浸潤型肺腺癌CT影像學(xué)特征與Ki-67表達(dá)的關(guān)系

郝以秀，唐昭亮，陳惠嫻，徐宏剛，何文娟

（1廣州市第一人民醫(yī)院放射科 廣東 廣州 510000）

（2廣州市第一人民醫(yī)院病理科 廣東 廣州 510000）

在中國，肺癌的發(fā)病率和死亡率每年都在逐步上升[1]。肺腺癌是肺癌常見的病理學(xué)類型，其CT影像特征包括毛刺征、分葉征、空泡征及胸膜凹陷征[2]。Ki-67是一種存在于增殖細(xì)胞核基質(zhì)內(nèi)的抗原，它的合成、表達(dá)與細(xì)胞的增殖周期有關(guān)，可能是預(yù)測肺癌患者預(yù)后有價(jià)值的生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，而該抗原目前需要活檢才能證實(shí)其存在[3]。如果浸潤型肺腺癌的某些CT特征可以提示腫瘤細(xì)胞增殖活躍并提示預(yù)后，那么通過非侵入檢查即可實(shí)現(xiàn)。目前關(guān)于Ki-67的研究主要集中于肺癌的預(yù)后及臨床療效預(yù)測[4-5]，而對于浸潤型肺腺癌CT征象與Ki-67的表達(dá)情況的意義，尚無相關(guān)報(bào)道。本研究分析浸潤型肺腺癌CT影像學(xué)特征與Ki-67表達(dá)水平，探討與浸潤型肺腺癌增殖活躍相關(guān)的CT征象。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月—2020年7月間于廣州市第一人民醫(yī)院經(jīng)病理活檢證實(shí)的浸潤型肺腺癌患者53例，排除其中6例，3例為胸腔積液穿刺確診的病例，1例多發(fā)病灶，2例未行Ki-67檢查，最終共有47例納入本研究。患者年齡為36～80歲，女性患者24例，平均年齡（61.46±9.117）歲；男性患者23例，平均年齡（62.7±11.372）歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①單發(fā)病灶；②術(shù)前兩周內(nèi)行胸部CT檢查者；③患者CT檢查前未行穿刺活檢、放化療操作或治療；④患者術(shù)前CT檢查圖像、術(shù)后病理及免疫組織化學(xué)資料均完整（術(shù)前CT檢查圖像包含胸部CT平掃或胸部CT增強(qiáng)掃描）。排除標(biāo)準(zhǔn)：①胸腔積液穿刺確診的病例；②縱隔淋巴結(jié)穿刺確診的病例；③合并有肺不張的肺癌；④中央型肺癌；⑤合并有其他癌癥的病例。因本院能收集到的病例大部分為浸潤型肺腺癌，將中央型肺癌排除在外一方面是因?yàn)榻櫺头蜗侔┐蟛糠謱儆谥車头伟?，另一方面是因中央型肺癌通常與肺門淋巴結(jié)分界不清，不能準(zhǔn)確測量病灶大小及觀察其他征象。本研究基于真實(shí)的資料及創(chuàng)新于其他研究者的結(jié)果，分析浸潤型肺腺癌的CT影像特征與Ki-67抗原表達(dá)水平,提高對于能提示腫瘤細(xì)胞增殖活躍的CT影像特征的認(rèn)識。

1.2 方法

掃描時(shí)患者取仰臥位，用Toshiba AquilionTSX-301A或Philips Brilliance 64排 螺 旋CT完 成 胸 部 掃描。胸部CT掃描參數(shù)：電壓120 kV，自動毫安。采集64×0.5 mm，重建層厚0.5～1.0 mm，重建間隔0.5～1.0 mm。采用高分辨CT掃描模式，肺算法，多平面重建（multi-planner reformation，MPR）。

圖像分析：CT掃描獲得的圖像經(jīng)醫(yī)學(xué)影像信息（picture archiving and communication systems，PACS）系統(tǒng)傳輸，由兩位胸部影像診斷醫(yī)師各自盲法閱片，如果存在分歧，通過討論解決。CT閱片時(shí)應(yīng)用PACS進(jìn)行MPR重建，在MPR重建圖像上觀察并記錄肺腺癌結(jié)節(jié)的大小、分葉征、毛刺征、空泡征、空氣支氣管征、胸膜凹陷征的情況。肺結(jié)節(jié)病灶根據(jù)密度分為實(shí)性結(jié)節(jié)、部分實(shí)性結(jié)節(jié)、非實(shí)性結(jié)節(jié)，實(shí)性結(jié)節(jié)肺窗圖像上完全遮蓋肺紋理，部分實(shí)性結(jié)節(jié)肺窗圖像上部分遮蓋肺紋理，非實(shí)性結(jié)節(jié)肺窗圖像上不遮蓋肺紋理[6]。為了更清楚地顯示病灶輪廓，所有病灶的測量和觀察均是在肺窗圖像上完成，設(shè)定肺窗1 600 HU/-600 HU。所有病灶大小的測量方法是肺窗橫斷面圖像上病灶最大長徑和同一層面垂直于最大長徑的最大短徑之和的平均值。肺窗圖像上分葉征定義為肺腺癌病灶的輪廓呈淺波浪形；毛刺征定義為從病灶發(fā)出的線條樣組織延伸至正常肺組織，但未觸及胸膜表面；空泡征定義為病灶內(nèi)直徑2 mm以下的類圓形空氣衰減影[2]；胸膜凹陷征是指自病灶局部延伸至胸膜表面并引起局部胸膜被牽拉[7]?？諝庵夤苷鞫x為病灶內(nèi)的含氣支氣管影。

1.3 組織病理學(xué)檢查結(jié)果的獲得及Ki-67評價(jià)

Ki-67濃縮型鼠抗人mAb，稀釋比例為1:100，購自上海長嘉生物科技有限公司；抗體稀釋液及EnⅤision試劑盒為Dako公司產(chǎn)品。標(biāo)本經(jīng)100 g/L甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚4 μm，HE染色，光鏡觀察，免疫組織化學(xué)用EnⅤision兩步法。石蠟標(biāo)本常規(guī)切片，脫蠟至無水后，于抗體修復(fù)液中微波修復(fù)，詳細(xì)步驟按說明書進(jìn)行。染色設(shè)已知陽性對照，陰性對照用磷酸鹽緩沖液替代，二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木精復(fù)染。免疫組織化學(xué)結(jié)果判定：陽性信號為棕黃色、棕褐色，Ki-67表達(dá)于細(xì)胞核。每例切片至少隨機(jī)選擇10個(gè)高倍鏡視野，取平均值。Ki-67在細(xì)胞核的陽性表達(dá)分為以下水平：≤5%，6%～10%，11%～20%，21%～30%，50%，60%～90%。以往的研究中籠統(tǒng)的將Ki-67的表達(dá)分為低表達(dá)、高表達(dá)或者陰性、陽性[8-9]，本研究定義的Ki-67的分級表達(dá)水平是基于病例中Ki-67表達(dá)情況而定，是為了明確CT影像學(xué)特征分別對應(yīng)的Ki-67表達(dá)水平，這是本研究的另一創(chuàng)新點(diǎn)。本研究中有1例患者表現(xiàn)為50%的Ki-67表達(dá)情況，基于以往文獻(xiàn)中定義的Ki-67≤40%低表達(dá)，Ki-67＞40%為高表達(dá)[8]，本研究中以Ki-67＞50%為高表達(dá)，Ki-67≤50%低表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)、百分比（%）表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以（）表示，行t檢驗(yàn)。P＜0.05則差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

47例患者中包括34例實(shí)性結(jié)節(jié)肺腺癌病灶，9例部分實(shí)性結(jié)節(jié)，4例非實(shí)性結(jié)節(jié)。因本研究能獲得的部分實(shí)性結(jié)節(jié)、非實(shí)性結(jié)節(jié)樣本量少，沒有對不同類型結(jié)節(jié)與K i-67的表達(dá)進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)。浸潤型肺腺癌大小與肺腺癌K i-67表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。浸潤型肺腺癌分葉征、空泡征、空氣支氣管征、胸膜凹陷征與肺腺癌K i-67表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2。浸潤型肺腺癌毛刺征與K i-67表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。浸潤型肺腺癌毛刺征在K i-67高表達(dá)時(shí)表現(xiàn)明顯。

表1 浸潤型肺腺癌結(jié)節(jié)大小與Ki-67的表達(dá)水平對比

表2 浸潤型肺腺癌分葉征、毛刺征、空泡征、空氣支氣管征、胸膜凹陷征與Ki-67表達(dá)水平對比

3 討論

3.1 Ki-67抗原與肺癌分化、治療及預(yù)后的關(guān)系

Ki-67是一種存在于細(xì)胞核內(nèi)的增殖抗原，也是目前最可靠的細(xì)胞核增殖標(biāo)志物，Ki-67指數(shù)升高提示腫瘤生長活躍[3]。Jingang Yan等[10]研究表明分別有58%的肺原位癌、44%的微浸潤型腺癌、7%的浸潤型腺癌中Ki-67表達(dá)＜5%，Ki-67表達(dá)≥30%僅在浸潤型肺腺癌中出現(xiàn)，提示Ki-67高表達(dá)與肺癌的浸潤性相關(guān)。一項(xiàng)meta分析結(jié)果提示，Ki-67標(biāo)記指數(shù)對非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后具有意義，高指數(shù)提示預(yù)后不良[11]。最新的WHO分類將Ki-67表達(dá)納入小細(xì)胞肺癌的診斷中，高表達(dá)的Ki-67可能與小細(xì)胞肺癌的放療敏感性有關(guān)[3]。因此，在術(shù)前利用CT影像資料預(yù)測Ki-67的表達(dá)，將有助于治療方案的優(yōu)化。目前的研究主要集中于非小細(xì)胞肺癌不同病理類型、肺腺癌不同病理亞型與Ki-67的表達(dá)差異，Ki-67的表達(dá)與某一種亞型肺腺癌的CT影像學(xué)特征之間的意義罕有報(bào)道。本研究基于浸潤型肺腺癌CT影像學(xué)特征，分析其與Ki-67表達(dá)的意義，據(jù)我們所知，這是首次進(jìn)行此類研究。

3.2 肺腺癌的CT影像學(xué)特征與Ki-67的關(guān)系

Jingang Yan等[10]研究發(fā)現(xiàn)，K i-67的表達(dá)與肺腺癌結(jié)節(jié)的直徑、分葉征呈正相關(guān)，Spearman相關(guān)系數(shù)分別為0.58、0.436，其中非實(shí)性結(jié)節(jié)38%，部分實(shí)性結(jié)節(jié)41%，實(shí)性結(jié)節(jié)21%。本研究中浸潤型肺腺癌結(jié)節(jié)大小與肺腺癌Ki-67表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。分析原因，表現(xiàn)為實(shí)性結(jié)節(jié)肺癌增殖的速度低于亞實(shí)性結(jié)節(jié)[12]，本研究中72%的病灶為實(shí)性結(jié)節(jié)，Ki-67表達(dá)可能因此在不同大小的結(jié)節(jié)中不具有差異性。陳相猛等[2]的研究證實(shí)，浸潤型肺腺癌的毛刺征、分葉征、空泡征、胸膜凹陷征的出現(xiàn)概率均顯著高于非典型腺瘤樣增生、原位腺癌、微浸潤型腺癌（P＜0.05）。在該研究中，毛刺征、分葉征、空泡征、胸膜凹陷征在浸潤型腺癌中的陽性率分別是38%、22%、15%、19%，表明毛刺征與浸潤型肺腺癌的分化密切相關(guān)。Jingang Yan等[10]研究發(fā)現(xiàn)95例肺腺癌中（包括肺原位癌、微浸潤型腺癌、浸潤型腺癌），分葉征、毛刺征陽性者Ki-67表達(dá)≥30%的比例均有11%（P=0.001、0.021）。帕麗旦·尼亞孜等[9]研究表明在107例肺癌中（包括腺癌、鱗癌、腺鱗癌、小細(xì)胞肺癌），分別有13%、35%的毛刺征、深分葉征陽性者出現(xiàn)K i-67表達(dá)＞10%（P＜0.05）。本研究發(fā)現(xiàn)在浸潤型肺腺癌中，有30%的毛刺征陽性者Ki-67表達(dá)60%～90%（P＜0.05），有30%的分葉征陽性者K i-67表達(dá)60%～90%（P＞0.05）。毛刺征形成的病理基礎(chǔ)是病灶向各個(gè)方向生長，腫瘤細(xì)胞向鄰近支氣管血管鞘或局部淋巴管浸潤擴(kuò)散[13]。分葉征是由于瘤內(nèi)纖維組織增生收縮、血管或淋巴管阻擋或病灶不同方向生長速度不同所致[14]。胸膜凹陷征是由于肺癌結(jié)節(jié)內(nèi)的瘢痕牽拉，導(dǎo)致鄰近的胸膜出現(xiàn)凹陷形成?？张菡骱涂諝庵夤苷魇且蚰[瘤細(xì)胞的不均勻浸潤導(dǎo)致[15]。上述征象中與肺癌擴(kuò)散浸潤生長密切相關(guān)的征象是毛刺征，本研究結(jié)果也證實(shí)了這一點(diǎn)，表明毛刺征陽性與K i-67高表達(dá)有關(guān)，預(yù)示腫瘤細(xì)胞增殖活躍。

3.3 本研究的不足之處與未來展望

本研究樣本數(shù)量雖然有限，但是結(jié)果證實(shí)了浸潤型肺腺癌毛刺征陽性提示Ki-67的高表達(dá)，通過毛刺征可以間接反映腫瘤細(xì)胞增殖活躍情況，從而優(yōu)化治療方案。未來期望有更多的樣本量納入，探索將更多與Ki-67表達(dá)相關(guān)的CT影像學(xué)特征，并將其與其他相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合預(yù)測肺癌生存率等情況。

綜上所述，浸潤型肺腺癌CT影像學(xué)特征中毛刺征陽性提示Ki-67的高表達(dá)，預(yù)示腫瘤細(xì)胞增殖活躍，可對判斷肺癌的生物學(xué)行為及優(yōu)化治療方案提供依據(jù)。