腎虛證動物模型研究進(jìn)展

李國輝，黃曉巍，王雨辰，白 冰，林 喆*

（1.長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，長春 130117；2.吉林修正藥業(yè)新藥開發(fā)有限公司，長春 130103）

腎主藏精，與人生殖、生長發(fā)育及衰老有關(guān)。腎虛是臨床常見的病證之一，一些疾病的轉(zhuǎn)歸及預(yù)后也會出現(xiàn)腎虛證。因此建立腎虛證動物模型對疾病的治療與轉(zhuǎn)歸非常重要[1][2],也為中醫(yī)臨床指導(dǎo)和診療疾病提供依據(jù)[3][4]。目前腎虛動物模型大體分為兩大類:中醫(yī)病因病機(jī)類模型和西醫(yī)病理生理類動物模型。本文將從這兩類造模方法進(jìn)行綜述。

1 中醫(yī)病因病機(jī)動物模型

1.1 驚恐傷腎動物模型

中醫(yī)基礎(chǔ)理論中有“恐傷腎”學(xué)說。《素問》說“百病生于氣也，怒則氣上，喜則氣緩，悲則氣消，恐則氣下，驚則氣亂?！薄绑@則心無所依，神無所歸，慮無所定，故氣亂矣?！庇纱苏f明驚和恐的情志刺激可影響人體的氣機(jī)運(yùn)行，所以驚恐及腎?？梢姷襟@悸、坐立不安、慌亂、甚則神亂，大小便失禁、滑精、腰酸等癥狀。根據(jù)中醫(yī)“驚恐累及腎”的理論，和靖[5]利用電子驅(qū)鼠儀恐嚇孕鼠方法，考察恐嚇對試驗(yàn)動物所繁育出的子代的影響，其結(jié)果表明，驚恐對模型動物子代的血清T3、T4、CORT、CAMP均降低，CGMP升高、CAMP/CGMP降低。

1.2 勞倦過度，房勞傷腎動物模型

腎者，主蟄，封藏之本，精之處也，主藏精，故腎精不應(yīng)該過度消耗?！澳I者，作強(qiáng)之官，伎巧出焉”，“因而強(qiáng)力，腎氣乃傷，高骨乃壞”。房勞過度，耗傷腎精，日久導(dǎo)致腎虛。常見腰酸，耳鳴，眩暈，精神萎靡，生殖機(jī)能減退。和靖[5]用“房勞傷腎”造模，發(fā)現(xiàn)模型動物子代的血清T3、T4、CORT、CAMP均降低，CGMP升高、CAMP/CGMP降低。此方法建造的腎虛動物模型，與臨床常見的腎精虧虛患者的表現(xiàn)及檢測指標(biāo)一致。2月齡親代雄性鼠與發(fā)情期雌鼠按1：3同籠，將籠中雌鼠每天進(jìn)行隨機(jī)互換,每間隔3d更換新的雌鼠。替換下來的雌鼠休息7d，再通過處理后，繼續(xù)使用，每只雌鼠使用3～4次。如此飼養(yǎng)30d。顏亭祥等[6]“勞倦過度，房勞傷腎”造模，模型鼠出現(xiàn)進(jìn)食量和飲水量減少，怕冷喜暖、聚攏在一起、自由活動度低、皮毛稀疏、失去光澤。游泳時長減少，性交次數(shù)明顯減少，大便稀溏，小便增多，陰囊皺縮，睪丸回升，與臨床腎虛相符。張丹［7］等“勞倦過度，房事不節(jié)”造模，通過強(qiáng)制小鼠勞倦游泳法造模；通過Colldege效應(yīng)導(dǎo)致雄性小鼠房勞過度，模擬腎陽虛小鼠模型。結(jié)果模型組出現(xiàn)體溫下降、畏寒、呈淡白舌、齒痕明顯、舌乳頭密度增加等。

1.3 先天不足腎虛模型

腎是先天之本，先天之精和后天之精儲藏在腎中，其精氣的盛衰可以確定子代體質(zhì)量的強(qiáng)弱。先天之精旺盛，則先天稟賦強(qiáng)，子代在出生后體質(zhì)強(qiáng)壯；反之則出現(xiàn)五軟、五遲，影響身體和心理的健康發(fā)展。馮新玲等[8]采用“驚恐傷及懷孕雌鼠”的方式進(jìn)行造模，發(fā)現(xiàn)新生幼鼠體質(zhì)量明顯變差、牙齒萌出晚、被毛生長稀疏、生長發(fā)育緩慢且髓海不足、大腦發(fā)育遲緩，從而揭示了“恐傷孕鼠”所繁育的子代為先天腎虛模型。周永生等[9]通過禁食孕鼠使老鼠過度饑餓的造模方法使懷孕雌鼠繁育的仔鼠體質(zhì)量降低，可作為腎精先天不足的模型。

1.4 老年腎虛模型

依據(jù)腎可藏精，精可化氣，腎精虧虛則腎氣衰的中醫(yī)理論，張?jiān)迫绲龋?0］對自然衰老雄性SD大鼠進(jìn)行觀察，研究發(fā)現(xiàn)，26～28月齡大鼠出現(xiàn)精神萎靡、倦臥弓背、嗜睡懶動等癥狀，血清中Cor、T3、T4含量明顯減少。吳君等［11］觀察老齡大鼠尿量、離子濃度及皮質(zhì)醇的變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型大鼠出現(xiàn)嗜睡懶動、行動遲緩、毛發(fā)發(fā)黃無光、目光晦黯等癥狀，5、24 h尿量明顯增多，尿液中Na+、Cl-濃度增加，K+濃度降低，皮質(zhì)醇的含量明顯降低。

1.5 復(fù)合腎虛模型

通過中醫(yī)基礎(chǔ)理論中“病日久累及腎”的觀點(diǎn)，可知“腎虛證”的發(fā)病是一個持續(xù)周期長的過程，常不是單一病因致病。故應(yīng)用復(fù)合造模法建立的動物模型，更符合臨床情況。史年剛［12］依據(jù)中醫(yī)“陽偏衰失于溫煦則寒”的理論挑選出陽虛的老齡雌鼠和雄鼠作為親代并繁育子代，對懷孕的雌鼠采用貓嚇鼠“驚恐傷腎”，低溫“寒邪易傷陽氣”和黃柏溶液灌胃聯(lián)合造模方式直至仔鼠出生，出生后觀察子代模型小鼠，小鼠出現(xiàn)體質(zhì)量下降、畏寒怯冷、被毛脫落、被毛無光澤、嗜睡懶動、大便稀溏、食量下降,還出現(xiàn)ATP產(chǎn)能下降、低體重兒比例增加，呼吸鏈酶代謝異常和下丘腦抑制了能量代謝等表現(xiàn)，符合腎陽虛的表現(xiàn)。

2 西醫(yī)病理生理動物模型

2.1 腎氣虛證模型

腎氣虛證是指腎氣虧虛，生長發(fā)育遲緩，生殖功能下降，攝納無權(quán)等所表現(xiàn)的證候，臨床以腰膝酸軟、氣短自汗、倦怠無力、小便頻數(shù)而清長，遺尿或尿失禁為主要表現(xiàn)。根據(jù)腎主水理論，王德山等[13]取SD大鼠，腹腔注射丁胺卡那霉素，250 mg/kg，分2次注射，連續(xù)14 d。結(jié)果表明，大鼠體重增長遲緩，毛稀松、畏寒、食欲下降，精神萎靡，尿量增多，尿比重減低。腎臟AQP2mRNA的表達(dá)減少，從而導(dǎo)致腎臟AQP2表達(dá)減少。太史春等[14]腎臟AQP1表達(dá)降低。

2.2 腎陽虛證模型

腎陽虛證是指腎陽氣虛衰，溫煦失職所出現(xiàn)的一類虛寒癥狀，臨床以腰膝酸軟冷痛、畏寒肢冷、性欲冷淡、反應(yīng)遲鈍、尿頻清長、夜尿多等為主要表現(xiàn)。

腎陽虛證動物模型主要是依據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)來探索腎陽虛證的病理變化，常表現(xiàn)為內(nèi)分泌功能障礙，通過運(yùn)用藥物干預(yù)、機(jī)械損傷等方式影響動物的靶腺軸，使其功能紊亂復(fù)制腎陽虛病理模型[15-17]?，F(xiàn)將常見的病理模型及相關(guān)評價指標(biāo)進(jìn)行歸納總結(jié)，詳見表1。

2.3 腎陰虛證模型

腎陰虛是由于腎陰虧虛，對機(jī)體各功能部分失于滋養(yǎng)濡潤，虛熱內(nèi)擾所表現(xiàn)的癥狀，臨床以腰膝酸軟、心煩、頭暈、耳鳴、失眠多夢、煩熱、潮熱盜汗、陽強(qiáng)易舉、陽痿早泄為主要表現(xiàn)?，F(xiàn)將最常用的模型建立的方法以及相關(guān)評價指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)歸納，詳見表2。

表2 腎陰虛證動物模型制備及評價

2.4 腎精不足證模型

腎精不足證是由于腎中所儲藏的精氣虧虛，表現(xiàn)出生長、發(fā)育與生殖機(jī)能減退，多因先天不足，后天失養(yǎng)，或脾運(yùn)化失調(diào)，后天之精生成不足。臨床以生長發(fā)育遲緩，身材矮小，骨骼痿軟，智力低下，早衰，性欲減退等為主要表現(xiàn)的證候。目前對常用的腎精不足證模型及相關(guān)評價指標(biāo)進(jìn)行歸納，詳見表3。

表3 腎精不足證動物模型制備及評價

3 現(xiàn)存不足及展望

3.1 缺乏規(guī)范化的造模對象

目前腎虛證常采用的模型動物大多為大鼠、小鼠及家兔，缺乏其它品系動物對于腎虛證造模方法的普遍性，科學(xué)性，規(guī)范化的研究，現(xiàn)今并沒有明確規(guī)定各造模方法最相匹配的模型動物[41]。將動物作為模型對象，與人類存在一定的種屬差異，人體的證候特征在試驗(yàn)動物上只能實(shí)現(xiàn)部分的復(fù)制，不能完全模擬出人體全面的證候特征[42]。

3.2 缺乏標(biāo)準(zhǔn)化的造模方法

常用的病理模型在給藥方式、劑量、造模周期上存在較大差異，其結(jié)果的可靠性也會受到學(xué)者的質(zhì)疑。例如，使用糖皮質(zhì)激素類藥物構(gòu)建腎陽虛證模型，其給藥方式多樣，有肌肉注射、皮下注射、口服灌胃等，且給藥劑量也尚未完全相同。模擬中醫(yī)病因模型也存在模型的刺激因素較難控制等缺陷。如使用房勞、體勞、驚恐等方式造模時，很難將刺激做到標(biāo)準(zhǔn)化、定量化、程度化，容易導(dǎo)致模型病理程度不同，給中藥藥理學(xué)研究帶來很多不便，難于被科學(xué)界認(rèn)可。

3.3 缺乏標(biāo)準(zhǔn)化、特異性的評判指標(biāo)

中醫(yī)學(xué)認(rèn)識和治療疾病的出發(fā)點(diǎn)是“證”，它是從整體上對疾病發(fā)展至某一階段的病因、病性、病理的概括，并隨時間和空間的變化而改變[43]。成功復(fù)制腎虛證候模型的關(guān)鍵不僅要體現(xiàn)出中醫(yī)的證候特征，還需要有被專家和學(xué)者認(rèn)可的病理生理評價指標(biāo)。目前常被用來評判的指標(biāo)主要有觀察模型動物的腎虛一般體征表現(xiàn)，檢測靶腺軸功能，以及對免疫力、能量代謝、自由基代謝、環(huán)核苷酸系統(tǒng)的檢測等[44]。雖取得一些成就，但尚沒有達(dá)成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，難以做到診斷指標(biāo)的大眾化、標(biāo)準(zhǔn)化。

綜上所述，腎虛證動物模型大體上復(fù)制了人體腎虛證的證候，在研究中醫(yī)證候、治法等方面已取得初步成果，但仍需要廣大研究者繼續(xù)研究和發(fā)展。一個成功的腎虛證動物模型，中醫(yī)病因是模擬腎虛證候的關(guān)鍵成因，其病因發(fā)生的病理變化應(yīng)該是其模擬的腎虛證候[45]。因此，不僅要建立證候的規(guī)范化，展示中醫(yī)證候特征，還需提高診斷的標(biāo)準(zhǔn)化、科學(xué)化，突出證候診斷的實(shí)踐價值。全力探索能全面體現(xiàn)腎虛證本質(zhì)的客觀指標(biāo)，以實(shí)現(xiàn)對腎虛證動物模型的標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)踐性，更好的適用于中醫(yī)藥研究的各個領(lǐng)域。