社區(qū)老年人DDAH2基因多態(tài)性與高血壓的相關(guān)性研究

隋靜，高玉敏,3，趙美清，王靖宇，王志香，劉琦，程佳穎，周旭穎，劉東洋，王昱锜

隨著我國社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展，以高血壓為代表的慢性病逐漸成為威脅居民健康的重大衛(wèi)生問題[1]。調(diào)查顯示，高血壓患病率隨年齡增加而升高[2]，一旦確診，常需終身治療以控制疾病進(jìn)展。在未來的健康領(lǐng)域，高血壓仍是需防治的重點公共衛(wèi)生問題之一。目前臨床關(guān)于高血壓的發(fā)病機(jī)制尚未得到一致認(rèn)可，但普遍認(rèn)為該病與環(huán)境、遺傳等因素關(guān)系密切[3]。因此，探索老年人罹患高血壓的遺傳因素，為疾病提供最早的基因預(yù)警，并根據(jù)基因報告進(jìn)行個體化的早期預(yù)防具有重要意義[4]。

二甲基精氨酸二甲胺水解酶2（DDAH2）是一種具有降解非對稱二甲基精氨酸（ADMA）作用的關(guān)鍵酶，由于DDAH2的活性受DDAH2基因多態(tài)性的影響，因而該基因多態(tài)性可間接影響血漿中ADMA的表達(dá)水平[5]，進(jìn)而影響高血壓的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)[6]，DDAH2基因rs805305、rs2272592兩個位點可能與高血壓的患病相關(guān)，但因種族、地域、環(huán)境等因素的不同，其影響程度也不同，本研究旨在探索該基因這兩個位點與本地區(qū)老年人群高血壓的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 研究對象采用便利抽樣的方法，選取2019～2020年于包頭市包鋼社區(qū)進(jìn)行體檢的65歲以上老年人為研究對象。病例組為高血壓患者，對照組為健康人群，每組各282例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡≥65歲；②患者及家屬均簽署知情同意書；③符合《中國高血壓防治指南（2018年修訂版）》血壓診斷及分級標(biāo)準(zhǔn)。舒張壓≥90 mmHg （1 mmHg=0.133 kPa）和/或收縮壓≥140 mmHg；或體檢前1個月仍進(jìn)行抗高血壓治療，服用降壓藥物者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嗜鉻細(xì)胞瘤等腫瘤患者；②已被診斷的Ⅰ/Ⅱ型糖尿病患者；③繼發(fā)高血壓患者；④正在服用激素類藥物的患者。

1.2 方法

1.2.1 指標(biāo)定義吸煙史：“吸煙史”定義為連續(xù)吸煙1年以上（≥1支/d）及已戒煙。飲酒史： “飲酒史”定義為飲酒持續(xù)1年以上（≥2/周）及已戒酒。是否進(jìn)行體育鍛煉[7]：“是”定義為包含以下三種情況任意一種。① “每天進(jìn)行體育鍛煉”（每次≥30 min）；② “經(jīng)常進(jìn)行體育鍛煉” （每周≥3次，每次≥30 min）；③“偶爾進(jìn)行體育鍛煉”（每周1～2次，每次≥30 min）。鍛煉為散步、跑步等有意識的活動。

1.2.2 流行病學(xué)調(diào)查制定統(tǒng)一的調(diào)查表，收集人口信息資料。睡眠質(zhì)量篩查使用匹茨堡睡眠質(zhì)量指數(shù)量表（PSQI），累計7個成分得分為PSQI總分，總分越高表示睡眠質(zhì)量越差[8,9]，該量表具有較高的信度和效度[10]。

1.2.3 血樣采集及基因型檢測抽取研究對象的空腹靜脈血，分別置于5 ml EDTA抗凝管和5 ml惰性分離膠促凝劑采血管中。促凝采血管離心后取血清，用于檢測血清生化指標(biāo)，包括空腹血糖、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）?？鼓苤腥褂媚蛩嵩嚰埥?jīng)比色法測定血尿酸。抗凝管離心后分別將血漿與血細(xì)胞分裝并在-80℃凍存，其中血細(xì)胞使用血基因組DNA提取試劑盒提取血基因組DNA，通過多重高溫連接酶檢測反應(yīng)技術(shù)（iMLDR）檢測rs805305、rs2272592位點多態(tài)性并將基因型分類。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)應(yīng)用Epidata 3.1軟件錄入數(shù)據(jù)庫，采用IBMSPSS 25.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，以擬合優(yōu)度χ2檢驗分析基因型的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。服從正態(tài)分布的定量資料使用（±s）表示，不服從正態(tài)分布的定量資料使用M（P25，P75）表示，定性資料使用例數(shù)（百分?jǐn)?shù)）表示，用配對數(shù)據(jù)的t檢驗、秩和檢驗（定量資料）或χ2檢驗（定性資料）統(tǒng)計病例組與對照組之間的一般信息及基因型分布的差異；采用多因素條件Logistic回歸分析計算比值比（OR）及其相應(yīng)的95%可信區(qū)間（CI）；使用SNPstats在線軟件分析5種遺傳模型與高血壓的關(guān)聯(lián)；多因素條件Logistic回歸分析用于研究基因與環(huán)境的交互作用。

2 結(jié)果

2.1 一般人口學(xué)特征本研究納入病例組與對照組，每組各282例，其中男性99對，女性183對，病例平均年齡74.0（69.0，80.0）歲；對照平均年齡74.0（70.0，79.0）歲，兩組性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。兩組間生化指標(biāo)及行為生活方式比較結(jié)果發(fā)現(xiàn)，尿酸水平等因素比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；而空腹血糖、體質(zhì)指數(shù)（BMI）等因素比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表1。

表1 病例組與對照組一般人口學(xué)特征比較[M（P25，P75），（n，%）]

2.2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗rs2272592、rs805305位點基因多態(tài)性χ2檢驗提示，兩個位點基因型分布比較均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律（P＞0.05），表2。

表2 兩組人群DDAH2基因rs2272592、rs805305位點Hardy-Weinberg遺傳平衡比較

2.3 遺傳模型分析通過SNPstats在線軟件進(jìn)行遺傳模型分析，并選取最優(yōu)模型[11]，判斷在rs2272592位點中的超顯性遺傳模型為較優(yōu)遺傳模型，rs805305位點的顯性遺傳模型為較優(yōu)遺傳模型，表3～4。

表3 rs2272592位點在病例組和對照組中不同遺傳模式的比較（n，%）

表4 rs805305位點在病例組和對照組中不同遺傳模式的比較（n，%）

2.4 DDAH2基因多態(tài)性與高血壓關(guān)系的多因素條件Logistic回歸分析以是否患有高血壓為應(yīng)變量，經(jīng)年齡、空腹血糖、TG、HDL-C、BMI調(diào)整后，僅發(fā)現(xiàn)rs2272592位點超顯性遺傳模型（G/G+A/A=0，G/A=1）與高血壓有統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)（P＜0.05），表5。

表5 DDAH2基因多態(tài)性與高血壓關(guān)系的多因素條件Logistic回歸

2.5 基因-環(huán)境交互作用分析本研究中環(huán)境因素主要包括吸煙史、飲酒史、是否進(jìn)行體育鍛煉及睡眠總分，將四種環(huán)境因素分別與rs2272592位點超顯性遺傳模型進(jìn)行相乘，將乘積項帶入Logistic回歸中，經(jīng)單因素條件Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)，rs2272592位點超顯性遺傳模型*睡眠總分與高血壓有統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)；經(jīng)年齡、rs2272592位點超顯性遺傳模型、吸煙史、飲酒史、是否進(jìn)行體育鍛煉、睡眠總分調(diào)整后，rs2272592位點超顯性遺傳模型*睡眠總分與高血壓的統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)消失，表6。

表6 多因素條件Logistic回歸分析基因-環(huán)境因素間相乘模型交互作用的結(jié)果

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)兩組人群在BMI、空腹血糖等因素間存在差異，多因素分析結(jié)果提示，空腹血糖、BMI是高血壓發(fā)生的危險因素，HDL-C是高血壓發(fā)生的保護(hù)因素。這與既往研究結(jié)論一致，可能是由于過量的脂肪組織可通過分泌脂聯(lián)素等脂肪因子紊亂機(jī)體的代謝，損傷內(nèi)皮細(xì)胞功能引發(fā)高血壓[12,13]；持續(xù)的高血糖水平會引發(fā)機(jī)體胰島素抵抗反應(yīng)，進(jìn)而引起機(jī)體血壓升高[14,15]；而HDL-C可清除血液和細(xì)胞中過多的膽固醇和LDL-C，從而降低高血壓發(fā)生的可能[16]。

既往研究表明，ADMA作為內(nèi)源性一氧化氮合成酶（NOS）抑制劑存在于人的血漿和尿液中，能夠競爭性抑制NOS，導(dǎo)致NOS活性降低，使得一氧化氮（NO）生成減少，生物利用度降低。NO作為氣體信號分子能夠影響血管舒張效應(yīng)，在原發(fā)性高血壓發(fā)生及進(jìn)展過程中扮演了重要角色[17]。DDAH2是降解ADMA的關(guān)鍵酶，但其活性受DDAH2基因多態(tài)性的影響，有研究表明，DDAH2基因多態(tài)性可能使得機(jī)體內(nèi)ADMA積聚，進(jìn)而影響血管內(nèi)皮舒張功能[5]，可能影響高血壓的發(fā)生。

國外有研究者發(fā)現(xiàn)，高加索人群中DDAH2基因rs805305位點多態(tài)性與高血壓相關(guān)，且rs805305G等位基因與高血壓患病相關(guān)[18]。本研究并未發(fā)現(xiàn)，rs805305位點基因多態(tài)性與高血壓的發(fā)生有關(guān)，其原因可能與研究人群存在遺傳異質(zhì)性、樣本含量等因素有關(guān)。既往有研究證實，DDAH2基因rs2272592位點GA+GG基因型與2型糖尿病顯著相關(guān)，暫未發(fā)現(xiàn) rs2272592位點多態(tài)性與高血壓存在關(guān)聯(lián)[19,20]。本研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)整混雜因素后，rs2272592位點攜帶G/A基因型可能增加高血壓的患病風(fēng)險。

近年來研究表明，高血壓是遺傳、環(huán)境因素共同作用的結(jié)果[3]。本研究發(fā)現(xiàn)， rs2272592位點超顯性遺傳模型與睡眠總分間存在相乘的交互作用，但調(diào)整其他環(huán)境因素后，該交互項的統(tǒng)計學(xué)意義消失，即rs2272592位點超顯性遺傳模型與睡眠總分的聯(lián)合作用可能與高血壓易感性無關(guān)。目前對于DDAH2基因多態(tài)性與高血壓關(guān)系的研究較少，暫未發(fā)現(xiàn)其他研究探索DDAH2基因多態(tài)性與環(huán)境因素的交互作用對高血壓的影響，無法將本研究結(jié)論與其比較，但既往有研究認(rèn)為睡眠時間過長或過短及睡眠質(zhì)量差可能與高血壓的患病有關(guān)[21]。因此，提示后續(xù)研究中，應(yīng)擴(kuò)大樣本數(shù)量，進(jìn)一步探索兩位點基因多態(tài)性及基因-環(huán)境交互作用與高血壓的關(guān)系。

本研究是在內(nèi)蒙古包頭地區(qū)首次探索DDAH2基因多態(tài)性與高血壓病的遺傳易感性關(guān)系，使用1:1配對病例對照研究，可控制混雜因素，提高兩組的可比性，結(jié)果可靠。但本研究也存在局限性，采用便利抽樣的方法，獲得的研究對象代表性較弱，可在之后的研究中與多中心合作，擴(kuò)大樣本數(shù)量，以期得到更可靠的結(jié)論，為老年高血壓的防控提供參考依據(jù)。