微柱凝膠技術(shù)在臨床交叉配血中的應(yīng)用

張璐璐

（沈陽(yáng)市骨科醫(yī)院承基醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

輸血已經(jīng)成為一種重要的疾病治療方法，特別是對(duì)于危重病患者。輸血治療可以最大程度地挽救患者的生命。因此，目前在各大醫(yī)院中，輸血需求的患者量不斷增加，同時(shí)輸血的安全性也得到了相關(guān)工作人員的廣泛關(guān)注。由于輸血是臨床治療中最為常見(jiàn)的一種治療方式，而在進(jìn)行輸血之前必須為患者進(jìn)行交叉配血檢測(cè)，以此判斷受血者是否能夠使用供血者的血液，從而降低發(fā)生溶血的風(fēng)險(xiǎn)概率。臨床中多使用聚凝胺法與微柱凝膠技術(shù)，對(duì)于配血的快速檢測(cè)具有重要價(jià)值[1]。不同交叉配血方式的效果不同，聚凝胺法的陽(yáng)性檢出率高，耗時(shí)短，檢測(cè)速度快。微柱凝膠技術(shù)的操作簡(jiǎn)單，具有可重復(fù)性，結(jié)果可以長(zhǎng)期保存，誤差率較小，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。為此，本文針對(duì)我院2018年11月至2019年11月入院治療的患者血液樣本240例，探討在臨床交叉配血中采用微柱凝膠技術(shù)的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本文的240例患者數(shù)據(jù)均選自入院治療的患者血液樣本，所選區(qū)間為2018年11月至2019年11月，按照抽簽法的方式將患者分為對(duì)照組（n=120）與試驗(yàn)組（n=120）。對(duì)照組患者年齡為9～80歲，平均（49.59±6.56）歲；男性和女性患者各為67例和53例。試驗(yàn)組患者年齡10～28歲，平均（49.61±6.29）歲，男性和女性患者各為63例和57例。對(duì)比兩組血液樣本的基本資料，組間并無(wú)差異，P＞0.05。所有患者均自愿簽訂知情同意書(shū)，且本次試驗(yàn)已經(jīng)通過(guò)沈陽(yáng)市骨科醫(yī)院承基醫(yī)院倫理委員會(huì)審批。

1.2 方法

試劑與器械：使用臺(tái)灣貝索公司生產(chǎn)的離心機(jī)（型號(hào)：BA-SO2005-1型），長(zhǎng)春博研公司產(chǎn)生的免疫微柱孵育器（型號(hào)：TYQ型），長(zhǎng)春博研公司產(chǎn)生的血型血清學(xué)離心機(jī)（型號(hào)：TD-3A型）等儀器進(jìn)行操作，流程均根據(jù)要求進(jìn)行逐步操作。

對(duì)照組行聚凝胺法檢測(cè)，主要檢測(cè)方式為：①將供血者的1滴2%濃度紅細(xì)胞加入需要進(jìn)行受血者的2滴血清內(nèi)，標(biāo)注為主側(cè)。②將供血者的2滴血清加入至受血者的2滴2%濃度的紅細(xì)胞中，標(biāo)注為次側(cè)[2]。③其次，分別向主側(cè)與次側(cè)的管中加入0.6 mL的1號(hào)溶液與2滴2號(hào)溶液，然后以3 000 r/min的離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行1 min的處理，結(jié)束后吸掉上層的清液，再滴入2滴2號(hào)溶液進(jìn)行搖勻。④若凝聚現(xiàn)象持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)達(dá)1 min左右，即判定為陽(yáng)性；若凝聚后散開(kāi)的時(shí)間長(zhǎng)達(dá)1 min，即判定為陰性[3]。

試驗(yàn)組行微柱凝膠技術(shù)檢測(cè)，主要檢測(cè)方式為：①將受血者的血液樣本以離心1 500 r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行5 min的處理，同時(shí)多次進(jìn)行供血者與受血者的紅細(xì)胞清洗，并調(diào)配成1%濃度的紅細(xì)胞懸液[4]。②在微柱孔內(nèi)分別加入50 μL的受血者血清與供血者25 μL的1%濃度的紅細(xì)胞懸液，標(biāo)注為主側(cè)。③其次，在微柱內(nèi)加入供血者50 μL的血清與受血者25 μL的1%濃度的紅細(xì)胞懸液，標(biāo)注為次側(cè)。④在37 ℃的溫度內(nèi)孵育15 min，并以轉(zhuǎn)速為900 r/min進(jìn)行2 min離心操作與轉(zhuǎn)速為1 500 r/min的3 min離心操作。⑤若凝膠的上層部分出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，則為陽(yáng)性；若凝膠的底部位置出現(xiàn)沉淀現(xiàn)象，則為陰性[5]。

1.3 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)并對(duì)比兩組檢測(cè)方式的敏感程度、交叉配血的相容性、是否呈陽(yáng)性現(xiàn)象，以及試驗(yàn)檢測(cè)所需時(shí)間與血清容量。統(tǒng)計(jì)并比較凝膠胺法和微柱凝膠法的配血不相合因素。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將本次研究中的240例患者數(shù)據(jù)應(yīng)用于SPSS 20.0進(jìn)行軟件處理，計(jì)量資料滿足正態(tài)分布形式，用（）形式表示兩組檢測(cè)方式的檢測(cè)時(shí)間與血清容量，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，用[n（%）]表示兩組檢測(cè)方式的敏感程度與交叉配血相容，以及交叉配血陽(yáng)性現(xiàn)象對(duì)比，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，組間對(duì)比若P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者檢測(cè)方式的敏感程度與交叉配血相容對(duì)比 對(duì)照組的敏感程度低于試驗(yàn)組，而交叉配血相容概率高于試驗(yàn)組，組間差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者檢測(cè)方式的敏感程度與交叉配血相容對(duì)比[n（%）]

2.2 兩組患者檢測(cè)方式交叉配血陽(yáng)性現(xiàn)象對(duì)比 通過(guò)對(duì)比可知，試驗(yàn)組檢測(cè)出陽(yáng)性的樣本明顯高于對(duì)照組，組間具有差異（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者檢測(cè)方式交叉配血陽(yáng)性現(xiàn)象對(duì)比[n（%）]

2.3 兩組患者檢測(cè)方式的檢測(cè)時(shí)間與血清容量對(duì)比 通過(guò)統(tǒng)計(jì)可知，對(duì)照組所需檢測(cè)時(shí)間為（11.85±2.53）min，而試驗(yàn)組所需檢測(cè)時(shí)間為（32.19±2.28）min，組間具有差異（t=65.4223，P=0.0001）；此外，對(duì)照組所需血清容量為（102.36±1.67）μL，而試驗(yàn)組所需血清容量為（26.48±1.86）μL，組間具有差異（t=332.5294，P=0.0001）。見(jiàn)表3。

表3 兩組患者檢測(cè)方式的檢測(cè)時(shí)間與血清容量對(duì)比（）

表3 兩組患者檢測(cè)方式的檢測(cè)時(shí)間與血清容量對(duì)比（）

2.4 統(tǒng)計(jì)并比較兩組患者凝膠胺法和微柱凝膠法的配血不相合因素 通過(guò)分析可知，白細(xì)胞增高、不規(guī)則抗體、自身抗體、標(biāo)本影響、藥物影響、球蛋白增高均是導(dǎo)致配血不相合的主要因素。

3 討 論

輸血治療是臨床常見(jiàn)的治療方法，在手術(shù)、貧血、低血容量休克等患者中較為常見(jiàn)，可為患者及時(shí)補(bǔ)充血容量，維持正常的血氧供應(yīng)。然而，由于血型差異、血液制品問(wèn)題、輸血技術(shù)等因素，輸血反應(yīng)較為常見(jiàn)，威脅著患者的安全。因此，有必要通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒?zhǔn)確識(shí)別及交叉配對(duì)血型，以減低輸血反應(yīng)，確保輸血的安全。以往臨床上常用凝聚胺交叉配血法進(jìn)行血型鑒定。盡管凝聚胺法可以檢測(cè)不完全抗體，但其靈敏度相對(duì)較低，易受操作者經(jīng)驗(yàn)的限制，影響交叉匹配結(jié)果的準(zhǔn)確性和輸血的安全性。血液的配對(duì)不僅是ABO相應(yīng)血型的配對(duì)，還需進(jìn)行RH等其他類(lèi)型的配合。通過(guò)匹配的血液進(jìn)行輸血治療，可以幫助患者進(jìn)行缺失血容量的及時(shí)補(bǔ)充，提高身體功能的供氧功能，及時(shí)對(duì)手術(shù)、貧血、低血容量休克等患者進(jìn)行搶救。在臨床輸血治療之前，為了規(guī)避患者出現(xiàn)溶血性現(xiàn)象，常常需要進(jìn)行相同血型間的交叉配血檢測(cè)。交叉配血是判斷能否進(jìn)行輸血的重要方式，主要是將供血者的血清、紅細(xì)胞與受血者的血清、紅細(xì)胞進(jìn)行融合，從血清與紅細(xì)胞的凝聚情況來(lái)觀察判斷。若受血者的紅細(xì)胞與供血者的紅細(xì)胞發(fā)生凝聚現(xiàn)象，必要情況下可以以慢速、少量的方式進(jìn)行血液輸送[6]。

目前，臨床中進(jìn)行交叉配血的方式主要有膠體介質(zhì)配血方法、聚凝胺法、微柱凝膠技術(shù)、鹽水法、抗球蛋白法等。其中，聚凝胺法與微柱凝膠技術(shù)是最為常用的交叉配血方式。聚凝胺法因快捷方便，能夠在短時(shí)間內(nèi)篩選出無(wú)規(guī)則的抗體，因此常被用于急診中的緊急性配血檢測(cè)中。其主要是通過(guò)低離子介質(zhì)對(duì)細(xì)胞的抗原抗體進(jìn)行致敏作用，使得紅細(xì)胞之間生成靜電力，再利用自身所攜帶的正電荷分子聚合物，拉近細(xì)胞之間的間距，生成凝聚現(xiàn)象。通過(guò)假性凝聚清理液，將非特異型的凝聚進(jìn)行消除處理，保障具有抗原抗體的特異型凝聚不產(chǎn)生任何影響。但該檢測(cè)方式，需通過(guò)顯微鏡進(jìn)行詳細(xì)觀察，且容易受到藥物、肝素等影響，從而導(dǎo)致結(jié)果容易出現(xiàn)誤差[7]。

微柱凝膠技術(shù)作為一項(xiàng)新型的檢測(cè)方式，因具有優(yōu)良的敏感度、方便快捷的操作、高精確度、可重復(fù)性利用等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于交叉配血、抗體篩選、血型檢測(cè)中。其融合了離心技術(shù)、凝膠過(guò)濾技術(shù)、抗原抗體反應(yīng)的眾多技術(shù)的優(yōu)良特點(diǎn)，能夠在抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的時(shí)候，具有IgG類(lèi)型的抗體致敏作用的紅細(xì)胞，能通過(guò)抗人球蛋白進(jìn)行特異型的凝聚，而在離心處理后可以分離游離性的紅細(xì)胞與凝聚性的紅細(xì)胞[8]。對(duì)于需要大量進(jìn)行輸血的患者，或者大批量進(jìn)行樣本配血檢測(cè)來(lái)說(shuō)，該檢測(cè)技術(shù)操作快捷方便，且影響因素也較少，結(jié)果精確度高且穩(wěn)定。此外，該檢測(cè)方式具有較高的敏感度，檢測(cè)可實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化，能精準(zhǔn)提高不規(guī)則抗體檢測(cè)的有效性與安全性，進(jìn)一步為輸血提供了有效保障。但該檢測(cè)方式因離心處理時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)法短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行判斷檢測(cè)，因此不宜用于急診中的交叉配血檢測(cè)[9]。微柱凝膠技術(shù)解決了紅細(xì)胞血型血清學(xué)臨床檢測(cè)中長(zhǎng)期存在的問(wèn)題?？谷饲虻鞍诇y(cè)試是在微柱凝膠培養(yǎng)基中進(jìn)行的，不需要清洗，也不需要確認(rèn)陰性結(jié)果，測(cè)試過(guò)程簡(jiǎn)單。如鹽水試管血球凝集測(cè)試，可常規(guī)用于臨床樣本測(cè)試，混合血液樣本中是否存在其他人的紅細(xì)胞，如患者輸血或骨髓移植后的血液，或人類(lèi)紅細(xì)胞嵌合血型等，都可以簡(jiǎn)單準(zhǔn)確地確定血型表型。

微柱凝膠技術(shù)是基于凝膠微柱分子層析原理，較小的紅細(xì)胞首先通過(guò)凝膠間隙與不規(guī)則抗體結(jié)合完成血型鑒定。微柱凝膠技術(shù)可以提高紅細(xì)胞結(jié)合不規(guī)則抗體的靈敏度，提高血型鑒定的陽(yáng)性和陰性分型符合率，進(jìn)而提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。與凝聚胺法相比，微柱凝膠法能提高血液檢測(cè)的靈敏度，不規(guī)則抗體檢測(cè)陽(yáng)性率高于微柱凝膠法，主要原因是它能消除冷凝集的干擾，為保證輸血的安全性。凝聚胺法雖然可以快速檢測(cè)出不完全抗體，但是冷凝血樣本存在假陽(yáng)性，導(dǎo)致醫(yī)師判斷失誤，從而延長(zhǎng)了交叉配血的時(shí)間，給交叉配血帶來(lái)一定的困難，延長(zhǎng)了搶救時(shí)間。凝聚胺法是臨床交叉配血常用的方法，可以快速檢測(cè)出血液配血結(jié)果，但操作步驟繁多，具有復(fù)雜性。凝聚胺溶液會(huì)釋放大量陽(yáng)性電荷，導(dǎo)致紅細(xì)胞出現(xiàn)非特異性凝集，臨床上通過(guò)滴加枸櫞酸鈉后，對(duì)凝集是否分散進(jìn)行觀察，以判斷血型匹配結(jié)果。凝聚胺法的交叉配血結(jié)果會(huì)受到多種藥物、肝素的影響，使凝集的紅細(xì)胞分散，出現(xiàn)假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，影響診斷。微柱凝膠免疫分析技術(shù)不受低濃度抗體和藥物的影響，操作簡(jiǎn)便，可減少樣品污染，具有較高的安全性和準(zhǔn)確性。

通過(guò)本次試驗(yàn)對(duì)比可知，試驗(yàn)組具有較高的敏感度，且交叉配血相容概率低于對(duì)照組，組間具有明顯的可比性（P＜0.05）；此外，試驗(yàn)組的交叉配血呈陽(yáng)性的概率也顯著高于對(duì)照組，也證明了其具有較高的精準(zhǔn)性，組間具有差異（P＜0.05）；而在交叉配血檢測(cè)過(guò)程中，雖然檢測(cè)操作的時(shí)間較長(zhǎng)，但所需的血清容量?jī)H為對(duì)照組的1/4，組間具有顯著性（P＜0.05）。該結(jié)論與豐強(qiáng)[10]學(xué)者在《凝聚胺法與微柱凝膠法交叉配血陽(yáng)性結(jié)果研究》一文中取得的結(jié)果一致，其將2 000例無(wú)償獻(xiàn)血者的供血樣本作為研究對(duì)象，按照《輸血技術(shù)學(xué)》及產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)中的操作流程進(jìn)行試驗(yàn)操作，急診進(jìn)行凝聚胺法配血，其他配血類(lèi)型則采用微柱凝膠法，記錄并比較凝聚胺法與微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血呈陽(yáng)性的結(jié)果。通過(guò)對(duì)比可知，凝聚胺法檢測(cè)中，總陽(yáng)性有50.00%，主側(cè)陽(yáng)性25.00%，次側(cè)陽(yáng)性43.00%，假陽(yáng)性23.00%；微柱凝膠法檢測(cè)中，總陽(yáng)性有90.00%，主側(cè)陽(yáng)性38.00%，次側(cè)陽(yáng)性78.00%，假陽(yáng)性34.00%，兩組之間具有明顯的可比性（χ2=38.1000，P=0.0001）；而凝聚胺法操作耗時(shí)（12.09±2.11）min，微柱凝膠法操作耗時(shí)（32.22±2.31）min，組間具有明顯差異（P＜0.05）。該數(shù)據(jù)也再次證明了，微柱凝膠法雖檢測(cè)的耗時(shí)較長(zhǎng)，不宜用于急診交叉配血中，但其具有較高的敏感度與精確性[11]，方便又快捷，對(duì)于交叉配血的檢測(cè)具有重要作用。

綜上所述，交叉配血檢測(cè)中應(yīng)用微柱凝膠技術(shù)，可以快速、便捷地進(jìn)行交叉配血，短時(shí)間內(nèi)通過(guò)少量的血清容量即可有效提高配血的精準(zhǔn)度，值得廣泛推廣與應(yīng)用。