跨膜絲氨酸蛋白酶2-成紅細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)化基因相關(guān)基因、成紅細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)化基因變異體1及成紅細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)化基因變異體4在前列腺癌中的表達(dá)及臨床意義

陳俊泳，韓耕宇，褚 靖，鄧 健，謝 群

(廣東省珠海市人民醫(yī)院，暨南大學(xué)附屬珠海醫(yī)院，廣東 珠海 519000)

前列腺癌是男性發(fā)病率最高惡性疾，多好發(fā)于老年人群[1]。目前有關(guān)前列腺癌的發(fā)病機(jī)制尚未十分明確，有學(xué)者指出，人類惡性腫瘤與基因融合存在密切聯(lián)系，參與了腫瘤發(fā)生、發(fā)展，通過觀察基因融合情況，觀察基因融合情況對治療方法選擇、預(yù)后評估具有重要意義[2]。前列腺癌中基因融合涉及了跨膜絲氨酸蛋白酶2(transmembrane serine protease 2，TMPRSS2)基因及成紅細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)化基因相關(guān)基因(ERG)、成紅細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)化基因變異體4(ETV4)、成紅細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)化基因變異體1(ETV1)等，多數(shù)前列腺癌患者常伴有上述基因融合改變，而在前列腺良性組織中并不會出現(xiàn)上述改變[3，4]。本研究通過檢測前列腺癌患者中各因子表達(dá)情況，探討三者與前列腺癌的關(guān)系及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料2018年4月至2020年9月我院收治的82例前列腺癌患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)臨床確診；②年齡>18歲，且無意識、溝通障礙；③無放療、化療等治療史；④資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①自身免疫系統(tǒng)先天性異常；②存在急性前列腺炎、尿潴留等；③非典型性腺瘤樣增生者；④精神病、癡呆、孕婦等特殊人群。82例患者年齡52～85歲[(71.65±9.36)歲]；病理類型：腺癌69例，鱗癌13例；Gleason 分級評分標(biāo)準(zhǔn)：2～4分17例，5～7分42例，8～10分23例；Jewett-WhitmoreProut臨床分期：A+B期34例，C+D期48例。

1.2 方法收集82例患者術(shù)后癌組織及距瘤體5 cm以上的正常組織。常規(guī)脫水、固定、包埋，5 μm連續(xù)厚切片。用于免疫組化檢測TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV4表達(dá)。試劑：兔抗人TMPRSS2-ERG(濃縮型，稀釋度為1∶200)、TMPRSS2-ETV1(濃縮型，稀釋度為1∶200)、TMPRSS2-ETV4(濃縮型，稀釋度為1∶200)、多克隆抗體，均由美國 Epitomics公司提供。SP免疫組化、DAB試劑盒均由美國 Epitomics公司提供。并采用S-P免疫組化染色法檢測TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV4。一抗陰性對照使用PBS進(jìn)行代替。

1.3 結(jié)果判定采用雙盲法對結(jié)果進(jìn)行判定，即根據(jù)陽性細(xì)胞在全部組織細(xì)胞中占比及陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度判定[5]：①按顯色細(xì)胞數(shù)計(jì)分，無陽性細(xì)胞數(shù)為0分；1分陽性細(xì)胞<10%，2分10%～50%；3分50%～75%；4分>75%。②著色程度：0分為無色，淡黃色、棕黃色、黃褐色分別記1、2、3分。每張切片取5個高倍視野。兩類分?jǐn)?shù)相乘總分<3分為陰性。比較不同組織TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表達(dá)。分析各因子與臨床特征之間的關(guān)系及對前列腺癌的診斷價值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差描述，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，比較行χ2檢驗(yàn)；診斷價值分析采用ROC曲線。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織中各因子表達(dá)比較前列腺癌組織中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4陽性表達(dá)率均顯著高于癌旁正常組織(P<0.05)。見表1。

表1 不同組織中各因子表達(dá)比較 [n(%)]

2.2 不同臨床特征前列腺癌患者各因子陽性表達(dá)率比較臨床分期C+D期、Gleason評分≥5分患者的各因子陽性表達(dá)率均顯著高于臨床分期A+B期、Gleason評分<5分(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床特征前列腺癌患者各因子陽性表達(dá)率比較 [n(%)]

※與A+B期比較，P<0.05；○與<5分比較，P<0.05

2.3 各因子檢測對診斷前列腺癌的價值TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4聯(lián)合檢測曲線下面積(AUC)、敏感度、特異度分別為0.814、0.925、0.865，均高于各項(xiàng)指標(biāo)單獨(dú)檢測(P<0.05)。見表3及圖1。

表3 各因子檢測對診斷前列腺癌的價值

圖1 各因子對診斷前列腺癌的ROC曲線分析

3 討論

染色體結(jié)構(gòu)改變是正常細(xì)胞進(jìn)展為癌細(xì)胞的重要分子生物學(xué)事件，其中染色體易位導(dǎo)致基因融合可能是部分腫瘤發(fā)生的重要原因。TMPRSS2-ETS基因融合具有多樣性，TMPRSS2與ETS家族成員如ERG、ETV1、ETV4等均可發(fā)生基因重排，其中以TMPRSS2-ERG發(fā)生最為常見[6，7]。

ETS轉(zhuǎn)錄因子家族成員可表達(dá)于人體各臟器、組織，且同時參與了多個生物學(xué)過程，如細(xì)胞分化、調(diào)節(jié)、增殖等[8，9]。國內(nèi)外相關(guān)報道顯示，ETS在乳腺癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤的血管生成、轉(zhuǎn)移、浸潤中具有調(diào)控作用[10，11]。周文浩等則指出ERG、ETV1、ETV4基因與TMPRSS2基因融合生成新的融合基因頻繁出現(xiàn)在前列腺癌中，在疾病進(jìn)展中發(fā)揮重要作用[12，13]。本研究報道結(jié)果與上述研究基本相符，認(rèn)為可能是融合基因TMPRSS2調(diào)節(jié)了前列腺癌組織中ERG、ETV1、ETV4的表達(dá)，且ERG、ETV1、ETV4易受雄激素的影響；其融合基因的存在同樣亦影響雄激素的調(diào)節(jié)機(jī)制[14～16]。大部分的前列腺癌標(biāo)本中可見出現(xiàn)基因重排，從而促進(jìn)EST家族表達(dá)。但Todorova等[17]發(fā)現(xiàn)，在前列腺癌患者中，TMPRSS2-ETV1、ETV4陽性表達(dá)率不超過10%，與本研究報道不符，可能與納入樣本量、患者自身差異等因素有關(guān)。

國外部分研究指出，TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4的過度表達(dá)與ERG、ETV1、ETV4的高表達(dá)具有較高的一致性[18，19]。TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4過表達(dá)與前列腺癌的侵襲性具有一定關(guān)系，且與分化程度、腫瘤分期等亦相關(guān)。Carsten等[20]通過檢測Gleason評分為7分的前列腺癌中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表達(dá)，發(fā)現(xiàn)含融合基因患者的5年生存率明顯高于未含融合基因者。本研究中，隨臨床分期進(jìn)展、Gleason評分增高，TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4陽性表達(dá)率亦逐漸增高，提示上述因子同樣參與了前列腺癌的進(jìn)展，增加了前列腺癌細(xì)胞的侵襲能力，促進(jìn)腫瘤臨床進(jìn)展。進(jìn)一步ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，三者均可有效診斷前列腺癌，但通過聯(lián)合檢測三者可一定程度提高診斷效能。

綜上所述，前列腺癌患者中TMPRSS2-ERG、ETV1、ETV4表達(dá)異常，聯(lián)合檢測上述因子可為臨床鑒別診斷前列腺癌提供參考。