陳 晨，李 永，宋林錦，許厚強(qiáng)*

（1.貴州大學(xué)高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州省動(dòng)物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州貴陽(yáng) 550025；2.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025；3.貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025）

硫胺素（Thiamine）通過(guò)熱降解途徑分解成含硫化合物以增強(qiáng)肉風(fēng)味，提升肉類感官評(píng)價(jià)。硫胺素作為體內(nèi)的必需物質(zhì)，不僅可以維持動(dòng)物機(jī)體功能，還可以適當(dāng)減輕動(dòng)物應(yīng)激反應(yīng)。動(dòng)物體內(nèi)不能自主合成硫胺素，在食物攝取不足時(shí)，會(huì)造成硫胺素缺乏。豬缺乏硫胺素的臨床表現(xiàn)為神經(jīng)癥狀，最直觀的就是會(huì)影響豬的食欲，影響增重，嚴(yán)重者還會(huì)出現(xiàn)嘔吐現(xiàn)象。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)不同物種的、基因進(jìn)行了大量研究。THTPAse（硫胺素三磷酸酶）是催化硫胺素三磷酸產(chǎn)生硫胺素焦磷酸的重要酶類。而硫胺素焦磷酸作為硫胺素在體內(nèi)的生物活性物質(zhì)，其含量多寡直接影響了硫胺素的沉積。屬于CYTH 蛋白超家族，CYTH蛋白超家族存在一定的反應(yīng)條件，需要二價(jià)金屬陽(yáng)離子加入才能有活性。Song 等對(duì)小鼠的THTPAse 活性進(jìn)行了探究，分析了THTPAse 的特異性機(jī)制與水分子在酶催化中的作用。Rusina 等對(duì)哺乳動(dòng)物線粒體中的THTPAse 活性進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)這是一種可溶性酶，存在于膜間和基質(zhì)中。以上結(jié)果都說(shuō)明了THTPAse 以多種形式存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，行使不同功能。Piotr等對(duì)進(jìn)行克隆，成功克隆了一個(gè)高度特異的序列，其分子量為25 kDa。（硫胺焦磷酸激酶）基因是催化硫胺素生成硫胺素二磷酸和硫胺素二磷酸生成硫胺素三磷酸的關(guān)鍵酶的編碼基因。Matthias 等研究發(fā)現(xiàn)，基因缺陷會(huì)造成硫胺素代謝功能紊亂綜合癥，引起細(xì)胞內(nèi)硫胺素缺乏，引發(fā)相關(guān)疾病，在對(duì)嬰兒缺乏癥進(jìn)行治療中，口服硫胺素和生物素后，患者臨床癥狀趨于穩(wěn)定。Sechi 等研究發(fā)現(xiàn)，有缺陷病的患者血液與肌肉中的硫胺素焦磷酸的含量會(huì)下降，而通過(guò)補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牧虬匪兀墒够颊吲R床癥狀趨近穩(wěn)定。王海等對(duì)優(yōu)質(zhì)肉雞硫胺素含量以及基因的3' UTR 多態(tài)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)突變位點(diǎn)與硫胺素含量差異不顯著。王姣等對(duì)雛鵝飼喂硫胺素后，發(fā)現(xiàn)對(duì)基因在肝臟中的表達(dá)量有影響。、在硫胺素代謝過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，目前對(duì)、的研究主要聚焦于基因缺陷、酶活性方面，但香蘇雜交豬、表達(dá)與硫胺素含量相關(guān)性尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)以香蘇雜交豬為研究對(duì)象，旨在探究在香蘇雜交豬中、相對(duì)表達(dá)量的變化，并結(jié)合硫胺素含量進(jìn)行相關(guān)性分析，探究香蘇雜交豬在不同組織中、相對(duì)表達(dá)量與硫胺素含量的關(guān)系，為以香蘇雜交豬為基礎(chǔ)群體的良種分子選育工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 Trizol 試劑（購(gòu)自上海英駿生物技術(shù)有限公司，Gib-co，美國(guó)），RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Thermo 公司，貨號(hào)：K1622），pMD19-T Vector（購(gòu)自擎科生物，貨號(hào)：SD4005），硫胺素（維生素B）含量檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自Solarbio，貨號(hào)：BC4195），2×Taq PCR StarMix with Loa ding Dye（購(gòu)自Genstar，貨號(hào)：A112-05），SYBR Green qPCR Master Mix（購(gòu)自BIO-RAD，貨號(hào)：1725271），大腸桿菌（）DH5由高原山地動(dòng)物遺傳育種與繁殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室保存并活化。

1.1.2 樣本采集 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物采用貴州大學(xué)香豬場(chǎng)選育的香蘇雜交豬（從江香豬與蘇太豬雜交選育，含有75%從江香豬血統(tǒng)的香蘇雜交豬）。選擇飼養(yǎng)環(huán)境相同的180 日齡香蘇雜交去勢(shì)公豬，設(shè)計(jì)空腹期3 h、12 h、24 h 后進(jìn)行屠宰（每個(gè)處理各3 頭）。采取心、肝、脾、肺、腎、大腸（結(jié)腸）、小腸（十二指腸）、背最長(zhǎng)肌8 個(gè)組織，一部分經(jīng)生理鹽水（0.9%氯化鈉注射液）、DEPC 水（含0.1% 焦碳酸二乙酯）處理之后，保存于液氮中用于RNA 提取。另一部分經(jīng)生理鹽水處理后，進(jìn)行硫胺素的測(cè)定。

1.2 方法

1.2.1、基因CDS 區(qū)片段獲取 提取香蘇雜交豬各組織總RNA 并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。根據(jù)NCBI（https://www.ncbi.nlm.nih.gov）中野豬（）（XM_001928723）、（XM_013979874.2）的序列，運(yùn)用Primer Premier 5 軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，通過(guò)NCBI 在線預(yù)測(cè)軟件進(jìn)行引物特異性分析，送至擎科（重慶）生物技術(shù)有限公司合成。引物信息見(jiàn)表1。PCR 反應(yīng)體系為：cDNA 1 μL、正反向引物各1.5 μL（10 μmol/L）、2×Es Taq Master Mix 10 μL，加ddHO補(bǔ)足至20 μL。擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性5 min；95℃ 30 s，54℃/60℃（/）30 s，72℃ 60 s 為一個(gè)循環(huán)，進(jìn)行35 個(gè)循環(huán)；72℃延伸10 min。采用1.5% 的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR 產(chǎn)物進(jìn)行分離、純化。

表1 引物序列信息

1.2.2 T 克隆載體的構(gòu)建 將純化后的目的片段與pMD19-T 載體進(jìn)行連接反應(yīng)，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5感受態(tài)細(xì)胞中，劃線培養(yǎng)，挑取單個(gè)菌落培養(yǎng)，進(jìn)行菌液PCR 鑒定。選擇條帶明亮的菌液，送至擎科（重慶）生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.2.3、基因生物信息學(xué)分析 利用生物信息學(xué)在線軟件ProtParam（http://us.expasy.org/tools/protparam.html/）、SOPMA（http://npsapbil.ibcp.fr/cgi-bin/nps a_automat.pl?page=npsa_sopma.html）和SWISS-MODEL（http://swissmodel.ex-pasy.org/）分別對(duì)、基因編碼的蛋白質(zhì)進(jìn)行理化性質(zhì)、二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)分析；使用MegAlign 軟件進(jìn)行同源性分析，MEGA 6.0 軟件構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)。運(yùn)用DTU 在線軟 件（http://www.cbs.dtu.dk/services/）與BUSCA（http://busca.biocomp.unibo.it/）對(duì)磷酸化位點(diǎn)、跨膜結(jié)構(gòu)、蛋白信號(hào)、亞細(xì)胞定位進(jìn)行分析。通過(guò)SMART（http://smart.embl-heidelberg.de/smart/set_mode.cgi?NORMAL=1）進(jìn)行保守結(jié)構(gòu)功能域分析。

1.2.4、基因表達(dá)分析 運(yùn)用RT-qPCR 法檢測(cè)香蘇雜交豬、基因在不同組織的表達(dá)，反應(yīng)體系（10 μL）：cDNA 1 μL、正反向引物各0.5 μL（10 μmol/L）、2×SYBR Green qPCR Master Mix 5 μL，ddHO 補(bǔ)足至10 μL。擴(kuò)增程序：95℃預(yù)變性2 min；95℃ 5 s，58℃/60℃（/）5 s，為一個(gè)循環(huán)，進(jìn)行39 個(gè)循環(huán)，數(shù)據(jù)采用2值法計(jì)算，并用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析。

1.2.5 硫胺素測(cè)定 利用硫胺素含量檢測(cè)試劑盒，測(cè)定宰前空腹3、12、24 h 香蘇雜交豬8 個(gè)組織中的硫胺素含量。采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。

1.2.6 硫胺素含量與mRNA 相對(duì)表達(dá)的關(guān)系 利用SPSS 18.0 軟件對(duì)香蘇雜交豬8 個(gè)組織中和基因相對(duì)表達(dá)量與硫胺素含量進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1、基因CDS 區(qū)片段擴(kuò)增 擴(kuò)增出、基因CDS 區(qū)片段（圖1），片段大小均與預(yù)期結(jié)果相符。

圖1 THTPA 與TPK1 基因CDS 區(qū)擴(kuò)增條帶瓊脂糖凝膠電泳圖

2.2 T 克隆載體的構(gòu)建 將純化后片段與T 載體連接，轉(zhuǎn)化后進(jìn)行菌液鑒定（圖2），送至擎科（重慶）生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

圖2 THTPA、TPK1 基因菌液PCR 產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳

2.3、基因生物信息學(xué)分析 經(jīng)過(guò)測(cè)序發(fā)現(xiàn)香蘇雜交豬、的CDS 區(qū)與NCBI 中的野豬序列（:XM_001928723 和:XM_01397 9874.2）完全一致，不存在突變位點(diǎn)。THTPA、TPK1蛋白質(zhì)特性如表3 所示?；蚓幋a蛋白不穩(wěn)定系數(shù)為53.19，大于40，屬于不穩(wěn)定蛋白，而基因編碼蛋白不穩(wěn)定系數(shù)為34.95，小于40，為穩(wěn)定蛋白。由親疏水性可知，兩基因所編碼蛋白均為親水蛋白（圖3）。THTPA 蛋白主要由3 種結(jié)構(gòu)組成，其中40.87% 為-螺旋，延伸鏈區(qū)域占13.91%，無(wú)規(guī)則卷曲占45.22%。TPK1 主要由3 種結(jié)構(gòu)組成，其中37.97% 為-螺旋，延伸鏈區(qū)域占15.61%，無(wú)規(guī)則卷曲占46.41%。蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果表明，香蘇雜交豬THTPA 和TPK1 蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)與二級(jí)結(jié)構(gòu)相符（圖4），主要由無(wú)規(guī)則卷曲和-螺旋構(gòu)成。THTPA有60.9% 定位于細(xì)胞質(zhì)，位于細(xì)胞核、線粒體、分泌囊泡、細(xì)胞骨架的比例分別為17.4%、8.7%、8.7% 和4.3%。TPK1 主要定位于細(xì)胞質(zhì)，占65.2%，線粒體和細(xì)胞核占8.7%，液泡、細(xì)胞骨架、分泌囊泡、高爾基體均占4.3%。進(jìn)行相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)THTPA 與TPK1 存在一定程度上的相互關(guān)系（圖3C）。遺傳進(jìn)化樹(shù)分析可知（圖5），香蘇雜交豬、基因和野豬完全同源，在哺乳動(dòng)物中香蘇雜交豬、基因遺傳距離都較斑馬魚(yú)近；香蘇雜交豬基因與雞的遺傳距離最遠(yuǎn)，基因與狗的遺傳距離最遠(yuǎn)，符合物種遺傳進(jìn)化論。采用MegAlign 對(duì)13 種物種的和基因核苷酸序列進(jìn)行同源性分析，結(jié)果（圖6A）所示，香蘇雜交豬基因核苷酸同源性與野豬一致，同源性為100%，與斑馬魚(yú)相似性最低，同源性為42.2%。除野豬外基因與水牛的相似性最高（87%）。香蘇雜交豬基因核苷酸同源性（圖6B）與野豬一致（100%），其次是山羊（90.4%），與斑馬魚(yú)相似性最低（57.6%）?；蛟谒鶎?duì)比的哺乳動(dòng)物中，同源性都高于80%，表明該基因在哺乳動(dòng)物中可能會(huì)有相似的功能。

圖3 THTPA 與TPK1 親疏水性及相互關(guān)系

圖4 THTPA、TPK1 二級(jí)、三級(jí)蛋白結(jié)構(gòu)分析圖

圖5 香蘇雜交豬THTPA、TPK1 基因遺傳進(jìn)化分析

圖6 不同物種THTPA 基因（A）和TPK1 基因（B）核苷酸序列同源性及其遺傳距離分析結(jié)果

表3 THTPA、TPK1 蛋白基本性質(zhì)

2.4、基因在香蘇豬不同組織中的表達(dá)分析 用不同組織不同空腹處理時(shí)間cDNA 為模板進(jìn)行熒光定量PCR 檢測(cè)，以探究、基因在香蘇雜交豬不同屠宰空腹時(shí)間各組織中的表達(dá)規(guī)律。結(jié)果（圖7）表明，、在香蘇雜交豬的各個(gè)組織中均有表達(dá)，且不同空腹屠宰處理下，、基因表達(dá)量存在顯著差異。其中在對(duì)基因相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)時(shí)，處理3 h 時(shí)肝臟中的相對(duì)表達(dá)量最高，12、24 h 為脾臟中的相對(duì)表達(dá)量最高?；蛟谔幚?、12 h 時(shí)肝臟中的相對(duì)表達(dá)量最高，24 h 時(shí)大腸（結(jié)腸）表達(dá)量最高。

圖7 THTPA、TPK1 基因不同處理時(shí)間不同組織相對(duì)表達(dá)量

2.5 硫胺素測(cè)定 測(cè)定香蘇雜交豬8 個(gè)組織不同處理時(shí)間硫胺素含量（表4）。發(fā)現(xiàn)背最長(zhǎng)肌中各個(gè)階段硫胺素含量無(wú)差異。在處理3 h 時(shí)小腸、腎臟中硫胺素含量均上升，此時(shí)硫胺素含量最高為肝臟（20.937±2.850 mg/g），其次為小腸（17.514±1.717 mg/g）。在處理12 h 時(shí)，肝臟中硫胺素含量依舊最高（21.314±0.342 mg/g），且比處理3 h 有所上升。3 h 時(shí)，小腸中硫胺素含量急劇下降（6.902±0.384 mg/g），脾臟中硫胺素含量上升（19.881±0.334mg/g），在24 h 處理下，除肝臟、心臟、背最長(zhǎng)肌外各個(gè)組織硫胺素含量均有下降。

表4 不同組織與不同處理中硫胺素含量

2.6 硫胺素含量與mRNA 相對(duì)表達(dá)量的關(guān)系 對(duì)香蘇雜交豬、基因在不同階段各組織中的表達(dá)規(guī)律進(jìn)行分析（圖8）?；蛟谄⑴K、心臟和背最長(zhǎng)肌無(wú)明顯變化趨勢(shì)，在肺臟、小腸（十二指腸）、肝臟中先上升后下降。腎臟、大腸（結(jié)腸）相對(duì)表達(dá)量趨勢(shì)隨著空腹時(shí)間增加而上升?；虿煌M織中的相對(duì)表達(dá)量在24 h 時(shí)都趨于穩(wěn)定。背最長(zhǎng)肌與心臟呈現(xiàn)直線趨勢(shì)，并無(wú)明顯變化。其余組織隨著時(shí)間增加，表達(dá)量下降，最后均趨于穩(wěn)定。背最長(zhǎng)肌中各個(gè)階段硫胺素含量無(wú)差異。在處理3 h 時(shí)小腸、腎臟中硫胺素含量均上升，在處理12 h 時(shí)，肝臟中硫胺素含量最高，比處理3 h 有所上升。小腸（十二指腸）中硫胺素含量急劇下降。脾臟中硫胺素含量上升，在24 h 處理下，除肝臟、心臟、背最長(zhǎng)肌外各個(gè)組織硫胺素含量均有下降，通過(guò)SPSS.18.0 軟件對(duì)心、肝、脾、肺、腎、大腸（結(jié)腸）、小腸（十二指腸）、背最長(zhǎng)肌的、基因相對(duì)表達(dá)量和硫胺素含量進(jìn)行相關(guān)性分析（表5）。、基因相對(duì)表達(dá)量極顯著相關(guān)（0.483，<0.01），基因相對(duì)表達(dá)量與硫胺素含量極顯著相關(guān)（0.657，<0.01），基因相對(duì)表達(dá)量與硫胺素含量極顯著相關(guān)（0.378，<0.01）。

表5 THTPA、TPK1 基因相對(duì)表達(dá)量和硫胺素含量相關(guān)性分析

圖8 香蘇雜交豬THTPA、TPK1 基因與硫胺素在不同空腹階段各組織的變化趨勢(shì)

3 討論

研究表明，硫胺素作為外來(lái)風(fēng)味前體物質(zhì)，可以降低美拉德反應(yīng)的褐變作用，提高肉類感官評(píng)價(jià)?；蛟诟鱾€(gè)組織均有表達(dá)，但是酶活性卻極低，說(shuō)明這種酶類除了可以分解硫胺素以外，還存在其他功能。Bernard 等對(duì)基因在嚙齒動(dòng)物中的表達(dá)量進(jìn)行探究后發(fā)現(xiàn)在睪丸中基因相對(duì)表達(dá)最高，肝中的酶活性最高，這說(shuō)明基因相對(duì)表達(dá)量與THTPAse 酶活性關(guān)聯(lián)性不顯著。本實(shí)驗(yàn)使用qRTPCR，檢測(cè)了香蘇雜交豬心、肝、脾、肺、腎、大腸（結(jié)腸）、小腸（十二指腸）、背最長(zhǎng)肌8 個(gè)組織中、基因相對(duì)表達(dá)量。24 h 空腹處理時(shí)，基因各組織相對(duì)表達(dá)量排序?yàn)椋浩?肝>腎>小腸（十二指腸）>肺>大腸（結(jié)腸）>心>背最長(zhǎng)肌。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)基因編碼蛋白分子質(zhì)量為25 kDa，與人和小鼠的分子量25 kDa 相同，與牛24 kDa 存在一定的差異。通過(guò)親緣性對(duì)比，與牛的親緣性最高（86.7%）。Marjorie 等發(fā)現(xiàn)THTPAse 在人類中所占的比例高于嚙齒類動(dòng)物，該酶的表達(dá)和活性與細(xì)胞分化程度有關(guān)，即與物種的進(jìn)化分化相關(guān)。有60.9% 定位于細(xì)胞質(zhì)。亞細(xì)胞定位最大可能于細(xì)胞質(zhì)，占65.2%。Czerniecki 等對(duì)嚙齒動(dòng)物的進(jìn)行定位發(fā)現(xiàn)其存在于神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)。Rusina 等對(duì)牛THTPAse 活性進(jìn)行探究，也發(fā)現(xiàn)酶類存在于細(xì)胞質(zhì)中。這與香蘇雜交豬的亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)的結(jié)果一致，說(shuō)明可能主要定位于細(xì)胞質(zhì)中且在不同物種中可能都存在于細(xì)胞質(zhì)中。對(duì)背最長(zhǎng)肌與肝臟中硫胺素含量與基因相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析，肝臟中的表達(dá)量與硫胺素含量最高。

基因各組織相對(duì)表達(dá)量排序?yàn)椋捍竽c（結(jié)腸）>肝>腎>脾>肺>小腸（十二指腸）>心>背最長(zhǎng)肌，硫胺素的含量與基因相對(duì)表達(dá)量呈現(xiàn)正相關(guān)。Anna 等研究發(fā)現(xiàn)，基因缺陷病通過(guò)補(bǔ)充適當(dāng)?shù)牧虬匪兀墒够颊吲R床癥狀趨近穩(wěn)定。王嬌等對(duì)雛鵝飼喂硫胺素后，發(fā)現(xiàn)對(duì)基因在肝臟中的表達(dá)量有影響，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，說(shuō)明體內(nèi)硫胺素變化會(huì)影響基因表達(dá)量改變，硫胺素與基因在肝臟中的表達(dá)有一定影響。對(duì)不同空腹處理的香蘇雜交豬的肝臟和背最長(zhǎng)肌進(jìn)行硫胺素的測(cè)定，結(jié)果顯示香蘇雜交豬背最長(zhǎng)肌硫胺素的含量為3.536±0.253 mg/g。李翔等測(cè)定不同品種選育豬背最長(zhǎng)肌硫胺素的含量，CH 豬硫胺素含量為3.989 mg/g，S05 豬肉中硫胺素含量為2.737 mg/g，不同豬種中背最長(zhǎng)肌中硫胺素含量存在差異，這可能是地方豬種的特性，其機(jī)理還有待探究。不同組織中的硫胺素含量不同，且隨著空腹時(shí)間的增加在大腸（結(jié)腸）、小腸（十二指腸）、肺、腎這些組織中硫胺素含量下降，在肝、心這2 個(gè)組織中硫胺素含量上升，這是由于不同組織的代謝能力差異而普遍存在。在背最長(zhǎng)肌中硫胺素含量與基因相對(duì)表達(dá)量穩(wěn)定，這就說(shuō)明，基因在背最長(zhǎng)肌中的功能并不主要為硫胺素代謝。

本研究利用qRT-PCR 檢測(cè)、基因在香蘇雜交豬不同空腹時(shí)間屠宰后的表達(dá)規(guī)律，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，、基因在香蘇雜交豬不同階段的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、大腸（結(jié)腸）、小腸（十二指腸）、背最長(zhǎng)肌中均不同程度表達(dá)，其中，內(nèi)臟組織的相對(duì)表達(dá)量均高于肌肉組織，說(shuō)明、基因?qū)儆趶V譜表達(dá)基因，且在肌肉組織中表達(dá)暗示著在香蘇雜交豬的、基因可能存在硫胺素代謝以外的功能活性。、基因相對(duì)表達(dá)量受屠宰空腹時(shí)間影響，也就是受到硫胺素吸收代謝的影響，且存在一定的顯著性差異?；蛟谄⑴K、心臟和背最長(zhǎng)肌中表達(dá)量在不同空腹屠宰處理時(shí)間無(wú)明顯變化趨勢(shì)；在肺臟、小腸（十二指腸）、肝臟中趨勢(shì)為“A”型模式，先上升后下降；腎臟、大腸（結(jié)腸）相對(duì)表達(dá)量趨勢(shì)隨著空腹時(shí)間增加而上升。基因在不同組織中的表達(dá)趨勢(shì)，除肺臟以外，表達(dá)量隨著空腹時(shí)間增加均下降。這說(shuō)明、基因表達(dá)量與硫胺素吸收代謝有一定關(guān)系。此外，、基因在香蘇雜交豬肝臟中的相對(duì)表達(dá)量較高，暗示、基因有可能參與了硫胺素代謝等調(diào)控功能。在背最長(zhǎng)肌中硫胺素含量與、基因表達(dá)量都趨近于穩(wěn)定，這就說(shuō)明即使不參與硫胺素代謝，可能也參與了其余的生物學(xué)功能。

4 結(jié)論

本研究成功克隆出香蘇雜交豬、基因，并進(jìn)行生物信息學(xué)、組織表達(dá)特征分析，、基因在各個(gè)組織中都有表達(dá)，且在不同處理?xiàng)l件下，肝臟都有較高的表達(dá)，在背最長(zhǎng)肌中表達(dá)量最低。、基因相對(duì)表達(dá)量相關(guān)性極顯著，基因相對(duì)表達(dá)量與硫胺素含量極顯著相關(guān)，基因相對(duì)表達(dá)量與硫胺素含量極顯著相關(guān)。本研究結(jié)果可為硫胺素沉積研究提供分子方面的理論依據(jù)，為后期硫胺素脅迫研究提供理論支撐。