血管內皮損傷和血小板活化標志物對診斷缺血性結腸炎的臨床價值

朱華麗 闕揚銘 季霞 阮水良

[摘要] 目的 探討血管內皮損傷和血小板活化標志物對診斷缺血性結腸炎（IC）的臨床價值。 方法 選取2019年12月至2020年12月入院接受治療的58例疑似IC患者，包括30例IC患者（IC組）和28例潰瘍性結腸炎（UC）患者（UC組）;另選擇同期行健康體檢者30例為對照組。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定外周血液中血管假性血友病因子（vWF）、血栓調節(jié)蛋白（TM）、內皮素-1（ET-1）、血小板活化因子（PAF）含量。流式細胞術檢測血小板ɑ顆粒膜糖蛋白（CD62p）和溶酶體膜蛋白（CD63）表達。 結果 IC組患者的血清vWF、TM、ET-1、PAF水平及血小板CD62p、CD63表達水平均高于對照組（P<0.05）;且IC組患者血清vWF、TM、ET-1水平以及血小板CD62p、CD63表達水平亦高于UC組（P<0.05）。ROC曲線分析，血清vWF、TM、ET-1、PAF及血小板CD62p、CD63對IC的診斷效能較高（AUC均>0.8）;血清vWF、TM及血小板CD62p對IC患者和UC患者的鑒別診斷效能也較高（AUC>0.08）。多腸段亞組IC患者血清TM、ET-1、PAF水平均高于單一腸段亞組患者（P<0.05）。 結論 檢測血清vWF、TM、ET-1、PAF、血小板CD62p、CD63表達有助于IC患者的臨床診斷。此外檢測血清vWF、TM、血小板CD62p表達對IC患者和UC患者的鑒別診斷也有一定的參考價值。

[關鍵詞] 血管內皮損傷;血小板活化;缺血性結腸炎;潰瘍性結腸炎

[中圖分類號] R574.6? ? ? ? ? [文獻標識碼] B? ? ? ? ? [文章編號] 1673-9701（2022）13-0034-04

[Abstract] Objective To investigate the clinical value of vascular endothelial injury and platelet activation markers in the diagnosis of ischemic colitis （IC）. Methods A total of 58 patients with suspected IC who were admitted to our hospital from December 2019 to December 2020 were selected， including 30 patients with IC（IC group） and 28 patients with ulcerative colitis （UC）UC group. Another 30 healthy subjects in Second Hospital of Jiaxing in Zhejiang during the same period were selected as the control group. The levels of von Willebrand factor （vWF）， thrombomodulin （TM）， endothelin-1 （ET-1） and platelet activating factor （PAF） in peripheral blood were measured by enzyme-linked immunosorbent assay.Flow cytometry was used to detect the expression of Platelet ɑ granule membrane glycoprotein （CD62p） and lysosomal membrane protein （CD63）. Results The serum vWF， TM， ET-1， PAF levels， and platelet CD62p and CD63 expression levels in the IC group were higher than those in the control group（P<0.05）. The serum levels of vWF， TM， ET-1， and the platelet CD62p and CD63 expression levels in the IC group were also higher than those in the UC group（P<0.05）.ROC curve analysis showed that serum vWF， TM， ET-1， PAF， and platelet CD62p，CD63 had higher diagnostic efficacy for IC （AUC>0.8 for all）.The serum vWF，TM，and platelet CD62p also had higher differential diagnostic efficacy for IC and UC patients （AUC>0.08）. The serum levels of TM， ET-1， and PAF in patients with polyenteric IC were higher than those in patients with a single intestinal segment（P<0.05）. Conclusion Detection of serum vWF， TM， ET-1， PAF， platelet CD62p and CD63 expression is helpful for the clinical diagnosis of IC patients. In addition， the detection of serum vWF，TM，and platelet CD62p expression also has some reference value for the differential diagnosis of IC patients and UC patients.5C474685-75F0-4D28-A266-E1397A58D31A

[Key words] Vascular endothelial injury; Platelet activation; Ischemic colitis; Ulcerative colitis

缺血性結腸炎（ischemic colitis，IC）是一組包含腸黏膜和黏膜下層在內的短暫性局部缺血和暴發(fā)型伴有透壁梗死的局部缺血的臨床綜合征，具有較高的致死率[1-3]。眾多研究證實，缺血機制和血管內皮損傷在其中發(fā)揮著重要作用[4]。正常情況下，血漿內皮素-1（ET-1）等血管活性物質可維持血管動態(tài)平衡，當受到有害物質刺激時，血管內皮細胞則分泌諸如凝血酶調節(jié)蛋白（TM）與血管性血友病因子（vWF）等促凝、抗纖溶物質[5]。本研究旨在探討血管內皮損傷標志物vWF、TM、ET-1以及血小板標志物[血小板活化因子（PAF）、血小板ɑ顆粒膜糖蛋白（CD62p）、溶酶體膜蛋白（CD63）]在IC患者外周血液中含量的變化，并揭示其作為IC診斷的臨床價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年12月至2020年12月因突發(fā)性腹痛入院接受治療的58例疑似IC患者，其中50例患者伴有便血，49例患者伴有水樣便，47例患者伴有發(fā)熱。入院后急診（入院后48 h內）結腸鏡檢查，其中30例（男11例，女19例，年齡45～80歲）患者符合IC診治標準[6]為IC組，另外28例（男15例，女13例，年齡39～76歲）患者被診斷為潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis，UC）為UC組，所有患者均經病理檢查確診。排除患有嚴重心腦血管疾病、腸易激綜合征、糖尿病、慢性腎病、血液系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤、缺血性心肌梗死或腦卒中病史者及長期服用抗凝及抗血小板藥物治療、近3個月內有腹部手術史者。另選取30例年齡和性別相匹配的健康志愿者為對照組（男16例，女14例，年齡40～80歲）。三組的年齡、性別構成比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會的批準，所有參與者按倫理委員會的要求簽署書面知情同意書。

1.2 血管內皮損傷標志物和血小板活化標志物含量檢測

對入院疑似IC患者留取24 h內血樣2管;其中1管于4 h內離心提取富含血小板血漿送檢，采用流式細胞術檢測血小板表面標志物CD62p、CD63：用CD63-PE和FITC標記的血小板激活標記物（CD62p、CD63）（美國Biolegend公司）在室溫下培養(yǎng)10 min。加入1 ml PBS，通過流式細胞儀分析樣品。采用前向/側向散射（FSC/SSC）散點圖進行門控。另1管血樣則在4℃離心（3000 r/min×20 min）后，留取血清置入-80℃?zhèn)錂z測。根據制造商的說明，分別采用人vWF、TM、ET-1、PAF酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒（美國ProteinTech公司）檢測血清vWF、TM、ET-1、PAF含量。對照組以相同方法留取血液樣本，待檢測。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學軟件進行分析，符合正態(tài)分布的計量資料以均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗;計數資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。采用受試者工作特性（receiver operating characteristic，ROC）曲線分析各檢測指標的敏感性及特異性。

2 結果

2.1 三組血管內皮損傷和血小板活化標志物水平比較

IC組患者的血清vWF、TM、ET-1水平及血小板CD62p、CD63表達水平高于對照組和UC組（P<0.05），且血清PAF水平高于對照組（P<0.05）;UC組患者的血清vWF、TM、PAF水平及血小板CD62p、CD63表達水平亦高于對照組（P<0.05）。見圖1、表1。

2.2 ROC曲線分析血管內皮損傷和血小板活化標志物水平對IC患者診斷和鑒別診斷的價值

經ROC曲線分析，血清vWF、TM、ET-1、PAF及血小板CD62p、CD63對IC的診斷效能較高，AUC均>0.8;另血清vWF、TM及血小板CD62p對IC患者和UC患者的鑒別診斷效能也較高，AUC>0.08。見圖2、表2。

2.3 不同病變累及范圍IC患者血管內皮損傷和血小板活化標志物水平比較

多腸段亞組IC患者血清TM、ET-1、PAF水平高于單一腸段亞組患者（P<0.05）。見表3。

3 討論

IC患者多因出現(xiàn)突發(fā)性下腹及臍周腹痛或便血而入院就診。但由于早期臨床癥狀、體征和腸鏡表現(xiàn)與UC患者類似，這些癥狀通常被認為是由于腸道運動減少造成的[6-8]，因此鑒別診斷較為困難，不利于臨床個體化治療。且結腸鏡檢查在臨床上有一定的局限性，需借助生物學標志物診斷或鑒別診斷IC。IC的發(fā)病原因之一是因部分結腸或整個結腸的血液供應不足，導致結腸炎癥和壞死，且結腸由于相對較低的血流量和較不發(fā)達的微血管叢，更易受到缺血的影響[9]?；谌毖獧C制尋找IC有效的生物標志物是本研究的初衷[10]。

vWF、TM都是由內皮細胞合成的一種內皮特異性因子糖蛋白[11，12];ET-1是從內皮細胞中分離出來的一種非常有效的血管收縮肽[13]，這些因子表達水平都會隨著各種刺激而升高，并反映缺血性病變呈進展程度。此外，當血管內皮損傷，內皮細胞損傷膠原的暴露可使血小板黏附于血管壁從而觸發(fā)血小板內顆粒的釋放，如PAF、血小板膜蛋白CD62p和CD63等都是血小板活化的重要標志物，這些顆粒的釋放可進一步促進血小板聚集，導致血栓發(fā)生[14，15]。PAF是一種強效的內源性磷脂類炎癥介質，具有廣泛的生物活性[16]。CD63作為溶酶體整合膜蛋白，極少表達在靜止血小板表面[17]，但當血小板活化后，溶酶體整合膜上的CD63可明顯增高[18]。CD62p作為P選擇素家族的重要成員之一[19]，與多種炎性細胞的活化和浸潤密切相關[20]。5C474685-75F0-4D28-A266-E1397A58D31A

本研究顯示，IC組患者血管內皮損傷和血小板活化標志物水平較對照組顯著升高，說明血管內皮損傷和血小板活化是IC的重要病變基礎，檢測這些標志物有助于IC的臨床診斷。另UC組患者上述指標較對照組也有一定程度的升高，說明UC病變同樣也存在血管內皮損傷情況，但這主要是由于炎癥反應引起的急性期表現(xiàn)，導致血小板活化和局部血管內皮損傷。此外，IC組患者血清vWF、TM及血小板CD62p表達較UC組變化更明顯，說明檢測這些指標有助于IC和UC的鑒別診斷，但診斷效能有限，還需要綜合分析基礎疾病史、臨床表現(xiàn)、腸鏡結果及病理特點等資料。此外，多腸段亞組IC患者的血清TM、ET-1、PAF水平均高于單一腸段亞組患者，說明隨著缺血性病變范圍的擴大，血管內皮損傷加重，導致血管內皮損傷（vWF、TM、ET-1）和血小板活化標志物（PAF、CD62p、CD63）水平也會相應增加。

綜上所述，IC的發(fā)病機制與血管內皮損傷和血小板活化有關，且隨著病變累及腸段范圍越大，血管內皮損傷程度和血小板活化程度越明顯。檢測血清vWF、TM、ET-1、PAF水平以及血小板CD62p、CD63表達有助于IC患者的臨床診斷。此外檢測血清vWF、TM水平及血小板CD62p表達對于IC患者和UC患者的鑒別診斷也能提供一定的參考信息。

[參考文獻]

[1]? ?Azam B，Kumar M，Mishra K，et al. Ischemic colitis[J].J Emerg Med，2019，56（5）：e85-e86.

[2]? ?邱曉丹，張園滿，陳源清，等.血漿D-二聚體水平檢測對缺血性結腸炎的診斷價值[J].醫(yī)療裝備，2019，32（1）：44-45.

[3]? ?潘雅斯，趙晨，林夢娟，等.相關血液與血生化指標對缺血性結腸炎診斷及結局預判價值的研究[J].疑難病雜志，2019，18（3）：251-255.

[4]? ?Koutroubakis IE，Sfiridaki A，Theodoropoulou A，et al. Role of acquired and hereditary thrombotic risk factors in colon ischemia of ambulatory patients[J].Gastroenterology，2001，121（3）：561-565.

[5]? ?葉梓，王世杰，李輝，等.血管內皮細胞中的凝血物質：理論研究新進展[J].中國組織工程研究，2017，20（4）：627-632.

[6]? ?許麗娟，陸華美.不同類型老年結腸炎的臨床特征差異對比研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)生，2017，55（24）：49-52.

[7]? ?陳曉露，張彥亭，司望利，等.缺血性結腸炎的結腸鏡及影像學檢查特征分析[J].臨床消化病雜志，2021，33（1）：26-29.

[8]? ?Nikolic AL，Keck JO.Ischaemic colitis：Uncertainty in diagnosis， pathophysiology and management[J].ANZ J Surg，2018，88（4）：278-283.

[9]? ?Yi L，Lu Y，Yu S，et al.Formononetin inhibits inflammation and promotes gastric mucosal angiogenesis in gastric ulcer rats through regulating NF-κB signaling pathway[J].J Recept Signal Transduct Res，2020，26（10）：1-7.

[10]? Krüger-Genge A，Blocki A，F(xiàn)ranke RP，et al. Vascular endothelial cell biology：An update[J].Int J Mol Sci，2019， 20（18）：4411.

[11]? 范如英，王曉偉，趙曉軍，等.血漿D-二聚體、纖維蛋白原及活化部分凝血活酶時間對缺血性結腸炎的診斷價值[J].中華保健醫(yī)學雜志，2017，19（2）：165-166.

[12]? Dogné S，F(xiàn)lamion B. Endothelial glycocalyx impairment in disease：Focus on hyaluronan shedding[J].Am J Pathol，2020，190（4）：768-780.

[13]? Benediktsson S，Kander T，Ostrowski SR，et al. Platelet increment is not associated with endothelial damage in haematological patients：A prospective observational study[J].Scand J Clin Lab Invest，2019，79（6）：395-403.

[14]? 董濤，金偉，王斌.急性缺血性結腸炎患者血栓前狀態(tài)分子水平變化及其意義[J].中國綜合臨床，2013，29（6）：609-611.

[15]? Nagahata Y，Azumi Y，Akimoto T，et al.Role of platelet activating factor on severity of ischemic colitis[J].Dis Colon Rectum，1999，42（2）：218-224.

[16]? Fricke A，Ullrich PV，Cimniak AFV，et al.Levels of activated platelet-derived microvesicles in patients with soft tissue sarcoma correlate with an increased risk of venous thromboembolism[J].BMC Cancer，2017，17（1）：527.

[17]? Matowicka-Karna J.Markers of inflammation，activation of blood platelets and coagulation disorders in inflammatory bowel diseases[J].Postepy Hig Med Dosw （Online），2016，70（4）：305-312.

[18]? 華曉東.血小板活化標志物檢測在臨床研究中的應用進展[J].天津藥學，2018，30（4）：58-62.

[19]? 姚勇，張歡歡，孫振超，等.單采血小板保存期內活化狀態(tài)及相關功能和代謝指標檢測及分析[J].中國輸血雜志，2021，33（2）：120-123.

[20]? 阮水良，王偉國，周雪峰，等.高凝狀態(tài)和血小板活化在缺血性結腸炎發(fā)病機制中的作用[J].江蘇醫(yī)藥，2020， 46（1）：40-42.

（收稿日期：2021-04-06）5C474685-75F0-4D28-A266-E1397A58D31A