血清lncRNA PANDA在2型糖尿病合并冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病中的診斷價(jià)值

周芳 林源

糖尿病后期可能會(huì)并發(fā)多種并發(fā)癥，其中冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。–HD）是2 型糖尿?。═2DM）最常見(jiàn)的心血管并發(fā)癥之一。有研究顯示，T2DM并發(fā)CHD的概率高達(dá)25%～35%，是非糖尿病患者的2～4倍[1]。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）在細(xì)胞生長(zhǎng)分化、生物發(fā)育及疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著重要的角色。lncRNA 已被證明可參與心力衰竭、心肌梗死、心臟肥大等各種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展[2-3]。lncRNA PANDA位于第6號(hào)染色體，在DNA損 傷的情況下可參與p53 依賴(lài)通路介導(dǎo)的抗凋亡作用。研究表明，lncRNA PANDA 可參與腫瘤的進(jìn)展，影響腫瘤的大小及分期[4-5]。動(dòng)脈粥樣硬化患者的外周血lncRNA PANDA 的表達(dá)顯著升高，其可通過(guò)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖參與動(dòng)脈粥樣硬化的病理過(guò)程[6]。本研究觀(guān)察T2DM 合并CHD 患者血清中l(wèi)ncRNA PANDA 的表達(dá)，評(píng)估其在診斷中的價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

本研究利用世界衛(wèi)生組織規(guī)定的“缺血性心臟病的命名及其診斷標(biāo)準(zhǔn)中”CHD 的診斷標(biāo)準(zhǔn)，以及《中國(guó)2 型糖尿病防治指南（2017）版》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取2017 年8 月至2020 年8 月在西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院收治的108 例T2DM 合并CHD患者作為T(mén)2DM＋CHD 組。其中男性66 例，女性42 例，年齡55～78 歲，平均（66.42±10.83）歲；同期收治的105 例單純CHD 患者作為CHD 組，其中男性61 例，女性44 例，年齡55～77 歲，平均（67.02±11.13）歲；以同期健康體檢者110 名作為對(duì)照組，其中男性68例，女性42例，年齡56～77歲，平均（66.83±11.47）歲。本研究經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意，所有受試者均簽署知情同意書(shū)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）認(rèn)知障礙及意識(shí)障礙；（2）甲狀腺疾病；（3）惡性腫瘤；（4）自身免疫性疾?。唬?）急慢性感染性疾??；（6）血液系統(tǒng)疾??；（7）心、肝、腎、腦等重要器官損傷。

1.2 方法

受試者于清晨空腹采集靜脈血5 mL，利用離心機(jī)3 000 g/min離心15 min后分離血清進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢查或置于－80 ℃冰箱中保存。

空腹血糖（FPG）、三酰甘油（TG）、膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）等通過(guò)全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)；糖化血紅蛋白（HbAlc）通過(guò)高效液相色譜法檢測(cè)。

通過(guò)TRIzol 試劑提取血清中的總RNA，用Nanodrop 2000（Thermo Fisher Science，USA）測(cè)定RNA 水平。用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（Takara，日本）合成cDNA。用Takara SYBR Green PCR 試劑盒（Takara，日本）進(jìn)行實(shí)時(shí)聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR），擴(kuò)增引物見(jiàn)表1。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性20 s、60 ℃退火40 s，共40 個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法進(jìn)行相對(duì)定量分析，內(nèi)參為GAPDH。

表1 RT-PCR所需引物序列

CHD 組和T2DM＋CHD 組受試者行冠狀動(dòng)脈造影，通過(guò)Gensini 評(píng)分評(píng)價(jià)冠狀動(dòng)脈的病變程度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

通過(guò)SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析；計(jì)數(shù)資料用例、百分比表示，多組間比較采用卡方檢驗(yàn)；采用工作受試者曲線(xiàn)（ROC）評(píng)價(jià)血清lncRNA PANDA 水平對(duì)T2DM 合并CHD的預(yù)測(cè)效能。以P＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組臨床資料比較

3 組在性別、年齡、體質(zhì)量指數(shù)（BMI）、高血壓史、TC、LDL-C、HDL-C 等方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與對(duì)照組和CHD 組相比，T2DM＋CHD組吸煙史比例，F(xiàn)PG、TG 及HbA1c 水平顯著升高（P均＜0.05）。與對(duì)照組相比，CHD 組吸煙史比例及HbA1c 水平顯著升高（P均＜0.05）。T2DM＋CHD 組Gensini 評(píng)分顯著高于CHD 組（P＜0.05），提示冠狀動(dòng)脈的病變程度更高。見(jiàn)表2。

表2 各組臨床資料比較

2.2 各組血清lncRNA PANDA水平比較

對(duì)照組、CHD組和T2DM＋CHD組血清lncRNA PANDA的相對(duì)表達(dá)水平分別為1.02±0.11，2.08±0.17 和4.12±0.36。與對(duì)照組相比，CHD組和T2DM＋CHD組血清lncRNAPANDA水平均顯著升高；與CHD組相比，T2DM＋CHD組血清lncRNA PANDA水平顯著升高（P均＜0.05）。

2.3 lncRNA PANDA對(duì)T2DM合并CHD的臨床診斷價(jià)值

ROC 表明，血清lncRNA PANDA 水平能區(qū)分健康人群與CHD 患者，其曲線(xiàn)下面積（AUC）為0.963（95%CI：0.94～0.987），敏感度為97.7%，特異度為90%，其血清lncRNA PANDA 臨界值為1.405，見(jiàn) 圖1A）。將CHD 組 和T2DM＋CHD 組的血清lncRNA PANDA 水平再進(jìn)行ROC 分析，發(fā)現(xiàn)AUC 為0.94（95%CI：0.909～0.97，P＜0.05），敏感度為71.7%，特異度為82.0%，其血清lncRNA PANDA 臨界值為3.285，見(jiàn)圖1B。

圖1 血清lncRNA PANDA診斷的ROC曲線(xiàn)

3 討論

LncRNA 是一類(lèi)非編碼RNA 分子，廣泛存在于血漿、血清及各組器官組織中，可作為心血管疾病重要的診斷和預(yù)測(cè)標(biāo)志物。lncRNA 可調(diào)節(jié)包括糖脂代謝及免疫反應(yīng)在內(nèi)的生物學(xué)過(guò)程，在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平上發(fā)揮作用。葉青青等[7]研究發(fā)現(xiàn)，血漿lncRNA NEAT1 表達(dá)水平在對(duì)照組及CHD 組患者間差異顯著，有助于提高CHD 診斷水平。lncRNA TUG1 過(guò)表達(dá)已被證明可通過(guò)Wnt 信號(hào)通路刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，從而促進(jìn)糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化疾病的進(jìn)程[8]。

lncRNA PANDA 是從細(xì)胞周期基因啟動(dòng)子區(qū)域轉(zhuǎn)錄的lncRNA 之一，該區(qū)域可能受p53 調(diào)控[9]。p53是調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生物學(xué)行為的關(guān)鍵分子，在調(diào)控細(xì)胞凋亡、修復(fù)DNA 損傷等方面發(fā)揮重要作用。已有證據(jù)顯示，p53 可調(diào)控血管平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的增殖與凋亡，參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[10]。陳曉英等[6]研究發(fā)現(xiàn)，急性心肌梗死患者外周血中l(wèi)ncRNA PANDA 的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組，且在內(nèi)皮細(xì)胞模型中，沉默lncRNA PANDA 的表達(dá)可降低細(xì)胞增殖水平。因此，本研究推測(cè)lncRNA PANDA 可能是診斷CHD 的潛在生物標(biāo)志。

本研究發(fā)現(xiàn)，與健康人群相比，CHD 患者血清中l(wèi)ncRNA PANDA 的表達(dá)顯著升高，而T2DM合并CHD 患者血清中l(wèi)ncRNA PANDA 的表達(dá)水平較單純CHD 患者更高。結(jié)合兩組患者的臨床資料發(fā)現(xiàn)，T2DM 合并CHD 患者冠狀動(dòng)脈的病變程度更高，血清lncRNA PANDA 表達(dá)水平可能與CHD的進(jìn)程有關(guān)。ROC 曲線(xiàn)分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，lncRNA PANDA 在健康人群與CHD 患者之間具有較高的診斷價(jià)值，其對(duì)單純CHD 與T2DM合并CHD 之間的鑒別診斷價(jià)值也較高。

血清lncRNA PANDA可能成為T(mén)2DM 合并CHD 的診斷的生物標(biāo)志物，但本研究為單中心、小樣本研究，后續(xù)需擴(kuò)大樣本量，并進(jìn)一步探索lncRNA PANDA 的具體調(diào)控機(jī)制。