乳酸桿菌的分離鑒定及其對皇竹草青貯飼料發(fā)酵品質(zhì)的影響

謝婷霞 曹雪笛 譚玉蘭 李 果 晉 蕾 劉書亮 敖曉琳 趙 珂* 鄒立扣*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)資源學(xué)院，成都 611130；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，雅安 615014)

青貯飼料作為牲畜的重要飼料之一，通常是將水分含量較多的植物性飼料經(jīng)切碎后，在密閉缺氧的條件下，通過厭氧乳酸菌的發(fā)酵作用，同時抑制各種雜菌的繁殖而得到的一種粗飼料[1]。經(jīng)青貯處理后的飼料，不僅能延長保存時間，還能最大程度保留其營養(yǎng)價值，在年度均衡供應(yīng)優(yōu)質(zhì)飼料中起重要作用。同時，青貯還能軟化飼料中的植物纖維，改善其適口性[2]。

研究發(fā)現(xiàn)，微生物添加劑能有效改善青貯飼料的營養(yǎng)價值和飼用價值[3]，其中乳酸桿菌能在厭氧環(huán)境下良好生長，青貯過程中添加乳酸桿菌能抑制有害菌的生長，降低細胞的有氧消耗，從而減少青貯原料的養(yǎng)分損失[4]。乳酸桿菌種類多樣，不同的乳酸桿菌在青貯過程中具有不同的作用。王思偉等[5]研究發(fā)現(xiàn)，添加枯草芽孢桿菌、嗜酸乳桿菌和產(chǎn)脘假絲酵母的混合添加劑可以顯著降低青貯飼料pH和氨態(tài)氮含量，提高乳酸和丙酸含量，從而抑制有害菌的生長。孫志強等[6]研究發(fā)現(xiàn)，組合添加布氏乳桿菌和植物乳桿菌可以有效提高青貯飼料的有氧穩(wěn)定性，進而提高青貯品質(zhì)。不僅如此，不同的乳酸桿菌添加劑在青貯過程中還會改變微生物群落的結(jié)構(gòu)和多樣性，對青貯飼料的發(fā)酵品質(zhì)有積極作用[7]。Wang等[8]在辣木青貯過程中添加乳酸菌，發(fā)現(xiàn)其在抑制有害細菌生長的同時提高了發(fā)酵品質(zhì)。李雁冰等[9]將鼠李糖乳桿菌和布氏乳桿菌添加至青貯黑麥草和青貯玉米中，發(fā)現(xiàn)其可以抑制有害真菌菌群的生長，從而防止腐敗的發(fā)生。

皇竹草(Pennisetumsinese)是隸屬于禾本科(Poaceae)、狼尾草屬(Pennisetum)的多年生直立叢生的草本植物，相比于狼尾草和象草具有營養(yǎng)豐富、產(chǎn)量高和適口性好等優(yōu)點，可作為草食動物的優(yōu)質(zhì)飼料來源[10]?；手癫菰诠庹粘渥?、濕潤的氣候條件下能夠更好地生長，較難做到全年均衡供應(yīng)；且皇竹草粗纖維含量較高，水溶性碳水化合物含量較低，直接青貯易腐爛且適口性不佳，難以獲得優(yōu)質(zhì)的青貯飼料[11]。因此，本研究以從黑麥草青貯飼料中分離到的3種乳酸桿菌應(yīng)用到皇竹草青貯發(fā)酵，研究其發(fā)酵品質(zhì)、營養(yǎng)成分及微生物多樣性的變化，篩選適宜青貯發(fā)酵的優(yōu)良菌株，旨在為皇竹草的高效利用以及青貯品質(zhì)的提升提供理論依據(jù)，并為進一步促進產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本試驗所用皇竹草于2020年12月刈割于四川省某市，長約1.5 m，留茬20 cm左右。參考張麗英[12]的方法，對皇竹草原料中的常規(guī)營養(yǎng)成分含量進行測定(表1)，其中干物質(zhì)含量為29.54%(鮮樣基礎(chǔ))，粗灰分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維和無氮浸出物含量分別為1.80%、7.51%、6.09%、41.04%、79.86%、49.19%和43.56%(干物質(zhì)基礎(chǔ))。

表1 皇竹草原料常規(guī)營養(yǎng)成分含量

1.2 乳酸桿菌的分離與鑒定

采集自然發(fā)酵的黑麥草青貯飼料樣品，向90 mL無菌生理鹽水中分別加入10 g樣品，充分混勻后用無菌生理鹽水進行梯度稀釋，依次稀釋至10-6g/mL，每個梯度設(shè)3個平行。然后，分別吸取100 μL不同濃度梯度的樣品稀釋液涂布于改良MRS(含CaCO3)培養(yǎng)基上，37 ℃下培養(yǎng)48 h。挑取有溶鈣圈的單菌落在MRS固體培養(yǎng)基中繼續(xù)劃線，進行分離純化，并通過革蘭氏染色鏡檢確定其形態(tài)特征。將純化后的菌落接種于MRS液體培養(yǎng)基中，經(jīng)37 ℃培養(yǎng)24 h后加入濃度為50%的等體積甘油，并于-20 ℃保存。

采用煮沸法提取菌株的DNA，使用細菌16S rRNA通用引物對菌株進行PCR擴增，將PCR產(chǎn)物送至成都有康生物科技有限公司進行測序，測序結(jié)果拼接后進行BLAST比對。

1.3 乳酸桿菌菌懸液的制備和產(chǎn)酸能力測定

將3株菌株活化后按1%接種量接入MRS液體培養(yǎng)基三角瓶中，于37 ℃、180 r/min條件下培養(yǎng)16～20 h，調(diào)整菌懸液600 nm吸光度(OD)值為0.80待用(菌落數(shù)約108CFU/mL)，取5 mL發(fā)酵液用pH計測定pH。

1.4 青貯試驗設(shè)計

試驗共設(shè)置1個對照組和3個試驗組，每組設(shè)3個重復(fù)。待皇竹草樣品晾曬至含水量為60%～70%時，用鍘草揉絲一體機粉碎樣品至1～2 cm，混合均勻。每組取切碎樣品80 kg，3個試驗組按青貯質(zhì)量的0.1%均勻噴灑菌懸液，其中LAB158組噴灑植物乳桿菌LAB158(LactobacillusplantarumLAB158)、MZN1組噴灑玉米乳桿菌MZN1(LactobacilluszeaeMZN1)、P-1-12組噴灑草本乳桿菌P-1-12(LactobacillusherbaceousP-1-12)，對照組則添加等量的無菌水，攪拌均勻后用打捆包膜一體機打包，室溫條件下避光密封儲藏。青貯60 d后取中部樣品混勻，每個樣品取500 g用于高通量測序，300 g樣品用于品質(zhì)測定。

1.5 青貯品質(zhì)測定

感官評定：參照王杰等[13]的感官評定標準，分別對皇竹草青貯飼料的色澤、氣味、質(zhì)地、水分和pH各方面具體情況打出相應(yīng)得分，最終得到綜合評分，按照得分76～100為優(yōu)質(zhì)、51～75分為良好、26～50分為一般和0～25分為劣等的標準得出皇竹草青貯飼料等級。

發(fā)酵品質(zhì)評定：取20 g青貯飼料樣品加入到裝有180 mL無菌水的三角瓶中，搖床(180 r/min,3 min)混勻后用4層紗布過濾，取出部分浸提液，利用pH計測定其pH；另取10 mL濾液離心(4 500×g,15 min)，采用高效液相色譜法測定上清液乳酸含量[14]。

營養(yǎng)成分含量測定：參考張麗英[12]的方法測定青貯飼料中干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、無氮浸出物、中性洗滌纖維、酸性洗滌纖維和粗灰分等含量，以此來反映該青貯飼料品質(zhì)的總體情況。

1.6 發(fā)酵菌群16S rRNA高通量測序

稱取0.5 g青貯飼料樣品，參考陶蓮等[15]的方法進行DNA的提取，并采用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的純度和濃度，取適量樣品于離心管中，使用無菌水稀釋樣品至1 ng/μL。以稀釋后的基因組DNA為模板，使用16S rRNA通用引物進行定量PCR檢測，產(chǎn)物使用1%濃度的瓊脂糖凝膠進行檢測[16]。將檢測合格的細菌DNA送于深圳華大基因科技服務(wù)有限公司，并采用Illumina HiSeq測序平臺進行高通量測序。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

首先用QIIME軟件對Illumina HiSeq平臺得到的原始數(shù)據(jù)進行過濾。將原始數(shù)據(jù)進行拼接、過濾，得到有效數(shù)據(jù)[17]；然后基于有效數(shù)據(jù)進行操作分類單元(operational taxonomic units,OTU)聚類和物種分類分析，并將OTU和物種注釋結(jié)合，從而得到每個樣品的OTU和分類譜系的基本分析結(jié)果；再對OTU進行豐富度、多樣性指數(shù)等分析，同時對物種注釋在各個分類水平上進行群落結(jié)構(gòu)的統(tǒng)計分析[18]。

用Excel 2007整理原始數(shù)據(jù)，再用SPSS 21.0軟件對營養(yǎng)成分含量數(shù)據(jù)及青貯飼料各處理樣品在門和屬水平上優(yōu)勢菌群的相對豐度數(shù)據(jù)進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法進行多重比較，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株分離鑒定結(jié)果

通過形態(tài)學(xué)鑒定和分子生物學(xué)鑒定，從黑麥草青貯樣品中獲得的3種乳酸桿菌分別是植物乳桿菌LAB158、玉米乳桿菌MZN1和草本乳桿菌P-1-12，菌懸液pH分別為4.5、4.8和4.2，菌株由本實驗室保存。分離到的菌株在MRS固體培養(yǎng)基上呈圓形乳白色單個菌落，菌落表面光滑，中央微凸(圖1)；經(jīng)革蘭氏染色呈紫色，顯微鏡下觀察菌株呈短桿狀，無芽孢，形態(tài)學(xué)均鑒定為乳酸桿菌。將分離到的菌株送檢測序后，經(jīng)BLAST比對，分離出的菌株分別與NCBI數(shù)據(jù)庫中序列相似度高達100%。

圖1 3種乳酸桿菌的形態(tài)觀察

2.2 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料感官評定的影響

不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料感官評定的影響見表2，LAB158組、P-1-12組和MZN1組在色澤評分和pH評分上均顯著高于對照組(P<0.05)，且LAB158組最高；與對照組相比，LAB158組和P-1-12組在氣味評分上也有所提高，但未達到顯著水平(P>0.05)；而3個試驗組在質(zhì)地評分和水分評分上均顯著低于對照組(P<0.05)?？偟脕碚f，LAB158組和P-1-12組綜合評分顯著高于對照組(P<0.05)，MZN1組綜合評分高于對照組但差異不顯著(P>0.05)，4組的感官評定等級均為一般。

表2 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料感官評定的影響

2.3 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料營養(yǎng)成分的影響

由表3可知，試驗組皇竹草青貯飼料中干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分和乳酸含量均顯著高于對照組(P<0.05)；LAB158組青貯飼料中的中性洗滌纖維和酸性洗滌纖維含量最高，且顯著高于MZN1組、P-1-12組和對照組(P<0.05)；對照組青貯飼料中無氮浸出物含量最低，但各組間差異并不顯著(P>0.05)；而對照組青貯飼料中粗纖維含量最高，僅顯著高于LAB158組(P<0.05)，與MZN1組和P-1-12組差異不顯著(P>0.05)。

表3 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料常規(guī)營養(yǎng)成分含量的影響

此外，由表4可知，在各組的皇竹草青貯飼料中，均檢測出17種氨基酸，其中LAB158組青貯飼料中總氨基酸含量最高，顯著高于MZN1組(P<0.05)，但與P-1-12組和對照組無顯著差異(P>0.05)；LAB158組和對照組青貯飼料中谷氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸和精氨酸等5種氨基酸含量顯著高于MZN1組和P-1-12組(P<0.05)；LAB158組青貯飼料中纈氨酸含量顯著高于MZN1組和P-1-12組(P<0.05)；LAB158組和對照組青貯飼料中亮氨酸含量顯著高于P-1-12組(P<0.05)；LAB158組青貯飼料中脯氨酸含量顯著高于MZN1組和P-1-12組(P<0.05)；LAB158組青貯飼料中甘氨酸含量顯著高于其他3組(P<0.05)；LAB158組青貯飼料中丙氨酸和半胱氨酸含量顯著高于對照組(P<0.05)；除此之外，對照組青貯飼料中蛋氨酸、組氨酸和蘇氨酸含量顯著高于3個試驗組(P<0.05)，對照組青貯飼料中酪氨酸和絲氨酸含量顯著高于MZN1組和P-1-12組(P<0.05)。

表4 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料氨基酸含量的影響(干物質(zhì)基礎(chǔ))

2.4 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料微生物多樣性的影響

2.4.1 Alpha多樣性分析

由表5可知，對皇竹草青貯開封后進行微生物Alpha多樣性分析，所有組的覆蓋度均能達到99.80%以上，說明測序深度基本能全面覆蓋微生物的核心組成。相比于對照組，MZN1組和LAB158組的Chao1指數(shù)和Ace指數(shù)均有所升高，說明菌群的豐富度升高；同時，MZN1組和LAB158組的Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)也有所升高，說明菌群的多樣性升高，P-1-12組則相反。

表5 不同樣本的Alpha多樣性分析

2.4.2 基于門水平的微生物群落結(jié)構(gòu)

由圖2和表6可知，基于門水平對皇竹草青貯飼料微生物群落進行結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，試驗組和對照組的微生物群落組成存在差異，對照組以厚壁菌門(Firmicutes)、變形菌門(Proteobacteria)以及擬桿菌門(Bacteroidetes)為主；而試驗組以厚壁菌門和變形菌門為主，擬桿菌門相對豐度大幅下降?？傮w而言，厚壁菌門和變形菌門為優(yōu)勢菌門，但在各組中相對豐度存在差異。其中，LAB158組、P-1-12組和MZN1組厚壁菌門的相對豐度分別為92.50%、90.83%和84.48%，均顯著高于對照組的71.89%(P<0.05)；而LAB158組、P-1-12組和MZN1組變形菌門的相對豐度分別為6.88%、8.53%和13.64%，均顯著低于對照組的18.88%(P<0.05)。這說明在皇竹草青貯飼料中添加植物乳桿菌LAB158、玉米乳桿菌MZN1和草本乳桿菌P-1-12可以提高厚壁菌門所占比例，降低變形菌門所占比例。

表6 不同乳桿菌對皇竹草青貯飼料優(yōu)勢菌門相對豐度的影響

Acidobacteria：酸桿菌門；Actinobacteria：放線菌門；Bacteroidetes：擬桿菌門；Proteobacteria：變形菌門；Firmicutes：厚壁菌門；Cyanobacteria：藍藻門；Unclassified：未分類；Other：其他。

2.4.3 基于屬水平的微生物群落結(jié)構(gòu)

由圖3和表7可知，基于屬水平對皇竹草青貯飼料微生物群落進行結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn)，各組中絕對優(yōu)勢菌屬均為乳桿菌屬(Lactobacillus)，對照組、LAB158組、P-1-12組和MZN1組中乳桿菌屬相對豐度分別達到85.03%、70.30%、90.25%和81.45%。對照組的優(yōu)勢菌屬還有類芽孢桿菌屬(Paenibacillus)，相對豐度為3.31%，顯著高于LAB158組、P-1-12組和MZN1組(P<0.05)；LAB158組的優(yōu)勢菌屬還有鞘氨醇桿菌屬(Sphingobacterium)，相對豐度為5.43%，顯著高于對照組、P-1-12組和MZN1組；P-1-12組和MZN1組其次的優(yōu)勢菌屬均為沙雷氏菌屬(Serratia)，相對豐度分別為3.54%和4.69%，顯著高于對照組(P<0.05)，且MZN1組還顯著高于LAB158組(P<0.05)。除此之外，MZN1組魏斯氏菌屬(Weissella)和乳球菌屬(Lactococcus)相對豐度最高，而對照組明串珠菌屬(Leuconostoc)相對豐度最高。

表7 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料優(yōu)勢菌屬相對豐度的影響

Unclassified：未分類；Flavobacterium：黃桿菌屬；Brevundimonas：短波單胞菌屬；Alcaligenes：產(chǎn)堿桿菌屬；Lactobacillus：乳桿菌屬；Bacillus：芽孢桿菌屬；Lactococcus：乳球菌屬；Ochrobactrum：蒼白桿菌屬；Paenibacillus：類芽孢桿菌屬；Pedobacter：土地桿菌屬；Providencia：普羅威登斯菌屬；Devosia：德沃斯氏菌屬；Weissella：魏斯氏菌屬；Serratia：沙雷氏菌屬；Sphingobacterium：鞘氨醇桿菌屬；Pseudochrobactrum：假蒼白桿菌屬；Stenotrophomonas：寡養(yǎng)單胞菌屬；Leuconostoc：明串珠菌屬；Other：其他。

3 討 論

3.1 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料感官評定的影響

青貯飼料品質(zhì)優(yōu)劣首先從感官方面進行評定，本試驗在青貯過程中添加植物乳桿菌LAB158、玉米乳桿菌MZN1和草本乳桿菌P-1-12之后，色澤評分和pH評分均顯著高于對照組，氣味評分也有所提高，而質(zhì)地評分和水分評分上均顯著低于對照組。產(chǎn)生這些變化的原因可能是因為青貯飼料在發(fā)酵過程中，通過乳酸桿菌破壞了皇竹草細胞壁結(jié)構(gòu)，細胞內(nèi)容物大量流出，與微生物進行各種反應(yīng)，從而導(dǎo)致色澤、氣味、質(zhì)地和水分等發(fā)生變化。吳進東[19]研究表明，相比于對照組，添加不同種類的添加劑對于青貯飼料的色澤、氣味、質(zhì)地和pH會有所提高，但影響并不大。

3.2 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料營養(yǎng)成分的影響

原料中較多的有害微生物和發(fā)酵過程中營養(yǎng)物質(zhì)的損失是影響青貯發(fā)酵品質(zhì)的主要原因，在發(fā)酵過程中添加乳酸桿菌可使青貯飼料快速積累乳酸且降低pH，抑制有害菌的生長，從而減少有害菌生長所產(chǎn)生的有氧消耗，達到降低青貯原料養(yǎng)分損失的目的[5,20]。本研究發(fā)現(xiàn)，青貯過程中添加乳酸桿菌能使其提前達到發(fā)酵所需乳酸菌數(shù)量，從而迅速降低pH，酸性環(huán)境的形成使得試驗組中乳酸含量顯著高于對照組，同時乳酸還會使發(fā)酵過程中氣味發(fā)生變化[21]。除此之外，添加不同乳酸桿菌均能顯著提高皇竹草青貯飼料中的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量，說明青貯過程中乳酸桿菌的添加使其營養(yǎng)物質(zhì)得到較好的保存；而試驗組粗纖維含量均低于對照組，說明乳酸桿菌的添加能更好地降解部分細胞壁成分，從而有效提高青貯質(zhì)量。Oliveira等[22]在苜蓿青貯過程中分別添加了同型乳桿菌和異型乳桿菌，發(fā)現(xiàn)均能提高乳酸的生成，降低pH?？芙瓭萚23]研究也表明，植物乳桿菌能促進乳酸生成，降低pH，使蛋白質(zhì)水解酶活性在酸性環(huán)境中得到抑制，進而減少干物質(zhì)和粗蛋白質(zhì)的損失。塔娜等[24]在無芒雀麥青貯過程中也發(fā)現(xiàn)，同型發(fā)酵乳酸菌和異性發(fā)酵乳酸菌均可抑制牧草蛋白質(zhì)的降解，2種菌混合添加使用效果最好。除本試驗添加乳酸桿菌能增加粗脂肪含量外，寇江濤等[23]在皇竹草青貯中加木聚糖酶，Hou等[25]在牧草青貯中添加纖維復(fù)合酶均顯著提高了粗脂肪含量。

蛋白質(zhì)是青貯飼料中重要的營養(yǎng)物質(zhì)，而蛋白質(zhì)中氨基酸的含量是評價蛋白質(zhì)品質(zhì)的重要指標。本研究中，添加乳酸桿菌之后青貯飼料中總氨基酸含量與對照組相比無顯著性差異，而甘氨酸、丙氨酸和半胱氨酸均以LAB158組最高，且顯著高于對照組。其中，甘氨酸和丙氨酸為呈甘味的鮮味氨基酸，其含量的增加可能會提高青貯飼料的酸甜芳香味，從而提高其適口性；而半胱氨酸具有促進細胞氧化還原的作用，半胱氨酸含量的提高能增強機體的抗逆性功能。另外，3個試驗組青貯飼料中蛋氨酸和蘇氨酸等含量顯著低于對照組，這可能與青貯飼料中微生物群落的物質(zhì)轉(zhuǎn)化代謝有關(guān)，其變化原因有待于下一步利用宏基因組學(xué)等手段進行研究。

3.3 不同乳酸桿菌對皇竹草青貯飼料微生物多樣性的影響

青貯過程是一個極其復(fù)雜的微生物共生體系，由參與其中的多種微生物的結(jié)構(gòu)與多樣性影響著發(fā)酵的品質(zhì)與營養(yǎng)成分[26]。參加青貯過程的微生物除原料上附著的微生物和引起青貯發(fā)酵的微生物外，還有能引起青貯腐敗變質(zhì)的微生物[27]。Alpha多樣性主要通過Chao1指數(shù)和Ace指數(shù)來反映微生物群落的豐富度，以Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)反映物種的多樣性。張娟等[28]在研究圓葉決明中添加蘋果酸和嗜酸乳桿菌青貯60 d后發(fā)現(xiàn)，添加蘋果酸和嗜酸乳桿菌后，Ace指數(shù)和Shannon指數(shù)均高于對照組。本試驗中，MZN1組和LAB158組OTU數(shù)量、Chao1指數(shù)、Ace指數(shù)、Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)均高于對照組，表明MZN1組和LAB158組的微生物群落豐富度和物種多樣性均較高，而P-1-12組則都低于對照組。

通過高通量測序技術(shù)對樣品進行16S rRNA測序，發(fā)現(xiàn)各組的優(yōu)勢菌門均為厚壁菌門，其次為變形菌門。其中，厚壁菌門是革蘭氏陽性菌，主要包括芽孢、支原體和非產(chǎn)芽孢菌群，大多數(shù)芽孢桿菌可降解纖維素和蛋白質(zhì)等大分子化合物[29]。變形菌門是革蘭氏陰性菌，主要包括大腸桿菌、弧菌和螺旋桿菌等病原菌，大部分病原菌是威脅禽畜健康存活的主要因素[30]。在皇竹草青貯過程中添加乳酸桿菌提高了厚壁菌門的相對豐度，并降低了變形菌門的相對豐度，說明添加乳酸桿菌能降低有害微生物的數(shù)量，從而降低致病菌對禽畜健康的影響。

在屬水平上，對照組和3個試驗組的優(yōu)勢菌屬均為乳桿菌屬，說明在青貯發(fā)酵后期起主要作用的是乳桿菌屬[31]，乳桿菌屬在發(fā)酵過程中不僅抑制了有害細菌的生長，同時促進了乳酸的生成，改變了青貯飼料的色澤和氣味，使其適口性更強。Yang等[32]研究表明，在青貯過程中乳酸的含量與乳桿菌屬相對豐度呈正相關(guān)。本試驗3個試驗組青貯飼料中乳酸含量均顯著高于對照組，而MZN1組和LAB158組中乳桿菌屬相對豐度低于對照組，與張娟等[28]結(jié)論相似，可能是因為植物乳桿菌和玉米乳桿菌的添加使pH下降更快，較強的酸性環(huán)境反而抑制乳酸桿菌活性。除此之外，試驗組中普羅威登斯菌屬(Providencia)相對豐度顯著低于對照組，普羅威登斯菌屬屬于條件致病菌，常引起腹瀉和腸道外感染[33]；而魏斯氏菌屬和鞘氨醇桿菌屬等在試驗組中相對豐度較高，說明添加乳酸桿菌可以有效改變微生物群落組成?？偟脕碚f，皇竹草青貯過程中添加不同乳酸桿菌能改變其微生物群落的豐富度和物種多樣性，形成不同的優(yōu)勢菌群，同時還能降低雜菌的數(shù)量，雜菌營養(yǎng)價值較低且可能會對禽畜的健康產(chǎn)生不利影響，雜菌數(shù)量的降低還能相應(yīng)提高青貯飼料的品質(zhì)[29]。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，3種乳酸桿菌均能有效改善皇竹草青貯飼料感官評定的綜合評分，提高營養(yǎng)成分含量，改變微生物優(yōu)勢種群的種類，從而提高青貯飼料的品質(zhì)。綜合考量，以添加植物乳桿菌LAB158菌株的青貯效果最佳。