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    常用黎族藥物裸花紫珠種子生物學(xué)特性及萌發(fā)性研究

    2022-06-14 14:08:46彭云露胡遠(yuǎn)艷李惠玲田建平
    湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:裸花紫珠培養(yǎng)皿

    彭云露,胡遠(yuǎn)艷,李惠玲,胡 艷,田建平

    (1.海南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院,???571199;2.熱帶轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)教育部重點實驗室,???571199;3.海南省熱帶藥用植物研發(fā)重點實驗室,???571199;4.海南大學(xué)海洋學(xué)院,???572208)

    裸花紫珠(Callicarpa nudifloraHook. et Arn.)隸屬于唇形科(Lamiaceae)紫珠屬(Callicarpa)植物,主要分布在海南、廣東、廣西、江西、福建等地,以枝葉入藥,是海南省黎族的常用藥物[1]。裸花紫珠具有止血、抑菌、抗炎、增強免疫等藥理活性,其臨床應(yīng)用非常廣泛,特別是2020 年新型冠狀病毒肺炎疫情的影響,市場對其資源的需求量大增[2,3]。

    近年來,裸花紫珠原有的野生資源已經(jīng)無法滿足市場的需要,現(xiàn)在裸花紫珠主要通過扦插繁育方式進(jìn)行人工種植,但上述無性繁殖方式不能保證裸花紫珠藥材的產(chǎn)量和質(zhì)量的穩(wěn)定[4]。選育新的優(yōu)良種質(zhì)材料是今后裸花紫珠育種工作的重點內(nèi)容,有必要對裸花紫珠種子的生物學(xué)習(xí)性和萌發(fā)特點進(jìn)行全面的科學(xué)研究。雖然,裸花紫珠種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已有初步研究[5],但很多方面沒有涉及,本研究對裸花紫珠種子進(jìn)行外觀性狀的測定,石蠟切片和超微結(jié)構(gòu)觀察,種子含水量和吸水率的測定,用TTC 溶液測定裸花紫珠種子的生活力,化學(xué)試劑處理測定種子萌發(fā)情況等方面進(jìn)行深入研究,為完善評價裸花紫珠種子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及更好地人工培育裸花紫珠提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    試驗材料用成熟種子采自海南醫(yī)學(xué)院校園植物,由田建平教授鑒定為裸花紫珠,標(biāo)本保存在海南醫(yī)學(xué)院中藥標(biāo)本室,對所采集種子進(jìn)行常溫干燥,備用。試驗所用浸種處理材料為天津市大茂公司生產(chǎn)的0.5%TTC 溶液、0.3%高錳酸鉀溶液、0.1%磷酸二氫鉀溶液、10%次氯酸鈉溶液、赤霉素、3%過氧化氫溶液、碳酸氫鈉溶液,沙土。

    1.2 方法

    1.2.1 種子橫切片和超微結(jié)構(gòu) 取裸花紫珠果實按照石蠟切片常規(guī)方法操作,在生物顯微鏡下觀察其種子的橫切面特征并拍照;同樣取裸花紫珠果實,用70%乙醇清洗表面雜質(zhì),于冷凍干燥機中處理后,置于真空鍍金儀中鍍膜,再按照掃描電鏡常規(guī)方法在電鏡下觀察并拍照。

    1.2.2 種子大小測量與千粒重測定 隨機選取裸花紫珠種子30 粒,仔細(xì)觀察其外部特征后再用游標(biāo)卡尺測量種子的長、寬、厚度,計算其平均值、標(biāo)準(zhǔn)差。從所采集種子中隨機取300 粒種子平均分為3 份,在電子天平上稱取每一份重量,取平均值乘以10,即為千粒重。

    1.2.3 種子含水量和吸水率 取100 粒裸花紫珠種子稱量并記錄重量M干前,而后置于約80 ℃烘箱內(nèi)烘烤30 min,取出立即再稱量并記錄數(shù)據(jù)M干后;立即再次放回烘烤30 min 再稱量,如此往復(fù),至稱量值不變。取100 粒裸花紫珠種子,稱重后記錄數(shù)據(jù)M吸前,而后在清水中浸泡30 min,取出種子并吸干表面水分后,再稱重并記錄數(shù)據(jù)M吸后;將種子再浸泡,吸干再稱量,如此往復(fù),至稱量值不變。以上均重復(fù)3 次試驗,分別計算含水率、吸水率并取其平均值[6,7]。

    1.2.4 種子生活力測定 取吸脹的裸花紫珠種子50 粒,沿種胚中心線縱切開,并均分為2 份。其中1 份加入約50 mL 0.5% TTC 溶液(將種子完全浸沒),室溫下浸泡2 h;將另1 份切開種子加水煮沸10 min,取出后進(jìn)行同樣染色處理作為對照組,顯微鏡下觀察胚著色情況。重復(fù)3 次,計算其種子生活力并取其平均值[8]。

    1.2.5 不同溫度下種子的萌發(fā) 在20、25、30、35 ℃的溫度條件下,取種子于培養(yǎng)皿中用水培養(yǎng),觀察裸花紫珠種子的萌發(fā)情況[9]。

    1.2.6 不同處理后種子的萌發(fā) 挑選飽滿的裸花紫珠種子,均分為4 份,每份50 粒置于培養(yǎng)皿中,其中1 份以清水浸泡作為空白試驗,其余3 份各自加入0.3%的高錳酸鉀溶液、0.1%的磷酸二氫鉀溶液和10%的次氯酸鈉溶液浸泡1 h 后取出,按照種子萌發(fā)的常規(guī)操作方法置于25 ℃的恒溫箱中,重復(fù)3 次,定期觀察并記錄種子的萌發(fā)情況[10]。

    在25 ℃的恒溫條件下,以清水為對照,GA3的濃度梯度為100、200、500、800、1 200 mg/L,按照上述組別,每組50 粒分別浸種48 h 后進(jìn)行萌發(fā)試驗。重復(fù)3 次,定期觀察并記錄種子的發(fā)芽狀況[11]。

    另取5 份,每份50 粒種子于放有濾紙的培養(yǎng)皿中,1 份加入3%的過氧化氫溶液,將培養(yǎng)皿置于4 ℃的冰箱中;另4 份分別加入0.5%、1.0%、1.5%、2%的碳酸氫鈉溶液浸泡,24 h 后取出吸干,加入去離子水,按照種子萌發(fā)的常規(guī)方法培養(yǎng)。

    另取50 粒種子于培養(yǎng)皿中,加入含有一定水分的沙土包埋種子,在25 ℃的溫度條件下培養(yǎng)種子,重復(fù)3 次,定期查看并記錄種子的發(fā)芽情況[12]。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 裸花紫珠果實石蠟橫切片和電鏡掃描研究結(jié)果

    在生物顯微鏡下觀察裸花紫珠果實的石蠟橫切片,結(jié)果發(fā)現(xiàn)其呈淺棕色,分為果皮和種子,果實由4 室胚珠組成,其中僅1~2 室胚珠發(fā)育完全,呈橢圓形,果實表皮具有許多褶皺,無胚乳。果實電鏡掃描觀察到裸花紫珠種子呈近圓形,基部殘留杯狀花萼殘基,同時上面具有多條脊?fàn)顥l帶,多數(shù)腺鱗,少量非腺毛,如圖1 所示。

    圖1 光學(xué)顯微鏡與掃描電鏡下裸花紫珠種子形態(tài)特征

    2.2 裸花紫珠種子生理指標(biāo)

    裸花紫珠種子呈褐色,平均長度為1.96 mm,寬度為1.76 mm,厚度為1.84 mm,種子千粒重的平均值為2 481.00 mg;裸花紫珠種子平均相對含水量為11.30%;吸水率的平均值為80.33%;平均生活力為33.30%,說明裸花紫珠種子的生活力不高(表1)。

    表1 裸花紫珠種子生理指標(biāo)

    2.3 不同溫度下裸花紫珠種子的萌發(fā)

    如圖2 所示,在20、25、30、35 ℃的溫度下,裸花紫珠種子平均萌發(fā)率分別為24.7%、62.7%、30.7%、11.3%,表明25 ℃更適合裸花紫珠種子的萌發(fā)和生長。

    圖2 不同溫度處理下裸花紫珠種子的萌發(fā)率比較

    2.4 不同試劑處理后裸花紫珠種子的萌發(fā)

    用0.3%高錳酸鉀溶液處理過的裸花紫珠種子有明顯的萌發(fā),萌發(fā)率為60%。用0.1%磷酸二氫鈉溶液和10%次氯酸鈉溶液處理過的種子僅有少數(shù)種子萌發(fā),萌發(fā)率為6%以下;空白對照組沒有萌發(fā),種子處于休眠狀態(tài)。

    用100、200、500、800 和1 200 mg/L 濃度的赤霉素處理過的裸花紫珠種子除最高濃度萌發(fā)率較低外,其余濃度處理裸花紫珠種子萌發(fā)率為62%~81%,如圖3所示,其最適合的赤霉素濃度為500 mg/L,但是用0.5%、1.0%、1.5%、2.0% 4 種不同濃度的碳酸氫鈉溶液處理過的裸花紫珠種子平均萌發(fā)率在5%以下,3%過氧化氫處理的種子未萌發(fā)。

    圖3 不同濃度GA3處理下裸花紫珠種子的萌發(fā)率比較

    2.5 沙土包埋處理后裸花紫珠種子的發(fā)芽率

    用沙土包埋的裸花紫珠種子有明顯的萌發(fā),平均萌發(fā)率為70%,說明沙土包埋處理方式適宜用于裸花紫珠。

    3 小結(jié)

    種子生物學(xué)習(xí)性是種子研究的重要內(nèi)容,其直接關(guān)系種子的生活力。裸花紫珠主要分布于亞熱帶和熱帶區(qū)域,在不同產(chǎn)地和種質(zhì)資源中,其種子千粒重、生活力均存在較大差異。相比于其他產(chǎn)區(qū)該植物種子的生物學(xué)特性(千粒重491.00 mg、生活力91.58%)[5],本研究中裸花紫珠種子的個體相對偏大,重量偏重,但含水量也不高,生活力較差,很多種子是休眠種子,其因素可能與部分種子的子房室發(fā)育不全有關(guān),另一方面也可能與環(huán)境有關(guān)。根據(jù)實地調(diào)查,在5 月底海南白沙、五指山、儋州山區(qū),裸花紫珠居群已大范圍開花,但在???、瓊中平原地區(qū)則開花要延遲1 個月左右的時間,校園內(nèi)昆蟲種類相對較少,其傳粉頻率也相對山區(qū)低。裸花紫珠種子活力是否與傳粉有關(guān),有待今后進(jìn)一步開展傳粉生物學(xué)研究。裸花紫珠種子的吸水率比較高,在25 ℃下用高錳酸鉀溶液和GA3處理后萌發(fā)率較高,用沙土包埋處理后也能有效解除種子休眠[13]。說明在溫度適宜、含水量比較豐富的地方有利于裸花紫珠種子的萌發(fā)和生長,溫度過高或過低都不適合裸花紫珠種子的萌發(fā)。用合適的化學(xué)試劑或物理方法處理裸花紫珠種子后可以解除種子的休眠,可以提高種子的萌發(fā)率[14]。同時今后也要采取有關(guān)措施提高種子的飽滿度,促進(jìn)果實中子房的發(fā)育。紫珠屬是一大類可以作為藥用的植物,本研究可以為種子質(zhì)量評價和繁育提供理論依據(jù)。

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