FAM83H-AS1靶向miR-4684-5p對(duì)胰腺癌細(xì)胞放射敏感性的影響

時(shí)彩艷，劉 峰，盧宏全，黃國(guó)定

(海南西部中心醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，海南 儋州 571700)

胰腺癌是消化系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其早期癥狀不明顯，限制了早期診斷和治療[1-2]。盡管近年來(lái)胰腺癌的治療水平有所提高，但患者的5年生存率仍小于5%[3]。清楚地認(rèn)識(shí)胰腺癌的發(fā)病機(jī)制將有助于明確胰腺癌診治的有效靶點(diǎn)和策略。長(zhǎng)鏈非編碼RNAs(long non-coding RNAs，lncRNAs)是真核細(xì)胞中長(zhǎng)度超過(guò)200核苷酸的RNA轉(zhuǎn)錄本，不具有蛋白質(zhì)編碼能力[4]，lncRNAs可參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生物學(xué)過(guò)程和疾病發(fā)病，包括正常胰腺細(xì)胞的癌變等[5-6]，也可參與調(diào)控腫瘤的放射敏感性[7]，如沉默lncRNA LINC00857通過(guò)招募NF-κB1增強(qiáng)肺腺癌細(xì)胞的放射敏感性[8]；另有研究發(fā)現(xiàn),lncRNA HOTAIR可通過(guò)miR-449b-5p促進(jìn)HSPA1A表達(dá)，增強(qiáng)乳腺癌耐輻射性[9]；還有研究表明lncRNA SBF2-AS1可通過(guò)miR-302a/MBNL3軸影響非小細(xì)胞肺癌的放射敏感性[10]。有研究發(fā)現(xiàn)FAM83H-AS1參與乳腺癌、結(jié)直腸癌、食管鱗癌等腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移[11-12]，但其在胰腺癌中的表達(dá)及其調(diào)控胰腺癌放射敏感性的作用機(jī)制仍不明確。因此，本研究通過(guò)探討FAM83H-AS1對(duì)胰腺癌放射敏感性的影響及其作用機(jī)制，首次揭示了FAM83H-AS1與胰腺癌輻射抵抗有關(guān)，為研究癌癥輻射耐藥性的分子機(jī)制開(kāi)辟了新的途徑，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 主要材料

經(jīng)患者和家屬同意，收集我院胰腺癌組織和距離病變位置約5 cm的癌旁組織標(biāo)本各30個(gè)，且立即保存在液氮中。胰腺癌PANC-1細(xì)胞、正常胰腺HPDE細(xì)胞來(lái)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)，DMEM培養(yǎng)基及胎牛血清(FBS)來(lái)自美國(guó)Gibco公司，細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，GAPDH多克隆抗體和Bcl-2、Bax抗體購(gòu)自英國(guó)Abcam公司，F(xiàn)AM83H-AS1 siRNA、pcDNA-FAM83H-AS1由北京擎科生物有限公司合成，miR-4684-5p inhibitor和miR-4684-5p mimics由上海吉瑪公司提供，流式細(xì)胞儀購(gòu)自美國(guó)Cell Signaling。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染

PANC-1細(xì)胞、HPDE細(xì)胞用含10% FBS、10 kU鏈霉素—青霉素的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)，置于37 ℃、飽和濕度為5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。待細(xì)胞融合至90%時(shí)，加入0.25%胰蛋白酶進(jìn)行消化傳代。轉(zhuǎn)染的細(xì)胞分組如下：①siRNA NC組(PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA NC質(zhì)粒)、FAM83H-AS1 siRNA組(PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染FAM83H-AS1 siRNA質(zhì)粒)；②pcDNA-3.1(+)組[PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA-3.1(+)質(zhì)粒]、pcDNA-3.1(+)+8 Gy組[PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA-3.1(+)質(zhì)粒后，用8 Gy射線垂直照射]、pcDNA-FAM83H-AS1組(PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA-FAM83H-AS1質(zhì)粒)、pcDNA-FAM83H-AS1+8 Gy組(PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA-FAM83H-AS1質(zhì)粒后，用8 Gy射線垂直照射)；③FAM83H-AS1 WT+mimics NC組(PANC-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染FAM83H-AS1 WT與mimics NC質(zhì)粒)、FAM83H-AS1 WT+miR-4684-5p mimics組(PANC-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染FAM83H-AS1 WT與miR-4684-5p mimics質(zhì)粒)、FAM83H-AS1 MUT+mimics NC組(PANC-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染FAM83H-AS1 MUT與mimics NC質(zhì)粒)、FAM83H-AS1 MUT+miR-4684-5p mimics組(PANC-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染FAM83H-AS1 MUT與miR-4684-5p mimics質(zhì)粒)；④mimics NC組(PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染mimics NC質(zhì)粒)、mimics NC+8 Gy組(PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染mimics NC質(zhì)粒后，用8 Gy射線垂直照射)、miR-4684-5p mimics組(PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-4684-5p mimics質(zhì)粒)、miR-4684-5p mimics+8 Gy組(PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-4684-5p mimics質(zhì)粒后，用8 Gy射線垂直照射)；⑤siRNA NC+inhibitor NC組(PANC-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染siRNA NC與inhibitor NC質(zhì)粒)、FAM83H-AS1 siRNA+inhibitor NC組(PANC-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染FAM83H-AS1 siRNA與inhibitor NC質(zhì)粒)、siRNA NC+miR-4684-5p inhibitor組(PANC-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染siRNA NC與miR-4684-5p inhibitor質(zhì)粒)、FAM83H-AS1 siRNA+miR-4684-5p inhibitor組(PANC-1細(xì)胞共轉(zhuǎn)染FAM83H-AS1 siRNA與miR-4684-5p inhibitor質(zhì)粒)；⑥X射線未照射組、X射線照射組(細(xì)胞完成轉(zhuǎn)染后，分別采用0、2、4、6、8 Gy的X射線垂直照射)。細(xì)胞鋪于12孔板，待融合至75%時(shí)棄培養(yǎng)基，用無(wú)FBS的DMEM覆蓋細(xì)胞，取稀釋好的重組質(zhì)粒和脂質(zhì)體混勻，室溫靜置20 min，緩慢滴入細(xì)胞。48 h后收集細(xì)胞RNA和蛋白進(jìn)行分析檢測(cè)。

1.3 細(xì)胞活力測(cè)定

細(xì)胞鋪于96孔板，融合至70%～80%時(shí)，按照1.2轉(zhuǎn)染步驟將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，需行X射線照射的細(xì)胞轉(zhuǎn)染后用8 Gy的X射線垂直照射，在培養(yǎng)箱中靜置48 h后，用PBS清洗，每孔細(xì)胞加入10 μL CCK-8溶液，放置4 h，在酶標(biāo)儀下讀取每孔細(xì)胞在450 nm處的吸光度值，計(jì)算細(xì)胞活力。

1.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率

細(xì)胞接種于12孔板，用LipofectamineTM2000進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，需行X射線照射的細(xì)胞轉(zhuǎn)染后用8 Gy的X射線垂直照射，48 h后收集細(xì)胞置于EP管，PBS清洗后，用500 μL結(jié)合緩沖液重懸細(xì)胞。細(xì)胞中加入5 μL Annexin V-FITC和10 μL PI，避光放置15 min后離心，采用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞的凋亡率。

1.5 雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)

采用生物信息學(xué)軟件miRnada預(yù)測(cè)FAM83H-AS1的靶基因后，構(gòu)建FAM83H-AS1野生型載體(FAM83H-AS1 WT)和突變型載體(FAM83H-AS1 MUT)。分別將FAM83H-AS1 WT+miR-4684-5p mimics與FAM83H-AS1 MUT+miR-4684-5p mimics質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至細(xì)胞內(nèi)，用8 Gy的X射線垂直照射，48 h后用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒檢測(cè)熒光素酶活性。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)( real-time fluoresent quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)

從液氮中取出保存的胰腺癌組織和癌旁組織，用液氮充分研磨后提取總RNA。PANC-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后或轉(zhuǎn)染完成用X射線照射48 h后，用Trizol法提取細(xì)胞RNA。通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以稀釋后的cDNA為模板，GAPDH為內(nèi)參，進(jìn)行RT-qPCR，反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共40個(gè)循環(huán)。結(jié)果通過(guò)2-ΔΔCt法分析。引物序列為GAPDH：F-CAAGGACCTCTACGCCAACAC，R-TGGAGGCGCGATGATCTT；FAM83H-AS1：F-CCTGGG-TTCAAGCGATTCT，R-GGTGGCACACACCTGCTAT。

1.7 Western blot

根據(jù)說(shuō)明書提取細(xì)胞中總蛋白，通過(guò)BCA試劑盒對(duì)蛋白進(jìn)行定量后，取50 μg蛋白進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳，90 V電泳90 min，120 V電泳30 min，再將蛋白濕轉(zhuǎn)到PVDF膜上(20 V濕轉(zhuǎn)1 h)。PVDF膜用封閉液室溫?fù)u床封閉3 h，與特異性一抗(Bcl-2、Bax和GAPDH)在4 ℃下反應(yīng)過(guò)夜，PBST洗滌5次，再于37 ℃下與二抗反應(yīng)l h，PBST洗滌5次，滴加化學(xué)發(fā)光劑進(jìn)行蛋白曝光，使用Image J軟件分析目的蛋白與內(nèi)參蛋白的灰度值，目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量=目的蛋白灰度值/內(nèi)參蛋白灰度值。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 FAM83H-AS1在胰腺癌組織、細(xì)胞和抗輻射PANC-1細(xì)胞中的表達(dá)

FAM83H-AS1在胰腺癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織(P<0.01)；PANC-1細(xì)胞中FAM83H-AS1表達(dá)高于HPDE細(xì)胞(P<0.01)，見(jiàn)圖1a、b；與經(jīng)0 Gy X射線照射的PANC-1細(xì)胞相比，用2、4、6、8 Gy X射線照射PANC-1細(xì)胞后，F(xiàn)AM83H-AS1的表達(dá)水平隨X射線照射劑量的增加而降低(P<0.05)，見(jiàn)圖1c。表明FAM83H-AS1在胰腺癌組織和細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)，而在抗輻射胰腺癌PANC-1細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。

a～c：RT-qPCR檢測(cè)FAM83H-AS1表達(dá) **：與癌旁組織比較，P<0.01；##：與HPDE細(xì)胞比較，P<0.01；△：與未用X射線照射的細(xì)胞比較，P<0.05；△△：與未用X射線照射的細(xì)胞比較，P<0.01

2.2 上調(diào)FAM83H-AS1抑制PANC-1細(xì)胞的放射敏感性

與pcDNA-3.1(+)組相比，pcDNA-FAM83H-AS1組FAM83H-AS1表達(dá)、Bcl-2蛋白表達(dá)和細(xì)胞活力升高(P<0.05)，Bax蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率降低(P<0.01)；與pcDNA-3.1(+)組相比，pcDNA-3.1(+)+8 Gy組FAM83H-AS1表達(dá)、Bcl-2蛋白表達(dá)和細(xì)胞活力降低(P<0.05)，Bax蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率升高(P<0.01)；與pcDNA-3.1(+)+8 Gy組相比，pcDNA-FAM83H-AS1+8 Gy組的FAM83H-AS1表達(dá)、Bcl-2蛋白表達(dá)和細(xì)胞活力升高(P<0.01)，Bax蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率降低(P<0.01)，見(jiàn)圖2。表明上調(diào)FAM83H-AS1能夠抑制PANC-1細(xì)胞的放射敏感性。

a：RT-qPCR檢測(cè)FAM83H-AS1表達(dá)；b：CCK-8法檢測(cè)PANC-1細(xì)胞活力；c、d：Western blot檢測(cè)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平；e、f：流式細(xì)胞儀測(cè)定PANC-1細(xì)胞凋亡率 1：pcDNA-3.1(+)組；2：pcDNA-FAM83H-AS1組；3：pcDNA-3.1(+)+8 Gy組；4：pcDNA-FAM83H-AS1+8 Gy組；*：與pcDNA-3.1(+)組比較，P<0.05；**：與pcDNA-3.1(+)組比較，P<0.01；△：與pcDNA-3.1(+)+8 Gy組對(duì)比，P<0.05；△△：與pcDNA-3.1(+)+8 Gy組對(duì)比，P<0.01

2.3 FAM83H-AS1和miR-4684-5p的關(guān)系

miRnada預(yù)測(cè)FAM83H-AS1和miR-4684-5p之間有直接結(jié)合位點(diǎn)。與FAM83H-AS1 WT+mimics NC組相比，F(xiàn)AM83H-AS1 WT+miR-4684-5p mimics組熒光素酶活性降低(P<0.01)；與FAM83H-AS1 MUT+mimics NC組相比，F(xiàn)AM83H-AS1 MUT+miR-4684-5p mimics組熒光素酶活性無(wú)變化(P>0.05)。與siRNA NC組相比，F(xiàn)AM83H-AS1 siRNA組FAM83H-AS1表達(dá)降低(P<0.01)。與siRNA NC組相比，F(xiàn)AM83H-AS1 siRNA組miR-4684-5p表達(dá)升高(P<0.01)；與pcDNA-3.1(+)組相比，pcDNA-FAM83H-AS1組miR-4684-5p表達(dá)降低(P<0.01)，見(jiàn)圖3。表明FAM83H-AS1和miR-4684-5p存在靶向和負(fù)調(diào)控關(guān)系。

a：miRnada預(yù)測(cè)FAM83H-AS1和miR-4684-5p之間的結(jié)合位點(diǎn)；b:熒光素酶活性的測(cè)定；c:RT-qPCR檢測(cè)FAM83H-AS1表達(dá)；d:RT-qPCR檢測(cè)miR-4684-5p表達(dá) **：與FAM83H-AS1 WT+mimics NC組比較，P<0.01；##：與siRNA NC組比較，P<0.01；△△：與siRNA NC組比較，P<0.01；▲▲：與pcDNA-3.1(+)組比較，P<0.01

2.4 miR-4684-5p在胰腺癌組織、細(xì)胞和抗輻射PANC-1細(xì)胞中的表達(dá)

miR-4684-5p在胰腺癌組織中的表達(dá)低于癌旁組織(P<0.01)，見(jiàn)圖4a；PANC-1細(xì)胞中miR-4684-5p表達(dá)低于HPDE細(xì)胞(P<0.01)，見(jiàn)圖4b；與經(jīng)0 Gy X射線照射的PANC-1細(xì)胞相比，經(jīng)不同劑量(2、4、6、8 Gy)X射線照射后的PANC-1細(xì)胞中miR-4684-5p的表達(dá)水平隨X射線照射劑量的增加而升高(P<0.05)，見(jiàn)圖4c。表明miR-4684-5p在胰腺癌組織和細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，而在抗輻射胰腺癌PANC-1細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。

a～c：RT-qPCR檢測(cè)miR-4684-5p表達(dá) **：與癌旁組織比較，P<0.01；##：與HPDE細(xì)胞比較，P<0.01；△：與未經(jīng)X射線照射的細(xì)胞比較，P<0.05；△△：與未經(jīng)X射線照射的細(xì)胞比較，P<0.01

2.5 上調(diào)miR-4684-5p增強(qiáng)PANC-1細(xì)胞的放射敏感性

與mimics NC組相比，miR-4684-5p mimics組miR-4684-5p表達(dá)、Bax蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率升高(P<0.05)，細(xì)胞活力和Bcl-2蛋白表達(dá)降低(P<0.05)；與mimics NC組相比，mimics NC+8 Gy組miR-4684-5p表達(dá)、Bax蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率升高(P<0.01)，細(xì)胞活力和Bcl-2蛋白表達(dá)降低(P<0.01)；與mimics NC+8 Gy組相比，miR-4684-5p mimics+8 Gy組細(xì)胞內(nèi)miR-4684-5p表達(dá)、Bax表達(dá)和細(xì)胞凋亡率升高(P<0.01)，細(xì)胞活力和Bcl-2蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，見(jiàn)圖5。表明上調(diào)miR-4684-5p能夠增強(qiáng)PANC-1細(xì)胞的放射敏感性。

a：RT-qPCR檢測(cè)miR-4684-5p表達(dá)；b：CCK-8法檢測(cè)PANC-1細(xì)胞活力；c～d：Western blot檢測(cè)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平；e～f：流式細(xì)胞儀測(cè)定PANC-1細(xì)胞的凋亡率 1：mimics NC組；2：miR-4684-5p mimics組；3：mimics NC+8 Gy組；4：miR-4684-5p mimics+8 Gy組；*：與mimics NC組比較，P<0.05；**：與mimics NC組比較，P<0.01；△：與mimics NC+8 Gy組比較，P<0.05；△△：與mimics NC+8 Gy組比較，P<0.01

2.6 FAM83H-AS1通過(guò)miR-4684-5p調(diào)控PANC-1細(xì)胞放射敏感性

PANC-1細(xì)胞經(jīng)8 Gy X射線垂直照射后，與siRNA NC+inhibitor NC組相比，F(xiàn)AM83H-AS1 siRNA+inhibitor NC組細(xì)胞活力和Bcl-2蛋白表達(dá)降低(P<0.01)，Bax蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率升高(P<0.01)；與siRNA NC+inhibitor NC組相比，siRNA NC+miR-4684-5p inhibitor組的細(xì)胞活力和Bcl-2蛋白表達(dá)升高(P<0.05)，Bax蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率降低(P<0.01)；與siRNA NC+miR-4684-5p inhibitor組相比，F(xiàn)AM83H-AS1 siRNA+miR-4684-5p inhibitor組的細(xì)胞活力和Bcl-2蛋白表達(dá)降低(P<0.05)，Bax蛋白表達(dá)和細(xì)胞凋亡率升高(P<0.01)，見(jiàn)圖6。表明下調(diào)FAM83H-AS1能夠通過(guò)miR-4684-5p調(diào)控PANC-1細(xì)胞的放射敏感性。

a：CCK-8法檢測(cè)PANC-1細(xì)胞活力；b、c：Western blot檢測(cè)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)水平；d、e：流式細(xì)胞儀測(cè)定PANC-1細(xì)胞凋亡率1：siRNA NC+inhibitor NC組；2：FAM83H-AS1 siRNA+inhibitor NC組；3：siRNA NC+miR-4684-5p inhibitor組；4：FAM83H-AS1 siRNA+miR-4684-5p inhibitor組；*：與siRNA NC+inhibitor NC組比較，P<0.05；**：與siRNA NC+inhibitor NC組比較，P<0.01；△：與siRNA NC+miR-4684-5p inhibitor組比較，P<0.05；△△：與siRNA NC+miR-4684-5p inhibitor組比較，P<0.01

3 討論

胰腺癌是一種高度轉(zhuǎn)移性和侵襲性的惡性腫瘤，通常對(duì)放射治療有耐藥性[13]。越來(lái)越多的證據(jù)表明，lncRNAs的異常表達(dá)可能對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡產(chǎn)生重要影響[14]。因此，探討lncRNAs在胰腺癌發(fā)生和輻射耐受中的作用機(jī)制，對(duì)明確其是否可以成為胰腺癌治療的潛在靶點(diǎn)至關(guān)重要。有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AM83H-AS1在多種癌癥中發(fā)揮著致癌基因的作用。如FAM83H-AS1是不同癌癥驅(qū)動(dòng)基因的潛在調(diào)制劑，也是ER/PR+乳腺癌患者的預(yù)后標(biāo)志物[15]。在肝細(xì)胞癌中上調(diào)FAM83H-AS1可通過(guò)激活Wnt/β-catenin通路促進(jìn)細(xì)胞增殖和侵襲[16]。另一項(xiàng)研究表明FAM83H-AS1可通過(guò)激活Notch信號(hào)通路促進(jìn)大腸癌細(xì)胞增殖[17]。上述研究明確了FAM83H-AS1在癌癥進(jìn)展中的重要作用，然而目前對(duì)于FAM83H-AS1對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖與凋亡的影響尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道，因此，本研究對(duì)FAM83H-AS1在胰腺癌中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，F(xiàn)AM83H-AS1在胰腺癌組織和細(xì)胞系中高表達(dá)，結(jié)合FAM83H-AS1在結(jié)直腸癌、乳腺癌等腫瘤中發(fā)揮的作用，我們猜測(cè)FAM83H-AS1在胰腺癌細(xì)胞中也可能具有致癌作用，而上調(diào)FAM83H-AS1后胰腺癌細(xì)胞增殖得到促進(jìn)、細(xì)胞凋亡得到抑制，進(jìn)一步證實(shí)了我們的推測(cè)。說(shuō)明FAM83H-AS1在胰腺癌的發(fā)展中也發(fā)揮了明顯的致癌基因作用，與FAM83H-AS1在其他癌癥中發(fā)揮的作用一致。此外，本研究結(jié)果還表明，F(xiàn)AM83H-AS1在抗輻射胰腺癌PANC-1細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，上調(diào)其表達(dá)能夠抑制PANC-1細(xì)胞的放射敏感性。

近期研究表明，lncRNAs作為miRNA海綿負(fù)調(diào)控miRNA表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控腫瘤的發(fā)展[18]。如FAM83A-AS1靶向miR-150-5p和修飾MMP14促進(jìn)肺腺癌細(xì)胞遷移和侵襲[19]。另有研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)AM83H-AS1可通過(guò)調(diào)控miR-136-5p促進(jìn)三陰性乳腺癌進(jìn)展[20]。結(jié)合前人的研究思路，本研究繼續(xù)探討了FAM83H-AS1的下游作用靶點(diǎn)，結(jié)果顯示，F(xiàn)AM83H-AS1能夠靶向miR-4684-5p，熒光素酶活性檢測(cè)證實(shí)了FAM83H-AS1與miR-4684-5p的直接結(jié)合。有研究認(rèn)為，在食管鱗癌中，F(xiàn)AM83H-AS1與miR-4684-5p具有靶向作用，并可通過(guò)調(diào)控miR-4684-5p/ZBTB38軸促進(jìn)有氧糖酵解和腫瘤進(jìn)展[21]，表明miR-4684-5p與腫瘤進(jìn)展密切相關(guān)。目前miR-4684-5p在胰腺癌細(xì)胞增殖、凋亡中的作用及其機(jī)制尚未完全闡明，因此本研究還探討了miR-4684-5p在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況及其生物學(xué)功能，結(jié)果顯示，miR-4684-5p在抗輻射胰腺癌PANC-1細(xì)胞中表達(dá)明顯上調(diào)，上調(diào)miR-4684-5p表達(dá)能夠增強(qiáng)PANC-1細(xì)胞的放射敏感性；且下調(diào)FAM83H-AS1能夠通過(guò)miR-4684-5p調(diào)控PANC-1細(xì)胞的放射敏感性。以上結(jié)果表明，F(xiàn)AM83H-AS1的下調(diào)通過(guò)海綿樣作用在轉(zhuǎn)錄后水平負(fù)調(diào)控miR-4684-5p的表達(dá)，抑制胰腺癌細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)胰腺癌放射敏感性。說(shuō)明FAM83H-AS1可以靶向miR-4684-5p調(diào)節(jié)胰腺癌細(xì)胞的放射敏感性，這可能是胰腺癌耐輻射的潛在靶點(diǎn)。

綜上所述，F(xiàn)AM83H-AS1在胰腺癌組織和細(xì)胞系中高表達(dá)，其表達(dá)下調(diào)可通過(guò)負(fù)調(diào)控miR-4684-5p抑制癌細(xì)胞增殖，增強(qiáng)胰腺癌放射敏感性。因此，靶向FAM83H-AS1/miR-4684-5p軸可能是一種胰腺癌輻射耐受的新的治療方向。