氣相色譜法測定(S, S)-2, 8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷中的殘留溶劑

李 霞，劉延新，廉貞霞，陳 勉，袁曉如，楊海霞

（山東省藥學科學院 山東省生物藥物重點實驗室，山東 濟南 250101）

鹽酸莫西沙星是第IV代新型8-甲氧基氟喹諾酮類廣譜抗菌藥物[1]，是肺部疾病抗感染治療的一線藥物[2]，可縮短患者臨床癥狀的改善時間，減輕炎癥反應[3-4]，治療下呼吸道感染安全、有效[5-6]。(S,S)-2, 8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷是合成鹽酸莫西沙星的關鍵中間體[7]，對(S,S)-2, 8-二氮雜雙環(huán)[4, 3,0]壬烷進行質量控制，對于提高鹽酸莫西沙星產品質量十分重要。

(S,S)-2, 8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷在生產過程中使用了甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯4種有機溶劑，根據中國藥典2020年版四部殘留溶劑測定法[8]的規(guī)定，甲醇、四氫呋喃和甲苯為第二類溶劑，乙酸乙酯為第三類溶劑，因此，需對(S,S)-2,8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷中上述有機溶劑的殘留量進行測定。本文建立了頂空氣相色譜法測定(S,S)-2, 8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷中甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯殘留量的方法，方法學研究表明所建立的檢測方法靈敏度高、操作簡便，可用于(S,S)-2,8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent7890A氣相色譜儀，Agilent7697A頂空進樣器（美國安捷倫科技有限公司）；XS-205型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

1.2 藥品與試劑

甲醇（天津市康科德科技有限公司，色譜純）；乙酸乙酯（天津科密歐化學試劑有限公司，色譜純）；四氫呋喃（天津市康科德科技有限公司，色譜純）；甲苯（國藥集團化學試劑有限公司，色譜純）；二甲基亞砜（天津市光復科技發(fā)展有限公司，色譜純）；水為自制超純水。(S,S)-2, 8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷（批號：20200707003，20200709004，20200712005）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：DB-624毛細管柱（30 m×0.53 mm，3.0 μm）；進樣口溫度：200 ℃；載氣（N2）：2 ml/min；FID檢測器溫度：250 ℃；氫氣：40 ml/min；空氣：400 ml/min；程序升溫：初始溫度為45 ℃，以每分鐘10 ℃升溫至155 ℃，再以每分鐘30 ℃升溫至235 ℃，保持8 min；溶劑：二甲基亞砜；頂空瓶平衡溫度：80 ℃，平衡時間：20 min。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯適量，加二甲基亞砜定量稀釋制成每1 ml約含甲醇150 μg、乙酸乙酯250 μg、四氫呋喃36 μg及甲苯44.5 μg的溶液，精密量取2 ml，置10 ml頂空瓶中，密封。

2.2.2 供試品溶液 取樣品約0.1 g，精密稱定，置10 ml頂空瓶中，精密加入二甲基亞砜2 ml，密封，振搖使溶解。

2.2.3 空白對照溶液 精密量取二甲基亞砜2 ml，置10 ml頂空瓶中，密封。

2.3 專屬性試驗

取2.2項下空白對照溶液和對照品溶液，按2.1項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖（圖1）。結果，對照品溶液中各主成分峰的出峰順序依次為甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃、甲苯，各主成分峰之間能完全分離，空白對照溶液對測定無干擾，表明方法專屬性良好。

圖1 專屬性試驗GC色譜圖

2.4 線性關系試驗

精密稱取乙酸乙酯59.14 mg，甲醇39.71 mg，置已盛有適量二甲基亞砜的25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液（1）。精密稱取甲苯20.38 mg，四氫呋喃17.29 mg，置已盛有適量二甲基亞砜的50 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液（2）。分別精密量取對照品貯備液（1）、對照品貯備液（2）各1 ml，置50 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為線性1號溶液；分別精密量取對照品貯備液（1）、對照品貯備液（2）各2 ml，置50 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為線性2號溶液；分別精密量取對照品貯備液（1）、對照品貯備液（2）各2.5 ml，置25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為線性3號溶液；分別精密量取對照品貯備液（1）、對照品貯備液（2）各4 ml，置25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為線性4號溶液；分別精密量取對照品貯備液（1）、對照品貯備液（2）各5 ml，置25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為線性5號溶液。各精密量取2 ml，置頂空瓶中，密封，照上述色譜條件進樣測定，以各主成分濃度（C）為橫坐標，對應的峰面積（A）為縱坐標，進行線性回歸，結果見表1。結果表明，線性范圍內，各溶劑濃度與峰面積之間線性關系良好。

表1 各組分線性方程、線性范圍及相關系數

2.5 檢測限與定量限

取對照品溶液，加二甲基亞砜稀釋制成不同濃度的溶液，頂空進樣，當甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯的濃度依次為2.23，0.36，0.21，0.25 μg/ml時，其信噪比約為10，即為其定量限；當甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯的濃度依次為0.96，0.142，0.083，0.098 μg/ml時，其信噪比約為3，即為其檢測限。

2.6 精密度試驗

精密量取2.4項下線性3號溶液（甲醇濃度為158.840 μg/ml、乙酸乙酯濃度為236.560 μg/ml、四氫呋喃濃度為34.580 μg/ml及甲苯濃度為40.760 μg/ml）2 ml，置頂空瓶中，密封，平行取樣6次，依法測定，分別計算甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯峰面積的RSD為2.58 %，1.84 %，1.61 %，1.75 %（n=6），表明方法精密度良好。

2.7 重復性試驗及中間精密度試驗

取2.4項下的線性3號溶液，作為對照品溶液。取樣品（批號：20200709004）約0.1 g，精密稱定，按2.2.2項下方法配制供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定各溶劑殘留量，平行測定6份，乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯均未檢出，甲醇殘留量平均為0.001 %，RSD為7.15 %（n=6），表明方法重復性良好。

另取樣品（批號：20200709004），在不同時間，采用不同儀器，由不同人員，按2.2.2項下方法配制供試品溶液，按2.1項下色譜條件測定各溶劑殘留量，分別平行測定6份，計算12份樣品溶劑殘留量的平均值，乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯均未檢出，甲醇殘留量平均為0.001 %，RSD為9.85 %（n=12），表明方法中間精密度良好。

2.8 回收率試驗

精密稱取乙酸乙酯60.01 mg，甲醇39.95 mg，置已盛有適量二甲基亞砜的25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液（1）。精密稱取甲苯21.12 mg，四氫呋喃16.52 mg，置已盛有適量二甲基亞砜的50 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液（2）。分別精密量取對照品貯備液（1）、對照品貯備液（2）各2 ml，置25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品1號溶液；分別精密量取對照品貯備液（1）、對照品貯備液（2）各5 ml，置50 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品2號溶液；分別精密量取對照品貯備液（1）、對照品貯備液（2）各3 ml，置25 ml量瓶中，加二甲基亞砜稀釋至刻度，搖勻，作為對照品3號溶液。

取樣品（批號：20200709004，甲醇含量為0.001 %，其余溶劑均未檢出）約0.1 g，共3份，精密稱定，各置3個10 ml頂空瓶中，分別加對照品1號溶液2 ml，密封，振搖使溶解，作為供試品溶液1～3；取樣品（批號：20200709004，甲醇含量為0.001 %，其余溶劑均未檢出）約0.1 g，共3份，精密稱定，各置3個10 ml頂空瓶中，分別加對照品2號溶液2 ml，密封，振搖使溶解，作為供試品溶液4～6；取樣品（批號：20200709004，甲醇含量為0.001 %，其余溶劑均未檢出）約0.1 g，共3份，精密稱定，各置3個10 ml頂空瓶中，分別加對照品3號溶液2 ml，密封，振搖使溶解，作為供試品溶液7～9。取對照品2號溶液2 ml及供試品溶液，依法測定，計算回收率，結果甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯的平均回收率分別為100.26 %（RSD=1.02 %），96.45 %（RSD=0.93 %），94.92 %（RSD=1.09 %），94.82 %（RSD=1.02 %）（n=9）。

2.9 耐用性試驗

取對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，分別調整載氣流速、程序升溫中初始溫度、升溫速率等條件，依法測定，考察各主成分峰之間的分離度，均能完全分離，表明該法耐用性良好。

2.10 樣品測定

分別取2.2項下供試品溶液及對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，按外標法，以峰面積計算各有機溶劑殘留量，結果見表2。

表2 樣品測定結果/%

3 討論

3.1 色譜條件選擇

分別選用WAX、HP-5及DB-624毛細管柱進行測定，通過對比結果，選用DB-624，同時優(yōu)化程序升溫，最終采用初始溫度為45 ℃，以每分鐘10 ℃升溫至155 ℃，再以每分鐘30 ℃升溫至235 ℃，保持8 min，此條件下，各組分峰對稱性較好，分離度符合要求，溶劑二甲基亞砜不干擾測定。

3.2 頂空瓶平衡溫度及平衡時間的選擇

考察了頂空瓶的不同平衡溫度（70，80，90 ℃）和不同平衡時間（10，20，30 min）對各被測成分峰面積的影響。結果表明，平衡溫度80 ℃，平衡時間20 min時，各被測成分的峰面積達平衡，因此，選擇平衡溫度為80 ℃，平衡時間為20 min。

4 結論

方法學驗證和樣品測定結果表明，本文建立的色譜方法，靈敏度高，操作簡便，能測定(S,S)-2, 8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷中甲醇、乙酸乙酯、四氫呋喃和甲苯的殘留量，該法能更好地控制(S,S)-2, 8-二氮雜雙環(huán)[4, 3, 0]壬烷產品質量。