枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及腸道菌群的影響

袁麗紅 ，柳成東

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南 昆明 650201；2.福建傲農(nóng)生物科技集團(tuán)股份有限公司，福建 漳州 363000；3.福建傲農(nóng)生物科技集團(tuán)股份有限公司福建省生豬營(yíng)養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 漳州 363000）

斷奶仔豬高腹瀉率、高死亡率的產(chǎn)生往往與飼料的營(yíng)養(yǎng)水平、飼養(yǎng)管理和疾病密切相關(guān)，其中，斷奶仔豬的高腹瀉的發(fā)生也會(huì)受到外界環(huán)境中病源微生物大腸桿菌的影響，造成斷奶仔豬死亡率增加。大量研究表明，在斷奶仔豬飼糧中補(bǔ)充枯草芽孢桿菌，能夠降低其腸道的有害菌大腸桿菌的數(shù)量，增加仔豬腸道中的有益菌乳酸桿菌的數(shù)量，進(jìn)而改善仔豬的生長(zhǎng)性能?；趧?dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)的不穩(wěn)定性和難重復(fù)性，難以快速評(píng)估出飼用的益生菌的益生效果的問題；因此，借鑒以往在飼糧中添加抗生素通過抑菌效果去改善仔豬腹瀉情況，提高仔豬生長(zhǎng)的實(shí)際運(yùn)用。文章通過建立體外抑菌實(shí)驗(yàn)初步評(píng)估益生菌的抑菌性能，在此基礎(chǔ)上，開展動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)再驗(yàn)證其運(yùn)用效果。

體外抑菌實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚩茖W(xué)和高效地評(píng)估飼用益生菌的抑菌效果。有研究表明，通過體外抑菌評(píng)估和體內(nèi)動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)兩方面結(jié)合評(píng)估，能夠共同表明該評(píng)估體系運(yùn)用到飼用益生菌的效果驗(yàn)證。鑒于此，本研究前期通過體外抑菌實(shí)驗(yàn)評(píng)估枯草芽孢桿菌的抑菌性能后，開展動(dòng)物飼養(yǎng)試驗(yàn)，希望在已有的報(bào)道基礎(chǔ)上進(jìn)一步驗(yàn)證體外和體內(nèi)雙向評(píng)估的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。

1 材料與方法

1.1 菌株

本課題組前期從白羽肉雞糞便中分析出一株芽孢桿菌，經(jīng)16 s RNA基因鑒定為枯草芽孢桿菌，分離純化后命名為枯草芽孢桿菌-Ⅱ。用于本次動(dòng)物飼喂試驗(yàn)。

畜禽腸道有害菌：大腸桿 菌K88（Escherichia coliCGMCC1.2385）、豬 霍 亂 沙 門氏 菌（Salmonella choleraesuisBNCC186354）、雞 白 痢 沙 門氏 菌（Salmonella pullorumBNCC124693），均購(gòu)買于北納創(chuàng)聯(lián)生物科技有限公司。

畜禽腸道有益菌：羅伊氏乳 酸 桿 菌（Lactobacillu reutreriATCC55730），購(gòu)買于北納創(chuàng)聯(lián)生物科技有限公司。

1.2 抑菌評(píng)估

前期對(duì)該株枯草芽孢桿菌的抑菌性能參照柳成東等（2021）報(bào)道，采用體外牛津杯法評(píng)估該株枯草芽孢桿菌對(duì)腸道有害菌和腸道有益菌抑菌效果。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

將66頭28日齡的健康斷奶仔豬按照體重一致的原則，分成2個(gè)處理組，每個(gè)處理組3個(gè)欄，每欄11頭斷奶仔豬。處理組設(shè)計(jì)如下：處理組1（A組）飼喂基礎(chǔ)日糧；處理組2（B組）在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加500 g /t的枯草芽孢桿菌制劑（活菌數(shù)：1×1010cfu/g）。飼喂周期7 d。

1.4 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼糧配方參照NRC（2012）豬營(yíng)養(yǎng)需要量標(biāo)準(zhǔn)配制基礎(chǔ)飼糧，配方組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1，基礎(chǔ)飼糧中不添加任飼用何抗生素和飼用益生菌。

1.5 飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)期間保持產(chǎn)房溫度在23~27℃，保證仔豬每天充足的飲水和光照；每天定時(shí)進(jìn)行3次飼喂，滿足仔豬自由采食。飼喂期間，隨時(shí)關(guān)注仔豬健康狀況，及時(shí)進(jìn)行治療和做好記錄。

1.6 指標(biāo)測(cè)定

1.6.1 生長(zhǎng)性能

試驗(yàn)第8天早上9時(shí)對(duì)所有試驗(yàn)豬進(jìn)行稱重，統(tǒng)計(jì)斷奶仔豬平均日增重、平均日采食量、料重比和腹瀉率。

1.6.2 腸道菌群

試驗(yàn)第7天下午17時(shí)觀察每頭試驗(yàn)豬的排糞情況，及時(shí)采集新鮮的糞便，用于檢測(cè)大腸桿菌和乳酸桿菌的數(shù)量。

注：（1）礦物質(zhì)和維生素預(yù)混料為每 kg飼糧提供：維生素A 2 200 IU，維生素D3 220 IU，維生素E 16.0 IU，維生素K3 0.5 mg，維生素B1 1.0 mg，維生素B2 3.5 mg，維生素B6 7.0 mg，維生素B12 0.018 mg，煙酸30 mg，泛酸10 mg，鐵100 mg，銅6 mg，鋅100 mg，錳4 mg，碘0.14 mg，硒0.30 mg。（2）營(yíng)養(yǎng)成分中的消化能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法

生長(zhǎng)性能、腸道菌群等數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)其進(jìn)行T-test數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，枯草芽孢桿菌的抑菌圈數(shù)據(jù)采用單因素方差分析和 Duncan，s多重比較。P≤0.05表示顯著差異，0.05＜P≤0.1表示有差異的趨勢(shì)。

2 結(jié)果

2.1 枯草芽孢桿菌抑菌性能的評(píng)估

由表2和圖1可知，該株枯草芽孢桿菌對(duì)大腸桿菌K88、豬霍亂沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌都有抑菌效果，且抑菌作用差異顯著（P＜0.05）。同時(shí)，枯草芽孢桿菌對(duì)雞白痢沙門氏菌的抑菌效果最佳。此外，枯草芽孢桿菌對(duì)羅伊氏乳酸桿菌無抑制作用。

表2 枯草芽孢桿菌對(duì)畜禽腸道有害菌的抑菌效果（抑菌圈直徑） mm

圖1 枯草芽孢桿菌對(duì)腸道有益菌羅伊氏乳酸桿菌的抑制作用

2.2 枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，飼料中添加枯草芽孢桿菌能夠顯著增加（P＜0.05）斷奶仔豬末重、平均增重，和顯著降低料重比和腹瀉率（P＜0.05）；但對(duì)平均日采食量無明顯差異（P＞0.05）。

表3 枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.3 枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響

由表4可知，飼糧中添加枯草芽孢桿菌能夠顯著降低（P＜0.05）斷奶仔豬腸道中大腸桿菌的數(shù)量；斷奶仔豬腸道中乳酸桿菌的數(shù)量顯著增加（P＜0.05）。

表4 枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響 （ l o g10 cfu/g）

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌抑菌性能的評(píng)估

枯草芽孢桿菌作為我國(guó)飼料添加劑的使用規(guī)范（《飼料添加劑品種目錄》2013）34種中的其中1種；具有耐高溫、耐酸和耐膽鹽的菌株特性，同時(shí)能夠產(chǎn)生多種消化酶，改善畜禽生長(zhǎng)性能。研究結(jié)果顯示，該株枯草芽孢桿菌對(duì)畜禽腸道中的主要致病菌大腸桿菌K88、豬霍亂沙門氏菌和雞白痢沙門氏菌具有較好的抑菌效果，這一結(jié)果與前人研究一致。

與此同時(shí)，該株枯草芽孢桿菌對(duì)畜禽腸道中的主要有益菌羅伊氏乳酸桿菌無抑制作用，李先磊等（2019）通過混合培養(yǎng)的抑菌方法，評(píng)估枯草芽孢桿菌對(duì)乳酸桿菌的抑制作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示枯草芽孢桿菌對(duì)腸道有益菌乳酸桿菌無抑制作用，這一結(jié)果與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致。

3.2 枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

陳遠(yuǎn)兵（2104）和何正偉（2016）研究表明，斷奶仔豬腹瀉率高峰期的一般發(fā)生在斷奶后第7天，導(dǎo)致斷奶仔豬生長(zhǎng)速度減緩，嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致仔豬死亡。因此，針對(duì)這一現(xiàn)象，本試驗(yàn)研究枯草芽孢桿菌對(duì)仔豬斷奶7天后的生長(zhǎng)性能是否會(huì)產(chǎn)生影響。結(jié)果顯示，在飼糧中添加枯草芽孢桿菌能夠顯著增加仔豬末重、平均日增重；顯著降低仔豬料重比和腹瀉率，這一結(jié)果與前人報(bào)道基本一致。這也說明，在斷奶仔豬飼糧中添加具有抑菌效果（見表2）的飼用益生菌能夠改善斷奶仔豬的生長(zhǎng)，提高養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益。

3.3 枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬腸道菌群的影響

腸道菌群平衡是改善仔豬生長(zhǎng)性能的機(jī)制之一，往往以具有代表性的畜禽腸道有害菌大腸桿菌數(shù)量和腸道為主有益菌乳酸桿菌數(shù)量作為研究的主要依據(jù)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加枯草芽孢桿菌，能夠顯著降低斷奶仔豬腸道中有害菌大腸桿菌的數(shù)量，顯著增加斷奶仔豬腸道中的有益菌乳酸桿菌的數(shù)量，這一結(jié)果與前人報(bào)道一致。這一結(jié)果也與體外評(píng)估該株枯草芽孢桿菌能夠抑制畜禽腸道有害菌，以及對(duì)畜禽腸道有益菌乳酸桿菌無抑制作用的結(jié)果（表2）相呼應(yīng)，從而改善斷奶仔豬生長(zhǎng)（表3）。

4 結(jié)論

本研究從體外實(shí)驗(yàn)采用牛津杯法評(píng)估枯草芽孢桿菌的抑菌性能，結(jié)合在飼糧中添加枯草芽孢桿菌改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的試驗(yàn)結(jié)果，共同表明，該株枯草芽孢桿菌能夠運(yùn)用在飼料、飼料添加劑和畜禽實(shí)際養(yǎng)殖中，以改善仔豬生長(zhǎng)性能。同時(shí)，試驗(yàn)也為飼用益生菌的運(yùn)用評(píng)估建立一套科學(xué)、高效的研究依據(jù)。