• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫(AlfalfaGEDB)的應(yīng)用研究
    ——以MsHB7 和MsPALM1 為例

    2022-07-17 13:19:20蔣曉可劉長寧
    熱帶農(nóng)業(yè)科技 2022年3期
    關(guān)鍵詞:等位基因靶點基因組

    蔣曉可,劉長寧

    (1.中國科學(xué)院西雙版納熱帶植物園,云南 勐臘 666303;2.中國科學(xué)院大學(xué),北京 100049)

    紫花苜蓿(Medicago sativaL.)因其高產(chǎn)潛力、廣泛的適應(yīng)性和優(yōu)良的營養(yǎng)特性被譽(yù)為“牧草之王”,是世界上分布最廣、栽培歷史最悠久的飼草之一。近年來,隨著畜牧業(yè)的迅速發(fā)展,紫花苜蓿的需求增加,對紫花苜蓿的研究應(yīng)用愈加廣泛[1]。2020 年,四倍體紫花苜蓿兩個品種(新疆大葉和中苜一號)的參考基因組公布[2-3],完成了染色體水平的基因組組裝,極大推進(jìn)了紫花苜?;蚬δ艿难芯亢推贩N改良的發(fā)展。

    基因編輯是一種利用序列特異性核酸酶(sequence-specific nucleases,SSNs)在序列特定位點引起堿基突變的技術(shù)。CRISPR/Cas9 因其操作簡單、實用高效而成為目前應(yīng)用最為廣泛的基因編輯技術(shù),已被廣泛用于水稻、高粱、小麥、玉米、大豆、番茄、馬鈴薯的作物改良[4-6]。

    基于以上背景,我們利用Django Web 框架,結(jié)合SQLite 數(shù)據(jù)庫,構(gòu)建了紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫(Alfalfa Gene Editing Database,AlfalfaGEDB),提供基因基本信息瀏覽、BLAST 序列比對、JBrowse基因組瀏覽器、多條件查詢、sgRNA 靶點設(shè)計、在線Heatmap 繪制、生物復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)繪制、基因家族預(yù)測和數(shù)據(jù)下載等功能。AlfalfaGEDB 及其相關(guān)工具為研究人員提供了一個實用性強(qiáng)、操作簡便的平臺,用以檢索紫花苜?;虻南嚓P(guān)信息,幫助研究人員更好的開展研究。本研究以MsHB7和Ms-PALM1基因為例,對AlfalfaGEDB 的功能進(jìn)行展示,旨在證明AlfalfaGEDB 的實用性和數(shù)據(jù)庫結(jié)果的可靠性。

    1 材料和方法

    1.1 AlfalfaGEDB 的數(shù)據(jù)處理

    通過文獻(xiàn)檢索,對四倍體紫花苜蓿兩個品種(新疆大葉、中苜一號)的基因組數(shù)據(jù)進(jìn)行全面收集,將四倍體紫花苜蓿的蛋白序列比對至多個基因功能公共數(shù)據(jù)庫,獲得了KEGG、GO、Pfam 等多種注釋信息;基于NCBI SRA 數(shù)據(jù)庫、EBI 和國家基因庫生命大數(shù)據(jù)平臺(CNGBdb)等公共數(shù)據(jù)庫,收集分析了212 份紫花苜蓿轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),涵蓋紫花苜蓿不同組織、不同環(huán)境脅迫等多種樣本;利用CRISPR-GE[7]和CRISPR-Local[8]靶點預(yù)測工具,對紫花苜蓿兩個品種分別進(jìn)行了sgRNA 預(yù)測,獲得4 套全基因組靶點預(yù)測數(shù)據(jù),基因組覆蓋率達(dá)99%以上。

    1.2 AlfalfaGEDB 的實現(xiàn)

    基于紫花苜蓿多組學(xué)數(shù)據(jù)的挖掘和整理,利用Django Web 框架,結(jié)合SQLite 數(shù)據(jù)庫,構(gòu)建了紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫(Alfalfa Gene Editing Database,AlfalfaGEDB),訪問網(wǎng)址為:http://alfalfagedb.liu-lab.com/。AlfalfaGEDB 收錄了紫花苜蓿兩個品種基因組信息、多樣本的基因表達(dá)譜、全基因組sgRNA 靶點預(yù)測等信息,提供基因組信息在線瀏覽,轉(zhuǎn)錄組表達(dá)量可視化以及sgRNA 靶位點預(yù)測數(shù)據(jù)在線瀏覽等功能模塊。此外,數(shù)據(jù)庫也集成了在線BLAST、熱圖繪制,生物復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)查詢、基于CRISPR/Cas9 的sgRNA 靶位點設(shè)計等工具。

    1.3 AlfalfaGEDB 的應(yīng)用

    以紫花苜蓿、CRISPR 等作為關(guān)鍵字進(jìn)行文獻(xiàn)搜集,選擇經(jīng)過實驗驗證的功能基因MsHB7和MsPALM1作為主要查詢對象。通過AlfalfaGEDB的BLAST 序列比對工具,對基因進(jìn)行驗證,得到該基因在AlfalfaGEDB 中對應(yīng)的基因名,實現(xiàn)基因ID 的轉(zhuǎn)化。Browse 功能用于查詢基因的基本信息;利用JBrowse 基因組瀏覽器進(jìn)行基因結(jié)構(gòu)的可視化;在線Heatmap 繪制工具展示基因在不同組織和脅迫條件下的表達(dá)信息;多條件查詢用于查詢基因所在網(wǎng)絡(luò)的信息;Network 工具繪制基因所在的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)和蛋白互作網(wǎng)絡(luò);基因家族預(yù)測結(jié)果確定該基因所在的轉(zhuǎn)錄因子家族;sgRNA 靶點設(shè)計提示了該基因預(yù)測到的所有可能的靶點信息。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 MsHB7 基因在AlfalfaGEDB 中的應(yīng) 用

    已有研究表明,MsHB7作為HD-Zip 轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員,其過表達(dá)對紫花苜蓿鹽脅迫耐受性具有負(fù)調(diào)節(jié)作用[9]。此外,還有一些植物物種中的HD-Zip 成員在非生物脅迫反應(yīng)中發(fā)揮作用。JcHDZ07基因是小桐子(Jatropha curcasL.)中HD-Zip 家族的成員,它在擬南芥中的過表達(dá)使轉(zhuǎn)基因品系對鹽脅迫更加敏感[10]。玉米(Zea maysL.)中ZmHDZ1的過表達(dá)使轉(zhuǎn)基因水稻鹽敏感性增強(qiáng)[11];棉花(Gossypium hirsutumL.)GhHB12基因過表達(dá)也對擬南芥和棉花的鹽脅迫和耐旱性產(chǎn)生了負(fù)調(diào)控作用[12]。鹽堿脅迫是重要的植物非生物脅迫因子,土壤鹽堿化也是世界范圍內(nèi)備受關(guān)注的生態(tài)問題,紫花苜蓿作為優(yōu)質(zhì)的牧草品種,選育適宜的耐鹽堿品種將極大促進(jìn)紫花苜蓿的生產(chǎn)和發(fā)展[13]。

    在AlfalfaGEDB 中搜索MsHB7(MsG0380016624.01)基因,可以得到如下結(jié)果:

    (1)Browse 搜索結(jié)果如圖1 所示,可以得到該基因的染色體位置信息、序列信息、基因注釋信息、sgRNA 靶位點預(yù)測結(jié)果。根據(jù)數(shù)據(jù)庫搜索結(jié)果,該基因在公共數(shù)據(jù)庫中被注釋為HD-Zip 相關(guān)蛋白。

    圖1 MsHB7(MsG0380016624.01)基本信息瀏覽

    (2)BLAST 工具鑒定結(jié)果顯示:紫花苜蓿中苜一號品種中MsHB7(MsG0380016624.01)基因與蒺藜苜蓿中響應(yīng)ABA、鹽脅迫的MtHB12(XP_003602321.2)基因的氨基酸序列相似性高達(dá)98%(圖2A)。

    (3)JBrowse 可視化結(jié)果顯示:MsHB7具有兩個外顯子和兩個CDS 區(qū)域(圖2B)。

    (4)如圖2C 所示,轉(zhuǎn)錄因子基因家族鑒定結(jié)果表明MsHB7基因?qū)儆贖D-Zip 轉(zhuǎn)錄因子家族。

    除基因的詳細(xì)信息,AlfalfaGEDB 提供的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)和蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析工具可幫助研究人員分析和挖掘更多的基因功能。AlfalfaGEDB 網(wǎng)絡(luò)查詢工具顯示:MsHB7與MsG0380016581.01 基因有蛋白互作關(guān)系(圖2D)。共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)查詢結(jié)果表明MsHB7與821 個基因有共表達(dá)關(guān)系,我們對p-value 值前10 的基因進(jìn)行了共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)展示(圖2E)。熱圖聚類(圖2F)顯示,MsHB7及其相關(guān)基因受鹽脅迫誘導(dǎo)變化明顯:與對照組相比(CZM、CXJ),這些基因在鹽處理下(TZM、TXJ)表達(dá)量上升。MsHB7基因sgRNA 靶位點預(yù)測結(jié)果如圖1D所示,利用CRISPR-GE 工具在MsHB7中預(yù)測出54個靶點,CRISPR-Local 工具預(yù)測出36 個靶點,兩個工具預(yù)測到的相同靶點數(shù)為35 個。

    圖2 MsHB7在AlfalfaGEDB中查詢結(jié)果

    2.2 MsPALM1 在 AlfalfaGEDB 中的應(yīng)用

    莖葉比是衡量紫花苜蓿品質(zhì)的重要指標(biāo),與紫花苜蓿的營養(yǎng)價值呈正相關(guān),培育多葉型新品種有助于改善紫花苜蓿莖葉比,從而提高其產(chǎn)量和營養(yǎng)價值。已有研究證明,C2H2 型鋅指轉(zhuǎn)錄因子——PALM1在二倍體蒺藜苜蓿復(fù)葉形成過程中發(fā)揮了關(guān)鍵作用[14-15]。2020 年,研究人員利用紫花苜蓿新疆大葉基因組數(shù)據(jù),以MtPALM1作為查詢,成功在紫花苜蓿中鑒定出4個MsPALM1等位基因:MS.gene059669,MS.gene09654,MS.gene21467 和 MS.gene015309。利用CRISPR/Cas9 技術(shù),對調(diào)控紫花苜蓿小葉數(shù)目的Ms-PALM1等位基因進(jìn)行定點突變,將三出復(fù)葉的紫花苜蓿突變?yōu)? 小葉的類掌狀復(fù)葉,大大加快了紫花苜蓿育種速度。

    為了更直觀地對本數(shù)據(jù)庫sgRNA 靶點設(shè)計工具進(jìn)行驗證,我們以MsPALM1為例,通過BLAST得到MtPALM1在新疆大葉基因組中的4 個等位基因,序列相似性99%以上(圖3A)。轉(zhuǎn)錄因子家族預(yù)測結(jié)果如圖3B 所示,MsPALM1的4 個等位基因?qū)儆贑2H2 轉(zhuǎn)錄因子家族,該結(jié)果進(jìn)一步印證了BLAST 結(jié)果的真實性。Browse 查詢結(jié)果顯示,4 個基因位于5 號染色體組的不同亞染色體上,GO 和Pfam 注釋結(jié)果相同,編碼C2H2 型鋅指蛋白(圖3C)。MsPALM1等位基因的表達(dá)矩陣熱圖顯示,其在敲除palm1 的葉片里明顯高表達(dá)(圖3D)。

    圖3 MtPALM1在AlfalfaGEDB中的查詢結(jié)果

    利用本數(shù)據(jù)庫的多靶點預(yù)測工具,成功預(yù)測到陳海濤等的研究中[16]敲除MsPALM1等位基因所用靶點:5’-GGAGACGAGCACGGTCGCGGCGG-3’(圖4),有力地證明了AlfalfaGEDB 靶點預(yù)測的可用性。

    圖4 MsPALM1等位基因靶點預(yù)測結(jié)果

    3 小結(jié)

    紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫(AlfalfaGEDB)共收集了兩個品種紫花苜蓿的基因組數(shù)據(jù)、212 份紫花苜蓿轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)以及4 套全基因組sgRNA 預(yù)測數(shù)據(jù)。在此基礎(chǔ)上,利用Django Web 框架,結(jié)合多種生物信息學(xué)工具,構(gòu)建了一個相對全面的紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫。本文通過對MsHB7和Ms-PALM1兩個實例進(jìn)行分析,對AlfalfaGEDB 的工具進(jìn)行了全方位的測試與驗證,數(shù)據(jù)庫查詢結(jié)果與已有研究結(jié)果[3,17]的一致性也進(jìn)一步印證了紫花苜?;蚓庉嫈?shù)據(jù)庫的實用性和可靠性。

    豆科作物紫花苜蓿在改良土壤、水土保持、生物固氮等方面發(fā)揮了重要作用,其應(yīng)用對飼料、作物輪作和土壤肥力至關(guān)重要,是可持續(xù)農(nóng)業(yè)的重要組成部分。作為目前最全面的紫花苜蓿功能基因研究平臺,AlfalfaGEDB 為研究人員提供了友好的Web 服務(wù)和便捷高效的生物信息學(xué)工具,成為紫花苜蓿功能基因研究的重要補(bǔ)充工具,期待其能夠持續(xù)為紫花苜?;蚬δ苎芯亢瓦z傳育種提供有用的資源。

    猜你喜歡
    等位基因靶點基因組
    維生素D受體或是糖尿病治療的新靶點
    中老年保健(2021年3期)2021-12-03 02:32:25
    牛參考基因組中發(fā)現(xiàn)被忽視基因
    親子鑒定中男性個體Amelogenin基因座異常1例
    智慧健康(2021年17期)2021-07-30 14:38:32
    腫瘤免疫治療發(fā)現(xiàn)新潛在靶點
    WHOHLA命名委員會命名的新等位基因HLA-A*24∶327序列分析及確認(rèn)
    DXS101基因座稀有等位基因的確認(rèn)1例
    心力衰竭的分子重構(gòu)機(jī)制及其潛在的治療靶點
    氯胺酮依賴腦內(nèi)作用靶點的可視化研究
    同位素(2014年2期)2014-04-16 04:57:16
    基因組DNA甲基化及組蛋白甲基化
    遺傳(2014年3期)2014-02-28 20:58:49
    有趣的植物基因組
    久久人人爽av亚洲精品天堂| 两个人看的免费小视频| 久久韩国三级中文字幕| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲色图综合在线观看| 桃花免费在线播放| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 黄色视频在线播放观看不卡| 青春草视频在线免费观看| 亚洲成人av在线免费| 亚洲精品,欧美精品| 国产男人的电影天堂91| 午夜免费鲁丝| av又黄又爽大尺度在线免费看| 电影成人av| 黄频高清免费视频| 亚洲国产欧美在线一区| 咕卡用的链子| 亚洲伊人色综图| 亚洲中文av在线| 亚洲天堂av无毛| 在线观看国产h片| 国产1区2区3区精品| 亚洲欧美一区二区三区久久| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲av欧美aⅴ国产| 国产成人精品在线电影| 国产精品一国产av| 高清不卡的av网站| 国产爽快片一区二区三区| 一区二区日韩欧美中文字幕| a级毛片在线看网站| 一本色道久久久久久精品综合| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产激情久久老熟女| 99香蕉大伊视频| 久久久久久久久久久免费av| 香蕉国产在线看| 激情五月婷婷亚洲| 国产片特级美女逼逼视频| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产免费福利视频在线观看| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 久久97久久精品| 一级毛片电影观看| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲精品,欧美精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精品人妻一区二区三区麻豆| 色网站视频免费| 波多野结衣一区麻豆| 黄片播放在线免费| 水蜜桃什么品种好| 日韩一区二区三区影片| 在线 av 中文字幕| 精品少妇内射三级| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 超碰97精品在线观看| 免费在线观看完整版高清| 日韩av不卡免费在线播放| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 一区二区三区乱码不卡18| 超碰97精品在线观看| 18禁动态无遮挡网站| 亚洲av综合色区一区| 韩国高清视频一区二区三区| av在线app专区| 久久久久久久久久人人人人人人| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲情色 制服丝袜| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 宅男免费午夜| 少妇被粗大猛烈的视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产成人精品一,二区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 欧美 日韩 精品 国产| 乱人伦中国视频| 男女午夜视频在线观看| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产一区二区三区综合在线观看| 一区在线观看完整版| 久久精品久久精品一区二区三区| 男女午夜视频在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 成人影院久久| 午夜精品国产一区二区电影| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 日韩三级伦理在线观看| 亚洲三区欧美一区| 亚洲精品美女久久av网站| 最新中文字幕久久久久| 日本欧美国产在线视频| kizo精华| 中文字幕人妻熟女乱码| 久久国内精品自在自线图片| 热99久久久久精品小说推荐| 国产熟女午夜一区二区三区| av电影中文网址| 欧美av亚洲av综合av国产av | 成人毛片60女人毛片免费| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 欧美人与善性xxx| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产免费视频播放在线视频| 久久人人97超碰香蕉20202| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品午夜福利在线看| 曰老女人黄片| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 成年女人在线观看亚洲视频| 欧美精品一区二区免费开放| 午夜日韩欧美国产| 久久这里有精品视频免费| 亚洲一区二区三区欧美精品| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 999精品在线视频| 亚洲经典国产精华液单| 国产精品免费大片| 如何舔出高潮| 亚洲中文av在线| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 9热在线视频观看99| 少妇的逼水好多| 成人手机av| 国精品久久久久久国模美| 欧美成人午夜免费资源| 亚洲精品视频女| 日本av手机在线免费观看| 男人舔女人的私密视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 精品福利永久在线观看| 国产av国产精品国产| 亚洲精品一区蜜桃| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 黄色毛片三级朝国网站| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜日本视频在线| 性色avwww在线观看| 国产淫语在线视频| 久久99蜜桃精品久久| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品久久久av美女十八| 日本午夜av视频| av国产久精品久网站免费入址| 国产成人精品一,二区| 亚洲精品自拍成人| 丰满少妇做爰视频| 黄片小视频在线播放| 一区二区av电影网| 精品少妇一区二区三区视频日本电影 | 亚洲国产av影院在线观看| 日韩精品有码人妻一区| a级毛片黄视频| 国产伦理片在线播放av一区| 各种免费的搞黄视频| 国产精品免费视频内射| 国产精品av久久久久免费| 国产男女内射视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 最新的欧美精品一区二区| 国产1区2区3区精品| 一级爰片在线观看| 美女主播在线视频| 亚洲欧美一区二区三区国产| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 亚洲av福利一区| 韩国av在线不卡| 精品酒店卫生间| 国产精品人妻久久久影院| 久久久久国产精品人妻一区二区| 国产高清不卡午夜福利| 丰满迷人的少妇在线观看| 老熟女久久久| 大香蕉久久成人网| 99久国产av精品国产电影| 欧美黄色片欧美黄色片| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 熟女电影av网| 精品少妇久久久久久888优播| 新久久久久国产一级毛片| 亚洲精品视频女| 精品少妇内射三级| 少妇被粗大的猛进出69影院| 日本vs欧美在线观看视频| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久久久久久久久久免费av| 中国国产av一级| 国产精品久久久av美女十八| 久久精品国产亚洲av天美| 性色av一级| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 精品视频人人做人人爽| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久久久久久久久人人人人人人| 看非洲黑人一级黄片| 欧美精品av麻豆av| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美成人精品欧美一级黄| 少妇被粗大的猛进出69影院| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 男女高潮啪啪啪动态图| 免费黄频网站在线观看国产| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 人人澡人人妻人| 自线自在国产av| 成年美女黄网站色视频大全免费| 免费观看av网站的网址| 制服人妻中文乱码| av在线老鸭窝| 99热国产这里只有精品6| 人妻少妇偷人精品九色| 国产男女超爽视频在线观看| 国产成人av激情在线播放| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美人与性动交α欧美精品济南到 | 国产在视频线精品| 极品人妻少妇av视频| av天堂久久9| 97精品久久久久久久久久精品| 国产淫语在线视频| 久久99精品国语久久久| 黄色毛片三级朝国网站| videos熟女内射| 日本黄色日本黄色录像| 午夜av观看不卡| 国产av国产精品国产| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久久久精品人妻al黑| 国产极品天堂在线| 我的亚洲天堂| 丝袜在线中文字幕| 国产在线免费精品| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 免费看av在线观看网站| 十八禁网站网址无遮挡| 黄片无遮挡物在线观看| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| av在线老鸭窝| 国产精品国产三级专区第一集| 精品少妇久久久久久888优播| 男人舔女人的私密视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 精品国产一区二区久久| 男男h啪啪无遮挡| 青春草视频在线免费观看| 老鸭窝网址在线观看| 最近最新中文字幕免费大全7| 亚洲成人手机| 极品少妇高潮喷水抽搐| 香蕉丝袜av| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲国产色片| 国产不卡av网站在线观看| 国产一区二区三区av在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 国产精品久久久久久久久免| 国产欧美亚洲国产| 亚洲人成电影观看| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久久国产一区二区| 在线观看国产h片| 毛片一级片免费看久久久久| 国产片特级美女逼逼视频| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲,欧美,日韩| 麻豆av在线久日| 亚洲av男天堂| 国产精品三级大全| 国产乱来视频区| 欧美97在线视频| 天堂中文最新版在线下载| 精品久久蜜臀av无| 午夜91福利影院| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 国产一区二区激情短视频 | 久久99蜜桃精品久久| 国产亚洲最大av| 9191精品国产免费久久| 国产精品久久久久久精品古装| 日本黄色日本黄色录像| 国产精品一国产av| 亚洲色图综合在线观看| 999久久久国产精品视频| 久久国产精品大桥未久av| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 免费观看无遮挡的男女| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产成人精品在线电影| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 成年女人毛片免费观看观看9 | 激情视频va一区二区三区| 亚洲中文av在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 午夜福利视频在线观看免费| www.av在线官网国产| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 女人精品久久久久毛片| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 午夜精品国产一区二区电影| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 人妻系列 视频| 国产不卡av网站在线观看| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 一级毛片我不卡| 免费少妇av软件| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久久久国产一级毛片高清牌| 啦啦啦啦在线视频资源| 女人久久www免费人成看片| 亚洲美女黄色视频免费看| 一二三四中文在线观看免费高清| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 91精品三级在线观看| 亚洲美女黄色视频免费看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久热久热在线精品观看| 成人亚洲欧美一区二区av| 人人妻人人澡人人看| 成年女人毛片免费观看观看9 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 免费黄网站久久成人精品| 久久女婷五月综合色啪小说| 国产国语露脸激情在线看| 精品久久久精品久久久| 国产深夜福利视频在线观看| 欧美xxⅹ黑人| 夫妻午夜视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 老司机影院毛片| 欧美另类一区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 亚洲一区二区三区欧美精品| 精品第一国产精品| www.自偷自拍.com| 女人久久www免费人成看片| 亚洲精品自拍成人| 国产一区二区在线观看av| 精品一区在线观看国产| 岛国毛片在线播放| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 波多野结衣一区麻豆| 一级片'在线观看视频| 中文字幕av电影在线播放| 欧美精品亚洲一区二区| www.自偷自拍.com| 免费在线观看完整版高清| 人成视频在线观看免费观看| av免费在线看不卡| 色视频在线一区二区三区| 五月天丁香电影| 亚洲国产成人一精品久久久| 美女中出高潮动态图| 亚洲av电影在线进入| 亚洲美女黄色视频免费看| 欧美另类一区| 亚洲四区av| 18禁观看日本| 在线天堂中文资源库| 午夜av观看不卡| 国产人伦9x9x在线观看 | 91精品三级在线观看| 久久久久久伊人网av| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产欧美亚洲国产| 亚洲精品乱久久久久久| 九色亚洲精品在线播放| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 一区二区av电影网| 精品久久久精品久久久| 一个人免费看片子| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 男男h啪啪无遮挡| 国产成人精品一,二区| 午夜av观看不卡| 2021少妇久久久久久久久久久| 熟女av电影| 性少妇av在线| 国产精品久久久久久精品古装| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 搡老乐熟女国产| av线在线观看网站| 男女边摸边吃奶| 国产av国产精品国产| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 免费高清在线观看视频在线观看| 午夜日韩欧美国产| 两个人免费观看高清视频| 人人妻人人澡人人看| 韩国av在线不卡| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 日韩大片免费观看网站| 国产乱来视频区| 亚洲第一区二区三区不卡| av网站在线播放免费| 亚洲成人一二三区av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品亚洲av一区麻豆 | 亚洲三区欧美一区| 精品国产露脸久久av麻豆| 91在线精品国自产拍蜜月| av视频免费观看在线观看| 亚洲精品乱久久久久久| 中文字幕制服av| 母亲3免费完整高清在线观看 | 亚洲国产看品久久| 久久久亚洲精品成人影院| 亚洲欧美清纯卡通| 久久这里有精品视频免费| 国产免费福利视频在线观看| 制服人妻中文乱码| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 99re6热这里在线精品视频| 成人国产麻豆网| 下体分泌物呈黄色| 成人午夜精彩视频在线观看| 男女免费视频国产| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲四区av| 18禁国产床啪视频网站| 1024视频免费在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 春色校园在线视频观看| 国产成人精品一,二区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 在线观看三级黄色| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 考比视频在线观看| 午夜日本视频在线| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日本91视频免费播放| 亚洲av电影在线进入| 91aial.com中文字幕在线观看| 婷婷色综合www| 欧美在线黄色| 亚洲精品,欧美精品| 在现免费观看毛片| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 久久久久久久精品精品| 免费少妇av软件| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 欧美人与性动交α欧美软件| 少妇人妻精品综合一区二区| 久久久久国产网址| av免费在线看不卡| 麻豆乱淫一区二区| 黑丝袜美女国产一区| 久久ye,这里只有精品| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 制服丝袜香蕉在线| 午夜日韩欧美国产| 人妻 亚洲 视频| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 久久久精品区二区三区| 日韩人妻精品一区2区三区| 最近2019中文字幕mv第一页| 老司机影院毛片| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一级片'在线观看视频| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 看免费成人av毛片| 黄片播放在线免费| 考比视频在线观看| 在线观看三级黄色| 日韩中文字幕欧美一区二区 | 亚洲,一卡二卡三卡| 午夜福利视频在线观看免费| 只有这里有精品99| 高清欧美精品videossex| 国产精品不卡视频一区二区| 一本色道久久久久久精品综合| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 99国产综合亚洲精品| 丰满迷人的少妇在线观看| av在线app专区| 亚洲人成电影观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 两个人免费观看高清视频| 久久久久精品久久久久真实原创| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲久久久国产精品| 日韩中文字幕视频在线看片| 啦啦啦啦在线视频资源| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 高清视频免费观看一区二区| 久久这里只有精品19| 在现免费观看毛片| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产精品免费大片| 免费黄网站久久成人精品| 电影成人av| 热re99久久国产66热| 亚洲精华国产精华液的使用体验| av免费在线看不卡| 午夜激情av网站| 久久人妻熟女aⅴ| 青青草视频在线视频观看| 国产一区有黄有色的免费视频| 只有这里有精品99| www日本在线高清视频| 国产有黄有色有爽视频| 好男人视频免费观看在线| 亚洲在久久综合| 欧美国产精品一级二级三级| 丁香六月天网| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 最近的中文字幕免费完整| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产高清国产精品国产三级| 精品视频人人做人人爽| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 久久久久久久大尺度免费视频| av网站免费在线观看视频| videossex国产| 成年人免费黄色播放视频| 国产亚洲最大av| 天天影视国产精品| 精品一区二区免费观看| 激情视频va一区二区三区| 在线看a的网站| 国产精品久久久久久av不卡| 久久狼人影院| 亚洲综合色惰| 婷婷色av中文字幕| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 久久久国产精品麻豆| 黑人欧美特级aaaaaa片| 日韩精品免费视频一区二区三区| 26uuu在线亚洲综合色| 亚洲欧美精品综合一区二区三区 | 最黄视频免费看| 精品国产国语对白av| 十八禁网站网址无遮挡| 搡老乐熟女国产| 亚洲国产看品久久| 最近最新中文字幕免费大全7| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产精品一二三区在线看| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 韩国av在线不卡| 久久精品亚洲av国产电影网| 丝袜在线中文字幕| 日韩伦理黄色片| 欧美成人午夜免费资源| 久久99精品国语久久久| 人妻系列 视频| 香蕉国产在线看| 丝袜在线中文字幕| 亚洲美女视频黄频| 久热久热在线精品观看| 日本vs欧美在线观看视频| 午夜福利视频在线观看免费| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产精品久久久av美女十八| 在线观看三级黄色| 另类亚洲欧美激情| 黄片播放在线免费| 看十八女毛片水多多多| 91在线精品国自产拍蜜月| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品第一国产精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 男的添女的下面高潮视频| 午夜福利影视在线免费观看| 久久人妻熟女aⅴ| 韩国av在线不卡| 欧美bdsm另类| 欧美成人午夜免费资源| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 成年女人在线观看亚洲视频| 人人澡人人妻人| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 欧美xxⅹ黑人| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 黄片无遮挡物在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲伊人久久精品综合| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 亚洲欧洲日产国产| 久久久久精品人妻al黑| 啦啦啦在线免费观看视频4| 免费高清在线观看日韩| 在线 av 中文字幕| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产一级毛片在线| 日韩伦理黄色片| 日本欧美视频一区| 男女边吃奶边做爰视频| a级片在线免费高清观看视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 久久久久久久久久人人人人人人| 99久国产av精品国产电影| 一级,二级,三级黄色视频| 妹子高潮喷水视频| 日日撸夜夜添| 一区福利在线观看| 国产高清国产精品国产三级| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 一本大道久久a久久精品| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 在线 av 中文字幕| 91aial.com中文字幕在线观看| 熟妇人妻不卡中文字幕|