羔羊斷奶應(yīng)激期飼喂方式對其生長性能和血清生化指標(biāo)的影響

史晨迪 趙曉雅 田沛知 陳佳欣 段春輝 張英杰 劉月琴 紀(jì)守坤 嚴(yán) 慧

(河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，保定 071000)

羔羊成活率及生長發(fā)育決定了養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益。斷奶是羔羊生長過程中的關(guān)鍵階段，母子分離、飼糧轉(zhuǎn)換、社群重組及環(huán)境變化等均會對羔羊造成應(yīng)激，同時羔羊斷奶時消化系統(tǒng)發(fā)育尚不完善，抵抗力低，發(fā)病率高，斷奶階段飼養(yǎng)管理對羔羊成活率及后期生長發(fā)育影響較大，斷奶階段是生產(chǎn)中格外關(guān)注的重要階段[1-2]。

羔羊斷奶前以母乳為主，皺胃較發(fā)達(dá)，瘤胃發(fā)育尚不完全，研究表明液體飼料長期飼喂會延滯羔羊瘤胃發(fā)育，植物飼料有助于刺激胃腸道發(fā)育，尤其是粗飼料能夠刺激胃腸道發(fā)育，維持反芻動物瘤胃正常功能和機(jī)體健康[3]。羔羊斷奶過渡期內(nèi)，飼糧結(jié)構(gòu)和組成對消化道的生長發(fā)育有重要作用，而全混合日糧(TMR)是將干草、青綠飼料或其他農(nóng)副產(chǎn)品等粗飼料、精飼料、礦物質(zhì)及維生素均勻混合調(diào)制而成的飼糧，具有低成本、營養(yǎng)均衡、適口性好、飼料利用率高和維持瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等優(yōu)點，能夠滿足羔羊生長所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)其生長發(fā)育，穩(wěn)定渡過各個應(yīng)激期。目前養(yǎng)殖場對于羔羊在斷奶過渡期飼喂的飼糧各有不同，沒有統(tǒng)一的飼糧過渡模式，主要包括代乳品、羔羊料+粗飼料、TMR粉料和羔羊料+TMR粉料等，羔羊腹瀉及死亡率較高。在飼料端全面禁抗的背景下，如何有效緩解羔羊斷奶應(yīng)激已成為急需解決的生產(chǎn)問題。因此，本試驗基于生產(chǎn)中主要的過渡飼料，分析比較不同飼喂方式對羔羊健康水平的影響，旨在為有效緩解斷奶應(yīng)激及促進(jìn)羔羊發(fā)育提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點

本試驗于2020年11月23日至2020年12月18日在河北省張家口市蘭海牧業(yè)進(jìn)行。

1.2 試驗設(shè)計與飼養(yǎng)管理

本試驗采用單因素試驗設(shè)計，選取健康、體重相近的50日齡湖羊羔羊48只(公母各1/2)，羔羊在50～60日齡隨母哺乳，并補(bǔ)飼羔羊料(購自某飼料公司)。59日齡時(記為第0天)，根據(jù)羔羊體重[(16.74±2.54) kg]、性別隨機(jī)分為3組：試驗1組(隨母哺乳，并補(bǔ)飼羔羊料)、試驗2組(60日齡斷奶，并飼喂TMR粉料)、試驗3組(60日齡斷奶，并飼喂50% TMR粉料+50%羔羊料)，每組16只。試驗期16 d。全混合日糧組成及其與羔羊料營養(yǎng)水平、母乳營養(yǎng)水平分別見表1、表2。

表1 全混合日糧組成及其與羔羊料

試驗期間，每周對羊舍地面及四壁進(jìn)行消毒處理，每天于09:00和16:00各飼喂1次，羔羊自由采食和飲水。

1.3 樣品采集

所有羔羊在試驗開始及結(jié)束時稱重，在第0、3、9和15天于晨飼前頸靜脈采集血液，離心機(jī)3 000×g離心10 min，分離上清液，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生長性能

所有羔羊在第0和15天于晨飼前稱重并記錄，試驗2組和3組記錄每天飼料投喂量和剩料量。試驗1組每天測定羔羊吃奶量(哺乳前后稱重)，并取奶樣進(jìn)行營養(yǎng)成分測定，同時記錄羔羊料的投料量和剩料量。計算平均日增重(ADG)和干物質(zhì)采食量(DMI)。

ADG=(試驗羊末重-試驗羊初始重)/試驗天數(shù)；DMI=(每日投料量-次日剩料量)×干物質(zhì)含量。

1.4.2 血清生化指標(biāo)

采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法測定血清皮質(zhì)醇(COR)(檢出限：1～400 ng/mL)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)(檢出限：2～600 ng/L)、免疫球蛋白A(IgA)(檢出限：0.1～40.0 mg/mL)、免疫球蛋白M(IgM)(檢出限：0.2～60.0 mg/mL)、免疫球蛋白G(IgG)(檢出限：0.5～100.0 mg/mL)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)(檢出限：0.5～200.0 ng/L)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)(檢出限：3～900 ng/L)、干擾素-γ(IFN-γ)(檢出限：2～600 ng/L)和D-乳酸(D-Lac)(檢出限：20～6 000 ng/mL)含量。采用微板法測定血清乳酸脫氫酶(LDH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。采用比色法測定血清肌酸激酶(CK)活性。采用微量酶標(biāo)法測定血清堿性磷酸酶(ALP)活性(檢出限：0～60 金氏單位/dL)。采用重點顯色法測定血清內(nèi)毒素(ET)含量(檢出限：0.1～1.0 EU/mL)。采用速率法測定血清二胺氧化酶(DAO)活性(檢出限:0～100 U/L)。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計分析

所有試驗數(shù)據(jù)均用Excel 2010進(jìn)行初步整理后，采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，顯著水平為P<0.05。

2 結(jié) 果

2.1 斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊生長性能的影響

由表3可知，在第0和15天，3組羔羊BW差異不顯著(P>0.05)。在第0～15天，試驗1和3組羔羊ADG顯著高于試驗2組(P<0.05)。在第0～15天，試驗1和2組羔羊DMI顯著低于試驗3組(P<0.05)。

表3 斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊生長性能的影響

2.2 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清中COR和ACTH含量的影響

由表4可知，不同時間組間點血清中COR和ACTH含量分析結(jié)果：在第3天，試驗2組血清中COR含量顯著高于試驗1組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)；在第0、9和15天，3組間血清COR含量差異不顯著(P>0.05)。在第0、3、9和15天，3組間血清中ACTH含量差異不顯著(P>0.05)。

表4 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清COR和ACTH含量的影響

同組在不同時間點血清COR含量的分析結(jié)果：在試驗1組，不同時間點間血清中COR含量無顯著差異(P>0.05)。在試驗2組，第3天血清中COR含量顯著高于第9、15天(P<0.05)，與第0天差異不顯著(P>0.05)；第0天顯著高于第15天(P<0.05)，與第9天差異不顯著(P>0.05)。在試驗3組，第3天血清中COR含量顯著高于第15天(P<0.05)，第0天分別與第3、9、15天差異不顯著(P>0.05)，第3天與第9天差異不顯著(P>0.05)，第9天與第15天差異不顯著(P>0.05)。

同組在不同時間點血清ACTH含量的分析結(jié)果：在試驗1組和3組，血清中ACTH含量在不同時間點間差異不顯著(P>0.05)。在試驗2組，第3天血清中ACTH含量顯著高于第9、15天(P<0.05)，與第0天差異不顯著(P>0.05)；第0天顯著高于第15天(P<0.05)，與第9天差異不顯著(P>0.05)。

2.3 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清中酶活性的影響

由表5可知，不同時間點組間血清中酶活性的分析結(jié)果：在第0、3和9天，3組間血清中LDH活性差異不顯著(P>0.05)；在第15天，試驗1組血清LDH活性顯著高于試驗3組(P<0.05)，與試驗2組差異不顯著(P>0.05)。在第0、9和15天，3組間血清中CK活性差異不顯著(P>0.05)；在第3天，試驗2、3組血清CK活性顯著高于試驗1組(P<0.05)。在第0、3和9天，3組間血清中ALP活性差異不顯著(P>0.05)；在第15天，試驗1組血清ALP活性顯著高于試驗2組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)。在第0、3、9和15天，3組間血清中ALT活性差異不顯著(P>0.05)。在第3和15天，試驗2組血清中AST活性顯著高于試驗1組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)；在第0和9天，3組間血清AST活性差異不顯著(P>0.05)。

同組在不同時間點血清中酶活性的分析結(jié)果：在試驗1組，各時間點間血清中LDH、CK、ALT和AST活性無顯著差異(P>0.05)；血清中ALP活性在第15天顯著高于第0和3天(P<0.05)，與第9天無顯著差異(P>0.05)。在試驗2組，各時間點間血清中LDH、CK、ALP和ALT活性無顯著差異(P>0.05)；血清中AST活性在第15天顯著高于第3天(P<0.05)，與第0和9天無顯著差異(P>0.05)。在試驗3組，各時間點間血清中LDH、CK、ALT和AST活性無顯著差異(P>0.05)；血清中ALP活性在第9天顯著高于第3天(P<0.05)，與第0和15天無顯著差異(P>0.05)。

2.4 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清中炎癥指標(biāo)的影響

由表6可知，不同時間點組間血清中炎癥指標(biāo)的分析結(jié)果：在第3天，試驗2、3組血清中IL-1β含量顯著高于試驗1組(P<0.05)；在第0、9和15天，3組間血清IL-1β含量差異不顯著(P>0.05)。在第0和9天，3組間血清中TNF-α含量差異不顯著(P>0.05)；在第3天，試驗2、3組血清TNF-α含量顯著高于試驗1組(P<0.05)；在第15天，試驗1組血清TNF-α含量顯著高于試驗2組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)。在第0、3和15天，3組間血清中IFN-γ含量差異不顯著(P>0.05)；在第9天，試驗2組血清IFN-γ含量顯著高于試驗1組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)。

表6 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清中炎癥指標(biāo)的影響

2.5 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清中腸道屏障指標(biāo)的影響

由表7可知，不同時間點組間血清中腸道屏障指標(biāo)的分析結(jié)果：在第3天，試驗2組血清中D-乳酸含量顯著高于試驗1組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)；在第9天，試驗1組血清D-乳酸含量顯著高于試驗3組(P<0.05)，與試驗2組差異不顯著(P>0.05)；在第0和15天，3組間血清D-乳酸含量差異不顯著(P>0.05)。在第0天，3組間羔羊血清中DAO活性差異不顯著(P>0.05)；在第3天，試驗2、3組血清DAO活性顯著高于試驗1組(P<0.05)；在第9天，試驗1、2組血清DAO活性顯著高于試驗3組(P<0.05)；在第15天，試驗2組血清DAO活性顯著高于試驗1、3組(P<0.05)。在第0和15天，3組間羔羊血清中ET含量差異不顯著(P>0.05)；在第3天，試驗2組血清ET含量顯著高于試驗1、3組(P<0.05)；在第9天，試驗3組血清ET含量顯著高于試驗1、2組(P<0.05)。

表7 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清中腸道屏障指標(biāo)的影響

2.6 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清中免疫球蛋白含量的影響

由表8可知，不同時間點組間血清中IgA、IgG、IgM含量分析結(jié)果：在第0和3天，3組間血清中IgA含量差異不顯著(P>0.05)；在第9天，試驗1組血清中IgA含量顯著高于試驗2組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)；在第15天，試驗1組血清中IgA含量顯著高于試驗2、3組(P<0.05)。在第0、3和9天，3組間血清中IgG含量差異不顯著(P>0.05)；在第15天，試驗1組血清IgG含量顯著高于試驗2組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)。在第0和3天，3組間血清中IgM含量差異不顯著(P>0.05)；在第9天，試驗1組血清中IgM含量顯著高于試驗2組(P<0.05)，與試驗3組差異不顯著(P>0.05)；在第15天，試驗1、3組血清中IgM含量顯著高于試驗2組(P<0.05)。

表8 羔羊斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對血清中免疫球蛋白含量的影響

同組在不同時間點血清中IgA、IgG、IgM含量的分析結(jié)果：在試驗1組，各時間點間血清中IgA和IgG含量差異不顯著(P>0.05)；第15天血清中IgM含量顯著低于第0天(P<0.05)，與第3、9天差異不顯著(P>0.05)。在試驗2組，第0、3天血清中IgA含量顯著高于第9、15天(P<0.05)；第15天血清中IgG含量顯著低于第0、3天(P<0.05)，與第9天無顯著差異(P>0.05)；第9、15天血清中IgM含量顯著低于第0天(P<0.05)，與第3天無差異(P>0.05)。在試驗3組，血清中IgG、IgM含量在不同時間點間差異不顯著(P>0.05)；第15天血清中IgA含量顯著低于第0、3天(P<0.05)，與第9天無顯著差異(P>0.05)。

3 討 論

3.1 斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊生長性能的影響

斷奶是羔羊生長過程中的重要階段，對于羔羊生長性能有重要影響，其中體重是評價羔羊生長發(fā)育的重要指標(biāo)。Chai等[4]研究斷奶對湖羊生長性能的影響，發(fā)現(xiàn)30日齡斷母乳羔羊在斷哺乳1～10 d的ADG顯著低于隨母哺乳組。王世琴[5]研究斷奶應(yīng)激對羔羊生長性能的影響，發(fā)現(xiàn)與斷奶前7 d相比，49日齡斷奶羔羊的采食量在斷奶后1～7 d升高，但ADG在斷奶后1～7 d顯著降低。柴建民等[6]研究發(fā)現(xiàn)，30日齡斷母乳羔羊的ADG在斷母乳1～10 d顯著低于未斷奶組，但采食量差異不顯著。以上研究表明，斷奶應(yīng)激會影響幼畜的生長性能。本試驗中，試驗1組羔羊在第0～15天的ADG顯著高于試驗2組，與試驗3組差異不顯著，說明斷奶應(yīng)激使羔羊的生長性能下降。試驗3組羔羊在第0～15天的ADG和DMI顯著高于試驗2組，試驗1組羔羊在第0～15天的DMI顯著低于試驗3組，說明50% TMR+50%羔羊料能緩解斷奶應(yīng)激，也說明羔羊斷奶后飼喂50% TMR+50%羔羊料能更有利于羔羊的健康和生長，可能是因為TMR中性洗滌纖維(NDF)含量遠(yuǎn)高于羔羊料，過多的NDF會使瘤胃快速充滿而減少動物DMI[7]，使飼料轉(zhuǎn)化率降低，影響羔羊生長性能。

3.2 斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊血清中COR和ACTH含量的影響

動物應(yīng)激反應(yīng)是由多種激素參與的過程，其中最重要的是糖皮質(zhì)激素。糖皮質(zhì)激素能夠影響大多數(shù)器官和組織的生物學(xué)功能，并維持基礎(chǔ)和應(yīng)激相關(guān)的能量穩(wěn)態(tài)。COR是由腎上腺皮質(zhì)分泌的一種重要糖皮質(zhì)激素，在動物機(jī)體內(nèi)主要作用是促進(jìn)組織中蛋白質(zhì)和脂肪的分解。下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸激活是應(yīng)激時COR含量升高的主要調(diào)節(jié)機(jī)制，主要通過激活HPA軸刺激垂體前葉釋放ACTH，促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)分泌COR[8-10]。有研究報道，犢牛斷奶應(yīng)激會造成血清COR含量升高，COR可作為動物應(yīng)激的生物標(biāo)志物[11]。范超等[12]研究斷奶應(yīng)激對犢牛血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)犢牛血清中COR含量在斷奶后1 d上升，至斷奶后14 d恢復(fù)正常水平。高艷霞等[13]研究斷奶應(yīng)激對犢牛血液生化、免疫和內(nèi)分泌的影響，發(fā)現(xiàn)犢牛血液中的COR含量在斷奶后1、3 d升高，斷奶后5 d顯著升高，斷奶后7、14 d恢復(fù)正常水平。Ekiz等[14]研究不同斷奶時間(45、75 d)對羔羊血漿COR含量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)2組羔羊的血漿COR含量在斷奶后1 d顯著升高，在斷奶后2 d開始下降，直至恢復(fù)正常水平。以上研究表明，斷奶應(yīng)激會導(dǎo)致幼畜血液中COR含量升高，一般在斷奶2周內(nèi)恢復(fù)到正常水平。本試驗中，試驗2、3組羔羊60日齡斷奶，斷奶對血清中COR和ACTH含量無顯著影響，說明斷奶前補(bǔ)飼羔羊料可緩解斷奶應(yīng)激。試驗2、3組羔羊血清中COR和ACTH的含量在斷奶后2周內(nèi)均呈先升高后降低的趨勢，均在第3天達(dá)到最高水平，高于第9和15天，說明羔羊應(yīng)激時血清中COR和ACTH含量變化一致，斷奶應(yīng)激通過激活HPA軸促進(jìn)ACTH釋放以提高COR的分泌[9-10]，同時也說明斷奶后1周內(nèi)羔羊的應(yīng)激較大。試驗2、3組羔羊血清中COR和ACTH含量在第15天均低于斷奶前，說明羔羊在斷奶前(第0天)第1次采血時產(chǎn)生了應(yīng)激，隨著采血次數(shù)增多，羔羊?qū)Σ裳袨橹饾u適應(yīng)，應(yīng)激減小。

試驗2組羔羊在斷奶后第3天血清中COR含量顯著高于試驗1組，試驗3組與試驗1、2組無顯著差異，說明在哺乳期補(bǔ)飼羔羊料的基礎(chǔ)上，斷奶后飼喂50% TMR+50%羔羊料有助于緩解斷奶應(yīng)激。

3.3 斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊血清中酶活性的影響

LDH是動物機(jī)體糖酵解途徑中的重要酶，可催化丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸，應(yīng)激條件下，在保證心臟等重要器官供氧的前提下，其他組織極可能在缺氧時采取無氧酵解方式供能，導(dǎo)致血液中LDH活性升高[12]。因此，通常將LDH作為反映機(jī)體能量代謝是否正常的應(yīng)激指標(biāo)。范超等[12]和高艷霞等[13]研究斷奶應(yīng)激對犢牛血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)犢牛血清中LDH活性在斷奶1 d后顯著升高，在斷奶后7、14 d恢復(fù)正常水平，說明斷奶應(yīng)激對犢牛能量代謝造成了影響。柴建民[15]研究斷奶日齡對羔羊血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)在10和30日齡斷奶的羔羊血清中LDH活性在斷奶后較對照組顯著升高。本試驗中，試驗2、3組羔羊在第3、9天血清中LDH活性與試驗1組無顯著差異，但在第15天均低于試驗1組，與以上研究結(jié)果不一致，說明在本試驗條件下斷奶沒有影響到羔羊的能量代謝，試驗1組血清LDH活性較高可能是因為總攝入能量不足，組織代謝過程中存在糖酵解，也說明隨著泌乳期延長母羊乳汁質(zhì)量下降，僅靠母乳或者補(bǔ)飼羔羊料不能滿足羔羊生長發(fā)育的需要。試驗2、3組羔羊血清LDH活性在斷奶后2周內(nèi)呈先升高后降低趨勢，但無顯著差異，說明60日齡斷奶后飼喂TMR和羔羊料對能量代謝無顯著影響。

CK是一種特異性激酶，其功能是催化三磷酸腺苷中的高能磷酸鍵，轉(zhuǎn)移到肌酸分子生成磷酸肌酸而儲存能量，當(dāng)肌肉因應(yīng)激受損時CK會迅速釋放進(jìn)入血液[16]。周向梅等[17]研究斷奶應(yīng)激對仔豬血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)在斷奶后7 d血清中CK活性升高。盧春蓮等[18]研究運(yùn)輸應(yīng)激對肉牛血液理化指標(biāo)及免疫指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)肉牛血清中CK活性在運(yùn)輸后顯著上升。柴建民[15]研究斷奶日齡對羔羊血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)在10和30日齡斷奶的羔羊血清中CK活性在斷奶后較對照組顯著升高。以上研究表明，應(yīng)激會通過影響肌肉營養(yǎng)物質(zhì)代謝提高血液中CK活性。本研究中，試驗2、3組羔羊在斷奶后3 d血清中CK活性顯著高于試驗1組，可能是因為斷奶應(yīng)激影響了肌肉營養(yǎng)物質(zhì)代謝，導(dǎo)致CK迅速釋放入血液中[16]，在第9和15天，與試驗1組無顯著差異，說明在斷奶后1周內(nèi)對羔羊肌肉代謝影響較大。試驗2、3組羔羊血清CK活性在斷奶后2周內(nèi)呈先升高后降低趨勢，試驗2組斷奶羔羊在第9天血清CK活性最高，試驗3組在斷奶后第3天的血清CK活性最高，說明斷奶應(yīng)激期內(nèi)飼喂50% TMR+50%羔羊料有助于降低應(yīng)激對肌肉的影響。

ALP廣泛存在于肝臟、骨骼等，與肝臟和骨骼的代謝密切相關(guān)。有研究表明，血清中的ALP可反映動物對蛋白質(zhì)和脂類的代謝效率，其活性高低可反映動物的生長速率[19-20]。張慶坤等[21]研究不同斷奶日齡對仔豬血清酶活性的影響，發(fā)現(xiàn)不同斷奶日齡仔豬斷奶7 d后血清ALP活性均下降。劉超良等[20]研究發(fā)現(xiàn)仔豬血清中ALP活性在斷奶后7 d下降，斷奶后14 d恢復(fù)正常水平。李沖[22]研究斷奶應(yīng)激對羔羊血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)羔羊斷奶后7 d血清中ALP活性顯著降低。以上研究表明，斷奶應(yīng)激會降低幼畜血液中ALP活性。侯生珍等[23]研究蛋白質(zhì)水平對早期斷奶藏羔羊應(yīng)激和免疫的影響，發(fā)現(xiàn)隨著飼糧中蛋白質(zhì)水平的升高，血清中ALP活性升高。本試驗中，斷奶影響了羔羊血清中ALP活性，在第15天試驗2組的羔羊血清ALP活性顯著低于試驗1組，可能是因為斷奶后全部更換飼糧對羔羊應(yīng)激較大，在應(yīng)激期內(nèi)影響了羔羊生長發(fā)育[19-20]，試驗2組在斷奶后3和9 d血清ALP活性與試驗1組差異不顯著，僅在第15天顯著降低，可能是因為斷奶應(yīng)激對生長發(fā)育的影響在短期內(nèi)不明顯，也可能是因為TMR蛋白質(zhì)含量較羔羊料低，蛋白質(zhì)代謝效率低[24]，斷奶后長時間飼喂TMR對蛋白質(zhì)代謝影響較大。試驗1組羔羊血清中ALP活性在第0、3天顯著低于第15天，可能是因為首次分組采血對羔羊產(chǎn)生了應(yīng)激，隨著應(yīng)激逐漸緩解，血清ALP活性逐漸上升。試驗2組羔羊雖然在各時間點間無顯著差異，但血清中ALP活性低于試驗3組，可能是因為試驗2組內(nèi)個體差異較大。試驗3組羔羊在斷奶后第3天血清ALP活性最低，第9天恢復(fù)到斷奶前水平，說明斷奶應(yīng)激期內(nèi)飼喂50% TMR+50%羔羊料更有利于羔羊生長發(fā)育。

ALT主要存在于肝臟中，AST存在于更多組織中，主要是心臟和骨骼肌，其次是肝臟，可作為檢測組織損傷的敏感指標(biāo)[1]。ALT和AST作為非特異性細(xì)胞內(nèi)功能酶，正常時在血清中的活性較低，但當(dāng)組織細(xì)胞受損或細(xì)胞膜通透性升高時，會造成血清中ALT和AST活性升高[1,25]。張慶坤等[21]研究不同斷奶日齡對仔豬血清酶活性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)14日齡斷奶仔豬斷奶后7 d血清中ALT和AST活性顯著升高。周向梅等[17]研究仔豬斷奶應(yīng)激對血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)血清AST活性斷奶后7 d時比斷奶時高，ALT活性變化不顯著。范超等[12]研究斷奶應(yīng)激對奶水牛犢牛血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)與斷奶前1 d相比，犢牛血清中ALT活性在斷奶后1、14 d顯著升高，血清AST活性差異不大。以上研究說明，斷奶應(yīng)激會影響幼畜血清中ALT和AST的活性。本試驗中，斷奶應(yīng)激對羔羊血清中ALT活性無顯著影響，說明羔羊60日齡斷奶不會影響血清中ALT活性，與周向梅等[17]研究結(jié)果類似。斷奶應(yīng)激顯著影響了血清AST活性，且在斷奶后15 d羔羊血清中AST活性最高，試驗2組羔羊在第15天血清中AST活性最高，顯著高于第3天，說明斷奶應(yīng)激對組織的損傷在2周內(nèi)難以恢復(fù)。試驗2組羔羊血清中AST活性在第3和15天高于試驗1組和3組，說明斷奶后飼喂TMR相對于飼喂50% TMR+50%羔羊料對組織損傷較大。

3.4 斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊血清中炎癥因子指標(biāo)的影響

IL-1β和TNF-α是由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子，可誘導(dǎo)急性期反應(yīng)，對中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞有刺激作用，在組織異常合成可導(dǎo)致發(fā)熱，造成炎癥反應(yīng)[11]。TNF-α與IL-1β具有協(xié)同作用，通過降低局部血流速度使血液聚集在滲漏的血管中，從而增加淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的邊緣化，然后白細(xì)胞在細(xì)胞因子和趨化因子的引導(dǎo)下外滲到炎癥組織中[26]。Kim等[27]研究發(fā)酵豆粕部分替代豆粕對斷奶犢牛應(yīng)激指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)2組犢牛斷奶后血清中TNF-α和IL-1β含量均升高，表明斷奶作為應(yīng)激源可能會誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。Kim等[28]研究斷奶應(yīng)激對犢牛血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)犢牛血清TNF-α含量在斷奶后3 d顯著升高。Zhang等[11]研究發(fā)現(xiàn)，羔羊斷奶應(yīng)激會造成血清IL-1β和TNF-α含量顯著增加。以上研究表明，斷奶應(yīng)激會導(dǎo)致幼畜發(fā)生炎癥反應(yīng)。本試驗中，試驗2、3組羔羊在斷奶后3 d血清中TNF-α和IL-1β含量顯著高于試驗1組，第9天與試驗1組無顯著差異，說明斷奶會導(dǎo)致羔羊發(fā)生炎癥反應(yīng)，且試驗2、3組血清TNF-α和IL-1β含量均在第3天最高，說明在斷奶后1周內(nèi)炎癥發(fā)應(yīng)最大，與以上研究結(jié)果一致。本研究中，試驗1組羔羊在第15天血清中TNF-α含量高于試驗2、3組，可能是因為試驗期間母羊頻繁擠奶，造成部分母羊乳房出現(xiàn)炎癥，羔羊采食有炎癥的母乳造成了血清中TNF-α含量升高。

IFN-γ是由T淋巴細(xì)胞和自然殺傷(NK)細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子，能維持和促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的增值，參與細(xì)胞免疫應(yīng)答，進(jìn)而調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，當(dāng)機(jī)體受到刺激時會導(dǎo)致IFN-γ含量升高[29-31]。王莉梅等[32]研究運(yùn)輸應(yīng)激對安格斯牛血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)運(yùn)輸后的血清IFN-γ含量顯著高于運(yùn)輸前。高艷霞等[13]研究斷奶應(yīng)激對犢牛血清生化指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)犢牛斷奶后血清IFN-γ含量有上升趨勢，說明犢牛斷奶應(yīng)激刺激了T淋巴細(xì)胞做出應(yīng)答。以上研究表明，應(yīng)激會影響到動物的免疫功能。本試驗中，試驗2組在第9天血清中IFN-γ含量高于試驗1、3組，且試驗2組在第9、15天的血清IFN-γ含量顯著高于第0和3天，說明飼喂TMR比50% TMR+50%羔羊料對羔羊免疫力影響較大，且對免疫力的影響在2周內(nèi)難以恢復(fù)。

3.5 斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊血清中腸道屏障指標(biāo)的影響

D-乳酸是由腸道微生物產(chǎn)生的，哺乳動物不會產(chǎn)生D-乳酸，也不具備代謝D-乳酸的酶，當(dāng)腸黏膜受損、通透性增加時，腸微生物產(chǎn)生的D-乳酸會進(jìn)入血液，導(dǎo)致血清中D-乳酸含量增加，故血清D-乳酸含量可反映腸道健康狀態(tài)[33]。DAO是由腸上皮分泌的細(xì)胞酶，存在于腸血管上層的絨毛細(xì)胞中，當(dāng)腸黏膜受損時，DAO被釋放進(jìn)入血液，因此血清DAO活性常被作為腸道完整性的標(biāo)志物[34-35]。關(guān)于斷奶應(yīng)激對幼畜血清中腸道屏障指標(biāo)的研究主要集中在單胃動物上，反芻動物較少。欒兆雙等[33]研究斷奶應(yīng)激對仔豬腸形態(tài)、黏膜屏障的影響，結(jié)果表明與哺乳組相比，斷奶組仔豬血清D-乳酸含量和DAO活性在斷奶后1、3 d均顯著升高。錢仲倉等[36]研究早期斷奶對仔豬應(yīng)激、腸形態(tài)和腸通透性的影響，仔豬斷奶后血清D-乳酸含量和DAO活性斷奶后1 d迅速增加。Xiao等[37]研究斷奶應(yīng)激對仔豬腸道形態(tài)和通透性的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)仔豬斷奶后3、7 d血清DAO活性顯著升高。胡彩虹等[38]研究發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)飼糧組仔豬斷奶后第7、15天血漿中D-乳酸含量和DAO活性顯著高于哺乳組。以上研究表明，斷奶應(yīng)激會引起仔豬黏膜屏障受損，使腸通透性增加。本試驗中，試驗2、3組羔羊在斷奶后血清中D-乳酸含量和DAO活性均呈先升高后降低趨勢，且均在斷奶后第3 天達(dá)到最大值，在第15天恢復(fù)到正常水平，說明斷奶應(yīng)激造成的腸道損傷在2周內(nèi)可以恢復(fù)。試驗1組羔羊在第9天血清中D-乳酸含量和DAO活性高于試驗3組，可能是因為試驗期間母羊頻繁擠奶，部分母羊乳房出現(xiàn)炎癥，且擠奶應(yīng)激影響了母羊胃腸道健康，羔羊采食有炎癥的母乳造成血清D-乳酸含量和DAO活性升高。試驗2組羔羊在第3天血清中D-乳酸含量和DAO活性顯著高于試驗1組，在第15天血清DAO活性顯著高于試驗1、3組，說明斷奶后飼喂TMR相較于50% TMR+50%羔羊料對羔羊腸道損傷較大，使腸道通透性變大。

ET是革蘭陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖成分，大量存于機(jī)體腸腔內(nèi)，對宿主是有害的，腸道是抵御ET的第1道防線，正常情況下ET難以大量進(jìn)入血循環(huán)，當(dāng)腸道屏障功能障礙時，大量ET可通過受損屏障進(jìn)入肝臟，當(dāng)超過肝臟代謝能力時，ET會進(jìn)入血循環(huán)，因此血液中ET含量可作為檢測腸道屏障完整性的指標(biāo)[39-40]。龐敏[41]研究發(fā)現(xiàn)仔豬斷奶前期血清ET含量顯著升高，說明斷奶應(yīng)激損傷了腸道黏膜。張志浩[42]研究氧化應(yīng)激對肉雞腸道黏膜屏障功能的影響，結(jié)果表明氧化應(yīng)激使血漿中ET含量顯著增加。本試驗中，試驗2、3組羔羊在斷奶后血清中ET含量呈先升高后降低趨勢，均在第15天血清中ET含量恢復(fù)到正常水平，說明斷奶應(yīng)激造成的腸道損傷在2周內(nèi)可以恢復(fù)。試驗2組血清ET含量在第3天顯著高于其他2組，且在第3天達(dá)到最高水平；試驗3組在第9天顯著高于其他2組，且在第9天達(dá)到最高水平，說明斷奶后飼喂TMR對腸道損傷較大，飼喂50% TMR+50%羔羊料對腸道損傷較緩和。

3.6 斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊血清中免疫球蛋白含量的影響

免疫球蛋白含量在一定程度上能夠反映幼齡反芻動物的免疫能力，主要包括IgG、IgA、IgM，其中以IgG含量最高，在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中起主要作用[43-44]。高艷霞等[13]研究斷奶應(yīng)激對犢牛血清免疫的影響，發(fā)現(xiàn)斷奶后血清中免疫球蛋白含量均有不同程度的下降，表明斷奶應(yīng)激導(dǎo)致犢牛免疫力降低。趙會利等[45]研究發(fā)現(xiàn)斷奶應(yīng)激導(dǎo)致犢牛血清IgG含量有所下降。王莉梅等[32]研究運(yùn)輸應(yīng)激對安格斯牛血清免疫球蛋白含量的影響，發(fā)現(xiàn)運(yùn)輸后血清中IgG、IgA含量顯著降低，IgM含量呈降低趨勢。以上研究結(jié)果說明，應(yīng)激會導(dǎo)致幼畜血液中免疫球蛋白含量下降。本試驗中，試驗2、3組羔羊血清中IgG、IgA、IgM含量均在斷奶后15 d達(dá)到最低，說明羔羊斷奶后2周內(nèi)免疫力未得到較好恢復(fù)，由此在斷奶應(yīng)激期內(nèi)提高羔羊飼養(yǎng)管理水平對緩解斷奶應(yīng)激、促進(jìn)羔羊生長發(fā)育至關(guān)重要。試驗2組羔羊血清IgA和IgM含量在第9和15天顯著低于試驗1組，試驗3組在第9天與試驗1組無顯著差異，說明斷奶后飼喂TMR對羔羊免疫力影響較大，斷奶后飼喂50% TMR+50%羔羊料有助于緩解斷奶應(yīng)激，對羔羊免疫力影響不大，可能是因為TMR中NDF含量高于顆粒料，較高的NDF含量會使瘤胃快速充滿，減少營養(yǎng)成分的攝入，影響動物的生長發(fā)育，進(jìn)而可能會影響自身免疫力。

4 結(jié) 論

斷奶應(yīng)激期內(nèi)不同飼喂方式對羔羊斷奶應(yīng)激影響較大，在哺乳期補(bǔ)飼羔羊料的基礎(chǔ)上，斷奶后飼喂50% TMR+50%羔羊料可以緩解斷奶應(yīng)激，更有利于羔羊健康和生長發(fā)育。