民族藥馬利筋內生真菌生物活性研究

殷娜　宋娜麗　普曉佳　顧茜蘭　楊海浩　 萬春平　祁燕　李小絲　鄭喜

摘要：藥用植物內生真菌能產生與宿主相同或相似的活性物質，民族藥馬利筋生物活性廣泛。為獲得馬利筋活性內生真菌資源，該研究基于“民族藥-內生真菌-活性成分”的思路，考察了168株馬利筋內生真菌代謝產物的生物活性，并分別采用SRB法、Griess法、PNPG法和DPPH法對內生真菌發(fā)酵液乙酸乙酯提取物進行抗腫瘤、抗炎、α葡萄糖苷酶抑制和抗氧化等生物活性測定，對活性菌株進行ITS菌種鑒定。結果表明：（1）所篩選的168株內生真菌中有22株表現(xiàn)出不同程度的生物活性。其中，9株內生真菌具有顯著抗腫瘤活性，其IC50值在0.1～40μg·mL1之間;菌株MJF53在2.5μg·mL1時對LPS誘導的Raw264.7釋放的NO和IL1β均具有明顯的抑制作用;7株內生真菌表現(xiàn)出不同程度的α葡萄糖苷酶抑制活性，其IC50值在1.0～4.0mg·mL1之間，其中MYF16和MYF55對α葡萄糖苷酶抑制活性接近阿卡波糖;19株內生真菌具有不同程度的DPPH自由基清除活性，其中菌株MYF9、MYF19和MJF84表現(xiàn)出中等強度的抗氧化活性，IC50值分別為13.562、17.776、12.395μg·mL1。（2）ITS菌株鑒定發(fā)現(xiàn)，22株活性菌株分屬于鏈格孢屬（Alternariasp.）、刺盤孢屬（Colletotrichumsp.）、鐮刀菌屬（Fusariumsp.）、間座殼屬（Diaporthesp.）、踝節(jié)菌屬（Talaromycessp.）和新殼梭孢屬（Neofusicoccumsp.）等不同屬。研究結果認為，馬利筋內生真菌的生物活性具有多樣性，可為從馬利筋內生真菌中挖掘潛在新型天然抗腫瘤、抗炎、降糖和抗氧化活性化合物奠定基礎。

關鍵詞：馬利筋，內生真菌，抗腫瘤，抗炎，α葡萄糖苷酶抑制劑，DPPH自由基，ITS

中圖分類號：Q946

文獻標識碼：A

文章編號：10003142（2022）05078109

Biologicalactivitiesofendophyticfungi

fromAsclepiascurassavica

Abstract：Endophyticfungiinmedicinalplantshavethecapacitytoproducebioactivecompoundswhosefeatureshavegreatidentityorsimilaritywiththephytohosts.SinceAsclepiascurassavicahasbeenknowntopossessabroadrangeofbiologicalactivities，wesoughttoobtaintheactiveendophyticfungifromthisplant.Weperformedthestudyfollowedtheideaof“ethnicdrug-endophyticfungi-activeingredients”，andthereafterweexaminedthebioactivitiesoffungalmetabolitesfrom168strainsofendophyticfungiisolatedfromA.curassavica.Toevaluatethebiologicalactivitiesofantitumor，antiinflammatory，antiαglucosidaseandantioxidantinthesefungi，theethylacetateextractsfromfermentationbrothofendophyticfungiwerefirstdeterminedusingthemethodsofSRB，Griess，PNPGandDPPH，respectively.Furthermore，weidentifiedthebioactivefungalstrainswithconservedITSsequencing.Theresultswereasfollows：（1）Atotalof22in168isolatedstrainshadvariablebiologicalactivities.NinestrainshadobviousantitumoreffectwiththeIC50valuesof0.1-40μg·mL1.Further，thestrainMJF53displayedprominentinhibitoryeffectsonthereleaseofbothNOandIL1βinRaw264.7celllinebyLPSinductionundertheconcentrationof2.5μg·mL1.ThereweresevenstrainsshowingαglucosidaseinhibitoryactivitywiththeIC50valuesrangingfrom1.0to4.0mg·mL1，especially，theinhibitoryactivitiesofMYF16andMYF55wereclosetoacarbose;19endophyticfungihaddifferentdegreesofDPPHfreeradicalscavengingactivities，amongwhichMYF9，MYF19andMJF84showedmoderateantioxidantactivitieswithIC50valuesof13.562，17.776and12.395μg·mL1respectively.（2）TheITSidentificationshowedthatthe22activestrainsweremainlydistributeinsixgenera：Alternariasp.，Colletotrichumsp.，F(xiàn)usariumsp.，Diaporthesp.，Talaromycessp.andNeofusicoccumsp.ThisstudyindicatesthatthebioactivitiesoftheendophyticfungifromA.curassavicaarediverse，whichlaysafoundationforexploringnewpotentialnaturalantitumor，antiinflammatory，hypoglycemicandantioxidantcompoundsfromtheendophyticfungiofA.curassavica.697B9528-575B-4F9E-B926-7C77DA6C1103

Keywords：Asclepiascurassavica，endophyticfungus，antitumor，antiinflammatory，αglucosidaseinhibitor，DPPHfreeradical，ITS

植物內生真菌是指在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官內部，而不使宿主植物產生病變和排斥反應的真菌（Hardoimetal.，2015）。藥用植物內生真菌在抗腫瘤、抗微生物、抗炎、抗氧化、降糖、殺蟲等方面有較好的生物活性。Wei等（2020）從莞根中分離得到內生真菌pr10能顯著抑制A549的生長;Ran等（2017）從喜樹組織中分離獲得能產抗腫瘤化合物喜樹堿的內生真菌;Sailesh等（2020）從黃芩根中分離的內生真菌QF001，其代謝產物能夠有效抑制LPS刺激Raw264.7中促炎細胞因子NO、TNFα和IL6的表達;Geethanjali等（2019）從長春花中分離的黑毛殼菌代謝物乙酸乙酯提取物具有較強的DPPH自由基清除活性;Afra等（2015）研究發(fā)現(xiàn)葫蘆種子和苦杏內生真菌代謝物具有較強的抗氧化能力;鄭喜等（2014;2015）從昆明山海棠中分離獲得一株具有抑制α糖苷酶作用的鏈革孢屬真菌ThF63和一株具有抗菌和殺蟲活性的簡青霉ThF11。因此，藥用植物內生真菌被認為是活性天然產物的重要來源（Sanjanaetal.，2012）。近年來，從藥用植物內生真菌中尋找新型天然活性化合物已成為新的研究熱點，藥用植物內生真菌代謝產物的多樣性為尋找新穎天然活性化合物提供了有效途徑。

馬利筋（Asclepiascurassavica）是云南傣醫(yī)常用藥，性涼、味甘，具有調經活血、止痛退熱、消炎散腫的功效（蔣振忠和馮德強，2006），被廣泛用于強心、癌癥、哮喘、發(fā)燒、炎癥、腹瀉、淋病、風濕、心血管等疾病的治療（楊衛(wèi)平等，2016;李岡榮，2017;蔣洪和宋緯文，2017）。目前，馬利筋的研究主要集中在藥效學方面，研究表明馬利筋提取物具有抗菌、抗癌、心血管、鎮(zhèn)痛、解熱等多種藥理活性（Raja&Ravindranadh，2014;Ali，2015）;藥效機制方面，Zheng等（2019）研究發(fā)現(xiàn)馬利筋乙酸乙酯提取物能顯著抑制A549、Hela、SKOV3、MGC803、NICH1975等多株腫瘤細胞的增殖，通過激活P38和JNKMAPK信號通路誘導NICH1975發(fā)生凋亡。然而，有關馬利筋內生真菌及其生物活性的研究鮮有報道。

藥用植物中蘊藏著豐富多樣的內生真菌，與宿主植物長期進化使之能產生與宿主相同或相似的活性物質（王景儀等，2020）。Stierle等（1993）從紅豆杉中分離獲得產紫杉醇的內生真菌。因此，從藥用植物內生真菌中尋找天然活性產物是一條有效的途徑?；诖?，我們提出了“馬利筋內生真菌可能具有抗腫瘤、抗炎癥和抗氧化等生物活性”的科學假說，并基于“藥用植物-內生菌-生物活性”的研究思路，首次以馬利筋內生真菌為研究對象，對168株西雙版納產馬利筋內生真菌進行抗腫瘤、抗炎、α葡萄糖苷酶抑制及DPPH自由基清除等活性研究，以期為后續(xù)從中深入發(fā)掘潛在新型天然抗腫瘤、抗炎、降糖和抗氧化等活性化合物奠定良好基礎，這對保護民族藥馬利筋野生資源具有重要意義。

1材料與方法

1.1內生真菌和供試細胞株

168株供試內生真菌是從產自云南西雙版納的新鮮馬利筋的莖和葉中分離獲得，其中莖中分離獲得106株（MJF1～MJF106），葉中分離獲得62株（MYF1～MYF62），菌株培養(yǎng)于PDA和PDB培養(yǎng)基中。供試細胞株為人肺腺癌細胞NICH1975、人乳腺癌細胞MCF7、人結腸癌細胞HCT116、人宮頸癌細胞Hela、人肝癌細胞株HepG2和小鼠單核巨噬細胞Raw264.7。其中，NICH1975和MCF7采用RPMI1640完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，其他細胞株采用DMEM高糖完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。以上細胞均購自中國科學院昆明動物研究所細胞庫。

1.2培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL，pH自然。馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基（PDB）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，蒸餾水1000mL，pH自然。RPMI1640完全培養(yǎng)基：RPMI1640基礎培養(yǎng)基900mL，胎牛血清100mL，雙抗10mL，混合均勻。DMEM高糖完全培養(yǎng)基：DMEM高糖培養(yǎng)基900mL，胎牛血清100mL，雙抗10mL，混合均勻，4℃冰箱保存、備用。

1.3主要儀器和設備

DHZ052D型恒溫搖床（上海博彩生物科技有限公司）、DHP9052型恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司）、Heidolph型旋轉蒸發(fā)儀（德祥科技有限公司）、SpectraMaxi3x型多功能酶標儀（美谷分子儀器（上海）有限公司）、二氧化碳培養(yǎng)箱（ThermofisherScientific）。

1.4內生真菌的培養(yǎng)及提取物的制備

挑取分離所得的馬利筋內生真菌到新鮮PDA培養(yǎng)基上進行活化，活化后的內生真菌接種于PDB培養(yǎng)基中，28℃、150r·min1搖床培養(yǎng)8d，過濾菌絲，收集發(fā)酵液并用乙酸乙酯萃取3次，萃取物于旋轉蒸發(fā)儀上濃縮得提取物浸膏，將提取物浸膏用DMSO溶解配成初始濃度200mg·mL1的母液，4℃冰箱保存、備用。

1.5腫瘤細胞毒活性測定

采用SRB法（Skehanetal.，1990）進行腫瘤細胞毒活性測定，取對數(shù)生長期的腫瘤細胞株NICH1975、MCF7、HCT116、Hela和HepG2按4×104個·mL1接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100μL，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，加入100μL不同濃度（40、20、10、5、2.5、1.25μg·mL1）提取物，每個濃度設3個復孔，同時設3個對照孔，置于CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h，棄培養(yǎng)上清，每孔加入4℃預冷的10%的TCA100μL，4℃固定1h后用蒸餾水洗滌5次，空氣中自然風干。每孔加入4mg·mL1的SRB溶液100μL，室溫染色15min，棄上清液，用1%醋酸洗滌5次，空氣干燥，每孔加入100μL的Tris（10mmol·L1）溶液，室溫下放置5min，于560nm波長處測OD值。按以下公式計算各菌株提取物對腫瘤細胞的生長抑制率，半數(shù)抑制濃度IC50值采用Origin軟件計算。697B9528-575B-4F9E-B926-7C77DA6C1103

I（%）=（Ay-Ac）/Ac×100。

式中：I代表抑制率;Ay代表給藥組OD值;Ac代表對照組OD值。

1.6抗炎活性測定

1.6.1細胞活力測定采用SRB法（Skehanetal.，1990）檢測各提取物對Raw264.7細胞活力的影響，取對數(shù)生長期細胞按每孔3×105個接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100μL，設置內生真菌提取物組和對照組，提取物組加入50μL不同濃度（10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625μg·mL1）提取物和50μLDMEM高糖完全培養(yǎng)基，對照組加入100μL培養(yǎng)基，每組設3個復孔，加藥后，放于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，SRB法檢測Raw264.7細胞活力。

1.6.2LPS誘導的Raw264.7細胞中NO測定采用Griess法（Kimetal.，2020）進行NO檢測，取對數(shù)生長期的Raw264.7細胞按每孔3×106個接種于96孔板中，每孔100μL。將細胞分為空白組（DMEM培養(yǎng)基）、模型組（1.5μg·mL1LPS+DMEM培養(yǎng)基）和內生真菌提取物組[1.5μg·mL1LPS+各濃度提取物（2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625μg·mL1）]，每組設3個復孔。加藥后，放于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，收集培養(yǎng)上清，采用Griess法檢測培養(yǎng)上清中NO水平。

1.6.3LPS誘導的Raw264.7細胞中IL6、IL1β和TNFα的測定按1.6.2的方法對Raw264.7細胞進行處理，按照酶聯(lián)免疫吸附試劑盒說明書檢測細胞培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子α（TNFα）、白細胞介素6（IL6）、白細胞介素1β（IL1β）水平，根據標準曲線，計算上清中各種炎癥因子的含量。

1.7α葡萄糖苷酶抑制活性測定

參照鄭喜等（2015）方法，將內生真菌提取物和阿卡波糖用pH6.8的磷酸鹽緩沖液稀釋至所需濃度，α葡萄糖苷酶凍干粉配成濃度為0.8U·mL1溶液，底物（PNPG）配成濃度2.5mmol·L1溶液。設置對照組（磷酸鹽緩沖液+酶液+底物）、空白對照組（磷酸鹽緩沖液）、樣本測定組（磷酸鹽緩沖液+提取物+酶液+底物）、樣本對照組（磷酸鹽緩沖液+提取物）和陽性對照組（磷酸鹽緩沖液+阿卡波糖+酶液+底物），依次加入20μL提取物或阿卡波糖（5、2.5、1.25、0.625mg·mL1）、20μL磷酸鉀緩沖液、20μLα葡萄糖苷酶，37℃恒溫孵育15min后，加入20μL2.5mmol·L1的PNPG，37℃恒溫反應15min，再加入80μL0.1mol·L1的NaCO3溶液終止反應，于405nm波長測吸光度值A。每個樣本設3個復孔，實驗重復3次。按以下公式計算抑制率，并用Origin軟件計算IC50值。

I（%）=[1-（Ast-Asc）/（Ac-Ab）]×100。

式中：I代表抑制率;Ast代表樣本測定組OD值;Asc代表樣本對照組OD值;Ac代表對照組OD值;Ab代表空白對照組OD值。

1.8DPPH自由基清除活性測定

參照Guo等（2020）方法進行測定，將內生真菌提取物和維生素C用無水乙醇稀釋至所需濃度，DPPH用無水乙醇配成0.2mmol·L1的溶液。分別將100μL各濃度測試提取物溶液（800、400、200、100、50μg·mL1）和100μLDPPH溶液加入到96孔板中，輕輕混勻，室溫下避光靜置反應30min后于517nm波長測定其吸光度As，同時測定100μLDPPH溶液與100μL無水乙醇混合后的吸光度Ab，以及200μL無水乙醇的吸光度值Aref。按以下公式計算提取物對DPPH自由基的清除率，并用Origin軟件計算IC50值。

I（%）=[（As-Aref）-（Ab-Aref）]/（Ab-Aref）×100。

式中：I代表DPPH自由基清除率;As代表測試樣本和DPPH混合溶液OD值;Ab代表DPPH和無水乙醇混合溶液OD值;Aref代表無水乙醇OD值。

1.9活性菌株的鑒定

參照譚小明等（2014）的方法進行活性菌株鑒定，將純化好的活性菌株菌絲（0.5～1g）在液氮中迅速研磨成粉，參照天根真菌DNA提取試劑盒的操作說明提取真菌DNA。同時，采用通用引物ITS4（TCCTCCGCTTATTGATATGC）和ITS5（GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG）按以下反應條件進行PCR擴增：95℃，4min;95℃，30s，56℃，30s，72℃，1min，30個循環(huán);72℃，10min。PCR擴增產物取5μL進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，并委托擎科生物技術有限公司測序，反饋序列通過NCBI（http：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/）進行比對，確定活性菌株種屬。

2結果與分析

2.1馬利筋內生真菌代謝產物對腫瘤細胞生存率的影響

采用SRB法測定168株馬利筋內生真菌抗腫瘤活性，結果見表1。從表1可以看出，9株內生真菌提取物表現(xiàn)出廣譜而顯著細胞毒作用，其中以MYF16活性最強，活性強于順鉑。大部分活性菌株對NICH1975、HCT116和Hela較MCF7和HepG2敏感，具有更好的抑制作用;菌株MJF33對HepG2腫瘤細胞較為敏感，其IC50為0.147μg·mL1，而對其他4株腫瘤細胞的IC50>10μg·mL1;從菌株分布來看，活性菌株主要集中于馬利筋的莖，有8株，而葉中僅獲得1株活性菌株MYF16;來源于莖中的內生真菌活性弱于葉中內生真菌，可能跟宿主馬利筋抗腫瘤活性成分主要集中于葉有關。

2.2MJF53對LPS誘導的Raw264.7細胞中IL6、IL1β和TNFα的影響697B9528-575B-4F9E-B926-7C77DA6C1103

通過建立炎癥細胞模型，測定各內生真菌代謝物對Raw264.7細胞中NO的影響，發(fā)現(xiàn)菌株

MJF53在濃度小于2.5μg·mL1時對細胞無毒性，且能濃度依賴性抑制NO的分泌（圖1：a，b）。進一步測定MJF53對LPS誘導的Raw264.7細胞中IL6、IL1β和TNFα的影響，發(fā)現(xiàn)該菌株提取物在濃度2.5μg·mL1時能選擇性抑制IL1β的產生，而對TNFα和IL6的分泌無影響（圖1：c，d），推測MJF53可能通過選擇性抑制促炎因子IL1β分泌上游相關信號通路從而抑制炎癥發(fā)生。

2.3馬利筋內生真菌代謝產物對α葡萄糖苷酶活性的影響

通過α葡萄糖苷酶抑制活性篩選獲得7株對α葡萄糖苷酶具有較好抑制活性的內生真菌，抑制作用呈濃度依賴性，在濃度5mg·mL1時對α葡萄糖苷酶表現(xiàn)出顯著抑制作用，抑制率>70%，各活性菌株IC50值均小于4mg·mL1。其中，MYF16和MYF55對α葡萄糖苷酶的抑制活性最強，其IC50值分別為1.996和1.823mg·mL1，抑制活性接近阿卡波糖。結果見表2和表3。

2.4馬利筋內生真菌代謝產物對DPPH自由基清除活性的影響

采用DPPH法對168株內生真菌提取物進行抗氧化活性測定，發(fā)現(xiàn)在濃度800μg·mL1時，有19株內生真菌提取物對DPPH自由基的清除率均在50%以上，其中11株清除率在80%以上，菌株MYF9、MYF19和MJF84表現(xiàn)出較強的抗氧化活性，IC50分別為13.562、17.776和12.395μg·mL1。從菌株分布來看，DPPH自由基清除活性菌株有13株分布于馬利筋的莖中，6株分布于葉中。結果見表4和表5。

2.5活性菌株ITS鑒定結果

NCBI比對發(fā)現(xiàn)活性菌株序列相似度均接近100%，主要分布于鏈格孢屬（Alternariasp.）、刺盤孢屬（Colletotrichumsp.）、鐮刀菌屬（Fusariumsp.）、間座殼屬（Diaporthesp.）、踝節(jié)菌屬（Talaromycessp.）和新殼梭孢屬（Neofusicoccumsp.）6個屬，結果見表6。從表6可以看出，活性菌株主要集中分布于鏈格孢屬和間座殼屬2個屬，其中9株屬于鏈格孢屬，5株屬于間座殼屬，其他4個屬僅有8株，鏈格孢屬和間座殼屬可能是馬利筋優(yōu)勢活性菌株種屬。

3討論與結論

藥用植物內生真菌能產生結構新穎、種類多樣和生物活性廣泛的次生代謝產物，是活性天然產物的重要來源（Geethanjalietal.，2019）。在與宿主長期共寄生過程中宿主可能將其遺傳物質或信息傳遞給其內生真菌，使之具有和宿主相同或類似的代謝途徑，導致內生真菌能夠產生與宿主相同或相似生物活性的物質。馬利筋作為傣藥被廣泛用于癌癥、哮喘、強心、炎癥、風濕、發(fā)燒、腹瀉、淋病和心血管等疾病的治療（蔣洪和宋緯文，2017;李岡榮，2017），提示其具有多種生物活性，以抗腫瘤和抗炎活性引起廣泛關注。前期研究我們發(fā)現(xiàn)馬利筋具有顯著而廣譜的抗腫瘤活性，通過激活p38和JNKMAPK信號通路誘導NICH1975細胞凋亡介導抗腫瘤（Zhengetal.，2019）。本研究發(fā)現(xiàn)MYF16具有顯著而廣譜的生物活性，其抗腫瘤活性尤為顯著，對NICH1975最強，推測MYF16可能產生宿主馬利筋相同或相似生物活性的物質，研究結果與前期報道的紅豆杉內生真菌能產紫杉醇（Stierleetal.，1993;Somjaipengetal.，2015）以及喜樹內生真菌產喜樹堿（Ranetal.，2017）相似。因此，活性菌株MYF16可作為目標菌株進一步深入探討其活性代謝產物及抗腫瘤作用機制。

NLRP3炎癥小體的激活在調節(jié)炎癥反應中具有重要作用（Maoetal.，2017）。ATP等信號分子

促進胞內鉀離子外流介導NLRP3、ASC和caspase1組裝成蛋白嵌合體，進而激活caspase1自身剪切產生p20和p10兩個亞基，介導促炎因子IL1β和IL18剪切成熟釋放，導致炎癥反應的發(fā)生（丁楊和胡容，2018）。本研究發(fā)現(xiàn)，菌株MJF53在2.5μg·mL1時無明顯毒性且能有效抑制LPS誘導的Raw264.7中促炎因子NO和IL1β的分泌，推測該菌株可能產生抑制IL1β分泌的抗炎活性成分，通過抑制NLRP3炎癥小體激活抑制IL1β剪切成熟釋放介導抗炎作用，具體的抗炎機制及體內抗炎作用需要進一步深入確證。

藥用植物中蘊藏著豐富多樣的內生真菌，內生真菌是天然活性化合物的重要來源。ITS鑒定發(fā)現(xiàn)，22株活性菌株分屬于鏈格孢屬、刺盤孢屬、鐮刀菌屬、間座殼屬、踝節(jié)菌屬和新殼梭孢屬6個屬，其中9株屬于鏈格孢屬，5株屬于間座殼屬，廣譜活性菌株MYF16、MJF53和MJF64也分屬于這2個屬。由此推測，鏈格孢屬和間座殼屬可能是馬利筋優(yōu)勢內生真菌，結果與譚小明等（2015）報道的鏈格孢屬、鐮刀菌屬、刺盤孢屬等真菌是藥用植物的優(yōu)勢菌群相符。此外，內生真菌資源多樣性與宿主植物所處的環(huán)境密切有關，劉蕓等（2010）研究表明虎杖組織中內生真菌的種類和數(shù)量與季節(jié)密切相關;賈敏等（2014）研究發(fā)現(xiàn)不同

地域銀杏內生真菌的種類差別很大。因此，為了獲得更加豐富的馬利筋活性內生真菌資源，可以選擇不同季節(jié)、多個采樣點進行采樣后對不同部位進行分離、鑒定。

綜上所述，本研究篩選獲得多株具有抗腫瘤、抗炎、抑制α葡萄糖苷酶和清除DPPH自由基等活性的菌株，為從馬利筋內生真菌中深入發(fā)掘抗腫瘤、抗炎、降糖和抗氧化活性物質奠定基礎，對于開發(fā)傣藥馬利筋植物資源和拓展傣藥馬利筋應用具有一定的指導意義。

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（責任編輯蔣巧媛）

收稿日期：2021-03-20

基金項目：國家自然科學基金（81960745）;云南省基礎研究計劃面上項目（2019FB123）;云南省科技廳-云南中醫(yī)藥大學中醫(yī)聯(lián)合專項（2018FF001[077]），2018FF001[009]）

第一作者：殷娜（1994-），碩士研究生，研究方向為天然藥物作用及機制，（Email）2711732008@qq.com。

通信作者：鄭喜，碩士，助理研究員，研究方向為中藥和微生物天然產物藥理，（Email）Zhengxi138@163.com。697B9528-575B-4F9E-B926-7C77DA6C1103