寧夏彭陽縣肉牛布魯氏菌病風險因素病例對照研究

楊 濤，虎 銀，張國俊，張 虎

（1.廈門市動物疫病預防控制中心，福建廈門 361009；2.寧夏回族自治區(qū)彭陽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所，寧夏彭陽 756500）

布魯氏菌病（brucellosis，以下簡稱布?。┦怯刹剪斒暇鸬囊环N急性或慢性人獸共患傳染病，其傳染源是患病及帶菌動物，最危險的是受感染的妊娠母畜。傳播因子包括：病畜流產及正常分娩物、生殖道分泌物、排泄物，病畜乳、內臟、皮毛，以及布魯氏菌污染的水、土壤、塵埃等；傳播途徑包括：經皮膚黏膜、消化道、呼吸道感染，通過子宮胎盤垂直傳播。布魯氏菌對外界環(huán)境抵抗力較強，可在塵土、糞便、水、泥漿、流產胎、土壤、肉及奶制品中長期存活，如在污染土壤、水中可存活1～4 個月，冬季在糞便中可存活約2 個月，但在pH 低于4 的環(huán)境下快速死亡，當pH 低于3.5 時則極快死亡[1]。

近年來，各級獸醫(yī)機構對種公牛和奶牛布病防控極為關注，而對肉牛布病重視程度一般，養(yǎng)殖場戶對肉牛布病防控也缺乏認識。隨著肉牛養(yǎng)殖的快速發(fā)展，全國肉牛布病發(fā)生呈現持續(xù)上升趨勢，已成為阻礙肉牛產業(yè)健康發(fā)展和威脅公共衛(wèi)生安全的主要人獸共患病[1-2]。

2021 年3—5 月，寧夏回族自治區(qū)彭陽縣動物衛(wèi)生監(jiān)督所對當地肉牛開展了布病等幾種常見傳染病的流行狀況調查，對采集的肉牛血清進行了布魯氏菌感染抗體檢測，根據檢測結果估計，當地肉牛布病個體陽性率為5.0%，場戶流行率為11.8%（95%CI=9.6%～14.3%）。本研究于2021 年6 月，通過問卷形式進行調查，開展病例對照研究，旨在探索彭陽縣肉牛布病的主要風險因素，為當地肉牛布病防控策略制定提供依據。

1 材料與方法

1.1 研究區(qū)域

彭陽縣位于寧夏回族自治區(qū)南部邊緣，六盤山東麓，西連固原市原州區(qū)，東、南、北環(huán)臨甘肅省慶陽市和平涼市，農業(yè)人口約占90%，以肉牛和肉羊養(yǎng)殖為主。彭陽縣轄區(qū)內共有4 鎮(zhèn)8 鄉(xiāng)，分別是白陽鎮(zhèn)（縣政府所在地）、古城鎮(zhèn)、紅河鎮(zhèn)、王洼鎮(zhèn)、新集鄉(xiāng)、城陽鄉(xiāng)、孟塬鄉(xiāng)、馮莊鄉(xiāng)、交岔鄉(xiāng)、羅洼鄉(xiāng)和小岔鄉(xiāng)，行政村合計156 個。彭陽縣對肉牛不實施布病免疫。截至2020 年底，彭陽縣共存欄肉牛約10 萬頭，肉牛養(yǎng)殖場戶約1.2 萬個，戶均存欄牛8～9 頭，其中存欄4～8 頭的場戶數最多，存欄≥20 頭的場戶數僅占全縣肉牛養(yǎng)殖總場戶數的4%左右。

1.2 研究設計

采用匹配設計的病例對照研究方法。病例組為肉牛布魯氏菌感染抗體陽性養(yǎng)殖場戶（其養(yǎng)殖的肉牛中至少有1 頭被檢測為感染抗體陽性），對照組為肉牛布魯氏菌感染抗體陰性的養(yǎng)殖場戶，以近兩年肉牛養(yǎng)殖場戶是否同時養(yǎng)羊為主要觀察的暴露因素。匹配原則為，病例組和對照組肉牛養(yǎng)殖場戶同在一個行政村，和/或具有相似養(yǎng)殖規(guī)模，養(yǎng)牛時間差異在±3 年內，按此順序進行篩選，匹配比例為1:2。經咨詢鄉(xiāng)村獸醫(yī)，對照組肉牛養(yǎng)殖場戶中同時養(yǎng)羊的比例約為40%，預期羊和肉?；祓B(yǎng)養(yǎng)殖場戶的肉牛感染布魯氏菌概率是不養(yǎng)羊肉牛養(yǎng)殖場戶的2.5 倍，設檢驗水準α=0.05（雙側），把握度1-β=0.80，病例與對照之間危險因素的相關程度Phi 系數設為0.2，利用PASS 11 軟件計算得到病例組和對照組的樣本量分別為69和138例。為提高檢驗效能，在此基礎上把病例組和對照組的樣本量各增加10%。

1.3 問卷設計

調查問卷主要涉及兩個方面內容：一是購牛渠道和是否從縣外買牛等信息；二是自家、鄰居家和親朋好友家的養(yǎng)羊情況，以及近兩年母牛和母羊流產情況。但問卷中隱去敏感詞匯，以“某病”替代“布病”，防止被調查人員因了解布病而不愿回答或故意隱瞞實際情況。調查采用盲法，即參與現場問卷調查的工作人員（縣疫病控制中心業(yè)務骨干和鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)）不知道被調查養(yǎng)殖場戶肉牛是否感染布魯氏菌。

1.4 數據分析

把調查問卷原始信息錄入Excel 軟件并整理成數字格式，對研究群基本情況進行描述性統(tǒng)計。連續(xù)型變量統(tǒng)計結果用均值±標準差（MX±S）或中位數及四分位間距（M，IQR）描述，分類型變量統(tǒng)計結果用百分比描述，連續(xù)型變量為或近似正態(tài)分布時，其與布病狀況的關聯(lián)分析采用t檢驗，偏態(tài)分布則用U檢驗，分類型變量與布病狀況的關聯(lián)分析采用OR 值和χ2檢驗，使用Epi info 軟件開展單因素和多因素條件Logistic 回歸分析。單因素條件Logistic 回歸分析結果中，P＜0.25 的變量被保留進入多因素條件Logistic 回歸分析。

2 結果與分析

2.1 研究群基本特征描述

彭陽縣前期開展的肉牛布病橫斷面調查中，共發(fā)現了89 個布魯氏菌感染抗體陽性場戶，研究群納入過程見圖1。病例組和對照組基本信息的統(tǒng)計描述見表1。差異性比較結果顯示：兩組在肉牛存欄量、養(yǎng)牛場所與主要交通公路距離、養(yǎng)牛持續(xù)時間、牛舍面積、周圍養(yǎng)牛場戶數、養(yǎng)殖類型和養(yǎng)牛方式方面均無顯著差異（P＞0.05），但兩組在是否通過經紀人買牛（P=0.002）和是否會讓經紀人進牛圈（P=0.003）這兩個方面存在有統(tǒng)計學意義的差異。

表1 病例組和對照組基本情況描述及差異性比較結果

2.2 單因素風險因素分析

篩選出調查問卷中的9 條信息作為暴露因素，采用單因素條件Logistic 回歸，分析與肉牛布病的關聯(lián)性，并估計OR 值和95%CI。表2 為彭陽縣肉牛布病與暴露因素關聯(lián)性分析結果，其中4 個因素與肉牛布病存在統(tǒng)計學關聯(lián)（P＜0.05），分別是通過經紀人買牛（OR=5.19，95%CI=1.57～17.18）、讓經紀人進牛圈（OR=3.02，95%CI=1.48～6.15）、家/場里養(yǎng)的母羊近兩年有流產史（OR=1.92，95%CI=1.01～3.63）和親朋好友家養(yǎng)羊（OR=2.23，95%CI=1.12～4.46）。

表2 彭陽縣肉牛布病與暴露因素關聯(lián)性分析結果

2.3 多因素風險因素分析

把單因素分析結果中P＜0.25 的變量納入多因素條件Logistic 回歸進行分析，由于“d.通過牛經紀人買牛”和“e.會讓牛經紀人進牛圈”這兩個暴露因素存在關聯(lián)性，兩者的Phi 系數為0.53（P＜0.005），因此保留“d.通過牛經紀人買?！钡淖兞窟M入回歸模型。單因素分析發(fā)現，近兩年肉牛養(yǎng)殖場戶同時養(yǎng)羊與不養(yǎng)羊對是否會引起肉牛布病沒有統(tǒng)計學差異，而近兩年家/場里母羊有流產史可能是風險因素，因此對“g.家/場里養(yǎng)的母羊近兩年有流產史”這個暴露因素中的否和不養(yǎng)羊再進行細分，設置成啞變量（多分類變量）后進入回歸模型，表3 為最終模型。該模型顯示，“d.通過牛經紀人買?！钡膱鰬?，其肉牛感染布魯氏菌的風險增大（OR=5.05，95%CI=1.50～17.01），與不養(yǎng)羊的場戶相比，家/場里養(yǎng)羊且近兩年母羊有流產史可能增大肉牛感染布魯氏菌風險（OR=1.86，95%CI=0.92～3.75）。該模型的-2 對數似然值（-2Log likelihood）為152.78，模型ROC 曲線下面積為0.630，可中度區(qū)分高低風險場。

表3 彭陽縣肉牛布病多因素回歸模型

3 討論

寧夏六盤山地區(qū)近年來大力發(fā)展肉牛養(yǎng)殖，將肉牛產業(yè)發(fā)展成為帶動六盤山連片貧困地區(qū)鞏固脫貧成果和支撐鄉(xiāng)村振興的主導產業(yè)。彭陽縣是寧夏六盤山肉?；氐闹行模匀馀ｐB(yǎng)殖為主的草畜產業(yè)被列為全縣支柱性產業(yè)。而伴隨著肉牛養(yǎng)殖規(guī)模的快速擴大，近年來肉牛疾病也越來越多，其中就包括布病。2021 年初彭陽縣開展了當地肉牛常見病調查，結果發(fā)現當地肉牛布病已經出現了一定的空間分布特征，但對抽取的913 個養(yǎng)牛場戶相關人員進行訪談后發(fā)現，只有47.4%的養(yǎng)殖場戶人員知道布病，大部分養(yǎng)殖場戶缺少對肉牛布病的防控意識。在我國西北地區(qū)的肉牛流通環(huán)節(jié)，專門從事肉牛交易及販運的人員（牛經紀人）起著關鍵性作用。目前，彭陽縣所在的地級市固原市專門從事肉牛交易及販運者超過5 000 人，初步形成了以六盤山活畜交易市場、單家集活畜交易市場和古城肉牛交易市場為中心，62 個鄉(xiāng)鎮(zhèn)活畜交易市場為輻射的肉牛交易網絡。彭陽縣90%以上養(yǎng)牛場戶的育肥牛和淘汰母?？颗＝浖o人上門收購，大部分養(yǎng)牛場戶也是通過牛經紀人購入肉牛；運輸肉牛的車輛以販運車為主，絕大部分的拉牛車輛沒有按規(guī)定消毒；經過調查得知，牛經紀人都有進牛圈查看肉牛的行為。這些都給疫病傳播帶來很大隱患，所以通過牛經紀人買牛的方式與當地肉牛布病存在密切關聯(lián)。考慮到牛經紀人在當地肉牛產業(yè)發(fā)展中發(fā)揮了重要作用，應該通過宣傳教育提高牛經紀人的布病防控意識，比如改變牛經紀人進牛圈的行為，牛經紀人販賣給當地養(yǎng)殖戶的肉牛應附有布病抗體檢測證明，每次販運肉牛后應對車輛進行清洗消毒等。

牛通常感染牛種布魯氏菌，但也能感染羊種布魯氏菌。羊種布魯氏菌不僅感染羊和牛，也容易感染人。Médiha 等[3]曾報道養(yǎng)母羊（OR=43.12；95%CI=8.34～222.74）和處理流產母羊（OR=18.51；95%CI=5.18～66.09）是人感染布魯氏菌的風險因素；趙媛等[4]研究發(fā)現，2012—2018 年寧夏人間布病發(fā)病率與羊存欄數有一定的相關性。我國北方地區(qū)人間布病病例以感染羊種3 型菌為主。劉志國等[5]研究發(fā)現，羊種布魯氏菌在牛、羊和野生動物中循環(huán)傳播，最終感染人群，是內蒙古地區(qū)羊種布魯氏菌的潛在傳播模式之一；Anka 等[6]研究發(fā)現，養(yǎng)羊是馬來西亞牛感染布魯氏菌的風險因素（OR=8.9；95%CI=1.10～71.83）。彭陽縣近幾年來羊群布病時有發(fā)生，當地養(yǎng)殖戶牛羊混養(yǎng)的情況也不少。本次調查結果顯示，肉牛養(yǎng)殖場戶同時養(yǎng)羊不會增加肉牛感染布魯氏菌的風險，但如果近兩年家/場里養(yǎng)的母羊有流產史，則可能會增加家/場里肉牛的感染風險。但把該因素納入到多因素Logistic 回歸分析發(fā)現，其與肉牛布病的關聯(lián)還沒有達到P＜0.05 的統(tǒng)計學意義。這可能是由于本次調查到的家/場里母羊近兩年有流產史的場戶數量較少，因此需要增加樣本量進一步開展調查，還可以把采集到的肉牛流產物送有資質的實驗室進行布魯氏菌分離培養(yǎng)和菌株分型。

病例對照研究是流行病學研究中探索可能病因的重要方法。它將研究對象分為病例組/對照組（更廣泛來說是陽性組/陰性組），比較發(fā)病/陽性事件發(fā)生前接觸暴露因素的狀況，通過比較暴露水平的差異性，初步分析暴露因素與陽性事件之間的因果關系。但病例對照研究屬于觀察性研究，由于存在著回憶偏倚，暴露因素與結局的關系可能會受到干擾因素影響，因此所研究的暴露因素與陽性事件的關系只是探索性的，其因果關系需要進一步通過前瞻性研究（如隊列研究）予以確認。

4 結論

本研究基于彭陽縣2021 年3—5 月開展的肉牛布病橫斷面調查結果，采用病例對照研究方法探索肉牛感染布魯氏菌的風險因素，發(fā)現通過牛經紀人買牛與當地肉牛布病存在密切關聯(lián)。建議提高牛經紀人的布病防控意識，進一步調查當地羊群的布病流行狀況，并進行布魯氏菌分型鑒定。本研究探明了彭陽縣肉牛布病的主要風險因素，為當地肉牛布病防控策略制定提供了依據。