長鏈非編碼RNA 6030408B16RIK表達(dá)下調(diào)對腹膜間皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響

籍文捷，王志奎

隨著人口老齡化的增快，世界范圍內(nèi)慢性腎臟?。–KD）發(fā)病率也逐漸上升。腹膜透析是主要的腎臟透析治療初始方法，其應(yīng)用在世界不同地區(qū)和個(gè)別國家有著廣泛的差異［1］。與血液透析相比，長期存活率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［2］。在腹膜透析開始后不久，腹膜間皮細(xì)胞表現(xiàn)出上皮表型的進(jìn)行性喪失，并通過上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）獲得肌成纖維細(xì)胞樣特征，發(fā)生轉(zhuǎn)分化的腹膜間皮細(xì)胞具有更高的遷移和侵襲能力，能夠侵入間皮下基質(zhì)，從而促進(jìn)腹膜纖維化和血管生成［3-5］。EMT是指上皮細(xì)胞在特定的生理和病理情況下向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象和過程，上皮細(xì)胞表型的缺失及間質(zhì)特性的獲得是其主要特征［6］。EMT不僅在多細(xì)胞生物胚胎發(fā)育、炎癥控制、修復(fù)損傷的過程中發(fā)揮作用，而且在肝、肺、腎等器官纖維化、腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移中也起著重要作用［7］。長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，ln‐cRNA）是一類長度>200個(gè)核苷酸，不具備潛在編碼蛋白質(zhì)能力的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物［8-9］。研究表明lncRNA可以在多種疾病如腫瘤、代謝綜合征、心血管疾病及神經(jīng)退行性疾病中表達(dá)異常，并且可以通過調(diào)控基因的表達(dá)從而影響疾病的病理生理過程［10-11］。LIU等［12］通過研究證實(shí)，lncRNA通過與微小RNA（miRNA）和mRNA之間形成復(fù)雜的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)從而參與腹膜纖維化，例如：lncRNA（ENSMUST00000053838，AK089579，uc008pwj.1，AK080622，AV310809）均與腹膜纖維化有關(guān)，但是，這些基因，尤其是lncRNA，在網(wǎng)絡(luò)中的機(jī)制和功能仍不清楚。我們前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)腹膜透析小鼠的腹膜組織中l(wèi)ncRNA 6030408B16RIK存在異常表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)于2019年3月至2020年6月通過轉(zhuǎn)染6030408B16RIK干擾小RNA（siRNA）下調(diào)lncRNA 6030408B16RIK表達(dá)證明其對腹膜間皮細(xì)胞EMT的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物36只清潔級健康SD大鼠，周齡范圍為6～8周，體質(zhì)量（170.03±52.00）g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號：SCXK（粵2013-0002），本研究符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則。

1.2實(shí)驗(yàn)材料與主要試劑si-6030408B16RIK、NCs購自廣州銳博公司，β肌動(dòng)蛋白（β-actin）抗體、上皮鈣黏素（E-cadherin）抗體、抗α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）抗體、成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1（FSP-1）抗體、抗波形蛋白抗體、抗Ⅲ型膠原蛋白（CollagenⅢ）抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗兔抗體均購自英國Abcam公司。

1.3方法

1.3.1尿毒癥大鼠模型的構(gòu)建 36只清潔級健康SD大鼠，以抽簽法分為三組：正常組6只、假手術(shù)組6只、尿毒癥模型組24只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。采用5/6腎切除術(shù)建立尿毒癥模型，6周后從所有大鼠的內(nèi)眥靜脈收集靜脈血，測量血清肌酐和尿素氮以確定模型大鼠是否進(jìn)入尿毒癥階段，其血清肌酐和尿素氮超過正常大鼠的2～3倍。將造模成功大鼠以抽簽法分為：尿毒癥組（不進(jìn)行腹膜透析）、腹膜透析組（腹膜透析4周）、小干擾RNA陰性對照（si-NC）組（腹膜透析4周后行尾靜脈注射6030408B16RIK抑制物陰性對照）、si-6030408B16RIK組（腹膜透析后行尾靜脈注射si-6030408B16RIK），每組6只。大鼠用3%戊巴比妥鈉麻醉后仰臥位固定于手術(shù)臺上，右側(cè)腹中部置入腹膜透析管及皮下隧道，取5 mL生理鹽水進(jìn)行腹腔灌洗，確保管路通暢無液體滲漏后固定腹膜透析管并封管，于每日上午8：00經(jīng)腹膜透析管注入4.25%葡萄糖腹膜透析液（3 mL/100 g），為期4周。

1.3.2腹膜平衡實(shí)驗(yàn) 大鼠腹膜透析結(jié)束后兩天，將2 mL腹膜透析液注入腹腔，留取0.1 mL腹膜透析液檢測0 h大鼠的超濾量和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)能力。2 h后打開腹腔，用注射器抽取腹腔內(nèi)液體并精確地測量，用紗布吸干殘留液體并稱重。

1.3.3大鼠腹膜組織病理 將大鼠安樂死，取出腹膜組織，進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅（HE）染色、Masson染色觀察腹膜組織結(jié)構(gòu)變化及腹膜厚度等。

1.3.4免疫組織化學(xué) 第一抗兔CollagenⅢ抗體（ab7778，1∶100，Abcam Inc.，Cambridge，UK）和生物素標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白（Ig）G二級抗體（ab150077，1∶100，Abcam Inc.，Cambridge，UK）進(jìn)行免疫組織化學(xué)制片，在光學(xué)顯微鏡下觀察樣品。

1.3.5逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR） 利用Trizol試劑提取大鼠腹膜組織總RNA，Nano Drop2000測定RNA的濃度和純度。根據(jù)Genbank數(shù)據(jù)庫、miRbase數(shù)據(jù)庫中公開發(fā)表的基因序列，分別采用Primer5.0和miRprimer2引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)PCR反應(yīng)引物，見表1，引物由上海吉瑪公司合成。使用ABI PRISM 7500實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)（美國ABI公司）進(jìn)行PCR反應(yīng)，以β-actin為內(nèi)參對照，按照2?ΔΔCt進(jìn)行半定量分析。

表1 RT-PCR引物序列

1.3.6蛋白質(zhì)印跡法 提取大鼠腹膜組織的總蛋白，按照BCA試劑盒說明書測定蛋白濃度，按照40微克/孔上樣電泳分離后轉(zhuǎn)膜，分別加入一抗α-SMA（Abcam，ab32575，兔 抗，1∶500）、FSP-1（Abcam，ab197896，兔 抗，1∶500）、E-cadherin（Abcam，ab181296，兔 抗，1∶500）、波 形 蛋 白（Abcam，ab137321，兔抗，1∶500）、β-actin（Abcam，ab8227，兔抗，1∶1 000），4℃孵育過夜，加入相應(yīng)山羊抗兔二抗IgG抗體（ab6721，1∶500，Abcam，Cambridge，UK），室溫孵育1 h?；瘜W(xué)發(fā)光試劑顯影，β-actin作為內(nèi)參，目的條帶采用Image J軟件進(jìn)行灰度值分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS21.0軟件統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料以±s表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組之間的比較采用單因素方差分析，多組間的兩兩比較采用LSD法。P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1尿毒癥模型鑒定測量大鼠內(nèi)眥靜脈血中的血肌酐和尿素氮，以確定是否成功建立了尿毒癥大鼠模型。結(jié)果表明，假手術(shù)大鼠的血肌酐和尿素氮與正常大鼠差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。尿毒癥模型組大鼠血液中的肌酐含量為正常大鼠的2.981倍，尿素氮值為2.782倍。因此，可以確定成功建立了尿毒癥大鼠模型。見表2。

表2 大鼠造模后腎功能情況比較/±s

表2 大鼠造模后腎功能情況比較/±s

注：①與尿素癥模型組比較，P<0.001。

組別正常組假手術(shù)組尿素癥模型組F值P值鼠數(shù)6 6 6血肌酐/（μmol/L）45.36±4.63 50.31±4.87①135.24±13.66 198.32<0.001尿素氮/（mmol/L）3.82±0.41 4.05±0.44①10.61±1.11 168.66<0.001

2.2大鼠腹膜組織中6030408B16RIK的表達(dá)尿毒癥組、腹膜透析組、si-NC組和si-6030408B16RIK組大鼠腹膜組織中6030408B16RIK的表達(dá)分別為（1.01±0.12）、（3.26±0.34）、（3.01±0.32）和（2.16±0.21），F(xiàn)=88.17，P<0.001。與尿毒癥組相比，腹膜透析組、si-NC組和si-6030408B16RIK組大鼠腹膜組織中6030408B16RIK的表達(dá)均明顯升高（P<0.001）；相比于腹膜透析組，si-NC組大鼠腹膜組織中6030408B16RIK的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；相比于si-NC組，si-6030408B16RIK組中6030408B16RIK的表達(dá)明顯降低（P<0.001）。

2.3大鼠腹膜形態(tài)觀察通過HE染色、Masson染色和免疫組織化學(xué)觀察腹膜組織結(jié)構(gòu)變化和膠原纖維化。圖1結(jié)果表明，與尿毒癥組相比，腹膜透析組、si-NC組和si-6030408B16RIK組細(xì)胞變?yōu)閳A柱形，間皮細(xì)胞有脫落，間皮基質(zhì)增加，可見大量纖維樣細(xì)胞，巨噬細(xì)胞浸潤，且有大量膠原沉積，大鼠腹膜厚度顯著增加，大鼠間皮下纖維也明顯增厚。通過免疫組織化學(xué)檢測腹膜血管特異性蛋白CD31和CollagenⅢ，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，與尿毒癥組相比，腹膜透析組、si-NC組和si-6030408B16RIK組大鼠腹膜厚度和CollagenⅢ、CD31的陽性表達(dá)量均顯著增加（P<0.05）；相比于腹膜透析組，si-NC組大鼠腹膜厚度和CollagenⅢ、CD31的表達(dá)量均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而相比于si-NC組，si-6030408B16RIK組大鼠腹膜厚度、CollagenⅢ、CD31的表達(dá)量均顯著減?。≒<0.05）。見表3。

圖1 大鼠腹膜組織的HE染色（A）、Masson染色（B）及免疫組織化學(xué)（C）觀察結(jié)果（×400）

表3 大鼠腹膜形態(tài)比較/±s

表3 大鼠腹膜形態(tài)比較/±s

注：CollagenⅢ為Ⅲ型膠原蛋白。①與尿毒癥組比較，P<0.001。②與si-NC組比較，P<0.001。

組別尿毒癥組腹膜透析組si-NC組si-6030408B16RIK組F值P值鼠數(shù)6 6 6 6腹膜厚度/μm 17.32±1.78 42.18±4.32①38.57±3.95①28.11±2.96①②65.27<0.001 CollagenⅢ/%21.54±2.64 37.96±4.12①41.56±5.42①31.46±3.56①②28.09<0.001 CD31/%16.04±1.28 47.66±5.49①50.04±6.07①15.87±1.92①②120.08<0.001

2.4大鼠腹膜超濾量腹膜平衡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腹膜透析組、si-NC組和si-6030408B16RIK組大鼠的超濾量明顯小于尿毒癥組（P<0.05），而葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量則明顯大于尿毒癥組（P<0.05）；相比于腹膜透析組，si-NC組大鼠的超濾量和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量均差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而相比于si-NC組，si-6030408B 16RIK組大鼠的超濾量顯著增加（P<0.05），葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量顯著減少（P<0.05）。見表4。

表4 大鼠腹膜功能比較/±s

表4 大鼠腹膜功能比較/±s

注：MTG為葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量。①與尿毒癥組比較，P<0.001。②與si-NC組比較，P<0.001。

組別尿毒癥組腹膜透析組si-NC組si-6030408B16RIK組F值P值鼠數(shù)6 6 6 6超濾量/mL 8.25±0.86 4.13±0.42①4.23±0.43①5.45±0.57①②61.96<0.001 MTG/（mmol/kg）12.01±1.24 19.11±1.99①19.54±1.97①16.12±1.65①②23.87<0.001

2.5大鼠腹膜組織中α-SMA、FSP-1、波形蛋白、E-cadherin及6030408B16RIK的表達(dá)測定相比于尿毒癥組，腹膜透析組和si-NC組中6030408B16RIK，α-SMA、FSP-1和波形蛋白的表達(dá)顯著上調(diào)（P<0.05），而E-cadherin表 達(dá) 下 降（P<0.05），當(dāng) 對6030408B16RIK進(jìn)行干擾處理后，6030408B16RIK，α-SMA、FSP-1和波形蛋白的表達(dá)顯著降低（P<0.05），同 時(shí)E-cadherin表 達(dá) 回 升（P<0.05）。見表5，6。

表5 大鼠腹膜組織中6030408B16RIK、α-SMA、FSP-1、波形蛋白、E-cadherin的mRNA相對表達(dá)量比較/±s

表5 大鼠腹膜組織中6030408B16RIK、α-SMA、FSP-1、波形蛋白、E-cadherin的mRNA相對表達(dá)量比較/±s

注：α-SMA為α-平滑肌肌動(dòng)蛋白，F(xiàn)SP-1為成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1，E-cadherin為上皮鈣黏素。①與尿毒癥組比較，P<0.001。②與si-NC組比較，P<0.001。

組別尿毒癥組腹膜透析組si-NC組si-6030408B16RIK組F值P值鼠數(shù)6 6 6 6 6030408B16RIK 1.01±0.12 2.44±0.25①2.22±0.21①1.46±0.14②75.12<0.001 α-SMA 1.00±0.11 1.71±0.18①1.62±0.17①1.12±0.13②34.03<0.001 FSP-1 1.00±0.23 1.80±0.14①1.75±0.12①1.21±0.31②37.04<0.001波形蛋白1.00±0.10 1.88±0.19①1.95±0.20①1.33±0.14②48.11<0.001 E-cadherin 1.02±0.10 0.40±0.05①0.35±0.04①0.89±0.09②111.13<0.001

3 討論

在過去的幾十年中，腹膜透析已經(jīng)成為替代血液透析治療ESRD的公認(rèn)方式，腹膜透析中最重要的挑戰(zhàn)之一便是如何長期保存腹膜的完整性。

本課題通過采取大鼠腎臟5/6切除法來構(gòu)建尿毒癥模型，檢測大鼠血液中血肌酐以及尿素氮的水平評估是否造模成功，然后通過置入腹膜透析管連續(xù)四周每天向大鼠腹腔內(nèi)灌注4.25%雙聯(lián)腹膜透析液，檢測大鼠超濾量以及MTG來評估大鼠的腹膜功能。通過本實(shí)驗(yàn)方法所構(gòu)建的尿毒癥模型貼近尿毒癥腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化的臨床病理生理過程，并且操作過程相對簡單，成本相對來說比較低且成功率較高，對后續(xù)觀察大鼠的腹膜組織結(jié)構(gòu)及功能的變化等方面提供了良好的條件。

表6 大鼠腹膜組織中α-SMA、FSP-1、波形蛋白、E-cadherin的蛋白相對表達(dá)量比較/±s

表6 大鼠腹膜組織中α-SMA、FSP-1、波形蛋白、E-cadherin的蛋白相對表達(dá)量比較/±s

注：α-SMA為α-平滑肌肌動(dòng)蛋白，F(xiàn)SP-1為成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1，E-cadherin為上皮鈣黏素。①與尿毒癥組比較，P<0.001。②與si-NC組比較，P<0.001。

組別尿毒癥組腹膜透析組si-NC組si-6030408B16RIK組F值P值鼠數(shù)6 6 6 6 α-SMA 0.71±0.08 1.31±0.13①1.24±0.12①0.65±0.06②66.82<0.001 FSP-1 1.02±0.13 1.82±0.22①1.72±0.19①1.29±0.13②29.56<0.001波形蛋白1.09±0.11 1.85±0.19①1.99±0.21①1.39±0.14②37.14<0.001 E-cadherin 1.01±0.11 0.46±0.05①0.38±0.04①0.96±0.10②100.03<0.001

長期暴露于生物不相容性腹膜透析液、腹膜透析過程中腹膜炎的反復(fù)發(fā)生和其他一些理化因素，或多或少會(huì)造成腹膜的結(jié)構(gòu)與功能發(fā)生不同程度的改變，最終的結(jié)果會(huì)造成EMT，導(dǎo)致腹膜透析病人腹膜發(fā)生纖維化，從而發(fā)展為超濾衰竭［13-15］。在同等葡萄糖負(fù)荷的情況下，應(yīng)用新型腹膜透析液（中性pH、緩沖堿為碳酸氫鹽、低葡萄糖降解產(chǎn)物）相較于應(yīng)用生物不相容性腹膜透析液的病人其腹膜纖維化的程度更輕［16］。因?yàn)槌Ｒ?guī)的腹膜透析液由于酸性pH、高濃度的葡萄糖、葡萄糖降解產(chǎn)物、糖基化終產(chǎn)物和乳酸鹽這些非生理成分可以造成腹膜形態(tài)學(xué)的改變，抑制了腹膜間皮細(xì)胞的增殖活性和EMT的發(fā)生，最終引起腹膜病理改變，其表現(xiàn)形式主要為腹膜纖維化［16-19］。

反復(fù)發(fā)生的腹膜炎以及新生血管的生成是腹膜纖維化發(fā)病的主要機(jī)制，腹膜纖維化是一個(gè)進(jìn)行性且不可逆的過程，與超濾功能障礙有關(guān)，細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積會(huì)造成纖維化的發(fā)生，其發(fā)生在許多臟器中，并最終會(huì)導(dǎo)致臟器衰竭［20］。迄今為止，腹膜纖維化作為長期進(jìn)行腹膜透析病人的主要并發(fā)癥之一，常常會(huì)給病人帶來高昂的醫(yī)療費(fèi)用，因此增加了他們的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，盡管目前進(jìn)行了大量的研究和臨床試驗(yàn)，但仍沒有有效的治療方法或者可以改變其病程進(jìn)展的藥物［21］。因此探究腹膜纖維化的病理生理機(jī)制對改善腹膜透析病人超濾衰竭的發(fā)生變得十分重要。

通過本研究可以觀察到，與Uremic組大鼠相比，腹膜透析組大鼠可觀察到腹膜間皮細(xì)胞變?yōu)閳A柱形、脫落，間皮下基質(zhì)增加，可以看到大量的成纖維樣細(xì)胞和大量的巨噬細(xì)胞浸潤其中，而且觀察到有大量膠原沉積，大鼠的間皮下纖維以及腹膜厚度也表現(xiàn)出顯著增加，CollagenⅢ、CD31的陽性表達(dá)量均顯著增加，大鼠腹膜超濾量以及MTG均表現(xiàn)出明顯下降。因此，長期進(jìn)行腹膜透析與腹膜的結(jié)構(gòu)性改變和功能性改變有關(guān)，從而導(dǎo)致腹膜透析治療的中斷。

已知EMT是一個(gè)極其復(fù)雜但是早期可以逆轉(zhuǎn)的過程，其特征是頂-基底外側(cè)極性的喪失和細(xì)胞間連接的破壞，以及遷移、侵襲和纖維化的特征增加。它還伴有蛋白質(zhì)表達(dá)的改變，包括上皮蛋白質(zhì)的丟失，以及新的間充質(zhì)標(biāo)志物的獲得，包括FSP-1、波形蛋白以及α-SMA［22-23］。從本研究可以發(fā)現(xiàn)，與Uremic組大鼠相比，腹膜透析組大鼠α-SMA、FSP-1和波形蛋白的表達(dá)水平顯著上調(diào)，而E-cadherin表達(dá)水平下降，因此可以通過相關(guān)蛋白分子的表達(dá)水平反映EMT的發(fā)生及腹膜纖維化的嚴(yán)重程度。

先前的研究非常重視lncRNA的功能，因ln‐cRNA具有廣泛的生物學(xué)功能，結(jié)合其受限制的細(xì)胞類型特異性表達(dá)，使lncRNA成為有吸引力的治療靶點(diǎn)，許多l(xiāng)ncRNA已經(jīng)被證明參與了疾病的發(fā)展，這突出了lncRNA作為許多疾病的新型診斷以及預(yù)后判斷的重要性［24］。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)可以證明，在多種組織中表現(xiàn)出異常表達(dá)的lncRNA能夠廣泛參與各類疾病的病理機(jī)制。一些lncRNA被證明與纖維化有關(guān)，lncRNA的降低和過量表達(dá)減輕或增強(qiáng)了體內(nèi)外纖維化程度，表明lncRNA可以作為一種新的靶點(diǎn)去參與纖維化的治療，具有相當(dāng)重要的意義［25］。

本課題采取構(gòu)建尿毒癥大鼠模型并進(jìn)行腹膜透析形成腹膜纖維化，隨后通過轉(zhuǎn)染siRNA來下調(diào)lncRNA 6030408B16RIK表達(dá)水平，目的是以此來觀察lncRNA 6030408B16RIK表達(dá)水平的變化對腹膜間皮細(xì)胞EMT的作用，從而間接反映對腹膜纖維化以及超濾衰竭的影響。和Uremic組進(jìn)行比較，si-NC組、腹膜透析組以及si-6030408B16RIK組大鼠的腹膜組織中6030408B16RIK的表達(dá)均明顯上升，si-NC組以及腹膜透析組的大鼠腹膜組織中6030408B16 RIK的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；和si-NC組進(jìn)行比較，si-6030408B16RIK組中6030408B16RIK的表達(dá)明顯降低。上述結(jié)果證實(shí)大鼠體內(nèi)的小干擾RNA與空質(zhì)粒均轉(zhuǎn)染成功，分組成立可進(jìn)行下一步觀察。

前期研究已經(jīng)證實(shí)lncRNA 6030408B16RIK表達(dá)水平上調(diào)可以促進(jìn)EMT發(fā)生。本研究結(jié)果證明，與si-NC組相比，si-6030408B16RIK組大鼠腹膜厚度及CollagenⅢ、CD31的表達(dá)量均顯著減小，超濾量增加、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量減少，α-SMA、FSP-1和波形蛋白表達(dá)減少，E-cadherin表達(dá)回升，證實(shí)6030408B16 RIK表達(dá)下調(diào)可以延緩EMT過程，從而改善腹膜透析大鼠的腹膜纖維化程度，并可以在防治腹膜透析相關(guān)性腹膜纖維的過程中提供新的理論依據(jù)及支撐點(diǎn)，但是目前關(guān)于lncRNA 6030408B16RIK改善EMT的相關(guān)分子機(jī)制尚不清楚，需予以進(jìn)一步研究。