血清膜結(jié)合黏蛋白2與前列腺特異性抗原水平對乳腺癌診斷的臨床意義

劉慧敏，邵 華，姚壯凱，孫 巖

連云港市第二人民醫(yī)院甲乳外科，江蘇 連云港 222000

膜結(jié)合黏蛋白2（MUC2）是一種分泌性黏蛋白，在器官如胰腺、乳腺和前列腺的黏液癌中出現(xiàn)，Dhanisha 等［1］提出，血清黏蛋白水平升高可作為疾病診斷和預(yù)后的潛在標(biāo)志物。前列腺特異性抗原（PSA）目前作為特異性腫瘤標(biāo)記物用于診斷早期前列腺癌，研究顯示PSA 同樣存在于女性卵巢、乳腺等依靠激素調(diào)節(jié)的組織中，它在乳腺癌患者血清內(nèi)異常表達(dá)［2］，本研究通過檢測乳腺癌患者血清中MUC-2及PSA的濃度水平，旨在探討聯(lián)合檢測兩者作為乳腺癌患者早期診斷及篩查指標(biāo)的可行性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017 年6 月—2019 年6 月于連云港市第二人民醫(yī)院確診為乳腺癌的96 例患者作為試驗(yàn)組，同時(shí)選取92 例乳腺良性疾病患者作為對照組，同時(shí)段選取93例體檢健康女性作為正常組，試驗(yàn)組年齡28～60 歲，所有患者術(shù)前穿刺病理證實(shí)為乳腺浸潤性癌，術(shù)前均未接受任何新輔助放化療，內(nèi)分泌治療及靶向治療等，其中I期35 例，Ⅱ期47例，Ⅲ期及以上共14 例。對照組92 例患者均為乳腺良性疾病，包括乳腺纖維瘤，乳腺中重度增生，乳腺導(dǎo)管擴(kuò)張等，排除急慢性乳腺炎患者。正常組88 例年齡22～65 歲，均為樣本醫(yī)院體檢健康正常人，入選標(biāo)準(zhǔn)為體檢前一個(gè)月內(nèi)無明顯感染史，均無自身免疫疾病病史等。

1.2 檢測方法

采用雙抗體夾心法測定血清MUC2 和PSA 水平，靜脈穿刺從三組人群中提取血液樣本，并在室溫下離心，離心后收集血清并立即在80 ℃冷凍直至析出。微滴度板分別預(yù)先涂上針對MUC2 和PSA 的抗體。三組人群用兩者特異性的生物素偶聯(lián)抗體加入到孔中。微滴板含有苯二烯，親和素偶聯(lián)到辣根過氧化物酶（HRP），分別加入到每孔中孵育。加入四甲基聯(lián)苯胺（TMB） 底物溶液后，含有MUC2、PSA、生物素偶聯(lián)抗體和酶偶聯(lián)親和素的孔出現(xiàn)顏色變化。采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測定標(biāo)本血清中的MUC2 和PSA 濃度的吸光度（OD 值），確定血清中PSA 和MUC2 的濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析進(jìn)行計(jì)量資料的組間比較，采用ROC 曲線評估PSA 和MUC2 在乳腺癌中的診斷價(jià)值，比較對乳腺癌診斷的敏感性和特異性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組人群血清PSA和MUC2的檢測結(jié)果

本研究顯示試驗(yàn)組血清PSA、MUC2 的表達(dá)水平均高于對照組和正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。對照組和正常組血清中兩者的表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 三組人群血清PSA和MUC2的檢測結(jié)果（±s）

表1 三組人群血清PSA和MUC2的檢測結(jié)果（±s）

組別試驗(yàn)組（n=96）對照組（n=92）正常組（n=93）P值PSA（ng/mL）0.267±0.068 0.149±0.017 0.135±0.024＜0.05 MUC2（μ/mL）65.66±4.15 23.88±6.22 23.12±3.67＜0.05

2.2 血清PSA和MUC2對女性乳腺癌診斷的ROC曲線及診斷價(jià)值分析。

計(jì)算Youden 指數(shù)=靈敏度+特異度-1，以Youden 指數(shù)最大切點(diǎn)為最佳臨界點(diǎn)，確定PSA 和MUC2 診斷乳腺癌的最佳臨界值，并計(jì)算曲線下面積（AUC），PSA 對乳腺癌診斷的ROC 曲線下面積約為0.80，診斷臨界值為1.79，敏感度64.3%，特異度68.2%（圖1），MUC2 對乳腺癌的ROC 曲線下面積約為0.90,診斷臨界值為1.95，敏感度83.3%，特異度70.2%（圖2）。

圖1 乳腺癌患者轎清PSA的ROC曲線

圖2 乳腺癌患者血清MUC2的ROC曲線

3 討論

膜結(jié)合蛋白作為細(xì)胞表面受體，參與各種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，研究表明黏蛋白在癌癥中的高分泌狀態(tài)是由于其獨(dú)特的糖基化模式，作為多種生長因子和細(xì)胞因子的結(jié)合平臺通過幾個(gè)信號級聯(lián)通路從而促進(jìn)惡性細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移［3］。在乳腺導(dǎo)管腺癌中，膜結(jié)合蛋白（MUC1、MUC3、MUC4） 和分泌黏液蛋白（MUC2、MUC5AC、MUC5B、MUC6）均上調(diào)。一些研究揭示了黏蛋白的一些獨(dú)特作用，包括在整個(gè)乳腺癌進(jìn)展過程中調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)，Rakha等［4］報(bào)告了MUC2表達(dá)與ER狀態(tài)呈顯著負(fù)相關(guān)，Patel等［5］發(fā)現(xiàn)，MUC2的表達(dá)陰性與組織學(xué)高分化分級相關(guān)，然而目前極少有研究報(bào)道MUC2 在乳腺癌患者血清中的表達(dá)水平，我們研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者血清中的MUC2 表達(dá)水平明顯高于乳腺良性疾病和正常人，而對照組和正常組之間差異均不明顯，這也符合MUC2 在乳腺癌組織中高表達(dá)的生物學(xué)特性，提示腫瘤細(xì)胞可能通過分泌黏蛋白穿透血管壁參與血液流通來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散及轉(zhuǎn)移。

PSA 作為KLKs 家族成員主要由前列腺合成，在性激素相關(guān)惡性腫瘤（前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌、睪丸癌）的發(fā)生發(fā)展中起著刺激細(xì)胞生長及促血管形成，降解細(xì)胞基層的作用，廣泛用于前列腺癌的術(shù)前診斷及術(shù)后檢測。Toru Hanamura 等［2］報(bào)道稱乳腺癌患者的PSA 水平高于健康對照組，且乳腺癌患者術(shù)后血清PSA 水平低于術(shù)前檢測水平，提示血清中同樣可以檢測出自乳腺癌組織中PSA，本研究同樣發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者血清PSA 水平稍高于對照組及正常組，但其敏感性及特異性均低于MUC2 組，ROC 曲線下面積可以反映診斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度大小，一般認(rèn)為AUC值在0.5～0.7時(shí)準(zhǔn)確度較低,0.7～0.9時(shí)處于中等，大于0.9以上表明準(zhǔn)確度高，本實(shí)驗(yàn)MUC2 （AUC）值為0.90，PSA（AUC）為0.80，說明MUC2 用于診斷乳腺癌的準(zhǔn)確度較PSA 高，PSA 作為早期乳腺癌的血清篩查指標(biāo)研究價(jià)值有待進(jìn)一步深入探討。

本研究的局限性在于這是一個(gè)單指標(biāo)觀察性研究，MUC家族的其他黏蛋白水平并未被評估，此外分開檢測血清中的總PSA（T-PSA）和游離PSA（F-PSA）的濃度更能提高本次試驗(yàn)的檢測效能，我們沒有考慮術(shù)前新輔助治療如（放化療、激素治療或靶向治療等）及穿刺活檢等創(chuàng)傷操作的影響，這些因素可能會(huì)影響試驗(yàn)結(jié)果，進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量聯(lián)合檢測MUC2 和PSA 的血清研究對兩者作為乳腺癌的早期診斷及篩查指標(biāo)更有說服力。