齊墩果酸線粒體靶向脂質(zhì)體的制備及抗胰腺癌研究

譚曉柯，武香香，曾華輝，朱鑫*（. 河南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，鄭州 450046；. 河南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥科學(xué)院，鄭州 450046）

胰腺癌（pancreatic cancer，PC）是一種難治性惡性腫瘤[1]，預(yù)后非常差，通常在確診后，只有24%的人存活1年，9%的人存活5年[2]。預(yù)后不良的主要原因是缺乏早期癥狀、腫瘤進(jìn)展迅速以及局部/轉(zhuǎn)移性疾病的有效藥物療效有限[3]。

齊墩果酸（oleanolic acid，OA）是一種五環(huán)三萜類天然產(chǎn)物，廣泛存在于多種中藥材中，如三七、懷牛膝、甘草、石斛夾竹桃和女貞等[4]。研究發(fā)現(xiàn)，OA 具有多種有益的藥理學(xué)活性，比如抗氧化作用、抗炎作用、降糖作用、抗病毒作用、肝功能保護(hù)作用、胃黏膜保護(hù)作用、抗微生物作用、抗腫瘤作用等[5]。雖然OA 具有一定的抗腫瘤活性，能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞的增殖[6]，但該藥物的水溶性較差，在水中的溶解度僅為 1μg·mL-1，腸黏膜透過性較差且具有較大的首過效應(yīng)，致使其生物利用度低且個(gè)體間差異較大，這些性質(zhì)限制了其臨床應(yīng)用與開發(fā)[7]。目前，OA 在市場上銷售的藥物制劑只有片劑和膠囊劑，國內(nèi)外有關(guān)學(xué)者進(jìn)行了OA 新劑型的研究，大多數(shù)新型制劑制備工藝較復(fù)雜，載藥量低，對(duì)設(shè)備要求較高，而且存在靶向性較低的問題，使藥物療效不佳以及易產(chǎn)生不良反應(yīng)[8]。因此，我們需要開發(fā)基于脂質(zhì)體的靶向性制劑來提高OA 的治療效果，并減少毒副作用。

α-生育酚琥珀酸酯（α-TOS）是維生素E最主要的成分α-生育酚（α-TOH）的一種酯化衍生物。維生素E 在儲(chǔ)存和應(yīng)用過程中易被氧化，因而常將其酯化衍生物作為商業(yè)的供應(yīng)形式，α-TOS 即是其中的一種[9]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，α-TOS 除作為維生素E 的供應(yīng)前體外，還具有廣泛的抗腫瘤活性，可通過多種機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，如誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制NF-кB 功能、抑制血管生成等。此外，α-TOS 能選擇性殺死腫瘤細(xì)胞而對(duì)正常組織無不良反應(yīng)[10]。三苯基磷基團(tuán)（TPP）中含有3 個(gè)苯基，使得整個(gè)分子具有很強(qiáng)的脂溶性，同時(shí)TPP 中磷原子上的正電荷可以離域到3 個(gè)苯環(huán)上，在更大空間分散正電荷，降低擴(kuò)散滲透膜時(shí)的自由能，促使TPP 穿越磷脂膜。正常細(xì)胞的線粒體膜電位為-（130 ～150）mV，遠(yuǎn)高于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、核糖體等細(xì)胞器的膜電位，因此親脂性陽離子可以很容易地通過脂質(zhì)雙分子層的疏水屏障并在線粒體中積聚。此外，腫瘤細(xì)胞較正常細(xì)胞具有更高的線粒體膜電位（大約為200 mV），可將抗腫瘤藥物優(yōu)先靶向腫瘤細(xì)胞的線粒體，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[11]。因此，通過親脂性陽離子對(duì)抗腫瘤藥物進(jìn)行修飾，可以實(shí)現(xiàn)將藥物遞送至線粒體的目的。

因此，本研究通過TPP 修飾α-TOS 構(gòu)成具有線粒體靶向能力的三苯基磷基生育酚琥珀酸酯（α-TOS-TPP）偶聯(lián)物作為線粒體靶向載體，以期通過靜電作用使藥物更容易富集于腫瘤細(xì)胞線粒體。此外脂質(zhì)體表面修飾聚乙二醇（PEG）可使脂質(zhì)體清除速率減慢，延長其在血液中的循環(huán)時(shí)間，提高OA 的生物利用度，進(jìn)而提高其抗腫瘤活性。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；手動(dòng)擠壓器（型號(hào)：HE8433 Genizer 公司）；粒徑分析儀（型號(hào)：250144，Brookhaven Instruments）；高倍顯微鏡（型號(hào)：TS100，Nikon）；萬分之一電子天平（型號(hào)：AL204，梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；透射電子顯微鏡[型號(hào)：JEM-1230（HC）]；UV-2201 紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；全波長酶標(biāo)儀（Multiskan GO）；激光共聚焦顯微鏡（德國，ZEISS）；流式細(xì)胞儀（美國貝克曼）。

1.2 試藥

α-TOS（阿拉丁，批號(hào)：T109349，純度＞98%）；6-溴正己醇（阿拉丁，批號(hào)：B138834，純度＞97%）； 三苯基膦（阿拉丁， 批號(hào)：T104475，純度＞99.0%）；大豆卵磷脂（阿拉丁，批號(hào)：B1504087，純度＞98%）；膽固醇（北京百靈威科技有限公司，批號(hào)：LK40Q28，純度：95%）；PEG（SIGMA，批號(hào)：BCBQ6878V）；二甲基亞砜（Solarbio，批號(hào)：710N032，細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）；香豆素6（阿拉丁，批號(hào)：12009083，純度＞98.0%）；Mito-Tracker Red（Beyotime， 批號(hào)：062320210302）；DAPI 溶液（Solarbio，批號(hào)：20190923）；Annexin V-FITC/PI apoptosis kid 凋亡試劑盒（聯(lián)科生物，批號(hào)：A11015）；其他試劑均為分析純。

1.3 細(xì)胞

胰腺癌BxPC-3 細(xì)胞（武漢普諾賽生命科技有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 α-TOS-TPP 的合成

將α-TOS（5.0000 g，9.4201 mmol）、6-溴正己醇（1938.3 μL，14.1302 mmol）、二環(huán)己基碳二亞胺（2.3307 g，11.3041 mmol）、4-二甲基吡啶（0.0575 g，0.4710 mmol）分別用適量二氯甲烷溶解后，在冰浴條件下，將其混合，攪拌10 min 后轉(zhuǎn)至室溫，再攪拌12 h 后加入6-溴正己醇（646.1 μL，4.7101 mmol），繼續(xù)攪拌12 h[12]。通過柱層析分離收集，初始展開劑為石油醚-乙酸乙酯（24∶1），之后適當(dāng)改變比例增大極性，收集的預(yù)測產(chǎn)物在真空管干燥箱60 ℃下減壓干燥5 h，得到無色或淺黃色油狀物化合物A，收率為64.56%。經(jīng)核磁驗(yàn)證，如圖1所示。

取化合物A（3.0769 mmol，2.1349 g）、三苯基膦（6.1538 mmol，1.6141 g）、無水K2CO3（0.3000 g）在適量乙腈中混合，90℃ 回流 30 h[12]。過濾除去K2CO3后，濃縮濾液，加入石油醚超聲，過濾除去濾液，不溶物經(jīng)柱層析，初始展開劑為乙酸乙酯-甲醇（20∶1），之后適當(dāng)改變比例增大極性，收集的預(yù)測產(chǎn)物在真空管干燥箱60℃ 下減壓干燥5 h，得到無色或淺黃色油狀物化合物B，收率為46%，純度為98.53%。經(jīng)核磁驗(yàn)證，如圖2所示。

通過1H-NMR 對(duì)化合物A 和B 進(jìn)行了表征。在化合物A 的1H-NMR 譜中，在δ＝4.11 ～4.14（2H）和3.37 ～3.41（2H）處出現(xiàn)的三重峰，在δ＝1.84 ～1.91（2H），1.78 ～1.86（2H），1.74 ～1.81（2H），1.64 ～1.71（2H）處出現(xiàn)的多重峰證實(shí)了6-溴正己醇通過酯鍵與α-TOS 連接。δ＝2.92 ～2.95（2H）、2.75 ～2.80（2H）、2.58 ～2.64（2H）處存在三重峰和代表單線態(tài)峰，δ＝2.09（3H）、2.02（3H）、1.98（3H）證實(shí)了α-TOS 部分的存在，如圖1。在化合物B 的1H-NMR 譜中，δ＝7.6 ～7.9（15H）證實(shí)了苯基的存在，剩余特征質(zhì)子峰與化合物A 位置相同，如圖2。經(jīng)驗(yàn)證化合物B 為α-TOS-TPP。

圖1 化合物A 的氫核磁譜圖Fig 1 1H-NMR spectrum of compound A

圖2 化合物α-TOS-TPP 的氫核磁譜圖Fig 2 1H-NMR spectrum of compound α-TOS-TPP

2.2 α-TOS-TPP-OA 的制備

精密稱取5.0 mg 卵磷脂，10.0 mgα-TOSTPP，1.0 mg OA，1.0 mg 膽固醇，PEG 1.0 mg（1∶2∶0.2∶0.2∶0.2）分別溶于2.0 mL 的二氯甲烷中，混合上述溶液，20 r·min-1、40 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去二氯甲烷，40 ℃真空干燥2 h 以徹底除去有機(jī)溶劑，加入去離子無菌水2.0 mL，60℃下磁力攪拌水化2 h，250 W 水浴超聲5 min，在60℃下依次擠壓通過200 nm、100 nm 聚碳酸酯膜，即得α-TOS-TPP-OA，在4℃下儲(chǔ)存?zhèn)溆肹13]。

2.3 形態(tài)、粒徑和電位

在室溫下采用粒徑分析儀對(duì)制備的脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)（PDI）進(jìn)行表征，結(jié)果平均粒徑為（137.0±0.82）nm，PDI 為（0.23±0.01），PDI 的值較大，可能是因?yàn)閿D壓膜時(shí)聚碳酸酯膜的孔徑大小不一所造成的，如圖3A 所示。使用α-TOS 制備的α-TOS-OA，測得其Zeta 電位為-（31.9±0.97）mV， 將α-TOS 換成α-TOSTPP 后制備的α-TOS-TPP-OA 的Zeta 電位為+（43.09±1.22）mV，Zeta 電位由負(fù)電荷轉(zhuǎn)變?yōu)檎姾桑妶D3B，說明TPP 可分散在脂質(zhì)體表面，使其具有線粒體靶向的能力，與預(yù)期一致。采用高倍透射電子顯微鏡觀察α-TOS-TPP-OA 的形貌，形態(tài)見圖3C ～3E。由電鏡照片可以觀察到，脂質(zhì)體單分散，呈球形，粒度較均一，其結(jié)果與粒徑儀所測到的脂質(zhì)體粒徑相吻合。

圖3 α-TOS-TPP-OA 的粒徑分布（A）、Zeta 電位及透射電子顯微鏡圖（C ～E）Fig 3 Particle size distribution（A），Zeta potential（B），and transmission electrons（C ～E）of α-TOS-TPP-OA microscope picture

2.4 包封率和載藥量的測定

2.4.1α-TOS-TPP 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 配制質(zhì)量濃度為10、30、50、80、120 和150 μg·mL-1的溶液，通過紫外可見光分光光度計(jì)在λ＝287 nm 檢測溶液的吸光度。以吸光度（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性擬合，得到回歸方程y＝10.082x+0.1995，R2＝0.997，表明α-TOS-TPP在10 ～150 μg·mL-1內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

2.4.2 OA 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 采用高效液相色譜法（HPLC）測定OA 的含量。采用ZORBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-1%醋酸水（90∶10，V/V）；柱溫：25℃；流速：1.0 mL·min-1；波長：220 nm；進(jìn)樣量：20 μL。配制質(zhì)量濃度為10、50、80、100、150、200和300 μg·mL-1的OA 溶液，進(jìn)樣測定，以峰面積（y）對(duì)質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性擬合，得回歸方程y＝5495.8x-34.366，R2＝0.9991，表明OA在10 ～300 μg·mL-1內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

取1.0 mLα-TOS-TPP-OA 溶液置于超濾離心管內(nèi)（截留相對(duì)分子質(zhì)量為30 000），以4000 r·min-1離心30 min，分離溶液中游離的OA 及α-TOS-TPP，截留在離心管內(nèi)的為α-TOS-TPPOA，離心管內(nèi)加入5 倍體積的甲醇破壞脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，促使OA 和α-TOS-TPP 從膠束中釋放出來，采用HPLC 測定脂質(zhì)體中包封的OA 質(zhì)量，離心管外為游離的OA，采用同樣的方法可測定游離的OA 的質(zhì)量。α-TOS-TPP 的含量則通過紫外可見光分光光度計(jì)在λ＝287 nm 檢測；用以下公式計(jì)算包封率和載藥量：

包封率＝脂質(zhì)體內(nèi)包封的藥物質(zhì)量/(脂質(zhì)體內(nèi)包封的藥物質(zhì)量+未包封的游離藥物質(zhì)量)×100%

載藥量＝包封于脂質(zhì)體內(nèi)的藥物質(zhì)量/(載體的質(zhì)量+脂質(zhì)體包封的藥物總質(zhì)量)×100%經(jīng)計(jì)算得到α-TOS-TPP 的包封率和載藥量分別為（76.21±7.74）%和（39.06±5.51）%，OA的包封率和載藥量分別為（70.96±9.13）%和（3.90±0.75）%。

2.5 脂質(zhì)體的穩(wěn)定性

將α-TOS-TPP-OA 分別在4℃純水中和37℃的PBS 環(huán)境中分別存放7 d 和3 d，模仿存儲(chǔ)環(huán)境和體內(nèi)環(huán)境，檢測其粒徑及PDI 變化。如圖4所示，在4℃的純水下儲(chǔ)存7 d 后粒徑從（137.0±0.82）nm 變?yōu)椋?31.1±0.80）nm，PDI 從（0.227±0.005）變?yōu)椋?.248±0.009）。在37℃的PBS 儲(chǔ)存3 d 后，粒徑增加到（176.7±3.9）nm，PDI 則變?yōu)椋?.257±0.013）。由此表明，該脂質(zhì)體在4℃的純水中有良好的儲(chǔ)存穩(wěn)定性，且在37℃的PBS 中也有較好的穩(wěn)定性（見圖4）。

圖4 α-TOS-TPP-OA 的穩(wěn)定性Fig 4 Stability of α-TOS-TPP-OA

2.6 線粒體靶向

由于OA 自身不發(fā)熒光，因此采用脂溶性的帶綠色熒光的香豆素6 作為替代OA 的模型藥物，按“2.1”“2.2”項(xiàng)下方法制備含有香豆素6（C6）的脂質(zhì)體。將BxPC-3 細(xì)胞以1×104個(gè)的密度接種于24 孔培養(yǎng)板內(nèi)，用血清培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h，將質(zhì)量濃度為100 ng·mL-1的載C6（顯綠色熒光）的α-TOS-C6 和載C6 的α-TOS-TPP-C6 加入其中，再與細(xì)胞共同孵育1、3 h 后，用37 ℃的PBS 洗滌。用100 nmol·L-1的Mitotracker Red染線粒體（紅色熒光）20 min，10 μg·mL-1的DAPI 溶液染細(xì)胞核（藍(lán)色熒光）5 min，然后在激光共聚焦顯微鏡下觀察C6 在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。

結(jié)果如圖5所示，孵育1、3 h 后，含有C6的脂質(zhì)體進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，且隨著孵育時(shí)間的延長，綠色熒光逐漸增強(qiáng)，表明隨著孵育時(shí)間的延長，腫瘤細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)體的攝取增加。帶有綠色熒光的脂質(zhì)體與呈紅色熒光的線粒體重合，會(huì)呈現(xiàn)為黃色。隨著孵育時(shí)間的增加黃色逐漸變深，說明脂質(zhì)體逐步聚集在線粒體周圍。脂質(zhì)體與線粒體的共定位通過皮爾遜系數(shù)（PCC）來體現(xiàn)，通過Image J 分析的到共定位散點(diǎn)圖及PCC。通過共定位散點(diǎn)圖表明，隨著孵育時(shí)間的增加，α-TOS-TPP-C6 的紅色熒光和綠色熒光共定位關(guān)系明顯好于α-TOS-C6。PCC 結(jié)果如圖6顯示，α-TOS-TPP-C6 的PCC 明顯高于α-TOS-C6，且存在顯著性差異。由此可知，TPP 陽離子能促進(jìn)脂質(zhì)體聚集在腫瘤細(xì)胞的線粒體部位。

圖5 α-TOS-C6 和α-TOS-TPP-C6 孵育1、3 h 后激光共聚焦顯微鏡圖片及共定位散點(diǎn)圖Fig 5 Confocal laser confocal microscopy images and colocalization scatter plots of α-TOS-C6 and α-TOS-TPP-C6 after incubation for 1 and 3 h

圖6 α-TOS-C6 和α-TOS-TPP-C6 孵育1、3 h 后的PCC 值（ ±s，n ＝3）Fig 6 PCC of α-TOS-C6 and α-TOS-TPP-C6 after 1 and 3 h incubation（x±s，n ＝3）

2.7 細(xì)胞存活率的測定

將胰腺癌細(xì)胞株BxPC-3 復(fù)蘇傳代，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，然后分為OA 組、α-TOS-TPP 組、α-TOS-TPP+OA 組和α-TOS-TPPOA 組，給予對(duì)應(yīng)藥物處理，由于不同給藥組在相同濃度時(shí)的抑制率相差較大，在計(jì)算IC50時(shí)容易造成誤差，故給藥濃度有所不同。其中α-TOSTPP+OA 游離藥物組和α-TOS-TPP-OA 組的給藥濃度為1、2、5、10、15、20、25、30 μmol·L-1（以O(shè)A 濃度為準(zhǔn)），OA 組、α-TOS 組和α-TOSTPP 組給藥濃度為15、20、25、30、35、40、45、50 μmol·L-1，每個(gè)濃度設(shè)6 個(gè)復(fù)孔，加藥后孵育48 h 后，取出96 孔板，避光條件下加入MTT溶液20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h 后取出，加入150 μL 二甲基亞砜，輕微振蕩10 min，在490 nm 波長下檢測下吸光度，計(jì)算IC50。

結(jié)果如表1所示，通過TPP 對(duì)α-TOS 的修飾，α-TOS-TPP 對(duì)BxPC-3 的抑制作用較α-TOS 明顯增加。α-TOS-TPP+OA 給藥組合對(duì)BxPC-3 的抑制作用高于α-TOS-TPP 和OA 單獨(dú)給藥。而α-TOSTPP-OA 對(duì)BxPC-3 的毒性高于α-TOS-TPP+OA的給藥組合，其IC50明顯低于其他給藥組。

表1 OA、α-TOS-TPP、α-TOS-TPP+OA 游離藥物和α-TOSTPP-OA 在48 h 的IC50Tab 1 IC50 of OA，α-TOS-TPP，α-TOS-TPP+OA free drugs and α-TOS-TPP-OA at 48 h

2.8 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡

為檢測α-TOS-TPP-OA 誘導(dǎo)BxPC-3 細(xì)胞凋亡的作用，將BxPC-3 細(xì)胞以2×106個(gè)每孔加入6孔板中，孵育過夜貼壁?？變?nèi)分別加入相應(yīng)IC50的α-TOS-TPP-OA，其中OA、α-TOS、α-TOS-TPP和α-TOS-TPP+OA 的加入量與α-TOS-TPP-OA中相應(yīng)含量相等。孵育24 h 后，分別收集孔中的細(xì)胞，PBS 洗滌兩次后，加入5 μL Annexin V-FITC和10 μL PI 標(biāo)記。通過流式細(xì)胞儀分析凋亡情況。如圖7所示，α-TOS-TPP-OA 處理的細(xì)胞處于早期和晚期凋亡階段的分別占45.34%和37.55%，而α-TOS-TPP+OA 分別誘導(dǎo)46.74%和5.73%的細(xì)胞進(jìn)入早期和晚期凋亡階段。從流式細(xì)胞儀分析可以看出，α-TOS-TPP-OA 比α-TOS-TPP+OA 能誘導(dǎo)更多的BxPC-3 細(xì)胞凋亡，可能是因?yàn)榘邢蜃饔米尭嗟乃幬镞M(jìn)入線粒體所致。

圖7 流式細(xì)胞儀分析OA、α-TOS、α-TOS-TPP、α-TOS-TPP +OA 和α-TOS-TPP-OA 誘導(dǎo)BxPC-3 細(xì)胞凋亡的作用Fig 7 Apoptosis of BxPC-3 cells induced by OA，α-TOS，α-TOSTPP，α-TOS-TPP+OA and α-TOS-TPP-OA by flow cytometry

3 討論

OA 具有潛在的抗腫瘤活性，可誘導(dǎo)許多腫瘤細(xì)胞系凋亡，但OA 的低水溶性和低滲透性限制了其使用[14]。因此，有必要選擇合適的納米給藥系統(tǒng)來增加OA 的溶解度，減少口服首過效應(yīng)，提高生物利用度。近年來，為了克服低溶解度藥物的缺點(diǎn)，目前已有脂質(zhì)體[15]、納米脂質(zhì)體[16]、納米混懸劑[17]、口服微乳[18]、固體分散體[19]等劑型的報(bào)道，但存在長期穩(wěn)定性差、載藥量小、靶向性多、僅依靠通透性保留（EPR）效應(yīng)的被動(dòng)靶向等不足。

α-TOS 能與線粒體電子傳遞鏈復(fù)合物Ⅱ結(jié)合，通過線粒體外膜通透性誘導(dǎo)不同類型腫瘤細(xì)胞凋亡，從而損傷線粒體[20]。Mallick 等[13]證明了α-TOS-化療藥物偶聯(lián)脂質(zhì)體可以同時(shí)靶向腫瘤細(xì)胞中的線粒體和細(xì)胞核。本研究通過酯化反應(yīng)將6-溴正己醇連接到α-TOS 上，該反應(yīng)生成化合物A，進(jìn)一步引入線粒體靶向TPP 基團(tuán)，得到α-TOS-TPP。α-TOS-TPP 具有一定的親脂性，更容易透過細(xì)胞膜，而且腫瘤細(xì)胞中的線粒體具有更高的膜電位，使得α-TOS-TPP 這種離域型親脂陽離子（DLC）更容易選擇性富集腫瘤細(xì)胞線粒體，因此使其一定程度上具有了線粒體靶向的能力[21]。

以α-TOS-TPP 作為線粒體靶向載體，制備了具有線粒體靶向性的OA 脂質(zhì)體，并且使用PEG對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行表面包覆，以避開單核吞噬系統(tǒng)，以確保長時(shí)間的血液循環(huán)。粒徑的大小是通過獨(dú)特的滲漏血管系統(tǒng)成功積聚到腫瘤組織中的重要決定因素之一，經(jīng)證實(shí)，粒徑為20 ～300 nm 的膠束的血液循環(huán)時(shí)間和腫瘤聚集量隨其直徑的增大而增加，最佳粒徑范圍為100 ～160 nm[22]。該脂質(zhì)體的粒徑為（137.0±0.8）nm，可通過增強(qiáng)EPR 效應(yīng)和減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（RES）的清除提高抗腫瘤效果和降低毒性[23]。此外，α-TOSTPP-OA 的表面電荷為+（43.09±1.22）mV，說明TPP 覆蓋在脂質(zhì)體的表面，使得該脂質(zhì)體表面帶有正電荷，這可以使該脂質(zhì)體通過胞吞進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后依靠靜電效應(yīng)向線粒體聚集，通過線粒體靶向性考察，證實(shí)了這一點(diǎn)。通過MTT 實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)，α-TOS-TPP-OA 對(duì) BxPC-3細(xì)胞的抑制作用明顯增強(qiáng)，這可能與α-TOS-TPPOA 增加了藥物在線粒體的聚集有關(guān)。

綜上所述，本研究通過TPP 對(duì)α-TOS 的修飾，合成了一種具有線粒體靶向性的載體，制備了搭載OA 的脂質(zhì)體，并初步評(píng)價(jià)了其體外抗胰腺癌作用，為OA 治療胰腺癌提供了一種新的思路，但后續(xù)還需要更深入地開展細(xì)胞水平研究及動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)本結(jié)論進(jìn)一步驗(yàn)證。