體檢測結(jié)果

3.1.2 肥育豬PR野毒抗體檢測結(jié)果 由表3可知，2018年和2019年該豬場肥育豬群野毒感染率較低，而2020年第三季度開始豬群野毒感染率明顯上升，特別是第四季度感染率達(dá)到89.9%，感染壓力大[6]。

表3 不同時間肥育豬PR野毒抗體檢測結(jié)果

由表4可知，2018—2020年60～100日齡的肥育豬群PR野毒感染率分別為5.4%、2.5%、1.8%，而100～210日齡的肥育豬群PR野毒感染率分別為5.6%、4.4%和57.6%。由此可見，100～210日齡豬群野毒感染率高于60～100日齡的豬群。

表4 不同日齡肥育豬PR野毒感染率 %

3.2 豬偽狂犬病免疫抗體檢測情況

3.2.1 種豬PRV免疫抗體檢測結(jié)果 由表5可知，2018年2月和4月檢測的種豬群RPV免疫抗體陽性率達(dá)到100%，而7月免疫抗體降低至71.4%。2020年2月和5月抽檢，PRV免疫抗體陽性率為100%和75.7%[7]。

表5 種豬PRV免疫抗體檢測結(jié)果

3.2.2 不同日齡肥育豬群PRV免疫抗體檢測結(jié)果由表6可知，隨著日齡的增大，2018—2019年肥育豬群PRV免疫抗體陽性率從60日齡的66.7%下降到90～100日齡的25.0%，而120～130日齡免疫抗體陽性率由41.7%上升至130～160日齡的70.6%[8]。

表6 不同日齡肥育豬PRV免疫抗體檢測結(jié)果

4 結(jié)果與討論

目前，我國一般采用gE基因缺失疫苗用來預(yù)防豬偽狂犬病野毒，這種疫苗的使用可以清楚地區(qū)分自然感染豬和免疫豬，采用的是血清學(xué)方法。豬偽狂犬病野毒抗體可以通過PRV gI抗體檢測試劑盒快速檢測出來，這種方法被用于評估規(guī)模化養(yǎng)豬場的豬偽狂犬病野毒感染的狀況。還有一種試劑盒，那就是Herdchek豬偽狂犬病gB抗體檢測試劑盒，這種試劑盒非常靈敏，即使是非常微量的抗體水平，也能夠檢測出抗體結(jié)果。本次檢測的Herdchek豬偽狂犬病gB抗體豬群是PR野毒抗體陰性豬群，因此，抗體水平可以反映出豬群的疫苗免疫結(jié)果[9]。

由PR野毒感染結(jié)果不難看出，該規(guī)?；i場的豬群野毒的感染狀況是呈現(xiàn)動態(tài)性變化的，2018年的豬偽狂犬病野毒感染比較嚴(yán)重，2018年的第一季度、第二季度、第三季度野毒感染率都較高，分別為15.6%、20.6%、44.8%，在此之后，豬場采取了對豬群加強(qiáng)免疫，并且對帶毒豬進(jìn)行淘汰，可見豬場的野毒感染狀況已經(jīng)出現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)，2019年第一季度到2020年第一季度的陽性率控制較好，在1.9%～11.5%之間，但是2020年第二季度以后，野毒感染率明顯上升，種豬的野毒感染率高達(dá)58.1%。可見定期對豬群進(jìn)行疫苗免疫是非常有必要的[10]。

通過豬場的肥育豬的豬群野毒檢測不難看出，2020年第三、四季度感染率分別為12.6%和89.9%。2018—2020年不同日齡肥育豬PR野毒感染檢測結(jié)果表明100～210日齡豬群的野毒感染率要明顯高于60～100日齡[11]。

偽狂犬病免疫（gB）抗體檢測表明種豬群的抗體陽性率明顯要高于肥育豬，種豬抗體陽性率為71.4%～100.0%；肥育豬免疫抗體陽性率出現(xiàn)較為明顯的波動[12]，70～80日齡的陽性率為52.9%，80～130日齡的陽性率為25.0%～41.7%，130～160日齡的免疫抗體陽性率為70.6%，可能與該豬場在65～70日齡采取免疫某進(jìn)口豬偽狂犬病疫苗有關(guān)。種豬由于采取每年3～4次普免豬偽狂犬病疫苗，免疫抗體水平較高，同時野毒感染率也較低，但是肥育豬在80～130日齡免疫抗體水平很低，基本處于免疫空白期[13]。

豬偽狂犬病是規(guī)模化養(yǎng)豬場的重要疫病，不但會導(dǎo)致種豬的繁殖障礙，還會導(dǎo)致仔豬的成活率低，死亡率高等，而且會導(dǎo)致肥育豬發(fā)生呼吸道病綜合征[14]。目前該病在我國并未完全根除，因此，對豬群加強(qiáng)疫苗接種，尤其要根據(jù)規(guī)?；i場的特點定期對豬群進(jìn)行疫苗接種，還要定期對豬群的豬偽狂犬病野毒抗體進(jìn)行檢測，這仍然是一種行之有效的方法[15]。