肺癌組織中腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1和血管內(nèi)皮生長因子C表達與腫瘤分期和預(yù)后的關(guān)系

趙麗霞，任成波，翟明慧，鮑 昕，劉 博，趙峻峰

(河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院，河北 張家口 075000)

肺癌起源于支氣管黏膜及腺體[1]，早期表現(xiàn)不明顯，臨床診斷多以中晚期為主，生存率較低[2]。有學(xué)者認為，腫瘤發(fā)展的生理過程與其外周血管的生成有著極大的聯(lián)系，抑制腫瘤血管的生長有利于控制腫瘤的生理活動，以延緩患者疾病發(fā)展[3]。血管生長因子C(vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C)在新生淋巴管的形成中具有重要推動作用，而淋巴轉(zhuǎn)移是腫瘤患者惡化的標(biāo)志之一[4]。腫瘤轉(zhuǎn)移的生理過程有多種基因參與，近年來發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(tumor metastasis-associated gene 1，MTA1)與腫瘤的發(fā)展有關(guān)[5]，但與肺癌關(guān)系尚不明確。本研究檢測非小細胞肺癌(non-small cell carcinoma, NSCLC)患者癌組織/癌旁組織VEGF-C、MTA1表達水平，分析與NSCLC患者腫瘤分期及預(yù)后的關(guān)系，為臨床診治提供新方向。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年8月至2020年11月我院108例NSCLC患者癌組織及癌旁組織標(biāo)本，納入標(biāo)準(zhǔn)：臨床已確診為NSCLC；我院病理科留存標(biāo)本。排除標(biāo)準(zhǔn)：病理及臨床資料不全者；存在多種腫瘤者；患有全身感染性或免疫性障礙者。男81例，女27例，年齡(65.97±7.86)歲。

1.2 方法

1.2.1資料收集 通過查閱病歷整理患者臨床資料，包括性別、年齡、病理類型、腫瘤分期、分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及生存隨訪資料等。

1.2.2病理組織處理 手術(shù)中采集的癌組織樣本及距離癌組織2 cm的癌旁組織，依次經(jīng)過石蠟包埋、組織切片(5 μm)，常規(guī)脫蠟處理(二甲苯溶液，5 min)后在常溫下脫苯和水化，蘇木素染色2 min，采用1%鹽酸酒精浸泡(1 min)，清洗后使用伊紅染色處理(3～5 min)，清洗后再次脫水，待染色成功后行蓋玻片封層固定，光鏡下觀察。

1.2.3VEGF-C與MTA1表達水平檢測 VEGF-C與MTA1多克隆抗體均購自艾美捷科技有限公司。取制備的石蠟切片經(jīng)抗原修復(fù)后滴入一抗，4 ℃條件過夜培育，清洗后慢滴二抗，37 ℃條件培育30 min，二次復(fù)染脫水后行蓋玻片封層固定，在光鏡下觀察。陰性對照一抗試劑采用磷酸鹽緩沖液。

1.3 結(jié)果判定VEGF-C、MTA1表達參照Axiotis病理評分標(biāo)準(zhǔn)[6]，以染色強度和對應(yīng)的陽性細胞數(shù)量進行評估。染色強度(無染色～黃褐色)計為0～3分。陽性率=陽性表達細胞數(shù)/視野總細胞數(shù)×100%，0分為無表達；1分為<25%；2分為25%～50%；3分為>50%。評估標(biāo)準(zhǔn)為染色強度評分與陽性率評分的乘積，0分為陰性，反之均為陽性。最終結(jié)果由我院2名資深檢驗技師同時進行判讀，在有歧義時邀請另一名資深技師參與結(jié)果的判斷。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 21.0軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析；預(yù)后生存分析采用Kaplan-Meier分析法，行Log-rankχ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 VEGF-C與MTA1陽性表達情況比較NSCLC患者癌組織中VEGF-C及MTA1陽性表達率均高于癌旁組織(P<0.05)。見表1。

表1 VEGF-C與MTA1陽性表達情況 [n(%)]

2.2 不同臨床特征NSCLC患者癌組織中VEGF-C與MTA1陽性表達情況比較MTA1與VEGF-C在腫瘤III～IV期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中陽性表達率較高(P<0.05)。見表2。

表2 不同臨床特征NSCLC癌組織中VEGF-C與MTA1蛋白陽性表達情況 [n(%)]

2.3 NSCLC患者癌組織中VEGF-C與MTA1表達相關(guān)性癌組織VEGF-C表達量為(1.14±0.13)，MTA1表達量為(0.67±0.12)，二者呈正相關(guān)(r=0.472，P<0.05)。

2.4 不同VEGF-C與MTA1表達水平患者生存分析108例NSCLC患者按VEGF-C及MTA1表達情況分為陽性組和陰性組。VEGF-C陽性組1年總生存率為46.88%，低于陰性組的68.18%(HR=1.895，95%CI：1.049～3.423，P<0.05)，無進展生存率為35.94%，低于陰性組的56.82%(HR=1.834，95%CI：1.076～3.127，P<0.05)；MTA1陽性組1年總生存率為48.21%，低于陰性組的62.00%(HR=1.830，95%CI：1.013～3.307，P<0.05)，無進展生存率為32.14%，低于陰性組的52.00%(HR=1.971，95%CI：1.161～3.346，P<0.05)。見圖1～4。

圖1 VEGF-C表達相關(guān)生存曲線 圖2 MTA1表達相關(guān)生存曲線

圖3 VEGF-C表達相關(guān)無進展生存曲線 圖4 MTA1表達相關(guān)無進展生存曲線

3 討論

肺癌早期無明顯特征，因而臨床診療多見中晚期，早期確診率較低，而肺癌與其他腫瘤治療原則一致，早期干預(yù)是改善其預(yù)后的最佳手段。中晚期患者因其身體機能的影響不能適應(yīng)根治手術(shù)，多以維持性放化療為主，預(yù)后較差。腫瘤發(fā)展與其細胞轉(zhuǎn)移、侵襲有關(guān)[7]。如何控制腫瘤的轉(zhuǎn)移和侵襲，以改善患者預(yù)后是臨床常考慮的重點課題。臨床常以患者的腫瘤分期進行治療，但傳統(tǒng)的組織學(xué)病理檢測在預(yù)測患者的發(fā)展和惡化中仍存在缺陷。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，在腫瘤的發(fā)展生理過程中發(fā)現(xiàn)了一些具有標(biāo)志性的蛋白因子，如癌胚抗原、纖維蛋白原等，對癌組織的檢測具有較高的敏感性，對預(yù)判腫瘤的惡性發(fā)展具有一定的價值，但其特異性較低，仍有誤診現(xiàn)象出現(xiàn)[8]。因而尋找其他具有高敏感度及特異度的標(biāo)志物對NSCLC患者臨床診療具有重要意義。

VEGF在腫瘤細胞生長、增殖和發(fā)展中具有重要的地位，VEGF-C是其家族一員，被稱為淋巴管生長因子，有推動癌組織新生淋巴管的形成、促進癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的作用[9]。血管內(nèi)皮生長因子受體(VEGFR)-2和VEGFR-3與VEGF-C同屬一個家族，有著促進內(nèi)皮細胞增生和遷移的作用，VEGF-C以細胞旁腺分泌的方式形成生成可激活VEGFR-2、VEGFR-3，為淋巴管內(nèi)皮細胞的生長提供能量支持，新生淋巴管可為腫瘤生長提供營養(yǎng)，增強其生物性質(zhì)，促進及其惡性發(fā)展，既往研究顯示[10，11]，VEGF-C在腫瘤細胞中均勻分布，在多種腫瘤組織中呈高陽性表達，參與癌細胞淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。本研究顯示，VEGF-C在NSCLC腫瘤組織中呈陽性表達，說明VEGF-C可能參與NSCLC惡性發(fā)展。

MTA1是腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因位點，在腫瘤細胞中呈陽性表達[12]。MTA1是Mi-2-核小體重構(gòu)脫乙酰復(fù)合物的重要組成部分，既往研究顯示[13]，MTA1對微小RNA-125a-3p(miR-125)具有調(diào)控作用。而miR-125a-3p與NSCLS的發(fā)展有著密切關(guān)系，在NSCLS中表達水平下調(diào)[14]，MTA1可能對miR-125表達有調(diào)控作用，對腫瘤細胞的生理過程產(chǎn)生影響。本研究顯示，MTA1在NSCLC癌組織中均具有陽性表達，提示MTA1可能在NSCLS癌組織中具有特異性表達，其水平變化可用于NSCLC的診斷。

對其不同病理特征進行分析，發(fā)現(xiàn)MTA1與VEGF-C在腫瘤III～IV分期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中陽性表達率較高，與顧磊等[15，16]研究部分相似，可能與腫瘤進展有關(guān)。研究顯示，VEGF-C與MTA1陽性表達水平呈正相關(guān)，提示VEGF-C與MTA1在腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的生理過程中可能存在協(xié)同關(guān)系，MTA1可能對腫瘤細胞血管及淋巴結(jié)的形成有影響，劉建平等[17]研究提出MTA1可能通過黏附缺氧誘導(dǎo)因子影響VEGF-C分泌，但影響VEGF-C分泌的機制過于復(fù)雜，后期仍需行動物試驗或體外細胞試驗進一步探討。研究顯示，存在VEGF-C與MTA1陽性組NSCLC患者的預(yù)后較差，可能與腫瘤惡性發(fā)展有關(guān)，VEGF-C與MTA1對腫瘤的發(fā)展可能具有推動作用，楊昕等[18]研究指出，MTA1對NSCLC患者預(yù)后有不良影響。李璟波等[19]研究中也提到VEGF-C與肺癌患者的預(yù)后存在密切聯(lián)系。結(jié)合本研究結(jié)論，提示臨床可能可通過抑制VEGF-C與MTA1來延緩NSCLC患者的惡性發(fā)展，以改善患者預(yù)后，延長其生命周期。

綜上所述，VEGF-C與MTA1在NSCLC癌組織中呈陽性表達，兩者在腫瘤血管和淋巴結(jié)生成中可能存在協(xié)同作用，共同促進著腫瘤細胞的惡性發(fā)展，其陽性水平表達與患者預(yù)后有關(guān)。