• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    武夷菌素對活體微生物農(nóng)藥的影響

    2022-07-09 10:00:50于博馳張克誠施李鳴楊淼泠呂朝陽葛蓓孛
    中國生物防治學(xué)報 2022年3期
    關(guān)鍵詞:哈茨僵菌白僵菌

    于博馳,張克誠,施李鳴, 楊淼泠,呂朝陽,葛蓓孛

    (中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所,北京 100193)

    武夷菌素是從不吸水鏈霉菌武夷變種StreptomycesalbulusCK-15代謝產(chǎn)物中分離得到的一種廣譜、高效和低毒的農(nóng)用抗生素[1],對蔬菜、果樹等多種作物真菌病害防治效果明顯,可有效防治黃瓜白粉病、番茄葉霉病等真菌病害,同時對作物生長還有一定的促進(jìn)作用[2],并以其良好的防治效果在農(nóng)業(yè)上得到了廣泛的應(yīng)用,創(chuàng)造了良好的社會和經(jīng)濟(jì)效益[3]。武夷菌素毒性測定結(jié)果表明其毒性分級為低毒類,對人、畜低毒,對環(huán)境生物安全。孫延忠對武夷菌素的作用機(jī)制進(jìn)行了研究,結(jié)果表明它可以改變菌絲體細(xì)胞膜的透性和抑制菌絲蛋白質(zhì)的合成,破壞菌絲體細(xì)胞結(jié)構(gòu),造成菌絲原生質(zhì)滲漏,致使菌絲畸形生長,從而降低病原菌的致病力,同時能夠誘導(dǎo)植株對病原菌產(chǎn)生抗性,從而達(dá)到防治病害的效果[4]。

    微生物源農(nóng)藥按成分可分為活體[5]和代謝產(chǎn)物[6]兩類。代謝產(chǎn)物類農(nóng)藥包括中生菌素[7]、井岡霉素[8]、阿維菌素[9]等,活體微生物農(nóng)藥主要包括金龜子綠僵菌Metarhiziumanisopliae[10]、球孢白僵菌Beauveria bassiana[11]、綠色木霉Trichodermaviride[12]、哈茨木霉Trichodermaharzianum[13]和淡紫擬青霉Paecilomyces lilacinus[14]等。在實際使用過程中,由于在植物的不同生長時期,或者同一時期發(fā)生的不同病害必然導(dǎo)致在同一株植株上使用不同的微生物農(nóng)藥,那么這些代謝產(chǎn)物類農(nóng)藥與活體微生物農(nóng)藥之間的相互影響目前還沒見相關(guān)的報道,值得進(jìn)一步研究討論。

    本研究以牛津杯抑菌測試法[15]探究武夷菌素對球孢白僵菌,金龜子綠僵菌的影響,以菌絲生長抑制法[16]探究武夷菌素對綠色木霉、哈茨木霉、淡紫擬青霉菌絲生長率的影響,本研究對指導(dǎo)武夷菌素及活體微生物農(nóng)藥的田間用藥,為生物防治技術(shù)集成提供理論基礎(chǔ),具有重要的意義。

    1 材料與方法

    1.1 供試菌種

    淡紫擬青霉Paecilomyceslilacinus(Thorn.)Samson:山東綠隴生物技術(shù)有限公司提供;綠色木霉Trichodermaviride:微元生物有限公司提供;金龜子綠僵菌Metarhiziumanisopliae2-2和球孢白僵菌Beauveriabassiana105:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所草地植保實驗室提供;哈茨木霉Trichoderma harzianum:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所生物防治研究室提供。

    1.2 供試試劑和培養(yǎng)基

    高保真KOD-plus DNA聚合酶購自日本TOYOBO公司;真菌DNA提取緩沖液:量取5 mL 1 mol/L Tris-HCl(pH 8.0),2 mL 5 mol/L氯化鈉,0.4 mL 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0),5 mL 20% SDS,加ddH2O定容到 50 mL混勻;武夷菌素發(fā)酵液:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所農(nóng)用抗生素組保存并提供。PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯(煮汁)200 g,葡萄糖20 g,瓊脂15 g;武夷菌素發(fā)酵培養(yǎng)基:玉米粉30 g,黃豆粉20 g,葡萄糖20 g,氯化銨4 g,碳酸鈣3 g。

    1.3 試驗儀器

    Tanon-1600型凝膠成像儀,購自上海天能科技有限公司;Sigma 1-14型離心機(jī),購自德國Sigma公司;RS-232型搖床,購自上海智城分析儀器制造有限公司;DYY-6C型電泳儀,購自北京市六一儀器廠;Sigma 1-14型離心機(jī),購自德國Sigma公司;DW-86W100型超低溫冰箱,購自青島海爾特種電器有限公司;牛津杯內(nèi)徑(6.0±0.1)mm,外徑(7.8±0.1)mm,高(10.0±0.1)mm;索尼數(shù)碼相機(jī),型號Sony DSC-T1。

    1.4 武夷菌素對真菌孢子類的抑制

    1.4.1 武夷菌素發(fā)酵液的制備 真菌懸浮液的制備:將真菌在PDAY培養(yǎng)基上進(jìn)行平板劃線,28 ℃培養(yǎng)72 h,用蒸餾水4 mL將孢子洗下來,4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩N湟木氐闹苽洌簩⒔臃N的武夷菌素發(fā)酵培養(yǎng)基放置于28 ℃恒溫箱中培養(yǎng)64 h,濾紙過濾,再濃縮5倍,進(jìn)行高效液相色譜效價測定,為20275 mg/L。

    1.4.2 抑菌試驗步驟 待制備好的PDA培養(yǎng)基冷卻至40 ℃左右,往錐形瓶中加入保存好的菌液100 μL,搖勻;倒平板,每板倒入15 mL培養(yǎng)基;將武夷菌素用蒸餾水稀釋至2000 mg/L,1500 mg/L,1000 mg/L,500 mg/L備用;用鑷子將無菌的牛津杯輕輕放入培養(yǎng)皿中,吸取250 μL不同濃度武夷菌素加至牛津杯中,每組3個重復(fù),放置28 ℃恒溫培養(yǎng),注意操作過程中不要將菌懸液溢出牛津杯外。待平板中開始形成清晰抑菌圈時進(jìn)行測量,用十字測量法通過DIGITAL CALIPER電子數(shù)量游標(biāo)卡尺進(jìn)行測量,每組3個重復(fù),每個平板抑菌圈用十字交叉法進(jìn)行測量,最終取6個數(shù)據(jù)的平均值,記錄試驗數(shù)據(jù)。

    1.4.3 測量最小抑菌濃度 在500~2000 mg/L抑菌圈的測量數(shù)據(jù)上,再次以不同武夷菌素濃度處理,找到生防菌的最小抑菌濃度(MIC),即能產(chǎn)生透明抑菌圈的最小抑菌劑濃度定為MIC,其判定標(biāo)準(zhǔn)為:在該濃度下抑菌圈直徑大于或等于牛津杯直徑[17]。

    1.5 武夷菌素對真菌菌絲生長率的抑制

    1.5.1 菌絲生長速率法測試步驟 在工作臺無菌條件下用過濾薄膜過濾武夷菌素20 mL于離心管中待用。將100 mL規(guī)格PDA培養(yǎng)基放置微波爐加熱,待冷至40 ℃時加入已除菌的武夷菌素分別為1.25 mL(25 mg/L),2.5 mL(50 mg/L),3.5 mL(75 mg/L)和5 mL(100 mg/L),將已加入除菌武夷菌素的PDA培養(yǎng)基混合均勻,倒板,每個平板15 mL,靜置冷卻,每組安排3個重復(fù);在培養(yǎng)72 h后的金龜子綠僵菌、球孢白僵菌、淡紫擬青霉菌落的相同直徑上用打孔器打菌餅并接到已冷卻的含藥培養(yǎng)基中心,在28 ℃恒溫箱中靜置培養(yǎng)。在真菌的生長過程中總共測3次,待對照組培養(yǎng)基中真菌長滿整個培養(yǎng)基平板時為最后一次,用十字交叉法測量菌落直徑,取平均值并計算抑菌率。抑制率=(對照組菌落直徑―試驗組菌落直徑)/對照組菌落直徑

    1.5.2 測量最小抑菌濃度 在25~100 mg/L菌絲生長速率法的測量數(shù)據(jù)上,再次細(xì)分不同的武夷菌素濃度,找到3種生防真菌的最小抑菌濃度。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 武夷菌素對真菌孢子的抑菌結(jié)果分析

    武夷菌素對生防菌細(xì)菌和真菌孢子的抑制試驗結(jié)果顯示:武夷菌素在高濃度處理下(500~2000 mg/L)對球孢白僵菌的抑制作用顯著大于金龜子綠僵菌在低濃度武夷菌素處理下。武夷菌素對生防菌真菌孢子的最小抑制濃度測定結(jié)果顯示:球孢白僵菌的最小抑菌濃度為400 mg/L,金龜子綠僵菌的最小抑菌濃度為200 mg/L,這可能是由于受到金龜子綠僵菌抑菌圈邊界不夠清晰的問題的影響(表1)。

    表1 抑菌圈法測定不同濃度梯度武夷菌素對球孢白僵菌和金龜子綠僵菌的抑菌效果Table 1 Bacteriostatic zone method to determine the antibacterial effect of different concentration gradient Wuyiencin on B.bassiana and M.anisopliae.

    在實際應(yīng)用中,金龜子綠僵菌防治范圍廣,可防治8目30科200余種害蟲。主要用于防治金龜子、象甲、金針蟲、蛾蝶幼蟲、蝽和蚜蟲等害蟲。球孢白僵菌主要用于防治松毛蟲、玉米螟、蠐螬、蝗蟲、茶小綠葉蟬、蚜蟲、飛虱等害蟲,采用噴粉的施用方式;武夷菌素用于防治多種作物上的白粉病、葉霉病、流膠病、病毒病、瘡痂病,采用直接藥液噴霧形式;存在與金龜子綠僵菌和球孢白僵菌同時使用的情況,可能影響田間防效,建議應(yīng)錯開使用。

    2.2 武夷菌素對真菌菌絲生長率的抑制結(jié)果分析

    武夷菌素100 mg/L濃度對三種真菌的抑制率分別為64.6%、48.6%和39.2%,抑制率由高到低分別為綠色木霉,哈茨木霉,淡紫擬青霉。而武夷菌素對綠色木霉、哈茨木霉、淡紫擬青霉最低抑制濃度測試表明,即使是極低濃度武夷菌素(6.25 mg/L)同樣對綠色木霉、哈茨木霉、淡紫擬青霉存在抑制,抑制率分別為4.3%、4.1%和6.3%。因此實際生產(chǎn)應(yīng)用中應(yīng)避免武夷菌素與綠色木霉、哈茨木霉、淡紫擬青霉同時使用,以免影響藥效(圖1~4)。

    圖1 武夷菌素對三種真菌的抑制率Fig.1 Inhibition rate of wuyiencin on three fungi

    圖2 武夷菌素處理綠色木霉菌絲體抑制效果圖Fig.2 The inhibitory effect of wuyiencin on T.viride

    圖3 武夷菌素處理哈茨木霉菌絲體抑制效果圖Fig.3 The inhibitory effect of wuyiencin on T.harzianum

    圖4 武夷菌素處理淡紫擬青霉菌絲體抑制效果圖Fig.4 The inhibitory effect of wuyiencin on P.lilacinus

    對抑制率進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,得到武夷菌素對綠色木霉,哈茨木霉,淡紫擬青霉的毒力回歸方程及 EC50值,結(jié)果表明武夷菌素對綠色木霉的EC50為57.13 mg/L,哈茨木霉的EC50為109.81 mg/L,淡紫擬青霉的EC50為170.03 mg/L(表2)。

    表2 武夷菌素對三種真菌的毒力回歸方程及EC50Table 2 The virulence regression equation and EC50 of wuyiencin to three fungi

    淡紫擬青霉主要用于防治田間和溫室內(nèi)蔬菜、果樹、花卉等農(nóng)作物的白粉病、灰霉病、霜霉病、葉霉病、葉斑病等葉部真菌性病害,采用藥液噴霧的形式[18]。而武夷菌素主要用于防治多種作物上的白粉病、葉霉病、流膠病、病毒病、瘡痂病,同樣是采用直接藥液噴霧形式。兩種農(nóng)藥同時使用,可能影響淡紫擬青霉的防效,建議應(yīng)錯開使用。

    在田間實際應(yīng)用中綠色木霉[19]和哈茨木霉都主要是采用拌種或與肥料混合施用于土壤,分別用于防治土傳性病害和各種線蟲病害。與武夷菌素的使用幾乎不存在重疊,不需要考慮相互影響效果。

    3 討論

    在球孢白僵菌和金龜子綠僵菌的抑菌試驗中發(fā)現(xiàn)隨著試驗進(jìn)行,同時抑菌圈的直徑也在發(fā)生變化,試驗數(shù)據(jù)采取的是抑菌圈的最大直徑。從球孢白僵菌不同時期的抑菌圈圖片可以明顯看出抑菌圈的直徑是隨著時間的增長逐漸變小,在2000 mg/L高濃度處理下,即使在72 h仍保持一個較小的邊界清晰的抑菌圈,而在1000 mg/L低濃度的處理下,隨著時間的延長,72 h抑菌圈逐漸變得不明顯。推測分析造成試驗結(jié)果的原因有兩點:一是由于隨著時間增長,真菌孢子的生長及新陳代謝消耗了培養(yǎng)基中部分的武夷菌素,從而導(dǎo)致抑菌圈減??;二是由于真菌孢子在武夷菌素的處理下自身產(chǎn)生了耐性或者是抗性從而導(dǎo)致抑菌圈減小甚至消失。

    根據(jù)不同濃度武夷菌素處理的綠色木霉、哈茨木霉、淡紫擬青霉的平板照片,發(fā)現(xiàn)隨著武夷菌素處理濃度升高,菌絲體呈現(xiàn)出增厚的現(xiàn)象,以適應(yīng)武夷菌素的抑制。而根據(jù)試驗獲得的綠僵菌平板照片可以看出抑菌圈邊界模糊不確定,推測綠僵菌對武夷菌素產(chǎn)生一定的抗性,有部分孢子可在武夷菌素條件下生長繁殖。

    本試驗僅在離體條件下測得武夷菌素對活體微生物的抑制率,根據(jù)最小抑菌濃度得出初步結(jié)論。在時間和試驗條件允許的情況下,應(yīng)進(jìn)一步安排田間試驗進(jìn)行驗證。

    猜你喜歡
    哈茨僵菌白僵菌
    不同濃度哈茨木霉對小型西瓜生長及果實品質(zhì)的影響
    綠僵菌對植物的促生防蟲作用研究進(jìn)展
    湖北植保(2022年5期)2022-12-24 21:26:00
    外源赤霉素與氯化鈣對哈茨木霉生長的影響
    穴施哈茨木霉菌肥對黑帥西瓜生長的影響*
    上海蔬菜(2022年3期)2022-06-22 06:57:46
    廣德市笄罩山毛竹根際綠僵菌物種多樣性及生態(tài)位研究
    不同儲存溫度對白僵菌孢子活性的影響
    4種綠僵菌乙酸乙酯初提物抗菌活性比較
    一株蠐螬綠僵菌的分子鑒定
    哈茨木霉防治草莓灰霉病
    白僵菌對酚類轉(zhuǎn)化及僵蠶中4-O-甲基葡萄糖苷化產(chǎn)物的研究進(jìn)展
    中成藥(2017年5期)2017-06-13 13:01:12
    色视频www国产| 少妇人妻 视频| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 视频中文字幕在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 涩涩av久久男人的天堂| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲精品色激情综合| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 香蕉精品网在线| 国产av一区二区精品久久| 免费观看av网站的网址| 日韩中文字幕视频在线看片| 一级毛片我不卡| 内地一区二区视频在线| 亚洲av二区三区四区| 国产熟女午夜一区二区三区 | 天美传媒精品一区二区| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩在线高清观看一区二区三区| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美精品亚洲一区二区| 国产精品人妻久久久久久| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产一区二区三区综合在线观看 | av有码第一页| 少妇人妻久久综合中文| 99九九在线精品视频 | 各种免费的搞黄视频| 大片免费播放器 马上看| 少妇熟女欧美另类| 国产精品人妻久久久久久| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品人妻久久久影院| 免费大片18禁| 老司机影院成人| 99久久人妻综合| 免费黄频网站在线观看国产| 制服丝袜香蕉在线| 免费久久久久久久精品成人欧美视频 | tube8黄色片| 人体艺术视频欧美日本| 十分钟在线观看高清视频www | 久久久久久久久久成人| 欧美bdsm另类| av国产久精品久网站免费入址| 高清毛片免费看| 亚洲经典国产精华液单| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 大片免费播放器 马上看| 99久久人妻综合| av福利片在线观看| 五月玫瑰六月丁香| 简卡轻食公司| 亚洲性久久影院| av在线观看视频网站免费| 国产视频首页在线观看| 免费看日本二区| 99国产精品免费福利视频| 中文欧美无线码| 免费大片18禁| 三上悠亚av全集在线观看 | 大香蕉97超碰在线| 少妇被粗大的猛进出69影院 | 日韩在线高清观看一区二区三区| 美女主播在线视频| 插阴视频在线观看视频| 美女中出高潮动态图| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 成人综合一区亚洲| 亚洲精品,欧美精品| 成人漫画全彩无遮挡| 另类精品久久| 99re6热这里在线精品视频| av播播在线观看一区| 视频中文字幕在线观看| 国产爽快片一区二区三区| 三级经典国产精品| 美女国产视频在线观看| 美女福利国产在线| 久久久久网色| 99热全是精品| 久久久久久久亚洲中文字幕| 久久婷婷青草| 国产 一区精品| 一区二区三区四区激情视频| av在线app专区| 99视频精品全部免费 在线| 色吧在线观看| 亚洲欧美一区二区三区国产| 在线精品无人区一区二区三| 亚洲美女视频黄频| 日韩亚洲欧美综合| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 看非洲黑人一级黄片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品国产亚洲av天美| 黑丝袜美女国产一区| 桃花免费在线播放| 国产精品99久久99久久久不卡 | 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 伦理电影免费视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 草草在线视频免费看| 99九九在线精品视频 | 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲国产精品一区三区| 亚洲美女搞黄在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 嘟嘟电影网在线观看| av有码第一页| 亚洲内射少妇av| 久久久久网色| 精品视频人人做人人爽| 观看av在线不卡| 91精品伊人久久大香线蕉| 97在线人人人人妻| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产免费视频播放在线视频| 成人综合一区亚洲| 久久99蜜桃精品久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 丝瓜视频免费看黄片| 国产精品久久久久久久电影| 搡老乐熟女国产| 国产精品一二三区在线看| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲美女视频黄频| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲三级黄色毛片| av免费观看日本| 嫩草影院入口| 一级毛片aaaaaa免费看小| 日韩av在线免费看完整版不卡| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久久久久久大尺度免费视频| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 国产高清三级在线| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产av国产精品国产| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 制服丝袜香蕉在线| 国产高清国产精品国产三级| 国产在线一区二区三区精| 日本-黄色视频高清免费观看| √禁漫天堂资源中文www| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 久久精品国产亚洲av涩爱| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 一区二区三区免费毛片| 在线播放无遮挡| 日韩精品有码人妻一区| 最近的中文字幕免费完整| 麻豆成人av视频| 亚洲av成人精品一二三区| 我要看黄色一级片免费的| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲精品成人av观看孕妇| 国产在线免费精品| 精品一区在线观看国产| 亚洲国产精品国产精品| 国产永久视频网站| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 欧美97在线视频| 亚洲真实伦在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 自线自在国产av| 男女免费视频国产| 一二三四中文在线观看免费高清| 在线观看免费视频网站a站| 久久99蜜桃精品久久| 丰满少妇做爰视频| 国产精品99久久久久久久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 97精品久久久久久久久久精品| 亚洲久久久国产精品| 精品一区二区免费观看| 久久精品夜色国产| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产视频首页在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 2022亚洲国产成人精品| 丰满少妇做爰视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 极品人妻少妇av视频| 水蜜桃什么品种好| 看免费成人av毛片| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲国产成人一精品久久久| 边亲边吃奶的免费视频| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 人妻 亚洲 视频| 欧美bdsm另类| 人妻系列 视频| 波野结衣二区三区在线| 18禁在线播放成人免费| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲美女黄色视频免费看| 一级毛片我不卡| 在线播放无遮挡| 久久久久久久久大av| 国产中年淑女户外野战色| 国产精品一区二区在线观看99| 国产男女内射视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久久午夜欧美精品| 精品少妇内射三级| 尾随美女入室| 国产精品三级大全| tube8黄色片| 深夜a级毛片| 在现免费观看毛片| 国产高清不卡午夜福利| 黑人高潮一二区| 一本大道久久a久久精品| av线在线观看网站| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲第一区二区三区不卡| 一级毛片 在线播放| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 欧美成人午夜免费资源| 久久久国产精品麻豆| 成人国产麻豆网| 久久韩国三级中文字幕| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 波野结衣二区三区在线| 亚洲国产av新网站| 能在线免费看毛片的网站| 中文在线观看免费www的网站| 久久久久久久久久人人人人人人| 日本vs欧美在线观看视频 | 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲内射少妇av| 久久人人爽人人片av| 熟女av电影| 亚洲怡红院男人天堂| 久久人人爽人人片av| 高清午夜精品一区二区三区| 黄色毛片三级朝国网站 | 91在线精品国自产拍蜜月| 国产免费又黄又爽又色| 日本vs欧美在线观看视频 | 日本vs欧美在线观看视频 | 99久久中文字幕三级久久日本| 久久99热6这里只有精品| 亚洲成人av在线免费| 亚洲情色 制服丝袜| 国产日韩欧美在线精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 免费观看av网站的网址| av国产久精品久网站免费入址| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲av福利一区| 三上悠亚av全集在线观看 | 欧美成人午夜免费资源| 少妇人妻一区二区三区视频| 三级国产精品片| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 一区二区三区免费毛片| 少妇高潮的动态图| av在线播放精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产精品免费大片| 国产一区有黄有色的免费视频| 3wmmmm亚洲av在线观看| 99热6这里只有精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久 成人 亚洲| 国产精品不卡视频一区二区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 一级片'在线观看视频| 老熟女久久久| 26uuu在线亚洲综合色| 少妇 在线观看| 在线天堂最新版资源| 日日爽夜夜爽网站| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久 | 97精品久久久久久久久久精品| 国产av码专区亚洲av| 久久6这里有精品| 国产午夜精品一二区理论片| 精品久久国产蜜桃| 欧美精品高潮呻吟av久久| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲精品aⅴ在线观看| 一级毛片我不卡| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 黑人猛操日本美女一级片| 少妇精品久久久久久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 久久久久久久国产电影| 国产精品无大码| 丝袜脚勾引网站| 国产av码专区亚洲av| 国产成人免费无遮挡视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 搡老乐熟女国产| 久久婷婷青草| 国产亚洲91精品色在线| 丁香六月天网| 色吧在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 视频区图区小说| 啦啦啦啦在线视频资源| 黄片无遮挡物在线观看| 色视频www国产| 亚洲精品视频女| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产av精品麻豆| 美女福利国产在线| h日本视频在线播放| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产午夜精品一二区理论片| 激情五月婷婷亚洲| 国产精品国产av在线观看| 国产成人精品婷婷| 中文字幕久久专区| 啦啦啦在线观看免费高清www| 日本91视频免费播放| 精品国产一区二区久久| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 一区在线观看完整版| 性色av一级| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日韩 亚洲 欧美在线| 我的老师免费观看完整版| 性色avwww在线观看| 国产精品.久久久| av在线播放精品| 国产探花极品一区二区| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产成人一区二区在线| 伦理电影免费视频| 日韩成人伦理影院| 日韩强制内射视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久午夜综合久久蜜桃| 久久av网站| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产av一区二区精品久久| 国产男女内射视频| 国产在线男女| 国产视频首页在线观看| 久久av网站| 18禁在线播放成人免费| 国产探花极品一区二区| 久久97久久精品| 亚洲,欧美,日韩| 在线观看国产h片| 亚洲人成网站在线观看播放| 亚洲av电影在线观看一区二区三区| 国产午夜精品一二区理论片| 一级二级三级毛片免费看| 午夜免费男女啪啪视频观看| 18禁在线播放成人免费| 国产成人freesex在线| 久久久久久久精品精品| 亚洲中文av在线| 久久97久久精品| 看免费成人av毛片| 嫩草影院入口| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 99视频精品全部免费 在线| 最后的刺客免费高清国语| 人体艺术视频欧美日本| 一本一本综合久久| 伊人亚洲综合成人网| 国产黄色视频一区二区在线观看| 蜜臀久久99精品久久宅男| 午夜激情福利司机影院| 日本与韩国留学比较| 欧美3d第一页| 最新中文字幕久久久久| 精品亚洲成a人片在线观看| 少妇人妻久久综合中文| 一级爰片在线观看| 国产精品三级大全| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久影院123| 欧美一级a爱片免费观看看| 日本午夜av视频| 热99国产精品久久久久久7| 国产精品国产av在线观看| 日韩中字成人| 97精品久久久久久久久久精品| 国产av精品麻豆| 日韩成人av中文字幕在线观看| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 美女主播在线视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产综合精华液| 日韩视频在线欧美| 日韩制服骚丝袜av| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 国产成人精品无人区| 美女内射精品一级片tv| 国产精品不卡视频一区二区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 免费黄网站久久成人精品| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 老司机亚洲免费影院| 99国产精品免费福利视频| 亚洲内射少妇av| 高清在线视频一区二区三区| 国产成人免费观看mmmm| 免费少妇av软件| 久久人人爽人人爽人人片va| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产高清不卡午夜福利| 国产淫片久久久久久久久| 我的老师免费观看完整版| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲熟女精品中文字幕| 内地一区二区视频在线| 亚洲自偷自拍三级| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲,一卡二卡三卡| .国产精品久久| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 国产女主播在线喷水免费视频网站| a 毛片基地| 国产亚洲5aaaaa淫片| 如何舔出高潮| 精品久久久久久电影网| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 精品一区在线观看国产| 成年人免费黄色播放视频 | 国产精品不卡视频一区二区| 黄色毛片三级朝国网站 | 免费在线观看成人毛片| 少妇被粗大猛烈的视频| tube8黄色片| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 国产伦在线观看视频一区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 狂野欧美激情性bbbbbb| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲av在线观看美女高潮| xxx大片免费视频| 99久久精品一区二区三区| 中国国产av一级| 国产成人精品福利久久| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 极品教师在线视频| 久久久久久久国产电影| 91久久精品电影网| 超碰97精品在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲av.av天堂| 青春草视频在线免费观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产黄片美女视频| 亚洲国产精品成人久久小说| 中文欧美无线码| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲av男天堂| 人人妻人人看人人澡| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 国产欧美日韩综合在线一区二区 | av福利片在线| 又爽又黄a免费视频| 少妇的逼好多水| 久久久久久久久久成人| 久久 成人 亚洲| 亚洲欧美日韩东京热| 黄色怎么调成土黄色| 黄色日韩在线| 国内精品宾馆在线| 免费观看在线日韩| 日本欧美国产在线视频| 国产极品天堂在线| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 欧美精品国产亚洲| 国产精品99久久久久久久久| 亚洲va在线va天堂va国产| 久久久久久久久久久久大奶| 国产一级毛片在线| 99热网站在线观看| 国产精品国产av在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 大话2 男鬼变身卡| 欧美丝袜亚洲另类| 七月丁香在线播放| 日韩在线高清观看一区二区三区| 亚洲高清免费不卡视频| 一级,二级,三级黄色视频| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产成人91sexporn| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产成人精品久久久久久| 香蕉精品网在线| 一本色道久久久久久精品综合| 欧美变态另类bdsm刘玥| av卡一久久| 22中文网久久字幕| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| xxx大片免费视频| 亚洲,欧美,日韩| videossex国产| 日韩一本色道免费dvd| 99热这里只有是精品在线观看| 国产成人91sexporn| 亚洲人成网站在线观看播放| freevideosex欧美| 特大巨黑吊av在线直播| 高清av免费在线| 国产一区二区三区综合在线观看 | 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久国产精品大桥未久av | 日韩中字成人| 一级爰片在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 成人亚洲精品一区在线观看| 大码成人一级视频| 麻豆成人av视频| 99久久精品国产国产毛片| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 在线天堂最新版资源| 在线观看www视频免费| 97超视频在线观看视频| 人妻一区二区av| 中文字幕精品免费在线观看视频 | 精品人妻偷拍中文字幕| 内地一区二区视频在线| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲成色77777| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 久久久久久伊人网av| 国产精品不卡视频一区二区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 国产一区二区三区av在线| 午夜影院在线不卡| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产成人精品久久久久久| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产男人的电影天堂91| 看免费成人av毛片| 国产成人aa在线观看| 99久久精品热视频| 18+在线观看网站| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 日本与韩国留学比较| 一级爰片在线观看| 9色porny在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 麻豆成人av视频| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 大片电影免费在线观看免费| av视频免费观看在线观看| 91精品伊人久久大香线蕉| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲不卡免费看| 97在线视频观看| 五月开心婷婷网| 黄色视频在线播放观看不卡| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 久久亚洲国产成人精品v| 美女cb高潮喷水在线观看| 午夜av观看不卡| 久久狼人影院| 91久久精品国产一区二区成人| 久久久亚洲精品成人影院| av在线app专区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产免费一级a男人的天堂| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久午夜综合久久蜜桃| 制服丝袜香蕉在线| 免费黄网站久久成人精品| 在线观看国产h片| 日本黄大片高清| 18禁动态无遮挡网站| av一本久久久久| 精品熟女少妇av免费看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 亚洲精品国产色婷婷电影| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 日韩 亚洲 欧美在线| 国产成人免费观看mmmm| 国产在线视频一区二区| 久久精品夜色国产| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 免费看不卡的av| 一本一本综合久久| 少妇丰满av| 日韩成人伦理影院| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产欧美日韩综合在线一区二区 | 欧美精品国产亚洲| 久久女婷五月综合色啪小说| 另类精品久久|