柳茶提取物對大鼠血壓影響的研究

趙小芳，徐明麗 ，馮翠娟 ，段博文 ，李 運

（1.甘肅衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州市食品藥品檢驗檢測研究院，甘肅 蘭州 730000）

柳茶為薔薇科鮮卑花屬植物鮮卑花和窄葉鮮卑花的葉及嫩枝，甘肅省有豐富的野生資源，主要產(chǎn)于甘南藏族自治州，生長在海拔3 000～3 600 m的草地或灌木叢中[1]。藥理研究表明，柳茶具有調(diào)節(jié)脂代謝、提高機體免疫力、抗氧化、抗腫瘤、保護肝損傷[2-4]等作用。為進一步摸清柳茶的其他藥理作用，合理開發(fā)利用我省的藥材資源，課題組開展了柳茶在調(diào)節(jié)血糖、抗疲勞、抗缺氧、對血壓的影響等方面的實驗研究，本項目主要承擔(dān)柳茶提取物對血壓影響的實驗研究。

肥胖是血壓升高的危險因素，控制體重有助于降低血壓[5]。另外，大量流行病學(xué)研究顯示，高脂血癥是高血壓的可調(diào)性間接危險因素之一，調(diào)節(jié)血脂有利于控制血壓[6]。鑒于柳茶有降低血脂、減肥的功效，課題組根據(jù)以往研究推測：柳茶是否也能降壓？如果有降壓作用，那么是由于降血脂而導(dǎo)致的間接作用還是有直接降壓作用？降壓作用是否顯著？高密度脂蛋白（HDL）能刺激動脈內(nèi)膜細胞前列環(huán)素的形成，降低內(nèi)皮損傷導(dǎo)致的血管收縮反應(yīng)。而柳茶提取物可明顯降低大鼠血中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）含量，增加 HDL含量[7]，說明其可以增強HDL對動脈內(nèi)膜的保護作用。以上研究為本課題的推測提供了理論依據(jù)。

1 實驗對象與方法

1.1 實驗材料

柳茶采自甘肅省甘南藏族自治州，經(jīng)蘭州大學(xué)藥學(xué)院楊永建教授鑒定為薔薇科鮮卑花屬植物窄葉鮮卑花的葉。羅布麻購于蘭州惠仁堂藥店，由蘭州旭康藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號20181023），經(jīng)楊永建教授鑒定為夾竹桃科羅布麻屬植物羅布麻的葉。實驗動物為 Wistar大鼠，雄性，6 周齡，體重（200±10）g，由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 制備供試品 柳茶浸膏的制法：稱取窄葉鮮卑花葉300 g，粉碎后用95%乙醇1 600 W超聲提取3次，每次20 min。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮乙醇提取液，得102 g浸膏備用。按參考文獻給藥[8]。羅布麻浸膏的制法：稱取羅布麻300 g，粉碎后用60%乙醇回流2 h。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮乙醇提取液，得80.7 g浸膏備用。按臨床等效劑量給藥。

1.2.2 實驗動物分組 雄性Wistar大鼠30只，購入后飼養(yǎng)觀察3天，隨機分為5組，每組6只，分別編號（見表1）。

表1 實驗動物分組及處理方法

1.2.3 高血壓大鼠模型的建立 用動物無創(chuàng)測壓儀連續(xù)測定血壓3天后，對B、C、D、E組大鼠每日皮下注射丙酸睪丸素2 mg/100 g[9]，同時給予5%鹽水，常規(guī)飼料喂養(yǎng)，14天后，測得大鼠血壓明顯升高（與造模前比較，收縮壓P<0.001，舒張壓P<0.01），此時進行實驗治療。

丙酸睪丸素溶液的配制方法：將花生油于165℃干熱空氣滅菌2 h，作為溶劑。將460 mg丙酸睪丸素加入34.5 mL滅菌花生油中，超聲振蕩40 min，完全溶解。每只大鼠的給藥量為2 mg/100 g ，即 0.15 mL/100 g。

1.2.4 實驗性治療方法 治療開始后，大鼠給藥量為2 g生藥/200 g·d，給藥方法為灌胃。連續(xù)14天，每7天測一次血壓?？瞻讓φ战M和模型對照組給蒸餾水。

柳茶治療組給藥量：每只大鼠給藥量為2 g生藥/200 g·d，即0.68 g浸膏。將浸膏配成0.34 g/mL的水溶液，則每只大鼠的給藥量是 2 mL/200 g·d。

羅布麻治療組給藥量：每只大鼠給藥量為2 g生藥/200 g·d，即0.538 g浸膏。將浸膏配成0.269 g/mL的水溶液，則每只大鼠的給藥量是2 mL/200 g·d。

復(fù)方治療組給藥量：柳茶和羅布麻按1︰1的比例混合，每只大鼠給予柳茶1 g/200 g·d、羅布麻1 g/200 g·d，即將配好的柳茶水溶液和羅布麻水溶液各1 mL/200 g·d混合后給予。

1.3 檢測指標

1.3.1 血壓 用多通道動物無創(chuàng)測壓儀測大鼠的尾動脈壓，比較治療后大鼠血壓的變化。

1.3.2 血清中生化指標NO、NOS 治療結(jié)束后，將大鼠4.5 mL/kg腹腔注射10%水合氯醛，待進入麻醉狀態(tài)后，心臟采血，離心 10 min（3 000轉(zhuǎn)/min），分出血清，于-20 ℃保存。

用試劑盒法測定血清中NO含量和NOS活力，操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

大鼠的血壓、NO含量和NOS活力采用SPSS 16.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料采用（±s）表示，組間比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 治療結(jié)束后各組大鼠的血壓

各組大鼠血壓變化顯示：造模成功后至治療結(jié)束，模型對照組大鼠的血壓維持在較高水平；柳茶治療組大鼠的血壓明顯下降（P<0.001），說明柳茶對實驗性高血壓大鼠具有降壓作用，且與羅布麻療效相當(dāng)。

復(fù)方治療組大鼠血壓下降顯著（P<0.001），但與單方比較，療效并無差異，初步提示治療高血壓時，柳茶與羅布麻還是單用為好（見表2）。

表2 柳茶對實驗性高血壓大鼠血壓的影響（±s，mmHg）

表2 柳茶對實驗性高血壓大鼠血壓的影響（±s，mmHg）

注：與空白對照組比較，***P<0.001，**P<0.01；與模型對照組比較，▲▲▲P<0.001

組別治療結(jié)束后的血壓SBP DBP空白對照組（2 mL/200 g·d）模型對照組（2 mL/200 g·d）柳茶治療組（2 mL/200 g·d）羅布麻治療組（2 mL/200 g·d）復(fù)方治療組（2 mL/200 g·d）110.67±8.17 133.32±5.912***113.57±5.66▲▲▲116.27±8.83▲▲▲111.95±9.06▲▲▲85.0172±10.70 99.43±4.29**89.33±3.12▲▲▲89.20±1.99▲▲▲88.37±2.94▲▲▲

2.2 NO試劑盒測試結(jié)果

紫外分光光度計用蒸餾水調(diào)零，于550 nm處，0.5 cm光徑，測各管吸光度，計算各樣品中NO含量，見表3。

表3 柳茶對高血壓大鼠血清中NO含量的影響（±s，μ mol/L）

表3 柳茶對高血壓大鼠血清中NO含量的影響（±s，μ mol/L）

注：大鼠血清中的 NO含量參考值為（38.0±23.4）μmol/L。與空白對照組比較，**P<0.01；與模型對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01，▲▲▲P<0.001；與復(fù)方治療組比較，★★P<0.01，★P<0.05

組別NO含量空白對照組（2 mL/200 g·d）模型對照組（2 mL/200 g·d）柳茶治療組（2 mL/200 g·d）羅布麻治療組（2 mL/200 g·d）復(fù)方治療組（2 mL/200 g·d）48.15±12.15 33.70±11.94**45.74±11.01▲★★56.11±9.05▲▲★65.18±19.19▲▲▲

2.3 NOS試劑盒測試結(jié)果

紫外分光光度計用蒸餾水調(diào)零，于530 nm處，1 cm光徑，測各管吸光度，每毫升血清每分鐘生成1 nmol NO為一個酶活力單位。

計算TNOS（總一氧化氮合酶）空白管吸光度為0.083，iNOS（誘導(dǎo)型一氧化氮合酶）空白管吸光度為0.046。各組大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力見表4。

表4 各組大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力（±s，U/mL）

表4 各組大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力（±s，U/mL）

注：與模型對照組比較，▲P<0.05

組別TNOS iNOS空白對照組（2 mL/d）模型對照組（2 mL/d）柳茶治療組（2 mL/d）羅布麻治療組（2 mL/d）復(fù)方治療組（2 mL/d）22.205±1.454 28.640±4.476 29.652±2.294 30.713±4.303 29.328±1.689 8.843±1.737▲12.822±3.664▲16.798±2.449▲15.427±3.894▲17.064±2.639▲

3 討論

3.1 柳茶提取物對高血壓大鼠有降壓作用

通過實驗觀察，發(fā)現(xiàn)柳茶提取物對實驗性高血壓大鼠的血壓有顯著降低作用（P<0.001），療效與羅布麻相當(dāng)。

與羅布麻合用后，與單方相比，降壓效果并無增強，提示治療高血壓時，柳茶與羅布麻還是單用為好。

3.2 柳茶提取物能改善高血壓大鼠的生化指標

柳茶提取物能升高高血壓大鼠血清中擴血管物質(zhì)NO的含量，并提高iNOS活力（P<0.05），使其催化NO合成的能力增強，說明對動脈內(nèi)皮有保護作用。

3.3 展望

本實驗研究證明柳茶提取物對高血壓大鼠有降壓作用，并對考察的生化指標（NO、NOS）有所改善。在今后的研究中，將觀察柳茶治療高血壓的長期療效以及內(nèi)皮素（ET）、硫化氫（H2S）等與高血壓有關(guān)的其他生化指標的變化，論證將其進一步開發(fā)為有降壓功效的保健茶飲，作為高血壓治療的輔助產(chǎn)品的可行性。