降解溫和氣單胞菌AHLs乳酸菌的篩選及在三文魚保鮮中的應(yīng)用

高永悅，呂欣然,*，杜 宏，崔曉玲，俞美辰，白鳳翎，勵建榮,2，王明麗，周小敏，郭曉華

（1.渤海大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，生鮮農(nóng)產(chǎn)品貯藏加工及安全控制技術(shù)國家地方聯(lián)合工程研究中心，遼寧省食品安全重點實驗室，遼寧 錦州 121013；2.大連工業(yè)大學(xué) 海洋食品精深加工關(guān)鍵技術(shù)省部共建協(xié)同創(chuàng)新中心，遼寧 大連 116034；3.蓬萊京魯漁業(yè)有限公司，山東 煙臺 265600；4.浙江興業(yè)集團(tuán)有限公司，浙江 舟山 316100；5.山東美佳集團(tuán)有限公司，山東 日照 276800）

溫和氣單胞菌（）是水產(chǎn)品中常見的優(yōu)勢腐敗菌，可通過產(chǎn)生-?；呓z氨酸內(nèi)酯（-acyl-homoserine lactones，AHLs）類信號分子響應(yīng)群體感應(yīng)通訊通路，進(jìn)而啟動毒力因子或生物膜等相關(guān)基因的表達(dá)，從而導(dǎo)致水產(chǎn)品腐敗，引起嚴(yán)重的水產(chǎn)品安全問題。在溫和氣單胞菌的LuxI/R群體感應(yīng)系統(tǒng)中，AHLs類信號分子與受體蛋白結(jié)合，激活轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子LuxR，從而調(diào)控生物膜、胞外蛋白酶、嗜鐵素等致腐基因表達(dá)。Li Tingting等研究證實添加外源信號分子可提高溫和氣單胞菌的致腐能力，提高冷藏大菱鲆魚片細(xì)菌菌落總數(shù)和揮發(fā)性鹽基氮（total volatile basic nitrogen，TVB-N）值，從而加速產(chǎn)品的腐敗?？股厥强刂莆⑸锓敝车闹饕侄危欢湓谒a(chǎn)品中易積累富集，抑制機(jī)體免疫反應(yīng)，并導(dǎo)致抗生素耐藥細(xì)菌的出現(xiàn)，嚴(yán)重危害人類健康和生態(tài)環(huán)境系統(tǒng)。因此，抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用受到限制。針對該問題，群體感應(yīng)淬滅被認(rèn)為是控制水產(chǎn)品腐敗菌的新途徑，因其不以微生物細(xì)胞為作用靶點，不會使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥，逐漸成為防腐領(lǐng)域研究的熱點。

群體感應(yīng)淬滅劑主要可通過抑制AHLs合成、競爭性抑制AHLs與受體蛋白結(jié)合、AHLs降解等淬滅方式干擾細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)。AHLs降解主要是依靠微生物分泌的AHLs內(nèi)酯酶、?；D(zhuǎn)移酶、氧化還原酶等酶的分解作用。目前，國內(nèi)外研究報道中可分泌AHLs降解酶的微生物主要包括芽孢桿菌屬、乳桿菌屬、不動桿菌屬等，但關(guān)于乳酸菌來源的AHLs降解酶鮮有報道。乳酸菌是一種安全高效的抗菌劑，其自身或代謝產(chǎn)物可通過抑制AHLs合成、競爭性抑制AHLs與受體蛋白結(jié)合、AHLs降解等淬滅方式干擾細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)。本課題組Cui Tianqi等研究了面包乳桿菌ZHG 2-1淬滅酶粗提物對銅綠假單胞菌AHLs降解活性，實時聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）結(jié)果表明群體感應(yīng)相關(guān)基因/和/的表達(dá)下調(diào)。

本研究以產(chǎn)AHLs類信號分子的溫和氣單胞菌AS7為目標(biāo)菌，從傳統(tǒng)發(fā)酵食品分離的乳酸菌中篩選對溫和氣單胞菌信號分子具有降解活性的菌株，對其淬滅酶存在位置、種類及最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）進(jìn)行分析。同時，以三文魚為載體，通過測定細(xì)菌菌落總數(shù)、持水力、硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）值以及TVB-N值等指標(biāo)評價乳酸菌控制溫和氣單胞菌致腐能力的效果，旨在為控制AHLs介導(dǎo)的革蘭氏陰性細(xì)菌群體感應(yīng)系統(tǒng)導(dǎo)致的水產(chǎn)品腐敗問題提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

三文魚購買自錦州海芝鮮挪威三文魚店。

乳酸菌菌株：分離自面團(tuán)、酸湯面、酸菜、酸豆角等傳統(tǒng)發(fā)酵食品中；目標(biāo)菌株：溫和氣單胞菌AS7，分離自腐敗大菱鲆體表；報告菌株：紫色色桿菌（）CV026為ATCC31532的mini-Tn5突變體，該菌株自身不產(chǎn)生AHLs信號分子，當(dāng)添加-丁?；?-高絲氨內(nèi)酯（-butanoyl--homoserine lactone，C-HSL）、辛?；?-高絲氨酸內(nèi)酯（octanoyl--homoserine lactone，C-HSL）等外源短鏈AHLs時即可產(chǎn)生紫色菌素。以上菌株由本實驗室保藏。

MRS（de Man, Rogosa and Sharpe）培養(yǎng)基、LB（Luria-Bertani）培養(yǎng)基、平板計數(shù)培養(yǎng)基 北京奧博星生物技術(shù)有限公司；乳酸菌生化鑒定管 杭州天和微生物試劑有限公司；Tris-HCl、卡那霉素、細(xì)菌基因組DNA快速抽提試劑盒、DNA marker-D、PCR Master mix生工生物工程（上海）股份有限公司；TBA 上海源葉生物科技有限公司；三氯乙酸 天津市匯杭化工科技有限公司；氧化鎂 宜城晶瑞新材料有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

DL-CJ-2N超級潔凈工作臺 北京市東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；SPX-25生化培養(yǎng)箱 寧波海曙賽福實驗儀器廠；5804R高速冷凍離心機(jī) 德國Eppendorf公司；GI54DS立式高壓蒸汽滅菌鍋 致微（廈門）儀器有限公司；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠；DYY-8C電泳儀 北京市六一儀器廠；Quantity One凝膠成像系統(tǒng)、Imark酶標(biāo)儀 美國Bio-Rad公司；ABI stepone plus PCR儀 德國Eppendorf公司；Free Zone 2.5臺式真空冷凍干燥機(jī) 美國Labconco公司；JYSA800型絞肉機(jī) 九陽股份有限公司；UV2550紫外-可見分光光度計 日本島津公司；Y25小型均質(zhì)乳化機(jī) 上海約迪機(jī)械設(shè)備有限公司；Bagmixer400拍擊式均質(zhì)器 法國Interscience公司；PHS-3C pH計 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；KDY9820自動凱氏定氮儀 北京瑞邦興業(yè)科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 溫和氣單胞菌AHLs粗提物的制備

將溫和氣單胞菌3 代培養(yǎng)物于4 ℃、8 000 r/min離心10 min，并用0.22 μm濾膜真空抽濾，收集溫和氣單胞菌無細(xì)胞上清液（cell-free supernatant，CFS）。將100 mL溫和氣單胞菌CFS分裝至分液漏斗中，與20 mL含有0.01%冰醋酸的乙酸乙酯溶液振蕩混勻，靜置萃取5 min，收集乳化層于圓底蒸發(fā)瓶中，重復(fù)上述步驟5 次合并萃取液。利用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將萃取液于50 ℃、120 r/min處理至乙酸乙酯完全蒸發(fā)，體積分?jǐn)?shù)70%甲醇溶液溶解干燥物，保存至1.5 mL無菌離心管中，置于－20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 降解溫和氣單胞菌AHLs粗提物乳酸菌篩選

96 孔板法初篩：將1.0 mL乳酸菌二代培養(yǎng)物調(diào)節(jié)至pH 7.0，加入10 μL AHLs粗提物混合均勻，30 ℃靜置培養(yǎng)24 h。將共培養(yǎng)物pH值調(diào)至7.0，于4 ℃、10 000 r/min離心5 min獲得上清液，備用。在96 孔板中加入100 μL素瓊脂，待其凝固后將10 μL上清液點樣于素瓊脂表面，最后用100 μL含有CV026（體積比1∶5）的LB瓊脂封頂，30 ℃靜置培養(yǎng)24 h。以無菌MRS液體培養(yǎng)基與等量的溫和氣單胞菌AHLs共培養(yǎng)物作陰性對照。

牛津杯打孔法復(fù)篩：按上述方法獲得共培養(yǎng)物上清液。首先將10 mL素瓊脂平鋪至平板底部，待其凝固后放入牛津杯，將含有2.0 mL CV026的LB瓊脂倒入平板，冷卻凝固后將牛津杯取出，孔內(nèi)加入180 μL共培養(yǎng)物，30 ℃靜置培養(yǎng)24 h后，利用全自動菌落計數(shù)儀測量孔周圍的紫色暈圈直徑。以無菌MRS液體培養(yǎng)基與等量的溫和氣單胞菌AHLs共培養(yǎng)物作陰性對照。按式（1）計算乳酸菌對溫和氣單胞菌AHLs降解率：

式中：為對照組紫色圈直徑/mm；為乳酸菌處理組紫色圈直徑/mm。

1.3.3 乳酸菌群體淬滅酶及活性位置的確定

乳酸菌CFS的制備：過夜培養(yǎng)的乳酸菌4 ℃、10 000 r/min離心5 min，上清液使用0.22 μm無菌濾器過濾，濾液于4 ℃冰箱備用。

乳酸菌胞內(nèi)粗提物（crude cell extract，CCE）的制備：使用pH 6.5的磷酸鹽緩沖液洗滌乳酸菌沉淀物2 次，將其重懸于5.0 mL相同緩沖液中，在低溫條件下超聲破碎菌體5 min后，4 ℃、10 000 r/min離心30 min，上清液用0.22 μm無菌過濾器過濾，獲得乳酸菌CCE，4 ℃冰箱備用。

將10.0 μL溫和氣單胞菌AHLs粗提物分別與上述1.0 mL CFS、1.0 mL熱滅活CFS、1.0 mL CCE于30 ℃共培養(yǎng)24 h，應(yīng)用牛津杯打孔法測定乳酸菌CFS和CCE對溫和氣單胞菌AHLs的降解活性。

1.3.4 乳酸菌群體淬滅酶對AHLS的降解作用

溫和氣單胞菌AS7 AHL類信號分子主要有C-HSL、C-HSL和C-HSL。采用體積分?jǐn)?shù)70%甲醇溶液將C-HSL、C-HSL 和C-HSL信號分子標(biāo)準(zhǔn)品配制成200 μg/L的溶液，備用。將乳酸菌CFS和信號分子標(biāo)準(zhǔn)品按1.3.3節(jié)共培養(yǎng)步驟過夜培養(yǎng)，應(yīng)用牛津杯打孔法測定乳酸菌粗提物對AHL的降解作用。

1.3.5 乳酸菌群體淬滅酶類型的鑒定

乳酸菌粗提物的制備同1.3.1節(jié)，萃取劑為不含冰醋酸的乙酸乙酯。參考李婷婷等方法稍作修改。將乳酸菌粗提物用1.0 mol/L HCl溶液調(diào)至pH 2.0，30 ℃靜置培養(yǎng)24 h，應(yīng)用牛津杯打孔法檢測pH 7.0和pH 2.0上清液的降解效果。

1.3.6 乳酸菌粗提物MIC測定

將活化3 代的溫和氣單胞菌菌懸液稀釋至10CFU/mL，以2%接種量于5 mL LB培養(yǎng)基中，加入不同濃度的乳酸菌粗提物200 μL至其終質(zhì)量濃度為0、2.0、4.0、6.0、8.0、16.0、32.0 mg/mL，以添加等量MRS肉湯作為空白對照，30 ℃靜置培養(yǎng)24 h后，肉眼觀察到無渾濁現(xiàn)象試管對應(yīng)濃度為MIC。

取180 μL菌懸稀釋液于96 孔板中，再分別加入20 μL不同亞抑制濃度（0.25 MIC、0.50 MIC和0.75 MIC）乳酸菌粗提物，加入等量MRS肉湯作為陰性對照，30 ℃靜置培養(yǎng)，每隔2 h測定OD，連續(xù)檢測24 h，驗證亞抑制濃度乳酸菌粗提物對溫和氣單胞菌生長的影響。

1.3.7 乳酸菌菌株鑒定

參照文獻(xiàn)[16]，對具有降解溫和氣單胞菌AHLs作用的乳酸菌菌株進(jìn)行生理生化鑒定。參照林洋等方法進(jìn)行16S rDNA序列分析。

1.3.8 乳酸菌粗提物對三文魚的保鮮作用

1.3.8.1 無菌魚塊的制備

參照Herbert等方法并稍作修改。在無菌操作臺內(nèi)制備無菌魚肉樣品，利用75%乙醇溶液擦拭魚體，去除魚皮后，用無菌菜刀將魚肉切成約10 g/塊的魚塊備用。將制備好的魚塊采用浸泡法處理，具體處理方式如表1所示，篩選乳酸菌粗提物質(zhì)量濃度為6 mg/mL，溫和氣單胞菌菌液濃度為10CFU/mL。將無菌魚塊在不同處理方式下浸泡30 min后撈出瀝干，裝入無菌蒸煮袋中于4 ℃密封保存。2 d/次進(jìn)行取樣，對不同處理組中細(xì)菌菌落總數(shù)、持水力、TBA值以及TVB-N值進(jìn)行測定。

表1 無菌三文魚的不同處理方式Table 1 Different processing methods for sterile salmon

1.3.8.2 細(xì)菌菌落總數(shù)測定

參照GB 4789.2ü2016《食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定》，取不同處理的三文魚樣品于蒸煮袋中，分別加入無菌生理鹽水90 mL，用拍擊式均質(zhì)器拍打2 min，采用10 倍稀釋法對樣品進(jìn)行稀釋，選擇3 個適宜濃度，30 ℃培養(yǎng)24 h，記錄菌落總數(shù)。

1.3.8.3 持水力測定

參照Castellini等的方法并稍作修改。取三文魚樣品精確稱量其質(zhì)量，記為。用濾紙包住魚塊并置于離心管中，4 ℃、5 000 r/min離心10 min，離心后的魚肉質(zhì)量記為，按式（2）計算魚肉的持水力：

1.3.8.4 TBA值的測定

參照GB 5009.181ü2016《食品中丙二醛的測定》。精確稱取三文魚樣品5.0 g，準(zhǔn)確加入50 mL三氯乙酸（7.5%）混合液，均質(zhì)過濾。取5 mL濾液與TBA溶液（0.02 mol/L）混合后，90 ℃水浴30 min，冷卻后測量其OD。

1.3.8.5 TVB-N值的測定

參照Li Tingting等的方法并稍作修改。利用絞肉機(jī)將三文魚樣品絞碎，分裝至750 mL蒸餾管中，添加1.00 g輕質(zhì)氧化鎂，與半自動凱氏定氮儀相連接。利用10 mL 2%硼酸溶液收集餾出液，并用0.01 mol/L標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定。記錄鹽酸所消耗的體積，TVB-N值以mg/100 g表示。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 降解溫和氣單胞菌AHLs粗提物乳酸菌的篩選

從90 株乳酸菌中初篩到12 株乳酸菌，可以使CV026不產(chǎn)生紫色或產(chǎn)生的量遠(yuǎn)小于對照組（圖1a），初步判斷這些菌株對AHLs具有降解活性。通過復(fù)篩實驗，12 株乳酸菌對溫和氣單胞菌AHLs降解能力顯著，降解率在26.51%～100%之間。圖1b為乳酸菌LNL2-1、ZSC1-3、YF-8對溫和氣單胞菌的降解效果。其中來源于遼寧朝陽泡菜的菌株YF-8使紫色桿菌幾乎無紫色暈圈產(chǎn)生，表明降解活性較好，降解率接近100%，因此，后續(xù)實驗選擇菌株YF-8進(jìn)行下一步研究。

圖1 乳酸菌降解溫和氣單胞菌AHLs的篩選結(jié)果Fig.1 Results of screening of lactic acid bacteria degrading AHLs from A.sobria

2.2 YF-8群體感應(yīng)淬滅酶位置、類型及對AHLs信號分子降解作用的分析

由圖2a可知，菌株YF-8 CCE孔周圍的紫色圈與陰性對照組相比無顯著差異，表明其CCE不具有降解活性。但菌株YF-8 CFS孔周圍的紫色圈遠(yuǎn)小于對照組，表明淬滅酶主要存在于菌株CFS中。由圖2b所示，菌株YF-8 CFS經(jīng)熱滅活處理后，與對照組紫色圈無顯著差異，由此可確證YF-8粗提物淬滅物質(zhì)為蛋白酶類。菌株YF-8 CFS對信號分子標(biāo)準(zhǔn)品的降解圖顯示孔周圍有淡紫色暈圈，表明其對C-HSL、C-HSL和C-HSL的降解效果較好。

AHLs-內(nèi)酯酶是一類可將信號分子內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)破壞的酶，但在酸性條件下信號分子的內(nèi)酯環(huán)會重新環(huán)化。圖2c中，當(dāng)YF-8粗提物與AHLs共同存在時，pH 2.0和pH 7.0的共培養(yǎng)物上清液孔周圍均不產(chǎn)生紫色圈，表明上清液中信號分子被降解，在酸性條件下有效酶的活性依然存在，因此產(chǎn)生降解活性的物質(zhì)不是AHLs-內(nèi)酯酶，可能是AHLs-?；D(zhuǎn)移酶。

圖2 YF-8的群體感應(yīng)淬滅酶位置及類型分析Fig.2 Identification of the location and type of quorum quenching enzyme from YF-8

2.3 MIC分析

由圖3A所示，YF-8淬滅酶粗提物對溫和氣單胞菌的MIC為8.0 mg/mL。由圖3B可知，與對照組相比，當(dāng)YF-8淬滅酶粗提物在亞抑制質(zhì)量濃度6.0 mg/mL時，溫和氣單胞菌的生長速度與對照相比略有差異，但不足以殺死細(xì)菌。因此，選擇YF-8淬滅酶粗提物質(zhì)量濃度為6.0 mg/mL進(jìn)行后續(xù)研究。

圖3 不同質(zhì)量濃度YF-8淬滅酶粗提物對溫和氣單胞菌生長的影響Fig.3 Effect of different concentrations of YF-8 crude extract on the growth of A.sobria

2.4 乳酸菌菌株鑒定

表2表示菌株YF-8的生理生化鑒定結(jié)果，可初步判斷菌株YF-8為戊糖片球菌（）。將YF-8的PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在1 500 bp左右出現(xiàn)特異性亮帶，表明目標(biāo)片段被成功擴(kuò)增（圖4a）。通過與NCBI數(shù)據(jù)庫獲得的序列比較并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果可知（圖4b），菌株YF-8與MT510516.1的16S rDNA最為相似，支持率為100%，因此可確證菌株YF-8為戊糖片球菌。

表2 菌株YF-8的生理生化鑒定結(jié)果Table 2 Physiological and biochemical test results of strain YF-8

圖4 菌株YF-8的16S rDNA基因擴(kuò)增電泳圖（a）及16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹（b）Fig.4 PCR amplification of 16S rDNA gene (a) and phylogenetic tree for 16S rDNA sequence (b) of strain YF-8

2.5 YF-8淬滅酶粗提物對三文魚的保鮮作用

2.5.1 細(xì)菌菌落總數(shù)分析

國際食品微生物委員會規(guī)定生食魚片的菌落總數(shù)最低接受水平為5h10CFU/g，安全限值為10CFU/g。圖5a表示不同處理組的三文魚在4 ℃條件冷藏10 d細(xì)菌菌落總數(shù)變化情況，貯藏初始，對照組及不同處理組三文魚樣品的菌落總數(shù)均小于最低接受水平，表明魚肉品質(zhì)良好；貯藏第4天時，AS組的菌落總數(shù)超過5h10CFU/g；第6天時，NC組菌落總數(shù)為6.39（lg（CFU/g）），超過最低接受水平，小于安全限值；在貯藏第10天時，T組及T組細(xì)菌菌落總數(shù)分別為6.52（lg（CFU/g））和6.16（lg（CFU/g）），超過最低接受水平未超過安全限值，而兩對照組均超過安全限值，與NC組和AS組相比，可延長貨架期分別為2 d和4 d。

圖5 YF-8淬滅酶粗提物對三文魚的保鮮作用Fig.5 Effect of YF-8 crude extract on quality preservation of salmon

2.5.2 持水力分析

持水力反映魚肉在受到外力作用時保持原有水分以及防止水分流失的能力。由圖5b可見，冷藏初期，各組三文魚的持水力在88%以上，T組及T組的持水力始終高于空白對照NC組和陰性對照AS組；貯藏末期第10天時，與AS對照相比，T組持水力提高了6.88%；與NC對照相比，T組持水力提高了5.91%。

2.5.3 TBA值分析

TBA值是用于評估脂質(zhì)氧化程度的重要指標(biāo)之一。三文魚脂肪中不飽和脂肪酸含量高，容易發(fā)生脂質(zhì)氧化產(chǎn)生丙二醛，產(chǎn)生難聞的氣味，在一定條件與TBA縮合形成紅色物質(zhì)。當(dāng)TBA值達(dá)到1.0～2.0 mg/kg時，會產(chǎn)生難以接受的氣味。三文魚在不同處理條件下TBA值的變化情況如圖5c所示，貯藏第10天時，NC組和AS組的TBA值大于1.0 mg/kg，而T組及T組TBA值分別為0.85 mg/kg和0.73 mg/kg。

2.5.4 TVB-N值分析

TVB-N值是評定水產(chǎn)品新鮮程度的重要指標(biāo)之一。三文魚肉在酶和細(xì)菌的作用下，分解蛋白質(zhì)產(chǎn)生具有揮發(fā)性的氨以及胺類等堿性含氮物質(zhì)，其含量越高，表明氨基酸被破壞越多，從而影響魚肉營養(yǎng)價值。由圖5d可見，魚肉的初始TVB-N值小于15 mg/100 g，隨著冷藏時間的延長TVB-N值逐漸呈上升趨勢，NC組和AS組的上升速度顯著高于T組和T組；貯藏6 d，T組和T組TVB-N值為18.78、16.99 mg/100 g，鮮度下降；貯藏10 d，T組和T組TVB-N值顯著低于NC組和AS組。

因此，YF-8淬滅酶粗提物可通過降解AHLs信號分子阻斷群體感應(yīng)通路，進(jìn)而降低溫和氣單胞菌致三文魚腐敗的能力，分別表現(xiàn)為控制細(xì)菌菌落總數(shù)在安全限值內(nèi)，減緩魚肉持水力的降低，延緩三文魚貯藏過程中TBA值及TVB-N值的上升。陳桂芳等報道了競爭型群體感應(yīng)抑制劑肉桂油對感染熒光假單胞菌的大菱鲆魚汁腐敗作用的抑制效果，在4 ℃條件下貯藏12 d，肉桂油處理組細(xì)菌菌落總數(shù)和TVB-N值顯著降低，因此肉桂油可通過干擾熒光假單胞菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)降低其腐敗能力，與本研究結(jié)果類似。

3 結(jié) 論

從發(fā)酵食品中篩選出具有降解溫和氣單胞菌AHLs的戊糖片球菌YF-8，降解活性近100%。YF-8淬滅酶主要存在于CFS中，初步鑒定不是AHLs內(nèi)酯酶，對AHLs信號分子標(biāo)準(zhǔn)品C-HSL、C-HSL和C-HSL的降解效果良好。YF-8淬滅酶粗提物對溫和氣單胞菌的MIC為8.0 mg/mL，2.0、4.0、6.0 mg/mL的YF-8淬滅酶粗提物不影響溫和氣單胞菌的生長。在體外三文魚保鮮實驗中，與對照組相比，YF-8處理組有效控制三文魚塊中細(xì)菌菌落的生長，減緩持水力的下降及TBA值和TVB-N值的上升，從而抑制溫和氣單胞菌的致腐能力，旨在為控制AHLs介導(dǎo)的革蘭氏陰性菌群體感應(yīng)致水產(chǎn)品腐敗提供理論基礎(chǔ)。