急性冠脈綜合征患者術(shù)后血清TP53、miR-222-3p與預(yù)后的關(guān)系

李耀征，白保強，孫亞勤，張海柱

急性冠脈綜合征（ACS）是國際公認的急性 心血管疾病，死亡率高。經(jīng)皮冠狀動脈介入治療（PCI）是高效治療冠狀動脈（冠脈）血管閉塞的手段，能快速改善心肌缺血缺氧狀態(tài)，臨床效果較好，但術(shù)后部分患者可發(fā)生主要不良心血管事件（MACE）[1]。早期預(yù)估患者預(yù)后情況，可盡早調(diào)整治療方案，改善預(yù)后。急性冠脈綜合征的病理基礎(chǔ)主要與動脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊破裂有關(guān)，動脈粥樣硬化主要由血管內(nèi)皮損傷及血管內(nèi)膜增厚引起。微小RNA（miRNA）在心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要角色[2]。近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)miRNA與急性冠脈綜合征預(yù)后有關(guān)[3]。微小RNA-222-3p（miR-222-3p）是許多病理過程關(guān)鍵的調(diào)控因子。Han等[4]研究顯示，miR-222-3p高表達可抑制血管內(nèi)皮增殖，并促進血管平滑肌細胞增殖[5]。腫瘤蛋白P53（TP53）是與人類腫瘤相關(guān)性最高的抑癌基因。近年來Tan等通過體外實驗發(fā)現(xiàn)小鼠胚胎干細胞體外分化為平滑肌細胞過程中，TP53表達增加。目前TP53和miR-222-3p與PCI術(shù)后急性冠脈綜合征患者預(yù)后的關(guān)系鮮有文獻報道?；诖耍狙芯刻接慣P53和miR-222-3p對急性冠脈綜合征患者PCI術(shù)后MACE預(yù)測價值，以期為臨床早期預(yù)估患者PCI術(shù)后MACE情況提供幫助。

1 材料與方法

1.1 研究對象選取2018年1月至2020年1月于駐馬店市中心醫(yī)院行PCI的急性冠脈綜合征患者96例為研究對象，其中男性56例，女性40例，年齡33～79歲，平均年齡為（55.94±11.67）歲。納入標(biāo)準：①符合急性冠脈綜合征的診斷標(biāo)準[6]；②均為首次接受PCI；③術(shù)后接受抗血小板藥物治療；④病例資料完整。排除標(biāo)準：①合并非阻塞性冠脈疾??；②合并自身免疫性疾??；③合并嚴重肝腎功能障礙、惡性腫瘤；④合并感染性疾?。虎莺喜⑿募⊙?、心臟瓣膜病。本研究受試者知情同意，經(jīng)本院倫理委員會批準同意。

1.2 臨床資料收集收集所有患者高血壓史、糖尿病史、吸煙史、他汀類藥物服用史、糖化血紅蛋白水平、肌鈣蛋白Ⅰ（cTnI）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）及術(shù)前病變支數(shù)。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集采集患者PCI術(shù)后12 h空腹靜脈血4～5 ml，離心（4000 r/min，5 min），取上清液裝于無RNA酶的EP管中，凍存-80 ℃冰箱中待測。

1.3.2 PCR法檢測血清中mR-222-3p的水平RNA提取試劑盒（美國GeneCopoeia公司）提取血清中總RNA，依據(jù)反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Primescript RT Reagent Kit，日本TaKaRa公司）操作步驟將RNA反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA。采用SYBR Premix Ex Taq Ⅱ熒光定量試劑盒[寶生物工程(大連)有限公司]，制備反應(yīng)體系。采用CFX96實時熒光定量PCR儀（德國Bio-Rad公司）對miR-222-3p及內(nèi)參U6進行擴增反應(yīng)。miR-222-3p、U6引物由上海生工合成。反應(yīng)條件：95 ℃，3 min；95 ℃，30 s；60 ℃，30 s； 72 ℃，30 s；38個循環(huán)。對miR-222-3p相對表達量用2-△△CT法計算。引物由上海生工合成（表1）。

表1 qRT-PCR引物序列

1.3.3 檢測血清中TP53水平采用雙抗夾心法測定血清TP53水平，按照試劑盒采用TP53定量檢測試劑盒（北京百奧萊博科技有限公司）操作步驟進行測定。

1.4 隨訪對PCI術(shù)后ACS患者隨訪12個月，統(tǒng)計患者12個月內(nèi)發(fā)生MACE情況，將患者分為MACE組（22例）和非MACE組（74例）。本研究中MACE定義為再次心肌梗死、嚴重心律失常、心力衰竭、支架內(nèi)再狹窄、血運重建、腦卒中[7]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析采用軟件SPSS 25.0對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料用（n，%）表示，采用χ2檢驗。計量資料符合正態(tài)分布，以平均值±標(biāo)準差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；血清TP53、miR-222-3p水平預(yù)測急性冠脈綜合征患者PCI術(shù)后MACE的價值采用受試者工作特征（ROC）曲線評價。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者一般資料比較MACE組和非MACE組性別、年齡、高血壓、糖尿病、吸煙史、他汀服用史、病變支數(shù)、糖化血紅蛋白差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與非MACE組相比，MACE組cTnI、CK-MB較高（P＜0.05），表2。

表2 兩組患者一般資料比較（n，%）

2.2 MACE組和非MACE組血清TP53、miR-222-3p水平與非MACE組相比，MACE組血清miR-222-3p水平、TP53水平較高（P＜0.05），表3。

表3 MACE組和非MACE組血清中TP53、miR-222-3p水平比較

2.3 血清TP53、miR-222-3p對急性冠脈綜合征MACE的預(yù)測價值ROC曲線顯示，血清中miR-222-3p水平預(yù)測ACS患者PCI術(shù)后MACE的曲線下面積（AUC）為0.869（95%CI：0.780～0.958），截斷值為1.36，其敏感度、特異性分別為81.50%、86.50%；血清中TP53水平預(yù)測ACS患者PCI術(shù)后MACE的AUC為0.787（95%CI：0.674～0.900），截斷值為0.93 U/ml，其敏感度、特異性分別為70.40%、91.90%；兩者聯(lián)合預(yù)測急性冠脈綜合征患者PCI術(shù)后MACE預(yù)后的AUC為0.926（95%CI：0.866～0.986），其敏感度、特異性分別為92.60%、83.80%，圖1。

圖1 血清TP53、miR-222-3p診斷急性冠脈綜合MACE的ROC曲線

2.4 急性冠脈綜合征患者血清TP53、miR-222-3p水平與MACE關(guān)系按照miR-222-3p截斷值將術(shù)后患者分為miR-222-3p高水平組（50例）和miR-222-3p低水平組（46例）。隨訪發(fā)現(xiàn)，miR-222-3p高水平組MACE發(fā)生率為36.00%；miR-222-3p低水平組MACE發(fā)生率為8.70%。miR-222-3p高水平組MACE發(fā)生率明顯高于miR-222-3p低水平組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。按照TP53截斷值將術(shù)后患者分為TP53高水平組（52例）和TP53低水平組（44例）。隨訪發(fā)現(xiàn)，TP53高水平組MACE發(fā)生率為32.69%；TP53低水平組MACE發(fā)生率為11.36%。TP53高水平組MACE發(fā)生率明顯高于TP53低水平組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

miRNA在組織和細胞中具有高度特異性，miRNA的特異性表示其具有作為疾病生物標(biāo)記物的潛力，但miRNA的異常表達可能導(dǎo)致一些心血管疾病的發(fā)生[8]。血管平滑肌細胞在病理狀態(tài)下可移入內(nèi)膜中，血管內(nèi)膜增厚，導(dǎo)致動脈硬化[9]。多項研究表明，miRNA可調(diào)節(jié)內(nèi)皮功能障礙、血管內(nèi)膜增厚等過程[10]。

miR-222-3p是miRNA家族中重要的一員。有研究報道m(xù)iR-222-3p過表達可促進血管平滑肌細胞增殖和遷移，導(dǎo)致血管內(nèi)膜增厚，抑制其表達可降低血管內(nèi)膜厚度[11]。內(nèi)皮祖細胞在修復(fù)血管內(nèi)皮損傷方面起著至關(guān)重要的作用。Gao等[12]研究發(fā)現(xiàn)miR-222-3p過表達抑制內(nèi)皮祖細胞遷移、侵襲和募集，且該過程是通過miR-222-3p靶向負調(diào)控誘導(dǎo)AMKP激活的ADIPOR1基因?qū)崿F(xiàn)的。本研究發(fā)現(xiàn)MACE組血清miR-222-3p水平明顯高于非MACE組，提示miR-222-3p可能參與ACS患者PCI術(shù)后MACE的發(fā)生。本研究進一步發(fā)現(xiàn)miR-222-3p高水平組MACE發(fā)生率明顯高于miR-222-3p低水平組，猜測miR-222-3p高表達可能促進血管平滑肌細胞增殖和遷移，導(dǎo)致患者PCI術(shù)后血管內(nèi)膜增厚，從而發(fā)生MACE。

TP53位于染色體17q13上，編碼TP53蛋白質(zhì)。TP53可誘導(dǎo)細胞生長停滯、細胞凋亡和細胞分化[13]。Tan等[5]研究發(fā)現(xiàn)使用類維生素A酸（RA）誘導(dǎo)平滑肌細胞分化過程中，TP53表達增加，進一步研究證實，TP53通過直接與心肌素啟動子結(jié)合并調(diào)節(jié)心肌素表達參與平滑肌細胞分化。另有研究報道[14]，TP53在動脈粥樣硬化組織中增加，并充當(dāng)血管細胞凋亡的介體，TP53基因可通過抑制細胞凋亡誘發(fā)TP53功能障礙，并在動脈粥樣硬化的發(fā)病機理中發(fā)揮作用。本研究發(fā)現(xiàn)MACE組血清TP53水平明顯高于非MACE組，提示血清TP53可能對ACS患者PCI術(shù)后MACE發(fā)生有影響。本研究進一步發(fā)現(xiàn)TP53高水平組MACE發(fā)生率明顯高于TP53低水平組，推測TP53可能通過影響PCI術(shù)后患者機體血管平滑肌細胞增殖而影響MACE發(fā)生。此外，TP53和miR-222-3p聯(lián)合預(yù)測ACS患者PCI術(shù)后MACE預(yù)后的AUC為0.926，其敏感度、特異性分別為92.60%、83.80%，二者聯(lián)合診斷價值高于二者單獨的診斷價值，提示TP53和miR-222-3p聯(lián)合在臨床上預(yù)估ACS患者PCI術(shù)后MACE有較好的價值。

綜上所述，急性冠脈綜合征患者PCI術(shù)后MACE患者血清TP53、miR-222-3p呈高表達，二者聯(lián)合檢測對ACS患者PCI術(shù)后MACE評估有更好的預(yù)估價值，本研究為臨床上開發(fā)預(yù)估ACS患者PCI術(shù)后MACE的生物學(xué)指標(biāo)奠定理論基礎(chǔ)，但TP53、miR-222-3p對MACE的具體作用機制在本研究中尚未探究，后續(xù)需進一步探索。