m6A甲基化修飾結(jié)合蛋白YTHDF2在食管癌組織中的表達(dá)及其對(duì)食管癌細(xì)胞增殖和遷移的影響

馬琰迪,盧香云,何尚峰,俞雪燕,胡云華,高海霞,陳云昭,禹 潔,王文潔,李 鋒,3,崔曉賓,4

（1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)系，新疆 石河子 832002；2.江蘇省蘇州市高新區(qū)人民醫(yī)院病理科，江蘇 蘇州 215000；3.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京朝陽醫(yī)院病理科，北京 100200；4.南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院病理科，江蘇 南京 210008）

據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，2018年全球食管癌新發(fā)病例為58.2萬例，而我國新發(fā)病例占53.7%［1］，可見我國是食管癌發(fā)病率較高的國家之一。食管癌主要分為食管鱗狀細(xì)胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC） 和食管腺癌 （esophageal adenocarcinoma，EAC），其中ESCC是食管癌最常見的組織學(xué)類型［2］。雖然現(xiàn)有的醫(yī)療技術(shù)明顯提升，能通過多種治療方法（手術(shù)、化療和靶向治療）提高療效，但食管癌患者的預(yù)后仍較差［3］，因此深入研究食管癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機(jī)制，尋求新的有效治療靶點(diǎn)是提高食管癌患者總體生存率的重要手段。N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine RNA，m6A）是最普遍的RNA轉(zhuǎn)錄后修飾，其修飾過程有多種酶（腺苷甲基轉(zhuǎn)移酶、去甲基化酶和甲基識(shí)別蛋白等）參與，甲基化修飾酶的失調(diào)可導(dǎo)致一系列疾病，包括腫瘤的發(fā)生發(fā)展，也是其成為目前研究熱點(diǎn)的原因之一［4］。YTH結(jié)構(gòu)域連接蛋白2（YTH domain-containing family protein 2，YTHDF2）在m6A修飾過程中扮演重要角色，其能結(jié)合m6A甲基化的mRNA，調(diào)節(jié)mRNA的降解［5］。但YTHDF2與食管癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系仍未闡明。本研究首先利用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)ESCC組織中YTHDF2的表達(dá)，進(jìn)一步分析YTHDF2與ESCC患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，再利用YTHDF2 siRNA轉(zhuǎn)染食管癌細(xì)胞系檢測(cè)YTHDF2對(duì)ESCC細(xì)胞的增殖、克隆形成和遷移能力的影響，為尋找新的有效的食管癌治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2004—2016年石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院、烏魯木齊市自治區(qū)人民醫(yī)院和喀什市第一人民醫(yī)院病理科石蠟包埋組織，其中ESCC組織113例，癌旁正常食管上皮組織95例，有隨訪信息者59例，男性37例，女性22例，平均年齡 （58.881±9.385）歲，患者術(shù)前均未接受過放療或化療。所有研究樣本的病理診斷和分期，由2名資深病理醫(yī)生根據(jù)WHO消化系統(tǒng)腫瘤2019版對(duì)HE切片進(jìn)行復(fù)片，并參照國際抗癌聯(lián)盟（Union for International Cancer Control， UICC）2019版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期。癌旁正常食管上皮組織和ESCC組織均經(jīng)過病理學(xué)驗(yàn)證，本實(shí)驗(yàn)經(jīng)石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)倫理學(xué)與人體臨床試驗(yàn)委員會(huì)批準(zhǔn)，并獲得所有參與者的書面知情同意。收集患者的基本信息、腫瘤部位、分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和腫瘤TNM分期等臨床病理參數(shù)。后期采用電話、醫(yī)院病歷或其他方法對(duì)患者進(jìn)行隨訪，隨訪截止時(shí)間為2020年8月或死亡日期。

1.2 細(xì)胞、主要試劑和儀器 食管癌EC9706和Eca109細(xì)胞（上海復(fù)祥生物科技有限公司）。胎牛血清（以色列BI公司），RPMI-1640培養(yǎng)基和Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染試劑（美國Thermo Fisher公司），0.25%胰蛋白酶消化液（北京索萊寶有限公司），YTHDF2 siRNA（上海吉瑪基因公司，引物序列見表1），蛋白裂解液和BCA蛋白定量檢測(cè)試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司），YTHDF2抗體（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司），GAPDH抗體和山羊抗兔IgG二抗 （北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），10%PAGE凝膠劑盒（上海雅酶生物科技有限公司），CCK-8試劑盒和ECL化學(xué)發(fā)光底物（西安米鼠生物科技有限公司）。組織芯片制作儀（英國Mitogen公司），多功能酶標(biāo)儀和凝膠成像分析儀（美國Bio-Rad公司）。

表1 YTHDF2 siRNA引物序列Tab. 1 Sequences of YTHDF 2 siRNA primers

1.3 細(xì)胞培養(yǎng) 將復(fù)蘇的Eca109和EC9706細(xì)胞置于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，換液，傳代，凍存。

1.4 組織芯片制備、免疫組織化學(xué)染色和結(jié)果判定 組織芯片制備：首先對(duì)選取的HE染色切片病理診斷進(jìn)行核對(duì)，在切片上標(biāo)記典型區(qū)域，然后針對(duì)該區(qū)域?qū)?yīng)在蠟塊上區(qū)域準(zhǔn)確的標(biāo)記，即為制備組織芯片的取材位點(diǎn)。采用組織芯片制作儀制作組織芯片，3～4 μm厚度，連續(xù)切片，備用。免疫組織化學(xué)染色采用EnVision兩步法。由2名高年資的病理醫(yī)師雙盲法評(píng)定染色結(jié)果，YTHDF2主要定位于細(xì)胞質(zhì)，少量定位于細(xì)胞核中，以呈棕黃色顆粒為陽性。①按細(xì)胞著色強(qiáng)度評(píng)分：無著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕色為3分。②按腫瘤細(xì)胞中陽性細(xì)胞的百分率記分：＜5%記0分，6%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，≥76%記4分。2項(xiàng)記分相乘代表YTHDF2表達(dá)強(qiáng)度，0～1分為（－），2～4分為（+），5～8分為（），9～12分為（）。其中≤1分為不表達(dá)，2～4分為低表達(dá)，≥5分為高表達(dá)。若2名病理醫(yī)師對(duì)某結(jié)果存在分歧，則由第3名高年資的病理醫(yī)師進(jìn)一步評(píng)定。

1.5 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和分組 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期Eca109和EC9706細(xì)胞分為對(duì)照組（轉(zhuǎn)染si-NC）和si-YTHDF2組（分別轉(zhuǎn)染si-YTHDF2#1和si-YTHDF2#2），細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后，每孔5×104個(gè)細(xì)胞鋪于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，待細(xì)胞貼壁長(zhǎng)至70%左右時(shí)，加入2 mL無血清培養(yǎng)基，然后分別加入Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染試劑和YTHDF2 siRNA混勻的轉(zhuǎn)染試劑靜置5～10 min，棄去6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中原有培養(yǎng)基，用PBS緩沖液清洗2次，將混合液體均勻滴入每個(gè)孔中，4～6 h后進(jìn)行換液，繼續(xù)培養(yǎng)24和48 h后，收集細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.6 Western blotting法檢測(cè)各組細(xì)胞中YTHDF2蛋白表達(dá)水平 凝膠的制備嚴(yán)格按照PAGE凝膠劑盒說明書進(jìn)行操作。分別用濃度為50、75和100 nmol·L－1YTHDF2 siRNA 和si-NC轉(zhuǎn) 染Eca109和EC9706細(xì)胞，分別在24和48 h后提取蛋白，每孔加入10 μL蛋白，上樣，10%聚丙烯酰胺凝膠電泳，濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜，PSA室溫封閉2 h，加入YTHDF2抗體（1∶1 000）和GAPDH抗體（1∶1 000）4℃過夜孵育，TBST洗膜5 min×6次，山羊抗兔IgG（1∶10 000） 室溫孵育2 h，TBST洗膜5 min×6次，滴加ECL化學(xué)發(fā)光底物顯影。采用Image J軟件進(jìn)行灰度值分析，計(jì)算目的蛋白表達(dá)水平。目的蛋白表達(dá)水平=目的蛋白條帶灰度值/GAPDH條帶灰度值。選定YTHDF2 siRNA最佳轉(zhuǎn)染濃度和時(shí)間用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.7 CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖活性 轉(zhuǎn)染細(xì)胞后，分別將對(duì)照組、si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組細(xì)胞消化計(jì)數(shù)，接種于5個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔2×103個(gè)細(xì)胞，每個(gè)96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每組細(xì)胞鋪3個(gè)復(fù)孔，分別在鋪板后第1～5天加入CCK-8溶液，每孔10 μL，37℃孵育2 h后用多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)在450 nm波長(zhǎng)下各組細(xì)胞的吸光度（A）值，重復(fù)讀數(shù)3次，計(jì)算平均值，以A值平均值表示細(xì)胞增殖活性。

1.8 平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞克隆形成數(shù) 各組培養(yǎng)24 h的Eca109和EC9706細(xì)胞，消化并計(jì)數(shù)，接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔接種2×103個(gè)細(xì)胞，每組3個(gè)復(fù)孔，于37℃恒溫恒濕條件下培養(yǎng)14 d，然后用4%多聚甲醛固定20 min，0.1%結(jié)晶紫染色20 min，晾干，拍照并計(jì)數(shù)克隆形成數(shù)。

1.9 Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞中遷移細(xì)胞數(shù) 利用無Matrigel基質(zhì)膠的Transwell小室，進(jìn)行細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)。在上室加入2×104個(gè)細(xì)胞，加入無血清細(xì)胞懸浮液量為200 μL，在下室加入含20%血清培養(yǎng)液600 μL，培養(yǎng)24 h，4%多聚甲醛固定20 min，0.1%結(jié)晶紫染色20 min。洗滌，200倍鏡視野下觀察并計(jì)數(shù)遷移細(xì)胞數(shù)，選取3個(gè)視野，計(jì)算平均值。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。ESCC組織與癌旁正常食管上皮組織中YTHDF2表達(dá)強(qiáng)度比較采用Fisher’s確切概率法；不同臨床病理特征ESCC患者YTHDF2表達(dá)強(qiáng)度比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher’s確切概率法。按照隨訪患者信息中是否存活進(jìn)行二分類（0為死亡，1為存活），采用Kaplan-Meier法對(duì)患者進(jìn)行生存分析。細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞克隆形成數(shù)和遷移細(xì)胞數(shù)均符合正態(tài)分布，以±s表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 ESCC組織和癌旁正常食管上皮組織中YTHDF2蛋白表達(dá)情況 免疫組織化學(xué)染色，YTHDF2主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，少量表達(dá)于細(xì)胞核中。ESCC組織中YTHDF2蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯高于癌旁正常食管上皮組織（P＜0.01）。見圖1和表2。

圖1 免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)不同組織中YTHDF2蛋白表達(dá)情況Fig.1Expressions of YTHDF2 protein in different tissues detected by immunohistochemistry staining

表2 不同組織中YTHDF2蛋白表達(dá)情況Tab. 2Expressions of YTHDF 2 in different tissues

2.2 不同臨床病理特征ESCC患者癌組織中YTHDF2蛋白表達(dá)情況 根據(jù)免疫組織化學(xué)評(píng)分，59例ESCC患者分為YTHDF2低表達(dá)組（≤4分，22例）和YTHDF2高表達(dá)組（＞5分，37例）。不同發(fā)病年齡和TNM分期ESCC患者癌組織中YTHDF2蛋白表達(dá)強(qiáng)度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.008，P=0.041）。不同性別 （P=0.580）、腫瘤部位 （P=0.380）、腫瘤分級(jí) （P=0.563）、腫瘤浸潤(rùn)深度（P=1.000）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.590）和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移（P=0.240）等臨床病理特征ESCC患者癌組織中YTHDF2蛋白表達(dá)強(qiáng)度比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表3 不同臨床病理特征ESCC患者癌組織中YTHDF2蛋白表達(dá)情況Tab. 3Expressions of YTHDF 2 in cancer tissue of ESCC patients with different clinicopathological features

2.3 YTHDF2表達(dá)強(qiáng)度與ESCC患者預(yù)后的關(guān)系113例ESCC中，59例患者獲得完整的臨床隨訪信息。隨訪截止日期為2020年8月或死亡日期。Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示：與YTHDF2低表達(dá)組比較，YTHDF2高表達(dá)組ESCC患者的生存率明顯降低（P=0.035），即YTHDF2高表達(dá)組ESCC患者預(yù)后較差。見圖2。

圖2 YTHDF2蛋白表達(dá)強(qiáng)度與ESCC患者預(yù)后的關(guān)系Fig. 2 Relationship between YTHDF2 protein expression and prognosis of ESCC patients

2.4 各組食管癌細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況 分別用50、75和100 nmol·L－1的 YTHDF2 siRNA 和 50 nmol·L－1的si-NC轉(zhuǎn)染Eca109和EC9706細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24和48 h后檢測(cè)各組細(xì)胞中YTHDF2蛋白的表達(dá)水平。與對(duì)照組比較，YTHDF2 siRNA組（si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組）細(xì)胞中YTHDF2蛋白表達(dá)水平 明 顯 降 低 （P＜0.05或P＜0.01）。 其 中50 nmol·L－1的 si-YTHDF2#1和 si-YTHDF2#2作用24 h后對(duì)YTHDF2的干擾效果最明顯，因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)選定該濃度和作用時(shí)間。見圖3。

圖3 不同濃度siRNA轉(zhuǎn)染后各組Eca109細(xì)胞和EC9706細(xì)胞中YTHDF2蛋白表達(dá)電泳圖和直條圖Fig.3 Electrophoregram and histogram of expressions of YTHDF2 protein in Eca109 and EC9706 cells in various groups after transfected with different concentrations of siRNA

2.5 各組食管癌細(xì)胞的增殖活性 與對(duì)照組比較，轉(zhuǎn)染2～5 d時(shí)si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組Eca109細(xì)胞增殖活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)明顯降低（P＜0.05）；轉(zhuǎn)染1～5 d時(shí)si-YTHDF2#1組 和si-YTHDF2#2組EC9706細(xì)胞增殖活性隨著時(shí)間的延長(zhǎng)明顯降低（P＜0.05）。見表4和5。

表4 各組Eca109細(xì)胞增殖活性Tab. 4 Proliferation activities of Eca 109 cells in various groups(n=3，±s）

表4 各組Eca109細(xì)胞增殖活性Tab. 4 Proliferation activities of Eca 109 cells in various groups(n=3，±s）

*P＜0.05 vs control group.

Group Proliferation activity 2 3 4 5 Control si-YTHDF2#1 si-YTHDF2#2 1.392±0.004 0.883±0.022*0.548±0.009*(t/d)1 0.205±0.002 0.200±0.005 0.214±0.006 0.298±0.004 0.277±0.001*0.305±0.005 0.422±0.007 0.347±0.007*0.349±0.006*0.626±0.002 0.442±0.013*0.378±0.004*

2.6 各組食管癌細(xì)胞克隆形成數(shù) 與對(duì)照組比較，si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組Eca109和EC9706細(xì)胞克隆形成數(shù)均明顯減少。與對(duì)照組Eca109細(xì) 胞 ［ （311.0±11.0） 個(gè)］ 比 較，si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組Eca109細(xì)胞克隆形成數(shù)［（176.3±11.5）個(gè)和（35.3±2.5）個(gè)］明顯減少 （P＜0.01）；與對(duì)照組EC9706細(xì)胞［（244.7±8.0）個(gè)］比較，si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組EC9706細(xì)胞克隆形成數(shù)［（99.7±2.5）個(gè)和（32.7±2.5）個(gè)］明顯減少（P＜0.01）。見圖4。

表5 各組EC9706細(xì)胞增殖活性Tab. 5Proliferation activities of EC9706 cells in various groups(n=3，±s）

表5 各組EC9706細(xì)胞增殖活性Tab. 5Proliferation activities of EC9706 cells in various groups(n=3，±s）

*P＜0.05 vs control group.

Group Proliferation activity 2 3 4 5 Control si-YTHDF2#1 si-YTHDF2#2 1.851±0.032 1.128±0.003*0.694±0.022*(t/d)1 0.264±0.004 0.252±0.002*0.216±0.002*0.306±0.006 0.281±0.005*0.248±0.003*0.441±0.009 0.434±0.003 0.365±0.004*0.799±0.025 0.520±0.008*0.423±0.006*

圖4 各組食管癌細(xì)胞克隆形成情況（結(jié)晶紫）Fig.4 Colony formation abilities of Eca109 and EC9706 in various groups（Crystal violet）

2.7 各組食管癌細(xì)胞中遷移細(xì)胞數(shù) 與對(duì)照組比較，si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組Eca109和EC9706細(xì)胞中遷移細(xì)胞數(shù)均明顯減少。與對(duì)照組Eca109細(xì)胞 ［（315.3±4.9） 個(gè)］ 比較，si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組Eca109細(xì)胞中遷移細(xì)胞數(shù) ［（116.3±4.0） 個(gè)和 （109.3±15.9） 個(gè)］ 明顯減少 （P＜0.01）；與對(duì)照組EC9706細(xì) 胞 ［ （225.3±17.2） 個(gè)］ 比 較，si-YTHDF2#1組和si-YTHDF2#2組EC9706細(xì)胞中遷移細(xì)胞數(shù)［（94.3±7.1）個(gè)和（121±24.1）個(gè)］明顯減少（P＜0.01）。見圖5。

圖5 各組Eca109和Ec9706細(xì)胞遷移情況（結(jié)晶紫，×200）Fig.5 Migration of Eca109 and EC9706 cells in various groups（Crystal violet，×200）

3 討 論

近年來，雖然食管癌的發(fā)病率和死亡率已有明顯的降低，但食管癌患者術(shù)后的總體生存率仍然較低，預(yù)后較差［6］。研究食管癌發(fā)生發(fā)展的分子生物學(xué)機(jī)制，可為食管癌提供新的靶向治療策略，從而達(dá)到精準(zhǔn)治療食管癌的目的，改善患者的預(yù)后和總體生存時(shí)間，因此是食管癌領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)［7-8］。m6A甲基化修飾作為最常見的RNA修飾方式之一，可在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達(dá)，近年來其相關(guān)的酶或蛋白在食管癌發(fā)生發(fā)展的功能也被學(xué)者廣泛關(guān)注。研究［9-12］顯示：m6A甲基化修飾結(jié)合蛋白YTHDF2在多種腫瘤中特異性高表達(dá)，且其上調(diào)表達(dá)能促進(jìn)腫瘤增殖、遷移和侵襲。但YTHDF2在食管癌中作用的研究尚未見報(bào)道，其在食管癌中的作用機(jī)制仍不明確。

為探討m6A甲基化修飾結(jié)合蛋白YTHDF2在食管癌中的作用，本研究采用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)ESCC組織中YTHDF2蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示：在ESCC組織中，YTHDF2蛋白特異性高表達(dá)；進(jìn)一步分析ESCC組織中YTHDF2表達(dá)強(qiáng)度與ESCC患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示：不同發(fā)病年齡和TNM分期ESCC患者癌組織中YTHDF2蛋白表達(dá)強(qiáng)度比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；生存分析顯示：YTHDF2高表達(dá)患者有相對(duì)較低的生存率，進(jìn)一步證實(shí)m6A甲基化修飾結(jié)合蛋白YTHDF2可能為促進(jìn)ESCC患者的腫瘤進(jìn)展的重要分子之一。本文作者進(jìn)一步研究了YTHDF2能否促進(jìn)食管癌細(xì)胞的生物學(xué)行為，采用YTHDF2 siRNA轉(zhuǎn)染食管癌Eca109和EC9706細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖能力明顯受到抑制，克隆形成能力和細(xì)胞遷移能力明顯降低，表明YTHDF2可能促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖、克隆形成和遷移能力，提示下調(diào)YTHDF2表達(dá)可能是治療食管癌的潛在策略。

增殖和遷移是惡性腫瘤的重要特征，其過程復(fù)雜，涉及多種機(jī)制［13-16］，YTHDF2作為m6A甲基化修飾主要的閱讀器，其高表達(dá)能夠促進(jìn)某些抑癌基因或促癌基因相應(yīng)靶標(biāo)mRNA的降解或合成，進(jìn)而導(dǎo)致食管癌的發(fā)生。研究［17］表明：YTHDF2通過降解膀胱癌中的含SET域蛋白7（SET Domain Containing 7，SETD7） 和 Krüppel樣因子 4（Krüppel-like factor 4，KLF4） mRNA 促進(jìn)腫瘤發(fā)生。在小鼠精原細(xì)胞中，YTHDF2基因敲除能下調(diào)基質(zhì)金屬肽酶（matrix metalloproteinases，MMPs），并通過m6A/mRNA降解途徑影響細(xì)胞的黏附和增殖［18］。研究［19］顯示：YTHDF2 通過調(diào)節(jié)肺腺癌組織中的軸抑制蛋白1（axis inhibitor factor 1，Axin1）進(jìn)而激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞的增殖和遷移。在肝癌中YTHDF2通過上調(diào)八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4（octamer-binding transcription factor 4，Oct4）表達(dá)促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移［20］。但在ESCC中，m6A甲基化修飾結(jié)合蛋白YTHDF2調(diào)節(jié)食管癌增殖和遷移的機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，在ESCC組織中，m6A甲基化修飾結(jié)合蛋白YTHDF2特異性高表達(dá)，YTHDF2蛋白高表達(dá)患者有相對(duì)較低的生存率，敲低YTHDF2能抑制食管癌細(xì)胞的增殖和遷移。本研究結(jié)果提示，敲低YTHDF2可能是食管癌的潛在治療策略。