• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫(AlfalfaGEDB)的應(yīng)用研究
    ——以MsHB7 和MsPALM1 為例

    2022-07-17 13:19:20蔣曉可劉長寧
    熱帶農(nóng)業(yè)科技 2022年3期
    關(guān)鍵詞:等位基因靶點基因組

    蔣曉可,劉長寧

    (1.中國科學(xué)院西雙版納熱帶植物園,云南 勐臘 666303;2.中國科學(xué)院大學(xué),北京 100049)

    紫花苜蓿(Medicago sativaL.)因其高產(chǎn)潛力、廣泛的適應(yīng)性和優(yōu)良的營養(yǎng)特性被譽(yù)為“牧草之王”,是世界上分布最廣、栽培歷史最悠久的飼草之一。近年來,隨著畜牧業(yè)的迅速發(fā)展,紫花苜蓿的需求增加,對紫花苜蓿的研究應(yīng)用愈加廣泛[1]。2020 年,四倍體紫花苜蓿兩個品種(新疆大葉和中苜一號)的參考基因組公布[2-3],完成了染色體水平的基因組組裝,極大推進(jìn)了紫花苜?;蚬δ艿难芯亢推贩N改良的發(fā)展。

    基因編輯是一種利用序列特異性核酸酶(sequence-specific nucleases,SSNs)在序列特定位點引起堿基突變的技術(shù)。CRISPR/Cas9 因其操作簡單、實用高效而成為目前應(yīng)用最為廣泛的基因編輯技術(shù),已被廣泛用于水稻、高粱、小麥、玉米、大豆、番茄、馬鈴薯的作物改良[4-6]。

    基于以上背景,我們利用Django Web 框架,結(jié)合SQLite 數(shù)據(jù)庫,構(gòu)建了紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫(Alfalfa Gene Editing Database,AlfalfaGEDB),提供基因基本信息瀏覽、BLAST 序列比對、JBrowse基因組瀏覽器、多條件查詢、sgRNA 靶點設(shè)計、在線Heatmap 繪制、生物復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)繪制、基因家族預(yù)測和數(shù)據(jù)下載等功能。AlfalfaGEDB 及其相關(guān)工具為研究人員提供了一個實用性強(qiáng)、操作簡便的平臺,用以檢索紫花苜?;虻南嚓P(guān)信息,幫助研究人員更好的開展研究。本研究以MsHB7和Ms-PALM1基因為例,對AlfalfaGEDB 的功能進(jìn)行展示,旨在證明AlfalfaGEDB 的實用性和數(shù)據(jù)庫結(jié)果的可靠性。

    1 材料和方法

    1.1 AlfalfaGEDB 的數(shù)據(jù)處理

    通過文獻(xiàn)檢索,對四倍體紫花苜蓿兩個品種(新疆大葉、中苜一號)的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行全面收集,將四倍體紫花苜蓿的蛋白序列比對至多個基因功能公共數(shù)據(jù)庫,獲得了KEGG、GO、Pfam 等多種注釋信息;基于NCBI SRA 數(shù)據(jù)庫、EBI 和國家基因庫生命大數(shù)據(jù)平臺(CNGBdb)等公共數(shù)據(jù)庫,收集分析了212 份紫花苜蓿轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),涵蓋紫花苜蓿不同組織、不同環(huán)境脅迫等多種樣本;利用CRISPR-GE[7]和CRISPR-Local[8]靶點預(yù)測工具,對紫花苜蓿兩個品種分別進(jìn)行了sgRNA 預(yù)測,獲得4 套全基因組靶點預(yù)測數(shù)據(jù),基因組覆蓋率達(dá)99%以上。

    1.2 AlfalfaGEDB 的實現(xiàn)

    基于紫花苜蓿多組學(xué)數(shù)據(jù)的挖掘和整理,利用Django Web 框架,結(jié)合SQLite 數(shù)據(jù)庫,構(gòu)建了紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫(Alfalfa Gene Editing Database,AlfalfaGEDB),訪問網(wǎng)址為:http://alfalfagedb.liu-lab.com/。AlfalfaGEDB 收錄了紫花苜蓿兩個品種基因組信息、多樣本的基因表達(dá)譜、全基因組sgRNA 靶點預(yù)測等信息,提供基因組信息在線瀏覽,轉(zhuǎn)錄組表達(dá)量可視化以及sgRNA 靶位點預(yù)測數(shù)據(jù)在線瀏覽等功能模塊。此外,數(shù)據(jù)庫也集成了在線BLAST、熱圖繪制,生物復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)查詢、基于CRISPR/Cas9 的sgRNA 靶位點設(shè)計等工具。

    1.3 AlfalfaGEDB 的應(yīng)用

    以紫花苜蓿、CRISPR 等作為關(guān)鍵字進(jìn)行文獻(xiàn)搜集,選擇經(jīng)過實驗驗證的功能基因MsHB7和MsPALM1作為主要查詢對象。通過AlfalfaGEDB的BLAST 序列比對工具,對基因進(jìn)行驗證,得到該基因在AlfalfaGEDB 中對應(yīng)的基因名,實現(xiàn)基因ID 的轉(zhuǎn)化。Browse 功能用于查詢基因的基本信息;利用JBrowse 基因組瀏覽器進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)的可視化;在線Heatmap 繪制工具展示基因在不同組織和脅迫條件下的表達(dá)信息;多條件查詢用于查詢基因所在網(wǎng)絡(luò)的信息;Network 工具繪制基因所在的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)和蛋白互作網(wǎng)絡(luò);基因家族預(yù)測結(jié)果確定該基因所在的轉(zhuǎn)錄因子家族;sgRNA 靶點設(shè)計提示了該基因預(yù)測到的所有可能的靶點信息。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 MsHB7 基因在AlfalfaGEDB 中的應(yīng) 用

    已有研究表明,MsHB7作為HD-Zip 轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員,其過表達(dá)對紫花苜蓿鹽脅迫耐受性具有負(fù)調(diào)節(jié)作用[9]。此外,還有一些植物物種中的HD-Zip 成員在非生物脅迫反應(yīng)中發(fā)揮作用。JcHDZ07基因是小桐子(Jatropha curcasL.)中HD-Zip 家族的成員,它在擬南芥中的過表達(dá)使轉(zhuǎn)基因品系對鹽脅迫更加敏感[10]。玉米(Zea maysL.)中ZmHDZ1的過表達(dá)使轉(zhuǎn)基因水稻鹽敏感性增強(qiáng)[11];棉花(Gossypium hirsutumL.)GhHB12基因過表達(dá)也對擬南芥和棉花的鹽脅迫和耐旱性產(chǎn)生了負(fù)調(diào)控作用[12]。鹽堿脅迫是重要的植物非生物脅迫因子,土壤鹽堿化也是世界范圍內(nèi)備受關(guān)注的生態(tài)問題,紫花苜蓿作為優(yōu)質(zhì)的牧草品種,選育適宜的耐鹽堿品種將極大促進(jìn)紫花苜蓿的生產(chǎn)和發(fā)展[13]。

    在AlfalfaGEDB 中搜索MsHB7(MsG0380016624.01)基因,可以得到如下結(jié)果:

    (1)Browse 搜索結(jié)果如圖1 所示,可以得到該基因的染色體位置信息、序列信息、基因注釋信息、sgRNA 靶位點預(yù)測結(jié)果。根據(jù)數(shù)據(jù)庫搜索結(jié)果,該基因在公共數(shù)據(jù)庫中被注釋為HD-Zip 相關(guān)蛋白。

    圖1 MsHB7(MsG0380016624.01)基本信息瀏覽

    (2)BLAST 工具鑒定結(jié)果顯示:紫花苜蓿中苜一號品種中MsHB7(MsG0380016624.01)基因與蒺藜苜蓿中響應(yīng)ABA、鹽脅迫的MtHB12(XP_003602321.2)基因的氨基酸序列相似性高達(dá)98%(圖2A)。

    (3)JBrowse 可視化結(jié)果顯示:MsHB7具有兩個外顯子和兩個CDS 區(qū)域(圖2B)。

    (4)如圖2C 所示,轉(zhuǎn)錄因子基因家族鑒定結(jié)果表明MsHB7基因?qū)儆贖D-Zip 轉(zhuǎn)錄因子家族。

    除基因的詳細(xì)信息,AlfalfaGEDB 提供的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)和蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析工具可幫助研究人員分析和挖掘更多的基因功能。AlfalfaGEDB 網(wǎng)絡(luò)查詢工具顯示:MsHB7與MsG0380016581.01 基因有蛋白互作關(guān)系(圖2D)。共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)查詢結(jié)果表明MsHB7與821 個基因有共表達(dá)關(guān)系,我們對p-value 值前10 的基因進(jìn)行了共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)展示(圖2E)。熱圖聚類(圖2F)顯示,MsHB7及其相關(guān)基因受鹽脅迫誘導(dǎo)變化明顯:與對照組相比(CZM、CXJ),這些基因在鹽處理下(TZM、TXJ)表達(dá)量上升。MsHB7基因sgRNA 靶位點預(yù)測結(jié)果如圖1D所示,利用CRISPR-GE 工具在MsHB7中預(yù)測出54個靶點,CRISPR-Local 工具預(yù)測出36 個靶點,兩個工具預(yù)測到的相同靶點數(shù)為35 個。

    圖2 MsHB7在AlfalfaGEDB中查詢結(jié)果

    2.2 MsPALM1 在 AlfalfaGEDB 中的應(yīng)用

    莖葉比是衡量紫花苜蓿品質(zhì)的重要指標(biāo),與紫花苜蓿的營養(yǎng)價值呈正相關(guān),培育多葉型新品種有助于改善紫花苜蓿莖葉比,從而提高其產(chǎn)量和營養(yǎng)價值。已有研究證明,C2H2 型鋅指轉(zhuǎn)錄因子——PALM1在二倍體蒺藜苜蓿復(fù)葉形成過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用[14-15]。2020 年,研究人員利用紫花苜蓿新疆大葉基因組數(shù)據(jù),以MtPALM1作為查詢,成功在紫花苜蓿中鑒定出4個MsPALM1等位基因:MS.gene059669,MS.gene09654,MS.gene21467 和 MS.gene015309。利用CRISPR/Cas9 技術(shù),對調(diào)控紫花苜蓿小葉數(shù)目的Ms-PALM1等位基因進(jìn)行定點突變,將三出復(fù)葉的紫花苜蓿突變?yōu)? 小葉的類掌狀復(fù)葉,大大加快了紫花苜蓿育種速度。

    為了更直觀地對本數(shù)據(jù)庫sgRNA 靶點設(shè)計工具進(jìn)行驗證,我們以MsPALM1為例,通過BLAST得到MtPALM1在新疆大葉基因組中的4 個等位基因,序列相似性99%以上(圖3A)。轉(zhuǎn)錄因子家族預(yù)測結(jié)果如圖3B 所示,MsPALM1的4 個等位基因?qū)儆贑2H2 轉(zhuǎn)錄因子家族,該結(jié)果進(jìn)一步印證了BLAST 結(jié)果的真實性。Browse 查詢結(jié)果顯示,4 個基因位于5 號染色體組的不同亞染色體上,GO 和Pfam 注釋結(jié)果相同,編碼C2H2 型鋅指蛋白(圖3C)。MsPALM1等位基因的表達(dá)矩陣熱圖顯示,其在敲除palm1 的葉片里明顯高表達(dá)(圖3D)。

    圖3 MtPALM1在AlfalfaGEDB中的查詢結(jié)果

    利用本數(shù)據(jù)庫的多靶點預(yù)測工具,成功預(yù)測到陳海濤等的研究中[16]敲除MsPALM1等位基因所用靶點:5’-GGAGACGAGCACGGTCGCGGCGG-3’(圖4),有力地證明了AlfalfaGEDB 靶點預(yù)測的可用性。

    圖4 MsPALM1等位基因靶點預(yù)測結(jié)果

    3 小結(jié)

    紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫(AlfalfaGEDB)共收集了兩個品種紫花苜蓿的基因組數(shù)據(jù)、212 份紫花苜蓿轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)以及4 套全基因組sgRNA 預(yù)測數(shù)據(jù)。在此基礎(chǔ)上,利用Django Web 框架,結(jié)合多種生物信息學(xué)工具,構(gòu)建了一個相對全面的紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫。本文通過對MsHB7和Ms-PALM1兩個實例進(jìn)行分析,對AlfalfaGEDB 的工具進(jìn)行了全方位的測試與驗證,數(shù)據(jù)庫查詢結(jié)果與已有研究結(jié)果[3,17]的一致性也進(jìn)一步印證了紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫的實用性和可靠性。

    豆科作物紫花苜蓿在改良土壤、水土保持、生物固氮等方面發(fā)揮了重要作用,其應(yīng)用對飼料、作物輪作和土壤肥力至關(guān)重要,是可持續(xù)農(nóng)業(yè)的重要組成部分。作為目前最全面的紫花苜蓿功能基因研究平臺,AlfalfaGEDB 為研究人員提供了友好的Web 服務(wù)和便捷高效的生物信息學(xué)工具,成為紫花苜蓿功能基因研究的重要補(bǔ)充工具,期待其能夠持續(xù)為紫花苜?;蚬δ苎芯亢瓦z傳育種提供有用的資源。

    猜你喜歡
    等位基因靶點基因組
    維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點
    中老年保健(2021年3期)2021-12-03 02:32:25
    牛參考基因組中發(fā)現(xiàn)被忽視基因
    親子鑒定中男性個體Amelogenin基因座異常1例
    智慧健康(2021年17期)2021-07-30 14:38:32
    腫瘤免疫治療發(fā)現(xiàn)新潛在靶點
    WHOHLA命名委員會命名的新等位基因HLA-A*24∶327序列分析及確認(rèn)
    DXS101基因座稀有等位基因的確認(rèn)1例
    心力衰竭的分子重構(gòu)機(jī)制及其潛在的治療靶點
    氯胺酮依賴腦內(nèi)作用靶點的可視化研究
    同位素(2014年2期)2014-04-16 04:57:16
    基因組DNA甲基化及組蛋白甲基化
    遺傳(2014年3期)2014-02-28 20:58:49
    有趣的植物基因組
    成人影院久久| 免费看光身美女| 色网站视频免费| 精品人妻偷拍中文字幕| 日韩精品有码人妻一区| 欧美国产精品一级二级三级| 国内精品宾馆在线| av在线app专区| 欧美激情 高清一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品一国产av| 天堂8中文在线网| 免费观看的影片在线观看| 国产精品久久久久久精品古装| 丝袜喷水一区| 国产有黄有色有爽视频| 精品久久久久久电影网| 久久韩国三级中文字幕| 中文字幕亚洲精品专区| 十八禁网站网址无遮挡| 黄片无遮挡物在线观看| 丰满迷人的少妇在线观看| 99久国产av精品国产电影| 中文字幕制服av| 久久久欧美国产精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 最新中文字幕久久久久| 五月玫瑰六月丁香| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲人成网站在线播| 亚洲精品一二三| 寂寞人妻少妇视频99o| 国产精品久久久久成人av| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲国产精品999| 欧美精品一区二区大全| 午夜激情久久久久久久| 亚洲国产色片| 精品一品国产午夜福利视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 大香蕉久久成人网| 亚洲情色 制服丝袜| 国产黄色视频一区二区在线观看| 秋霞伦理黄片| 国产精品.久久久| av播播在线观看一区| www.色视频.com| 久久97久久精品| 久久人人爽人人片av| 夜夜爽夜夜爽视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲精品自拍成人| 久久影院123| 久久久久精品性色| 一级毛片aaaaaa免费看小| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 日日摸夜夜添夜夜爱| 性色av一级| 少妇的逼水好多| 91久久精品电影网| 免费av中文字幕在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 人妻 亚洲 视频| 日本免费在线观看一区| 亚洲国产精品专区欧美| 国产精品久久久久成人av| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 岛国毛片在线播放| 少妇人妻 视频| 亚洲色图综合在线观看| 久久久久久人妻| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲av中文av极速乱| 午夜久久久在线观看| 日本欧美国产在线视频| 久久狼人影院| 午夜日本视频在线| 人人澡人人妻人| 日韩一区二区三区影片| 伦精品一区二区三区| 18在线观看网站| √禁漫天堂资源中文www| 老司机亚洲免费影院| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲人成77777在线视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 精品少妇久久久久久888优播| 国产亚洲一区二区精品| 中国美白少妇内射xxxbb| 亚洲av中文av极速乱| 国产亚洲最大av| 亚洲欧美一区二区三区国产| 欧美+日韩+精品| 免费高清在线观看视频在线观看| 亚洲精品av麻豆狂野| 久热久热在线精品观看| 欧美激情极品国产一区二区三区 | 一级二级三级毛片免费看| 久久久久国产精品人妻一区二区| 午夜福利,免费看| av在线观看视频网站免费| 精品一区在线观看国产| 婷婷成人精品国产| 亚洲av二区三区四区| 少妇人妻久久综合中文| 少妇 在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 日韩人妻高清精品专区| 久久精品久久精品一区二区三区| 一个人免费看片子| freevideosex欧美| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲少妇的诱惑av| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 在线观看国产h片| 免费看av在线观看网站| 熟女电影av网| av天堂久久9| 另类精品久久| 国产av码专区亚洲av| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 国产精品蜜桃在线观看| av线在线观看网站| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久99热6这里只有精品| 91成人精品电影| 色网站视频免费| 精品久久久久久电影网| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久热久热在线精品观看| 一级爰片在线观看| 欧美日本中文国产一区发布| 伊人亚洲综合成人网| 又大又黄又爽视频免费| 中文字幕最新亚洲高清| 国产成人aa在线观看| 天天影视国产精品| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 人人妻人人澡人人看| 大码成人一级视频| 国精品久久久久久国模美| 曰老女人黄片| 99热这里只有精品一区| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 熟女av电影| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久精品久久久久久久性| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲三级黄色毛片| 欧美人与善性xxx| 男女啪啪激烈高潮av片| 女人精品久久久久毛片| 国产精品国产三级国产av玫瑰| www.色视频.com| 成人漫画全彩无遮挡| 精品国产国语对白av| 狂野欧美激情性bbbbbb| 97在线人人人人妻| 国产精品一区二区在线观看99| 黄片无遮挡物在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 一级黄片播放器| 男女无遮挡免费网站观看| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 美女福利国产在线| 国产免费又黄又爽又色| 精品久久久久久久久亚洲| 我要看黄色一级片免费的| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 亚洲国产精品专区欧美| 欧美丝袜亚洲另类| 天天操日日干夜夜撸| 国产综合精华液| 国产深夜福利视频在线观看| 免费人妻精品一区二区三区视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 热99久久久久精品小说推荐| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 99久国产av精品国产电影| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| xxx大片免费视频| 建设人人有责人人尽责人人享有的| av有码第一页| 国产视频首页在线观看| 国产乱人偷精品视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 2021少妇久久久久久久久久久| 久久亚洲国产成人精品v| 日本vs欧美在线观看视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 全区人妻精品视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 少妇精品久久久久久久| 久久99蜜桃精品久久| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产精品国产av在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产成人aa在线观看| 亚洲中文av在线| 大片电影免费在线观看免费| 久久久久久久大尺度免费视频| 久久人妻熟女aⅴ| 一级二级三级毛片免费看| 91成人精品电影| 一区二区三区精品91| 一本久久精品| 国产精品.久久久| 免费av中文字幕在线| av线在线观看网站| 日本av免费视频播放| av电影中文网址| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲综合色网址| 三上悠亚av全集在线观看| 交换朋友夫妻互换小说| 久久午夜福利片| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 欧美日韩视频精品一区| 亚洲精品日本国产第一区| 精品少妇黑人巨大在线播放| 大片电影免费在线观看免费| 中文字幕免费在线视频6| 精品人妻偷拍中文字幕| 一本一本综合久久| 久久久久久久久久人人人人人人| 午夜免费鲁丝| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 伊人久久国产一区二区| 成人黄色视频免费在线看| 亚洲欧美清纯卡通| 亚洲中文av在线| av一本久久久久| 丁香六月天网| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 免费观看的影片在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 蜜臀久久99精品久久宅男| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲少妇的诱惑av| 国产极品粉嫩免费观看在线 | 纵有疾风起免费观看全集完整版| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 秋霞伦理黄片| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 一级毛片我不卡| 91精品三级在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 一个人免费看片子| 久久久久久伊人网av| 国产69精品久久久久777片| 国产成人精品久久久久久| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 精品亚洲乱码少妇综合久久| 69精品国产乱码久久久| 人妻系列 视频| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 色5月婷婷丁香| 777米奇影视久久| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产成人aa在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 免费观看性生交大片5| 午夜免费男女啪啪视频观看| 少妇的逼好多水| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 91精品国产九色| 国产黄色免费在线视频| 久久精品夜色国产| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲精品久久成人aⅴ小说 | 午夜福利视频在线观看免费| 最黄视频免费看| 麻豆乱淫一区二区| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产亚洲精品久久久com| 国产在线免费精品| 亚洲精品国产色婷婷电影| 黄色欧美视频在线观看| 成人国语在线视频| av黄色大香蕉| 亚洲综合色惰| 精品人妻一区二区三区麻豆| 人人妻人人澡人人看| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 91久久精品电影网| a 毛片基地| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 免费观看性生交大片5| 91精品一卡2卡3卡4卡| 国产成人精品婷婷| 成人综合一区亚洲| 国产精品人妻久久久影院| 国产乱人偷精品视频| 看非洲黑人一级黄片| 99热这里只有是精品在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| av不卡在线播放| 国产av精品麻豆| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品99久久99久久久不卡 | 人妻系列 视频| 伊人亚洲综合成人网| 99久国产av精品国产电影| 成人亚洲欧美一区二区av| xxxhd国产人妻xxx| 国产伦理片在线播放av一区| 18禁在线播放成人免费| 国产成人一区二区在线| 99九九线精品视频在线观看视频| kizo精华| 国产精品一区二区在线不卡| 免费人成在线观看视频色| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲第一av免费看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品人妻一区二区三区麻豆| 色吧在线观看| 老女人水多毛片| 亚洲欧洲国产日韩| 熟妇人妻不卡中文字幕| 久久久久精品久久久久真实原创| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 91精品一卡2卡3卡4卡| 97在线视频观看| 青春草视频在线免费观看| 亚洲av.av天堂| 久久久久久久久久久丰满| 少妇被粗大猛烈的视频| 自线自在国产av| 欧美日韩精品成人综合77777| 成人二区视频| 一区在线观看完整版| 99热这里只有是精品在线观看| 午夜日本视频在线| 性色av一级| 国产黄频视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 最新中文字幕久久久久| 亚洲国产精品国产精品| 中国三级夫妇交换| 精品一区二区三卡| 午夜久久久在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 欧美xxⅹ黑人| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 22中文网久久字幕| 久久人人爽人人片av| 视频在线观看一区二区三区| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 免费黄网站久久成人精品| 视频区图区小说| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 视频区图区小说| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲av在线观看美女高潮| 视频区图区小说| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃 | 人妻人人澡人人爽人人| 亚洲第一区二区三区不卡| 国内精品宾馆在线| 美女大奶头黄色视频| 简卡轻食公司| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产一级毛片在线| av福利片在线| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲综合色惰| 丝袜喷水一区| 国产精品三级大全| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 大香蕉久久成人网| 欧美日韩亚洲高清精品| 国产成人91sexporn| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲内射少妇av| 人妻 亚洲 视频| 成人影院久久| 成年人免费黄色播放视频| 中文字幕av电影在线播放| 色94色欧美一区二区| 丰满少妇做爰视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 少妇熟女欧美另类| 制服诱惑二区| 亚洲av在线观看美女高潮| 精品国产一区二区久久| 妹子高潮喷水视频| 只有这里有精品99| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品久久久久久久久亚洲| 99热6这里只有精品| 久久久久久久久久久久大奶| 国产精品一二三区在线看| 成人黄色视频免费在线看| 99热这里只有精品一区| 各种免费的搞黄视频| 精品视频人人做人人爽| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久久国产精品麻豆| 一区二区三区免费毛片| 永久免费av网站大全| 亚洲精品第二区| 制服诱惑二区| 精品人妻一区二区三区麻豆| 日韩av免费高清视频| 久久毛片免费看一区二区三区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 色94色欧美一区二区| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 精品久久久久久久久av| 国产精品不卡视频一区二区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 人体艺术视频欧美日本| 黄色视频在线播放观看不卡| 大香蕉久久成人网| 老熟女久久久| 九色成人免费人妻av| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 免费观看av网站的网址| 国产黄色视频一区二区在线观看| 欧美日韩在线观看h| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 免费看不卡的av| 久久99热这里只频精品6学生| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 制服人妻中文乱码| 性高湖久久久久久久久免费观看| 最近手机中文字幕大全| 婷婷色麻豆天堂久久| 欧美 日韩 精品 国产| 久久久久久伊人网av| 美女中出高潮动态图| 伦理电影免费视频| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 美女内射精品一级片tv| 中文天堂在线官网| 久热久热在线精品观看| 中国三级夫妇交换| 97超碰精品成人国产| 久久午夜福利片| 国产熟女欧美一区二区| 国产成人aa在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 十八禁高潮呻吟视频| 亚洲国产欧美在线一区| 国产不卡av网站在线观看| 一区二区三区四区激情视频| 人体艺术视频欧美日本| 午夜激情福利司机影院| 亚洲欧洲国产日韩| h视频一区二区三区| 亚洲国产精品一区三区| 国产高清不卡午夜福利| 最近的中文字幕免费完整| 国产一区二区三区av在线| 自线自在国产av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品久久久久久av不卡| 欧美精品一区二区大全| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品99久久久久久久久| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 天堂俺去俺来也www色官网| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美97在线视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久久久久久久久人人人人人人| 51国产日韩欧美| 26uuu在线亚洲综合色| 在线观看一区二区三区激情| 国产综合精华液| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩中字成人| 美女中出高潮动态图| 日韩成人av中文字幕在线观看| 熟女电影av网| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 日韩制服骚丝袜av| 亚洲人成网站在线观看播放| 99久久综合免费| 亚洲精品aⅴ在线观看| 欧美3d第一页| 亚州av有码| 国产成人午夜福利电影在线观看| 91精品国产国语对白视频| 两个人的视频大全免费| 亚洲av不卡在线观看| 亚洲综合色网址| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 高清欧美精品videossex| 亚洲精品,欧美精品| 精品亚洲成a人片在线观看| 久久久精品94久久精品| 亚洲中文av在线| 国产精品一区www在线观看| 中文欧美无线码| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| 少妇 在线观看| 国产一区二区在线观看av| 国产精品国产av在线观看| 大片免费播放器 马上看| 日韩av不卡免费在线播放| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲欧洲日产国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲人与动物交配视频| 视频区图区小说| 考比视频在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 欧美精品一区二区大全| 熟妇人妻不卡中文字幕| 男女国产视频网站| 99视频精品全部免费 在线| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美+日韩+精品| 日本欧美国产在线视频| 美女主播在线视频| 久久这里有精品视频免费| 国产精品久久久久久av不卡| 这个男人来自地球电影免费观看 | 男女高潮啪啪啪动态图| 亚洲经典国产精华液单| 久久精品国产亚洲网站| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产毛片在线视频| 日本欧美国产在线视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 在线观看免费视频网站a站| 毛片一级片免费看久久久久| 2022亚洲国产成人精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 黑人欧美特级aaaaaa片| 在线看a的网站| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品欧美亚洲77777| 夫妻性生交免费视频一级片| 99热全是精品| 亚洲精品色激情综合| 99国产精品免费福利视频| 男人爽女人下面视频在线观看| 观看av在线不卡| 免费人成在线观看视频色| 精品少妇内射三级| 亚洲精品,欧美精品| 国产免费又黄又爽又色| 91精品国产国语对白视频| 久久久午夜欧美精品| 精品亚洲成国产av| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产精品 国内视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 视频中文字幕在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 99热这里只有精品一区| 在线观看国产h片| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 三级国产精品片| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美人与善性xxx| 下体分泌物呈黄色| 美女国产视频在线观看| 亚洲性久久影院| 久久久久精品性色| 久久久久久伊人网av| 国产成人freesex在线| 久久久久精品性色| 99热网站在线观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲伊人久久精品综合| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| 中国三级夫妇交换| 五月开心婷婷网| 久久久精品区二区三区| 亚洲内射少妇av| 国产av码专区亚洲av| 中文字幕亚洲精品专区| 制服人妻中文乱码| 国产成人精品无人区| 亚洲少妇的诱惑av| 久久青草综合色| freevideosex欧美| 国产色婷婷99|